식품의약품안전처 공고 제2015-137호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2015. 4. 29.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2015-137호

｢식품의 기준 및 규격｣ (식품의약품안전처고시 제2015-4호, 2015. 2. 3.)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 ｢행정절차법｣ 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2015년 4월 28일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정기준｣(식품의약품안전처 고시 제2014-147호)에 따라 인정된 식품원료의 ｢식품의 기준 및 규격｣에 등재 요건을 명확히 하고자 함.

국내외에서 사용되는 농약의 잔류허용기준을 개정하고 동물용의약품의 적용 대상 식품명을 명확히 하며, 관련 시험법을 개정하여 식품 중 잔류물질의 안전관리를 강화하고자 함.

2. 주요 내용

가. 한시적으로 사용이 인정된 식품원료의「식품의 기준 및 규격」등재 요건 명확화〔안 제2. 2. 3)〕

1)「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준」에 따라 인정된 식품원료가 증가함에 따라「식품의 기준 및 규격」등재 요건의 명확화 필요

2) 등재 요건을 충족하는 경우 [별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록 또는 [별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록에 추가로 등재

나. 농산물 중 농약 잔류허용기준 개정 및 신설[안 별표 4 중 (9) 델타메트린, (29) 디플루벤주론, (101) 이미다클로프리드, (116) 카탑 하이드로클로라이드, (133) 테부코나졸, (227) 아세타미프리드,  (237) 피메트로진, (257) 플루퀸코나졸, (299) 티플루자마이드, (321) 디노테퓨란, (324) 비페나제이트, (333) 테부피림포스, (352) 메톡시페노자이드, (394) 비스트리플루론, (408) 스피네토람, (416) 클로란트라닐리프롤, (417) 플루벤디아마이드, (419) 프로헥사디온-칼슘, (422) 펜티오피라드, (423) 피콕시스트로빈, (424) 피리플루퀴나존, (428) 플루오피람, (430) 설폭사플로르, (433) 사이안트라닐리프롤, (437) 플룩사피록사드, (438) 피리오페논, (439) 스피로테트라맷, (442) 이프펜카바존, (443) 테퓨릴트리온, (444) 트리아파몬, (445) 이마자픽, (446) 이마자피르]

1)  ｢농약관리법｣에 등록되어 있는 농약에 대해 농산물 적용 범위 확대, 수입 농산물의 농약 잔류허용기준 요청 등으로 농약잔류허용기준 제·개정이 필요

2) 델타메트린 등 32종에 대한 농약 잔류허용기준 개정 및 신설

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 합리적으로 개정하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

다. 인삼 중 농약 잔류허용기준 신설[안 별표 5 중 (79) 포스티아제이트]

1)  ｢농약관리법｣에 등록되어 있는 농약 중 인삼에 대한 사용범위 확대에 따라 해당 농약의 잔류허용기준을 마련 필요

2) 포스티아제이트에 대한 농약 잔류허용기준 신설

3) 농약 잔류허용기준 신설을 통하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

라. 축산물 중 농약 잔류허용기준 개정[안 별표 6 중 (21) 사이퍼메트린]

1) 농약과 동물용의약품에 공통으로 사용되는 물질에 대한 기준조화 필요

2) 유 중 동물용의약품 사이퍼메트린 기준신설에 따른 농약 기준 삭제

3) 농약 및 동물용의약품 잔류허용기준 조화를 통한 혼란 방지

마. 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준 적용 대상 식품명 개정[안 별표 6 중 (4) 노보비오신, (29) 오르메토프림, (30) 옥소린산, (32) 올레안도마이신, (36) 죠렌]

1) 동물용의약품의 잔류허용기준 대상 식품명이 “고기”로 설정되어 있어 기준 적용이 해석의 논란 발생

2) 노보비오신 등 5종의 대상 식품명을 “고기”에서 “근육”으로 개정

3) 동물용의약품 잔류허용기준 적용 대상 식품명을 명확히 하여 검사의 신뢰성을 높이고자 함

바. 일반시험법 개정[안 제9. 4.1.4.174∼177, 제9. 5.2∼5.3]

1) 농약잔류허용기준 신설에 따른 이프펜카바존 등 4종 농약 잔류분석법 신설

2) 동물용의약품의 정성시험법에 물리·화학적 시험법 신설

3) 식품 중 겐타마이신 등 아미노글리코사이드계, 아목시실린등 페니실린계 및 벌꿀 중 테트라싸이클린계 정량시험법 개정

4) 농약 잔류허용기준 신설에 따른 분석법을 마련하고 식품공전과 축·수산물 유해물질 분석법 편람 시험법을 통일하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

3. 의견 제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는  단체 또는 개인은 2015년 6월 29일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처장(우편번호 : 363-700, 주소 : 충청북도 청원군 오송읍 오송생명 2로 187(연제리 643번지) 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2417, 팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2015-00호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2015-4호, 2015. 2. 3.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2015년  4월  0일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제2, 2, 3)을 다음과 같이 신설한다.

3) 한시적 인정 식품원료의 추가 등재

(1) 「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준」에 따라 인정된 식품 원료는 다음의 어느 하나를 충족하면 「식품의 기준 및 규격」 [별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록 또는 [별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록에 추가로 등재할 수 있다.

① 한시적 기준 및 규격을 인정받은 날로부터 3년이 경과한 경우

② 한시적 기준 및 규격을 인정받은 자가 3인 이상인 경우

③ 한시적 기준 및 규격을 인정받은 자가 등재를 요청하는 경우(다만, 인정받은 자가 2명인 경우 모두 등재를 요청하는 경우)

제9, 4.1.4.174부터 4.1.4.177까지 신설한다.

4.1.4.174 이프펜카바존(Ipfencarbazone)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산을 이용하여 액-액 분배하고 실리카 카트리지로 정제한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 - 전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프 - 질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 한 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 증류수 10 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세톤 100 mL을 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세톤 15 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL와 증류수 100 mL을 차례로 가한 후 헥산 50 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 헥산 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 수용액 층에 헥산 50 mL를 추가로 가하고 헥산 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 헥산 10 mL에 녹인다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 2 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산(10/90, v/v) 10 mL를 유출시켜 버린 후 에틸아세테이트/헥산(20/80, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5 (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 질소, 1 mL/min.

(3) 오븐 온도 : 200℃에서 검체를 주입하고 10℃/min.의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 10분간 유지

(4) 주입부 온도 : 250℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입량 : 1 μL, split ratio (20:1)

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이프펜카바존 (9.7분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이프펜카바존을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/min.

(3) 오븐온도 : 200℃에서 검체를 주입하고 10℃/min.의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 10분간 유지

(4) 주입부 : 260℃

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 분자량 범위 : 100～550 m/z

(7) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	관측이온(m/z)
8.9	427.2	426	198, 228

4.1.4.175 테퓨릴트리온(Tefuryltrione)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 테퓨릴트리온을 포름산을 포함한 아세토니트릴로 추출한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합용매로 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실 카트리지 : 플로리실 고정상(1 g)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 증류수 10 mL를 가한 후 30분방치) 아세토니트릴 30 mL, 증류수 10 mL 및 포름산 0.4 mL를 가하여 진탕기에서 30분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친다. 여과액을 500 mL 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL와 증류수 40 mL를 차례로 가한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 추가로 가하고 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 3회 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 아세톤/디클로로메탄(50/50, v/v) 혼합용매 10 mL에 녹인다.

나) 정제

플로리실 카트리지에 아세톤/디클로로메탄(50/50, v/v) 혼합용매 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 1 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/디클로로메탄(50/50, v/v) 혼합용매 5 mL를 유출시켜 씻어버린 후 4% 포름산이 포함된 아세톤/디클로로메탄(60/40, v/v) 혼합용매 8 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2 mm i.d. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 :

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산 수용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.1	50	50
3	80	20
4	80	20
5.5	50	50
15	50	50

(4) 이동상 유량 : 0.25 mL/min.

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Spray voltage : 3.5 kV

(4) Collision gas : 아르곤

(5) 충돌에너지

분석성분	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragment ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
테퓨릴트리온	443	261	30
		305	20

※ 각 토막이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막이온도 적용이 가능함

다) 검량선 작성

표준용액을 아세토니트릴에 일정농도로 희석한 다음 검체에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

테퓨릴트리온(4.3분)

마) 정량한계

0.03 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

4.1.4.176 트리아파몬(Triafamone)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 트리아파몬을 포름산을 포함한 아세토니트릴로 추출한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합용매로 액-액 분배하고 C18 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 :  표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18 고정상(500 mg)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 증류수 10 mL를 가한 후 30분방치) 아세토니트릴 30 mL, 증류수 10 mL 및 포름산 0.4 mL를 가하여 진탕기에서 30분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친다. 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL와 증류수 40 mL를 차례로 가한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 추가로 가하고 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 3회 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 증류수 10 mL에 녹인다.

나) 정제

C18 카트리지에 1% 포름산이 함유된 메탄올 3 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 1% 포름산이 함유된 메탄올/물(20/80, v/v) 3 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 2 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 1% 포름산이 함유된 메탄올/물(80/20, v/v) 4 mL를 유출시켜 받은 시험액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2 mm i.d. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴/0.1% 포름산 수용액(90/10, v/v)

(4) 이동상 유량 : 0.25 mL/min.

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Spray voltage : 4.0 kV

(4) Collision gas : 아르곤

(5) 충돌에너지

분석성분	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragment ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리아파몬	407	160	43
		245	24

※ 각 토막이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막이온도 적용이 가능함

다) 검량선 작성

표준용액을 아세토니트릴에 일정농도로 희석한 다음 검체에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

트리아파몬(5.8분)

마) 정량한계

0.03 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

4.1.4.177 이마자피르(Imazapyr)

1) 분석법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 과일류 및 채소류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이마자피르를 메탄올로 추출한 후 pH를 2.5로 조절하고 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올/0.5% 아세트산 수용액(50/50, v/v)에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 과일류․채소류·서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 메탄올 100 mL(과일류, 채소류, 콩류의 경우 60% 메탄올, 곡류 및 서류는 70% 메탄올)를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한 뒤 메탄올 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 농축액이 40 mL 이하가 될 때까지 메탄올을 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 증류수 60 mL를 더하고 4N HCl을 가하여 pH 2.5가 되도록 한다. 이를 500 mL 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 15 g 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 메탄올/0.5% 아세트산 수용액(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 메탄올/0.5% 아세트산 수용액(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.]

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 mm i.d. × 150 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.5% 아세트산 수용액(12/88, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min.

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 260 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이마자피르 (9.6분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이마자피르를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.0 mm i.d. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴/0.1% 포름산 수용액(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.25 mL/min.

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
4.0	261.3	261	262

제9. 5.2 “간이시험법”을 “정성시험법”으로 하고, “5.2.1 생물학적 시험법”을 신설한다.

제9. 5.2.2를 다음과 같이 신설한다.

5.2.2 물리·화학적 시험법

5.2.2.1 축산물 중 동물용의약품 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알, 벌꿀은 제외) 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 80% 아세토니트릴로 추출한 후 C18 분말로 분산하고 아세토니트릴 포화 헥산으로 정제하여 지방을 제거한 다음 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 및 표준용액：각 동물용의약품의 표준품을 아래의 표1과 같이 조제하여 표준원액 및 표준용액으로 사용하고 모두 냉동실에 보관하여 사용한다.

표 1. 표준원액 및 표준용액의 조제방법

물질명	용매	표준원액 (μg/mL)	희석 용매	표준용액 (μg/mL)
나프실린(Nafcillin)	DMSO	5,000	물	1,500
날리딕스산(Nalidixic acid)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	150
노르플록사신(Norfloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
노보비오신(Novobiocin)	DMSO	5,000	-	-
다노플록사신(Danofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	1,000
답손(Dapsone)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
독시싸이클린(Doxycycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
디클록사실린(Dicloxacillin)	DMSO	5,000	물	1,500
디플록사신(Difloxacin)	50% 메탄올	2,000	50% 메탄올	2,000
린코마이신(Lincomycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
마보플록사신(Marbofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	750
발네물린(Valnemulin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
버지니아마이신(Virginiamycin M1)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
벤질페니실린(Benzylpenicillin)	DMSO	5,000	물	250
사라플록사신(Sarafloxacin)	메탄올	1,000	아세토니트릴	50
세파졸린(Cefazolin)	DMSO	5,000	물	250
세파피린(Cephapirin)	DMSO	5,000	물	250
세팔렉신(Cephalexin)	50% DMSO	2,500	물	1,000
세팔로니움(Cefalonium)	DMSO	5,000	물	50
세포페라존(Cefoperazone)	DMSO	5,000	물	150
세푸록심(Cefuroxime)	DMSO	5,000	물	100
세프퀴놈(Cefquinome)	DMSO	5,000	물	250
세프티오퍼(Ceftiofur)	DMSO	5,000	-	-
스피라마이신(Spiramycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
시프로플록사신(Ciprofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
암피실린(Ampicillin)	DMSO	5,000	물	250
에리스로마이신(Erythromycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
엔로플록사신(Enrofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
오르메토프림(Ormetoprim)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
오비플록사신(Orbifloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	100
오플록사신(Ofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
옥사실린(Oxacillin)	DMSO	5,000	물	500
옥소린산(Oxolinic acid)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	250
옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
조사마이신(Josamycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	200
클로람페니콜(Chloramphenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline)	Methanol	5,000	아세토니트릴	1,000
클록사실린(Cloxacillin)	DMSO	5,000	물	1,500
클린다마이신(Clindamycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
타일로신(Tylosin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
테트라싸이클린(Tetracycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
트리메토프림(Trimethoprim)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
티아물린(Tiamulin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
티암페니콜(Thiamphenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
틸미코신(Tilmicosin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
페플록사신(Pefloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
플로르페니콜(Florfenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
플로르페니콜아민(Florfenicol amine, 플로르페니콜 대사체)	DMSO	10,000	아세토니트릴	1,000
플루메퀸(Flumequine)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	500
MQCA1 (올라퀸독스 대사체)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
QCA2 (카바독스 대사체)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500

1 MQCA : 3-methyl quinoxaline-2-carboxylic acid

2 QCA : quinoxaline-2-carboxylic acid

라) 혼합 표준용액의 조제 : 100 mL 용량플라스크에 50종의 표준용액을 각각 1 mL 씩 넣고 50% 아세토니트릴로 표시선까지 채워 조제하고, 각 성분의 농도가 잔류허용기준의 50배(성분별 최저 0.5에서 최대 50 μg/mL)가 되도록 하여 냉동실에 보관한다. 혼합한 표준용액은 0.1% 개미산과 메탄올의 1:1 비율로 혼합한 용액으로 희석하여 사용한다.

마) 0.5% 개미산 : 50 mL 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 개미산 250 μL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 암모니아수 : 10 mL 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 10% 수산화암모늄 용액 0.1 mL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채운다.

사) 이동상 A의 조제 : 1 L 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 개미산 1 mL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채워 0.1% 개미산을 조제하고, 0.1% 개미산 650 mL와 메탄올 50 mL를 혼합하여 사용한다.

아) C18 분말 : 잔여실란올기가 제거된 C18 분말(55-105 μm, 125 Å) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 80% 아세토니트릴 10 mL를 가한 뒤, 1분간 균질화하고 15분간 진탕한다. 5,000 g에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 C18 분말 1 g을 미리 넣어 둔 원심분리관과 합한다. 남은 침전물에 다시 80% 아세토니트릴 10 mL를 가하고 1분간 균질화한 후 15분간 진탕한다. 5,000 g에서 10분간 원심분리하고 상층액을 이전의 상층액과 합한 후 아세토니트릴 포화 헥산 10 mL을 가한다. 1분간 진탕하고 5,000 g에서 5분간 원심분리 한 후 상층(헥산 층)을 제거하고 하층(80% 아세토니트릴 층)을 새로운 원심분리관으로 옮긴다. 이를 50°C 이하에서 질소 건고한 후 메탄올 0.25 mL와 0.1% 개미산 0.25 mL로 재분산하고 5분간 초음파 추출한다. 이 용액을 0.2 μm PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 ｘ 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 : 메탄올(95 : 5, v/v)

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
0.25	95	5
8.25	0	100
10.25	0	100

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive, negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.0 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	나프실린 (Nafcillin)	positive	7.43	414.47	414.1249	415.22	199.12 171.05 115.09	14 40 60
1‘	나프실린-Na (Nafcillin-Na2)	positive	7.43	436.45	436.1068	437.20	278.17 261.18 319.18	18 16 16
2	날리딕스산 (Nalidixic acid)	positive	6.36	232.24	232.0849	233.12	215.12 187.11 159.09	14 26 30
3	노르플록사신 (Norfloxacin)	positive	3.92	319.33	319.1333	320.23	302.23 233.15 276.25	22 24 18
4	노보비오신 (Novobiocin)	positive	8.92	612.62	612.2319	613.33	189.15 133.07 218.13	34 60 12
4‘	노보비오신-Na (Novobiocin-Na)	positive	8.91	634.60	634.2138	635.25	418.25 240.14 211.16	22 20 38
5	다노플록사신 (Danofloxacin)	positive	4.06	357.37	357.1490	358.25	340.22 96.07 314.25	24 24 18
6	답손 (Dapsone)	positive	3.78	248.30	248.0619	249.03	155.96 92.03 108.00	14 26 22
7	독시싸이클린 (Doxycycline)	positive	5.79	444.43	444.1532	445.25	428.22 98.02 154.05	20 42 30
8	디클록사실린 (Dicloxacillin)	positive	7.42	470.32	469.0265	470.12	160.05 311.12 114.05	16 14 36
8‘	디클록사실린-Na (Dicloxacillin-Na)	positive	7.42	492.30	491.0085	492.10	333.06 182.07	14 14
9	디플로삭신 (Difloxacin)	positive	4.26	399.39	399.1396	400.24	356.29 299.21 382.25	20 28 20
10	린코마이신 (Lincomycin)	positive	3.72	406.53	406.2237	407.31	126.17 359.34 389.33	30 20 18
11	마보플록사신 (Marbofloxacin)	positive	3.57	362.36	362.1392	363.24	72.08 345.22 320.23	22 22 16
12	발네물린 (Valnemulin)	positive	7.22	564.81	564.3596	565.46	263.20 147.08 164.02	14 40 34
13	버지니아마이신 (Virginiamycin M1)	positive	7.20	525.59	525.2474	526.28	508.38 355.24 109.10	14 20 36
14	벤질페니실린-Na (Benzylpenicillin-Na)	positive	6.56	356.37	356.0806	357.11	198.11 181.24 239.79	14 16 18
15	사라플록사신 (Sarafloxacin)	positive	4.40	385.36	385.1239	386.22	368.22 299.17 342.26	20 28 20
16	세파졸린 (Cefazolin)	positive	4.26	454.50	454.0299	455.13	323.13 156.01 124.02	12 16 38
17	세파피린 (Cephapirin)	positive	3.09	423.46	423.0558	424.15	292.17 152.04 181.09	14 22 24
18	세팔렉신 (Cephalexin)	positive	4.12	347.38	347.0939	348.19	158.05 174.07 106.11	8 14 26
19	세팔로니움 (Cefalonium)	positive	3.67	458.51	458.0718	459.17	152.03 337.13 123.11	20 10 12
20	세포페라존 (Cefoperazone)	positive	4.47	645.66	645.1423	646.24	143.11 530.26 290.20	34 12 20
21	세푸록심-Na (Cefuroxime-Na)	positive	4.28	446.36	446.0508	447.15	386.13 174.96 342.15	12 20 14
22	세프퀴놈 (Cefquinome)	positive	3.33	528.60	528.1249	529.22	134.12 167.03 396.12	16 24 12
23	세프티오퍼 (Ceftiofur)	positive	5.65	523.56	523.0289	524.13	241.13 125.19 210.07	18 56 22
24	스피라마이신 (Spiramycin)	positive	4.99	843.05	842.5139	843.55	174.11 101.02 142.13	36 46 32
25	시프로플록사신 (Ciprofloxacin)	positive	4.02	331.35	331.1333	332.23	314.241 231.11 288.27	22 34 18
26	암피실린 (Ampicillin)	positive	4.39	349.40	349.1096	350.14	106.04 174.07 160.07	18 14 12
27	에리스로마이신 (Erythromycin)	positive	6.61	733.93	733.4612	734.49	158.09 116.06 576.41	30 40 20
28	엔로플록사신 (Enrofloxacin)	positive	4.05	359.40	359.1647	360.26	316.27 342.24 245.18	18 20 26
29	오르메토프림 (Ormetoprim)	positive	4.03	274.31	274.1429	275.18	123.12 259.20 81.01	26 26 42
30	오비플록사신 (Orbifloxacin)	positive	4.22	395.37	395.1258	396.24	352.30 226.15 295.22	18 46 26
31	오플록사신 (Ofloxacin)	positive	3.80	361.37	361.1439	362.24	318.26 261.17 221.65	20 28 38
32	옥사실린 (Oxacillin)	positive	6.98	401.43	401.1045	402.20	160.06 243.16 114.06	12 14 38
32‘	옥사실린-Na (Oxacillin-Na)	positive	6.98	423.41	423.0864	424.18	182.08 265.11 248.12	18 18 16
33	옥소린산 (Oxolinic acid)	positive	5.54	261.33	261.0637	262.16	244.14 216.08 157.59	20 28 34
34	옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	positive	4.19	460.43	460.1481	461.18	426.20 201.01 443.31	20 40 14
35	조사마이신 (Josamycin)	positive	6.97	827.99	827.4667	828.56	109.09 174.11 229.20	42 34 32
36	클로람페니콜 (Chloramphenicol)	negative	5.49	323.13	322.0123	321.11	151.98 257.15 194.12	20 12 14
37	클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	positive	5.10	478.88	478.1142	479.27	444.24 154.06 462.20	22 28 18
38	클록사실린 (Cloxacillin)	positive	7.14	435.88	435.0655	436.16	277.13 114.05 160.05	16 48 12
38‘	클록사실린-Na (Cloxacillin-Na)	positive	7.14	475.87	475.0580	458.14	299.13 182.06	14 14
39	클린다마이신 (Clindamycin)	positive	5.94	424.98	424.1798	425.28	126.14 377.25 389.35	28 20 20
40	타일로신 (Tylosin)	positive	6.50	916.10	915.5191	916.55	174.11 83.09 101.01	40 52 40
41	테트라싸이클린 (Tetracycline)	positive	4.10	444.43	444.1532	445.25	410.26 154.05 427.37	18 28 12
42	트리메토프림 (Trimethoprim)	positive	3.68	290.31	290.1378	291.23	230.15 123.05 261.15	24 24 24
43	티아물린 (Tiamulin)	positive	6.43	493.74	493.3225	494.42	192.16 73.06 119.07	22 60 38
44	티암페니콜 (Thiamphenicol)	negative	3.79	356.22	355.0047	354.10	185.08 290.11 78.99	18 12 32
45	틸미코신 (Tilmicosin)	positive	5.63	869.13	868.5660	869.66	174.11 88.05 696.64	44 64 42
46	페플록사신 (Pefloxacin)	positive	3.80	333.36	333.1490	334.25	290.29 316.26 233.19	18 20 26
47	플로르페니콜 (Florfenicol)	negative	4.55	358.21	357.0004	356.03	185.07 336.12 119.07	18 10 38
47‘	플로르페니콜아민 (Florfenicol amine, 플로르페니콜 대사체)	positive	1.58	247.28	247.0678	248.10	230.13 130.21 91.05	12 22 42
48	플루메퀸 (Flumequine)	positive	6.56	261.25	261.0802	262.18	244.16 202.09 174.01	20 32 38
49	MQCA (올라퀸독스 대사체)	positive	4.99	188.18	188.0585	189.09	145.08 143.00 102.07	14 15 32
50	QCA (카바독스 대사체)	positive	4.82	174.15	174.0429	175.07	129.00 131.02 102.02	18 15 30

1 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

2 Compound-Na : sodium adduct를 의미

※ 각 생성이온(product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온 및 생성이온이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 상대비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 퀴놀론계 크로마토그램

그림 2. 페니실린계 크로마토그램

그림 3. 세팔로스포린계 크로마토그램

그림 4. 테트라싸이클린계 크로마토그램

그림 5. 마크로라이드계 크로마토그램

그림 6. 린코사마이드계 크로마토그램

그림 7. 플레로무티린계 크로마토그램

그림 8. 암페니콜계 크로마토그램

그림 9. 기타 항균제 크로마토그램

5.2.2.2  수산물 중 동물용의약품 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

수산물(어류, 갑각류) 등에 적용한다.

2) 분석원리

균질화한 검체에 개미산암모늄용액과 80% 아세토니트릴을 넣어 분석대상물질을 추출하고, C18 분말을 분산시켜 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액： 각 동물용의약품 표준품을 정밀히 달아 용매(메탄올, 물 또는 50% 메탄올)에 녹여 50～100 mg/L로 조제하여 표준원액으로 한다. ※주1) 참조

라) 혼합표준용액：50 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 각 동물용의약품 잔류허용기준의 10배 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 물로 표시선까지 채워 냉동실에 보관한다. 혼합표준용액은 물로 희석하여 사용한다.

마) 2 mM 개미산암모늄용액 : 1 L 용량 플라스크에 초산암모늄 0.12 g을 넣고 아세토니트릴/물(80/20, v/v) 혼합용매로 용해하여 표시선까지 채운다.

바) C18 분말 : 잔여실란올기가 제거된 C18 분말(55-105 μm, 125Å) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 2 mM 개미산암모늄용액 10 mL를 가하여 20분간 진탕한 후, 10,000 g에서 10분간 원심분리하고 추출액을 다른 원심분리관에 취한다. 분리된 추출액에 C18 분말 500 mg을 분산시킨 후, 헥산 10 mL을 가하여 30초간 진탕한다. 10,000 g에서 5분간 원심분리하고, 하층액 중 5 mL만을 취해 눈금이 표시된 새로운 원심분리관에 옮긴다. 40℃ 수욕상에서 액이 1 mL 남을 때까지 질소농축한 후, 0.2 μm PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm i.d. ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
1	90	10
6	60	40
10	5	95
15	5	95
15.1	90	10
20	90	10

(3) 유속 : 0.4 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive, negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : positive - 5.0 kV

negative - 3.5 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤, 또는 비활성 기체)

(5) 분석 대상(45종) 및 개별조건(MRM 조건)

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온1 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	날리딕스산 (Nalidixic acid)	positive	7.50	232.2	232.0848	233	104 187 215	39 24 14
2	노르플록사신 (Norfloxacin)	positive	3.65	319.3	319.1332	320	205 233 276	31 23 16
3	독시싸이클린 (Doxycycline)	positive	5.80	444.4	444.1533	445	267 321 428	34 29 16
4	디플록사신 (Difloxacin)	positive	4.88	399.3	399.1394	400	299 356 381	27 17 20
5	린코마이신 (Lincomycin)	positive	3.07	406.5	406.2138	407	83 126 359	53 30 15
6	설파구아니딘 (Sulfaguanidine)	positive	1.12	214.2	214.0524	215	65 92 156	36 25 13
7	설파독신 (Sulfadoxine)	positive	5.50	310.3	310.0736	311	92 108 156	29 25 17
8	설파디메톡신 (Sulfadimethoxine)	positive	6.53	310.3	310.0736	311	92 108 156	31 29 19
9	설파디아진 (Sulfadiazine)	positive	2.50	250.2	250.0524	251	65 92 156	40 26 15
10	설파메라진 (Sulfamerazine)	positive	3.49	264.3	264.0681	265	92 108 155	28 24 15
11	설파메타진 (Sulfamethazine)	positive	4.23	278.3	278.0837	279	65 124 186	43 22 16
12	설파메톡사졸 (Sulfamethoxazole)	positive	5.47	253.2	253.0521	254	92 108 156	26 23 14
13	설파메톡시피리다진 (Sulfamethoxypyridazine)	positive	4.33	280.3	280.0630	281	92 108 156	29 25 15
14	설파모노메톡신 (Sulfamonomethoxine)	positive	4.89	280.0	280.0630	281	156 248 265	17 27 21
15	설파퀴녹살린 (Sulfaquinoxaline)	positive	6.57	300.3	300.0681	301	92 155 208	29 15 13
16	설파클로르피라진 (Sulfachlorpyrazine)	positive	6.36	284.7	284.0135	285	65 92 155	45 28 13
17	설파클로르피리다진 (Sulfachlorpyridazine)	positive	5.09	284.7	284.0135	285	92 108 155	29 22 13
18	설파티아졸 (Sulfathiazole)	positive	2.87	255.3	255.0136	256	92 108 156	24 22 15
19	설파페나졸 (Sulfaphenazole)	positive	6.66	314.3	314.0837	315	131 158 160	46 28 20
20	설피속사졸 (Sulfisoxazole)	positive	5.82	267.3	267.0678	268	65 92 155	39 27 13
21	세팔렉신 (Cefalexin)	positive	3.48	347.3	347.0940	348	106 157 174	32 6 13
22	세프티오퍼 (Ceftiofur)	positive	6.18	523.6	523.0290	524	95 126 241	42 58 16
22‘	데스후로일세프티오퍼 (Desfuroylceftiofur)	positive	4.28	429.5	429.0235	430	126 227 241	32 22 14
23	스피라마이신 (Spiramycin)	positive	5.29	843.0	842.5140	422	83 88 174	31 35 18
24	시프로플록사신 (Ciprofloxacin)	positive	3.95	331.3	331.1332	332	148 231 314	53 35 19
25	아목시실린 (Amoxicillin)	positive	1.35	365.4	365.1045	366	113 133 349	19 31 5
26	암피실린 (Ampicillin)	positive	3.61	349.4	349.1096	350	106 114 174	19 29 11
27	에리스로마이신 (Erythomycin)	positive	6.97	733.9	733.4612	734	82 115 157	35 34 29
28	엔로플록사신 (Enrofloxacin)	positive	4.34	359.4	359.1645	360	245 316 342	25 17 20
29	오르메토프림 (Ormethoprim)	positive	4.01	274.3	274.1430	275	81 123 259	42 25 27
30	오플록사신 (Ofloxacin)	positive	3.67	361.3	361.1438	362	261 318 344	25 17 19
31	옥소린산 (Oxolinic acid)	positive	6.05	261.2	261.0637	262	160 216 244	35 28 17
32	옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	positive	3.93	460.4	460.1482	461	200 426 443	36 16 10
33	조사마이신 (Josamycin)	positive	8.27	827.9	827.4667	828	108 173 228	35 30 29
34	클로람페니콜 (Chloramphenicol)	negative	6.20	322.1	322.0123	321	120 151 257	40 24 14
35	클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	positive	5.48	478.8	478.1143	479	98 444 462	35 18 14
36	클린다마이신 (Clindamycin)	positive	5.70	424.9	424.1799	425	83 126 377	51 31 17
37	키타사마이신 (Kitasamycin)	positive	7.68	771.9	771.4405	772	82 108 173	35 34 28
38	테트라싸이클린 (Tetracycline)	positive	4.32	444.4	444.1533	445	153 410 427	25 16 10
39	트리메토프림 (Trimethoprim)	positive	3.62	290.3	290.1379	291	123 230 261	33 22 24
40	티아물린 (Tiamulin)	positive	7.57	493.7	493.3226	494	73 118 192	53 34 19
41	티암페니콜 (Thiamphenicol)	negative	4.15	356.2	355.0048	354	118 184 290	37 23 15
42	페플록사신 (Pefloxacin)	positive	3.71	333.3	333.1489	334	233 290 316	23 16 18
43	프라지콴텔 (Praziquantel)	positive	8.79	312.4	312.1838	313	55 132 203	36 33 16
44	플로르페니콜 (Florfenicol)	negative	5.73	358.2	357.0005	356	118 184 336	40 21 13
44‘	플로르페니콜아민 (Florfenicol amine)	positive	1.12	247.2	247.0678	248	91 130 230	42 25 10
45	플루메퀸 (Flumequine)	positive	7.73	261.2	261.0801	262	126 202 244	47 31 17

1 밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 상대비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주2) 참조

8) 정량시험

정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

주1) 표준원액 조제에 사용되는 용매

용매	대상 동물용의약품 표준품
메탄올	날리딕스산, 노르플록사신, 독시싸이클린, 디플록사신, 린코마이신, 설파구아니딘, 설파독신, 설파디메톡신, 설파디아진, 설파메라진, 설파메타진, 설파메톡사졸, 설파메톡시피리다진, 설파모노메톡신, 설파퀴녹살린, 설파클로르피라진, 설파클로르피리다진, 설파티아졸, 설파페나졸, 설피속사졸, 스피라마이신, 시프로플록사신, 에리스로마이신, 엔로플록사신, 오르메토프림, 오플록사신, 옥시테트라싸이클린, 조사마이신, 클로르테트라싸이클린, 클린다마이신, 키타사마이신, 테트라싸이클린, 트리메토프림, 티아물린, 페플록사신, 플로르페니콜아민, 플루메퀸
50% 메탄올	세팔렉신, 세프티오퍼, 데스후로일세프티오퍼, 클로람페니콜, 티암페니콜, 프라지콴텔, 플로르페니콜
물	아목시실린, 암피실린, 옥소린산

주2) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 수산물 중 45종 동물용의약품의 크로마토그램

제9. 5.3.1을 다음과 같이 한다.

5.3.1 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin), 스트렙토마이신(Streptomycin), 스펙티노마이신(Spectinomycin), 아미카신(Amikacin), 아프라마이신(Apramycin), 카나마이신(Kanamycin), 하이그로마이신B(Hygromycin B)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼염화초산이 함유된 인산완충용액으로 추출한 후 HLB 및 약양이온 교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 물 40 mL에 녹인 후 아세토니트릴 20 mL와 초산 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동실에 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 아세토니트릴/초산/물(10/1/39) 혼합용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 토브라마이신 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 물 40 mL에 녹인 후 아세토니트릴 20 mL와 초산 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 조제한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준원액을 아세토니트릴/초산/물(10/1/39) 혼합용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

사) 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 : 2 L 용량플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 2.72 g을 넣고 물 1.9 L로 녹인 후 1 M 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨(Na2EDTA dihydrate) 0.3 g과 삼염화초산 40 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

아) 1.6% 삼염화초산 용액 : 250 mL 용량플라스크에 삼염화초산 4 g을 넣고 물 100 mL를 넣어 용해시킨 후 아세토니트릴 50 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 20 mM HFBA(heptafluorobutyric acid)/5% 아세토니트릴 : 1 L 용량플라스크에 아세토니트릴 50 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

차) 20 mM HFBA(heptafluorobutyric acid)/50% 아세토니트릴 : 1 L 용량플라스크에 아세토니트릴 500 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

카) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 : Divinylbenzene -N-vinylpyrrolidone Copolymer가 200 mg 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

타) 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지 : 약양이온교환수지가 150 mg 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

파) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

하) 기구 : 사용하는 모든 용기는 폴리프로필렌 재질 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 3 g 을 50 mL 원심분리관에 취하고 내부표준물질(토브라마이신)을 첨가한다. 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 15 mL를 가하여 10분간 진탕한 후 4℃에서 5,000 g로 15분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취한 후 5 M 수산화나트륨용액 0.2∼0.3 mL 을 가하여 pH 7.5로 조정하고(필요시 1 M 염산용액 또는 1 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH를 조정한다) 이 액을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 HLB 카트리지와 WCX(약양이온교환) 카트리지를 각각 활성화시킨 후 HLB 카트리지 위에 WCX 카트리지를 연결한다. 연결한 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후 감압하여 물을 완전히 제거해 준다. 15 mL 프로필렌 원심분리관에 1.6% 삼염화초산 용액 6 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화 한 후 0.2 ㎛ PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 액체크로마토그래프용 폴리프로필렌 바이알에 옮겨 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA / 5% 아세토니트릴

(나) 이동상 B : 20 mM HFBA / 50% 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	80	20
0.5	80	20
9.0	5	95
10.0	5	95
10.1	80	20
15.0	80	20

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤, 또는 비활성 기체)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	겐타마이신 C1a (Gentamicin C1a )	8.6	450	160	20
				322	11
2	겐타마이신 C2, C2a (Gentamicin C2, C2a)	8.6	464	160	22
				322	10
3	겐타마이신 C1 (Gentamicin C1)	8.6	478	157	20
				322	13
4	네오마이신 (Neomycin)	8.74	615	161	28
				293	21
5	디히드로스트렙토마이신 (Dihydrostreptomycin)	5.93	584	246	33
				263	29
6	스트렙토마이신 (Streptomycin)	5.84	582	246	36
				263	29
7	스펙티노마이신 (Spectinomycin)	4.66	351	98	29
				207	20
				333	17
8	아미카신 (Amikacin)	6.80	586	163	32
				264	23
9	아프라마이신 (Apramycin)	7.94	540	217	26
				378	14
10	카나마이신 (Kanamycin)	7.04	485	163	24
				324	14
11	파로모마이신 (Paromomycin)	8.91	616	163	32
				293	22
12	하이그로마이신 (Hygromycin B)	5.62	528	177	27
				352	21
13	토브라마이신 (Tobramycin, 내부표준물질)	8.15	468	163	22
				324	13

(4) 분석대상물질의 개별 조건

1 밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다. 단 겐타마이신은 겐타마이신 C1, 겐타마이신 C1a, 겐타마이신 C2, 겐타마이신 C2a의 각 정량값의 합으로 정량한다.

물질	정량한계(mg/kg)
겐타마이신(Gentamicin)	0.006
네오마이신(Neomycin)	0.030
스트렙토마이신(Streptomycin)/ 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin)	0.02
스펙티노마이신(Spectinomycin)	0.020
아미카신(Amikacin)	0.006
아프라마이신(Apramycin)	0.030
카나마이신(Kanamycin)	0.006
파로모마이신(Paromomycin)	0.006
하이그로마이신(Hygromycin B)	0.006

※  단, 벌꿀, 알, 유에서 6) 나) (4)의 분석대상물질이 검출될 경우 정량분석은 유에서 겐타마이신을 제외하고 5.3의 물질별 정량분석법을 따른다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램. 스펙티노마이신(4.6분), 하이그로마이신(5.6분), 스트렙토마이신(5.8분), 디히드로스트렙토마이신(5.9분), 아미카신(6.8분), 카나마이신(7.0분), 아프라마이신(7.9분), 토브라마이신(내부표준물질, 8.1분), 겐타마이신(8.6분), 네오마이신(8.7분), 파로모마이신(8.9분)

5.3.26을 삭제하고 5.3.27, 5.3.28을 각각 5.3.26 및 5.3.27로 한다.

5.3.29를 5.3.28로 하고 5.3.29.1 제1법 중 시험법 적용범위를 “축산물”에서 “유”로 한다.

5.3.30, 5.3.31을 각각 5.3.29 및 5.3.30으로 한다.

5.3.32를 아래와 같이 한다.

5.3.31 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G), 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 클록사실린(Cloxacillin),   옥사실린(Oxacillin),  , 페녹시메틸페니실린 (Phenoxymethyl penicillin, Penicillin V)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 나트륨이 함유된 인산완충용액(축산물), 아세토니트릴 수용액(수산물) 또는 트리클로로초산이 함유된 아세토니트릴(유 및 알)로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다. 표준품과 시료는 직사광선을 피하고 어두운 냉동실에 보관한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올 50 mL로 용해한 후 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동실에 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 피페라실린 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올 50 mL로 용해한 후 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 한다. 조제된 내부 표준물질 표준원액은 냉동실에 보관한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도로 조제한다.

사) 0.05% 포름산 용액 : 1 L 용량 플라스크에 포름산 5 mL 첨가 한 후, 물로 표시선까지 채운다.

아) 0.05% 포름산 아세토니트릴 용액 : 1 L 용량 플라스크에 포름산 5 mL 첨가 한 후 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 0.1 M 인산나트륨완충용액(pH 4.5) : 500 mL 용량 플라스크에 제일인산나트륨(NaH2PO4) 6 g 을 넣어 물로 표시선까지 채운 후 5 M NaOH를 가하여 pH 4.5로 맞춘다.

차) 0.17 M 황산 : 100 mL 용량 플라스크에 황산 1.67 g 을 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

카) 25 mM 인산칼륨완충용액(pH 9.0) : 100 mL 용량 플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 0.34 g 넣은 후 물로 표시선까지 채운 후, NaOH를 가하여 pH 9.0이 되도록 조절한다.

타) 0.1 M 인산수소나트륨용액 : 1L 용량플라스크에 제이인산수소나트륨(Na2HPO4) 14.2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

파) 0.05 mM 인산수소칼륨용액 : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

하) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

거) HLB 카트리지(500 mg, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 내부표준물질(피페라실린)을 첨가한다. 0.1 M 인산나트륨완충용액(pH 4.5) 6 mL, 0.17 M 황산 1.5 mL, 5% 텅스텐산나트륨 1.5 mL를 넣고 10분간 진탕한 후 4℃에서 5,000 g로 15분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 5 M NaOH를 가하여 pH 8.1∼8.5로 조절 후 4℃에서 5,000 g로 15분간 원심분리 후 상층액을 취하여 20% NaCl 10 mL를 넣고 이액을 추출액으로 한다. 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 2% NaCl 5 mL로 활성화 시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% NaCl 5 mL, 25 mM 인산칼륨완충용액(pH 9.0) 5 mL 순서로 세척한 후 카트리지를 건조시킨다. 아세토니트릴 3 mL로 두 번에 걸쳐 대상성분을 용출시키고 40℃이하의 수욕상에서 질소농축시킨다.  5 mM 인산칼륨완충용액(pH 9.0) 1 mL로 재용해하고 0.2 μm PVDF 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유 및 알

균질화한 검체(유 20 mL, 알 5 g)를 50 mL 원심분리관에 취하고 유는 아세토니트릴 50 mL, 알은 20% 트리클로로초산 0.5 mL이 포함된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한다. 혼합액을 9,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 9,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 용액을 0.1 M 수산화나트륨 용액으로 pH 9.0±0.2로 조절한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm PVDF 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 수산물

균질화한 검체 2 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20 v/v) 10 mL를 넣고 2분간 균질화시킨다. 균질화시킨 검체를 50 mL 원심분리관으로 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20, v/v) 10 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞의 시료와 합한다. 합친 시료를 5,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을 때까지 감압농축한다. 농축액을 여분의 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 5,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm PVDF 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.05% 포름산이 포함된 물

(나) 이동상 B : 0.05% 포름산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	90	10
10.0	50	50
15.0	25	75
15.1	90	10
20.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤, 또는 비활성 기체)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	나프실린 (Nafcillin)	12.86	415	171 199 256	33 14 14
2	디클록사실린 (Dicloxacillin),	13.52	470	114 160 198 311	36 13 36 15
3	벤질페니실린, 페니실린 G (Benzylpenicillin, Penicillin G)	10.30	335	160 176	12 13
4	아목시실린 (Amoxicillin)	2.65	366	114 349	20 7
5	암피실린 (Ampicillin)	5.15	350	106 114 192	17 29 17
6	옥사실린 (Oxacillin)	11.72	402	114 144 160 243	33 27 13 13
7	클록사실린 (Cloxacillin)	12.48	436	160 164 277	14 33 14
8	페녹시메틸페니실린, 페니실린 V (Phenoxymethylpenicillin, Penicillin V)	11.22	351	114 160 192	34 11 11
9	피페라실린 (내부표준물질, Piperacillin)	9.66	518	143 160	20 12

1 밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

가) 정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물	수산물	유	알
나프실린	0.03	0.005	0.001	0.001
디클록사실린	0.03	0.005	0.001	0.001
벤질페니실린 (페니실린 G)	0.01	0.001	0.005	0.001
아목시실린	0.01	0.005	0.002	0.001
암피실린	0.01	0.001	0.001	0.001
옥사실린	0.01	0.005	0.001	0.001
클록사실린	0.03	0.005	0.005	0.001
페녹시메틸페니실린 (페니실린 V)	0.01	-	-	-

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램. 아목시실린(2.6분), 암피실린(5.1분), 피페라실린(내부표준물질, 9.6분), 벤질페니실린(10.3분), 페녹시메틸페니실린(11.2분), 옥사실린(11.7분), 클록사실린(12.5분), 나프실린(12.8분), 디클록사실린(13.5분)

5.3.33 ∼ 5.3.35를 각각 5.3.32 ∼ 5.3.34로 한다.

5.3.36을 5.3.35로 하고 아프라마이신의 시험법 적용범위를 “축·수산물”에서 “유, 알 및 수산물 등”으로 한다.

5.3.37 ∼ 5.3.48을 각각 5.3.36 ∼ 5.3.47로 한다.

5.3.48을 다음과 같이 한다.

5.3.48 독시싸이클린(Doxycycline), 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline), 테트라싸이클린(Tetracycline)

5.3.48.1 제1법

1) 시험법 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

가) 유(乳)

검체에 트리클로로초산 용액을 넣어 단백질을 제거한 후 여과하여 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 측정한다.

나) 수산물

검체에 EDTA가 함유된 트리클로로초산을 가하여 균질화한 후 원심분리하고 여기에 헥산을 가해 추출하여 농축한 다음 Sep-pak C18 카트리지에 흘려 흡착 및 용출시켜 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 측정한다.

다) 유(乳) 및 수산물을 제외한 식품

검체에 C18 분말, 수산(oxalic acid)과 EDTA를 넣고 균질화한 후 혼합물을 주사기에 채우고 헥산, 디클로로메탄으로 세척한 다음, 수산 함유 메탄올로 용출하여 건조시킨다. 여기에 이동상을 가하여 용해시킨 후 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액

(1) 유(乳), 알(卵), 수산물

옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린 표준품을 각각 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 mg/L 농도가 되게 한다.

(2) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린 표준품 10 mg을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 메탄올 10 mL에 잘 녹인 다음 물로 표시선까지 채워 잘 혼합한다(100 ppm).

나) 표준용액

(1) 유(乳)

표준원액을 물로 희석해서 사용한다.

(2) 알(卵), 수산물

표준원액을 메탄올로 10 mg/L 농도가 되게 한 후 희석하여 사용한다.

(3) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

표준원액 10 mL을 정확히 취하여 100 mL 메스플라스크에 옮기고 이동상으로 표시선까지 채운 다음 잘 혼합하여 사용한다(10 ppm).

다) 이동상：무수수산 1.26 g을 물 1 L에 용해시킨 후 이 액 720 mL와 아세토니트릴 180 mL 그리고 메탄올 100 mL를 잘 혼합한 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 이동상으로 사용한다.

라) 기타 시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)

검체 1 mL에 1.5 mL 20% 트리클로로초산(TCA) 용액을 넣어 30초간 균질화한 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)

C18 분말 2 g을 유발에 취하고 검체 0.5 g, 수산과 EDTA 각각 0.05 g을 가하고 막자로 C18 분말과 검체가 완전히 균질화되게 한다. 여과지(Whatman No. 1) 2장을 10 mL 주사기에 넣고 균질화된 혼합물을 주사기에 옮겨 담는다. 혼합물 위에 여과지 1장을 놓고 주사봉을 이용하여 혼합물의 부피가 약 4.5 mL되게 압축한다. 헥산 8 mL를 가하여 흘려 보내고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 혼합물 내에 남아있는 헥산을 음압하에서 제거한다. 다시 디클로로메탄 8 mL로 세척하고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 음압하에서 완전히 건조시킨다. 0.01 M 메탄올함유 수산 8 mL로 용출시킨후 그 용출액을 질소농축하여 건조한다. 건조물에 이동상 1 mL를 가하여 10분간 초음파를 통과시키고 용해시킨 후 4℃ 15,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취해 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

다) 수산물

검체를 마쇄한 후 10 g을 취해 0.5% EDTA가 함유된 5% 트리클로로초산 40 mL를 가하여 균질기로 2분간 균질화한다. 이 액을 8,000 rpm에서 20분간 원심분리해 상층액을 취해 분액깔때기로 옮기고 헥산：클로로포름(9：1) 혼합액 40 mL를 가해 혼합한 후 액층이 분리될 때까지 정치한다. 분리된 액층 중 아래층은 다른 분액깔때기에 옮겨 헥산：클로로포름(9：1) 혼합액을 다시 40 mL 가하여 액층을 분리한다. 분리된 아래 액층은 농축플라스크에 받아 3 mL 정도가 되도록 40℃에서 감압 농축한다. 농축액은 활성화시킨 Sep-pak C18 카트리지에 흘린 후, 증류수 40 mL를 흘려 세척한다. 카트리지에 흡착된 성분은 메탄올 40 mL를 흘려 용출시키고, 용출액은 다시 감압 하에서 농축기로 건조시킨다. 시험액이 건조된 플라스크에 이동상 2 mL를 가하여 녹이고 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

* Sep-pak C18 카트리지 활성화

진공음압기에 장착하여 20 mL의 메탄올과 20 mL의 증류수를 순차적으로 흘려 세척하고, 5% EDTA 용액 10 mL를 흘린다.

라) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

C18 분말 2 g을 유발에 취하고 검체 0.5 g, 수산과 EDTA 각각 0.05 g을 가하고 막자로 C18 분말과 검체가 완전히 균질화되게 한다. 여과지(Whatman No. 1) 2장을 10 mL 주사기에 넣고 균질화된 혼합물을 주사기에 옮겨 담는다. 혼합물 위에 여과지 1장을 놓고 주사봉을 이용하여 혼합물의 부피가 약 4.5 mL되게 압축한다. 헥산 8 mL를 가하여 흘려 보내고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 혼합물 내에 남아있는 헥산을 음압하에서 제거한다. 다시 디클로로메탄 8 mL로 세척하고 주사기를 vacuum manifold로 옮겨 음압하에서 완전히 건조시킨다. 0.01 M 수산 함유 메탄올 8 mL로 용출시킨후 그 용출액을 40℃에서 건조시키고 잔류물에 이동상 0.5 mL을 가하여 초음파장치에서 5분간 방치하여 완전히 용해시킨 다음 원심분리하여 상층액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼

(가) 유(乳), 알(卵), 수산물

: C18(4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 유(乳), 알(卵)을 제외한 식품

: μ-Bondapak C18(3.9×300 mm, 10 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：0.01 M 수산：아세토니트릴：메탄올(700：200：100)

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：UV 360 nm

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린의 함량을 각각 구한다.

나) 독시싸이클린 정량한계：0.05 mg/kg

8) 확인시험

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(2.1 × 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 35℃

- 이동상

․이동상 A : 0.1% 개미산 용액

․이동상 B : 0.1% 개미산 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	70	30
3.0	60	40
3.1	70	30
4.0	70	30

- 유속 : 0.3 mL/분

- 주입량 : 5 μL

(2) 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary temperature : 350℃

- Collision gas : 아르곤(Ar)

- Collision energy : 15 ～ 30 V

나) 확인

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 표준용액에서 분리 확인되는 특이이온이 시험용액에서 존재하는지를 비교 확인한다. 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
옥시테트라싸이클린	461	426, 443, 381
테트라싸이클린	445	427, 410, 154
클로르테트라싸이클린	479	462, 444, 154
독시싸이클린	445	428, 321, 154

5.3.48.2 제2법

1) 시험법 적용범위

벌꿀 등에 적용한다.

2) 분석원리

아카시아꿀, 유채꿀, 잡화꿀 중의 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린은 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0)으로 추출한 후 약양이온교환 카트리지로 정제하고 밤꿀 등 기타 꿀 중의 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린은 맥바인(Macllvaine) 완충용액으로 추출하여 페닐 카트리지와 약양이온교환 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가)  용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린 표준품을 각각 정밀히 달아 100 μg/mL이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산 수용액으로 희석하여 사용한다.

마) 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0) : 1 L 메스플라스크에 초산나트륨(CH3COONa) 8.2 g을 취하여 물에 녹이고 초산으로 pH 5.0으로 맞춘 후 표시선까지 채운다.

바) 2% 개미산 메탄올 용액 : 100 mL 메스플라스크에 개미산 용액(≥95%) 2.1 mL를 취한 후 메탄올에 녹여 표시선까지 채운다.

사) 맥바인(Macllvaine) 완충용액 : 구연산(citric acid monohydrate) 11.8 g과 EDTA․2Na 33.62 g 및 제이인산나트륨(disodium hydrogen phosphate dihydrate) 13.72 g을 물 1 L에 녹인다.

아) 페닐(Phenyl) 카트리지 : 페닐 충진제(1,000 mg, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

자) 약양이온교환 카트리지 : WCX(Weak Cation Exchange) 카트리지(150 mg, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

차) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 아카시아꿀, 유채꿀, 잡화꿀

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심관에 취하여 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0) 10 mL를 가한 후 흔들어 섞는다. 이 용액을 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 약양이온교환 카트리지에 흡착시키고, 물 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 세척 후 2% 개미산 메탄올 용액 10 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고, 잔류물은 0.1% 개미산 수용액 1 mL에 녹인 후 0.2 μm PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 밤꿀, 기타 꿀(현행과 같음)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심관에 취하고 맥바인(Macllvaine) 완충용액 10 mL를 가하여 흔들어 섞는다. 이 용액을 미리 메탄올 5 mL, 아세토니트릴 5 mL, 0.01 M 수산 5 mL, 포화 Na2EDTA 용액 5 mL 순으로 활성화시킨 페닐 카트리지에 흡착시키고, 0.01 M 수산 용액 5 mL로 세척 후, 에틸아세테이트:메탄올(9:1)  10 mL로 용출시킨다. 이 용출액에 물 2 mL를 가하고 40℃ 이하의 수욕중에서 감압하여 잔류물이 2 mL가 되도록 농축한다. 이 농축액에 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0) 5 mL를 가한 후 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 약양이온교환 카트리지에 흡착시키고, 물 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 세척 후 2% 개미산 메탄올 용액 10 mL로 용출시킨다. 용출액은 40℃ 이하의 수욕중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 0.01 M 수산 용액:아세토니트릴(8:2) 용액 1 mL로 녹인 후 0.2 μm PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산이 함유된 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2	90	10
7	10	90
9	10	90
12	90	10
15	90	10

(4) 유속 : 0.2 mL/분

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 4.2 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

가) 정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 각 물질에 대한 정량이온(옥시테트라싸이클린 m/z 426 이온, 클로르테트라싸이클린 m/z 154 이온, 테트라싸이클린 m/z 154 이온, 독시싸이클린 m/z 428 이온)의 피크 면적값을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액 크로마토그램상의 각 물질에 대한 정량이온의 피크 면적값에 따라 각각의 함량을 구한다.

물질명 (Compounds)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy,eV)
독시싸이클린 (Doxycycline)	444.4	444.1533	445	98 154 428	44 32 22
옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	460.4	460.1482	461	201 426 443	42 22 16
클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	478.9	478.1143	479	154 444 462	28 24 18
테트라싸이클린 (Tetracycline)	444.4	444.1533	445	154 410 427	30 18 16

1 밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

나) 정량한계 : 0.01 mg/kg

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

옥시테트라싸이클린

클로르테트라싸이클린

테트라싸이클린

독시싸이클린

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램. 옥시테트라싸이클린(1 ng, 5.1분), 테트라싸이클린(1 ng, 5.3분), 클로르테트라싸이클린(1 ng, 5.7분), 독시싸이클린(1 ng, 5.8분)

5.3.49와 5.3.50을 삭제한다.

5.3.51 ∼ 5.3.72를 각각 5.3.49 ∼ 5.3.70으로 하고 5.3.73 및 5.3.74를 삭제한다.

5.3.75 ∼ 5.3.83을 각각 5.3.71 ∼ 5.3.79로 한다.

5.3.84를 5.3.80으로 하고 시험법 적용범위를 “축·수산물”에서 “유, 알 및 수산물”로 한다.

5.3.85 ∼ 5.3.106을 각각 5.3.81 ∼ 5.3.102로 한다.

5.3.107을 5.3.103으로 하고 시험법 적용범위를 “축산물”에서 “유”로 한다.

5.3.108 ∼ 5.3.116을 각각 5.3.104 ∼ 5.3.112로 한다.

[별표 4], (9) 델타메트린(Deltamethrin) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

[별표 4], (29) 디플루벤주론(Diflubenzuron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.1

풋콩	1.0

[별표 4], (101) 이미다클로프리드(Imidacloprid) 중 다음 항목을 신설한다.

참깨	0.05

[별표 4], (114) 카보퓨란(Carbofuran)의 잔류물의 정의를 다음과 같이 한다.

◎ 잔류물의 정의 : Benfuracarb, Carbofuran, 3-hydroxycarbofuran, Carbosulfan, Furathiocarb의 합을 carbofuran으로 함

[별표 4], (116) 카탑 하이드로클로라이드(Cartap hydrochloride) 중 다음 항목을 신설한다.

마늘	0.05

[별표 4], (133) 테부코나졸(Tebuconazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

상추	0.05

양상추	0.05

[별표 4], (227) 아세타미프리드(Acetamiprid) 중 다음 항목을 신설한다.

풋콩	0.5

[별표 4], (237) 피메트로진(Pymetrozine) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

엇갈이배추	0.5

배추	0.2

참외	0.1

[별표 4], (257) 플루퀸코나졸(Fluquinconazole)) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

상추	0.05

오디	2.0

[별표 4], (299) 티플루자마이드(Thifluzamide) 중 다음 항목을 신설한다.

파	0.05

[별표 4], (321) 디노테퓨란(Dinotefuran) 중 다음 항목을 신설한다.

마늘	0.05

[별표 4], (324) 비페나제이트(Bifenazate) 중 다음 항목을 신설한다.

토마토	0.3

[별표 4], (333) 테부피림포스(Tebupirimfos) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

[별표 4], (352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide) 중 다음 항목을 신설한다.

당근	0.05

[별표 4], (394) 비스트리플루론(Bistrifluron) 중 “엇갈이배추 1.0”을 “엇갈이배추 3.0”으로 하고, “배추 0.3”을 “배추 1.0”으로 한다.

[별표 4], (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

가지	0.5

브로콜리	0.5

양배추	0.05

[별표 4], (416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole) 중 다음 항목을 신설한다.

면실	0.3†

[별표 4], (417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.1

풋콩	1.0

[별표 4], (419) 프로헥사디온-칼슘(Prohexadione-Calcium) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘	0.05

풋마늘	0.05

양파	0.05

[별표 4], (422) 펜티오피라드(Penthiopyrad) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	1.0

피망	1.0

[별표 4], (423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘	0.05

풋마늘	2.0

파	0.3

[별표 4], (424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon) 중 다음 항목을 신설한다.

감	0.5

[별표 4], (428) 플루오피람(Fluopyram) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

가지	2.0

복숭아	0.4

[별표 4], (430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

양상추	5.0

매실	0.3

[별표 4], (433) 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘	0.05

아몬드	0.04†

피칸	0.01†

면실	1.5†

유채씨	0.8†

해바라기씨	0.5†

[별표 4], (437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

[별표 4], (438) 피리오페논(Pyriofenone) 중 다음 항목을 신설한다.

토마토	3.0

[별표 4], (439) 스피로테트라맷(Spirotetramat) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감자	0.3

피망	2.0

[별표 4], (442) 이프펜카바존(Ipfencarbazone)을 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Ipfencarbazone

쌀	0.05

[별표 4], (443) 테퓨릴트리온(Tefuryltrione)을 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Tefuryltrione

쌀	0.05

[별표 4], (444) 트리아파몬(Triafamone)을 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Triafamone

쌀	0.05

[별표 4], (445) 이마자픽(Imazapic)을 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Imazapic

대두	0.3†

[별표 4], (446) 이마자피르(Imazapyr)를 다음과 같이 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Imazapyr

대두	3.0†

[별표 5], (79) 포스티아제이트(Fosthiazate)를 다음과 같이 각각 신설한다.

◎ 잔류물의 정의 : Fosthiazate

수삼	0.05

건삼	0.1

[별표 6], (21) 사이퍼메트린(Cypermethrin) 중 “유 0.05(F)”를 삭제한다.

[별표 7], (4) 노보비오신(Novobiocin)을 다음과 같이 한다.

(4) 노보비오신(Novobiocin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Novobiocin

식품명             mg/kg

소근육	1.0

닭근육	1.0

칠면조근육	1.0

오리근육	1.0

[별표 7], (29) 오르메토프림(Ormethoprim)을 다음과 같이 한다.

(29) 오르메토프림(Ormethoprim) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Ormethoprim

식품명             mg/kg

칠면조근육	0.1

오리근육	0.1

닭근육	0.1

닭간	0.1

닭지방	0.1

닭신장	0.1

어류*	0.1

[별표 7], (30) 옥소린산(Oxolinic acid)을 다음과 같이 한다.

(30) 옥소린산(Oxolinic acid) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Oxolinic acid

식품명             mg/kg

소근육	0.05

돼지근육	0.05

닭근육	0.1

닭간	0.15

닭지방	0.05

닭신장	0.15

송어	0.1

연어	0.1

방어	0.1

뱀장어	0.1

은어	0.1

잉어	0.1

갑각류	0.1

[별표 7], (32) 올레안도마이신(Oleandomycin)을 다음과 같이 한다.

(32) 올레안도마이신(Oleandomycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Oleandomycin

식품명         mg/kg

소근육	0.15

유             0.05

[별표 7], (36) 죠렌(Zoalene)을 다음과 같이 한다.

(36) 죠렌(Zoalene) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Zoalene

식품명         mg/kg

닭근육	3.0

칠면조근육      3.0

부칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시 후 60일이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품을 포함한다)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제1. 총칙

(생   략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준  및 규격

1. (생   략)

2. 식품원료 기준

1) ～ 2) (생   략)

<신    설>

제3. ∼ 제8. (생   략)

제9. 일반시험법  (생   략)

1 ∼ 3 (생   략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.42 (생   략)

4.1.4 단성분 분석법(Individual residue methods)

4.1.4.1 ∼ 4.1.4.173 (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

4.2∼4.3 (생  략)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 (생  략)

5.2 간이시험법

<신 설>

1) 시험법의 적용 범위

축·수산물 등에 적용 한다.

2) ∼ 7) (생 략)

<신 설>

<신  설>

5.3 정량시험법

5.3.1 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin), 스트렙토마이신(Streptomycin), 스펙티노마이신(Spectinomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 겐타마이신, 네오마이신, 디히드로스트렙토마이신, 스트렙토마이신 및 스펙티노마이신을 삼염화초산이 함유된 인산완충용액으로 추출한 후, HLB 및 약양이온교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프/질량분석기

나) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 : Divinylbenzene -N-vinylpyrrolidone Copolymer가 200 mg 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

다) 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지 : 약양이온교환수지가 150 mg 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 표준원액 : 겐타마이신, 네오마이신, 디히드로스트렙토마이신, 스트렙토마이신 및 스펙티노마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취한다. 물 40 mL에 녹인 후 아세토니트릴 20 mL와 초산 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채워 각각 100 μg/mL로 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관 한다.

다) 표준원액을 아세토니트릴 : 초산 : 물 (10:1:39) 혼합용액으로 겐타마이신은 0.01, 0.025, 0.05, 0.1, 0.15 및 0.2 mg/L, 네오마이신과 스펙티노마이신은 0.05, 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0 mg/L, 디히드로스트렙토마이신과 스트렙토마이신은 0.06, 0.15, 0.3, 0.6, 0.9 및 1.2 mg/L가 되게 한다. 시험 당일 제조하도록 한다.

라) 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 : 2 L 메스플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 2.72 g를 넣고 물 1.9 L로 녹인 후 1 N 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨(Na2EDTA dihydrate) 0.3 g과 삼염화초산 40 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

마) 1.6% 삼염화초산 용액 : 250 mL 메스플라스크에 삼염화초산 4.1 g을 넣고 물 100 mL를 넣어 용해시킨 후 아세토니트릴 50 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 20 mM HFBA (heptafluorobutyric acid)/5% 아세토니트릴 : 1 L 메스플라스크에 아세토니트릴 50 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

사) 20 mM HFBA (heptafluorobutyric acid)/50% 아세토니트릴 : 1 L 메스플라스크에 아세토니트릴 500 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 3 g을 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 15 mL를 넣은 후 10분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 3,000 G에서 약 10분간 원심분리한다. 상층액을 여과지로 여과하여 50 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 취하고 잔사에 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 15 mL를 넣은 후 위와 동일하게 원심분리하여 상층액을 합한다. 모아진 상층액에 30% 수산화나트륨용액 0.2 mL를 가하여 pH 7.5로 조정하고(필요시 1 N 염산용액 또는 1 N 수산화나트륨용액을 가하여 pH를 조정한다) 이 액을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 HLB 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 각각 활성화시킨 후 HLB 카트리지 위에 약양이온교환 카트리지를 연결한다. 연결한 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한다. 이때 감압하여 물을 완전히 제거해 준다. 1.6% 삼염화초산 용액 6 mL로 15 mL 폴리프로필렌 원심분리관에 용출하고 용출용액은 최종 6 mL로 조정한다. 이 용액을 균질화 한 후 멤브레인 필터로 여과하여 액체크로마토그래프용 폴리프로필렌 바이알에 옮겨 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C18(2.0 × 75 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 20 mM HFBA/5% 아세토니트릴

② 이동상 B : 20 mM HFBA/50% 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
0.5	80	20
9.0	5	95
10.0	5	95
10.1	80	20
15.0	80	20

③ 유속 : 0.3 mL/분

④ 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 450℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy : 10 V

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 겐타마이신은 겐타마이신(C1a), 겐타마이신(C2, C2a), 겐타마이신(C1)을 각각 m/z 322 이온의 면적에 대한 합으로써 검량선을 작성하여 시험용액 중 겐타마이신의 함량을 구한다. 또한 네오마이신은 m/z 455, 디히드로스트렙토마이신은 m/z 263, 스트렙토마이신은 m/z 263, 스펙티노마이신은 m/z 333 이온에 대한 각각의 면적을 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
Gentamicin(C1a)	450	322, 160
Gentamicin(C2, C2a)	464	322, 160
Gentamicin(C1)	478	322, 160
Neomycin	615	455, 323, 294, 161
Dihydrostreptomycin	584	263, 246, 221
Streptomycin	582	263, 246, 221
Spectinomycin	351	333, 315, 98

8) 정량한계

가) 겐타마이신 : 0.05 mg/kg

나) 네오마이신 : 0.02 mg/kg

다) 디히드로스트렙토마이신 : 0.01 mg/kg

라) 스트렙토마이신 : 0.05 mg/kg

마) 스펙티노마이신 : 0.05 mg/kg

5.3.2 ∼ 5.3.25 (생략)

5.3.26 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린(Cloxacillin)

5.3.27 ∼ 5.3.28 (생략)

5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin)

5.3.29.1 제1법

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) ∼ 7) (생략)

5.3.29.2 제2법 (생략)

5.3.30 ∼ 5.3.31 (생략)

5.3.32 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 나프실린(Nafcillin), 옥사실린(Oxacillin)

1) 시험법의 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에 아세토니트릴 : 물 혼합액(유 및 알의 경우 트리클로로초산이 함유된 아세토니트릴)을 가한 후 대상성분을 추출하고 액-액 분배 및 고상추출법으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액 : 아목시실린, 암피실린, 벤질페니실린, 클록사실린, 디클록사실린 및 나프실린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100  mg/L 농도가 되게 한다

나) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 적당한 농도가 되게 희석하여 사용한다.

다) HLB 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

라) 0.1 M 인산수소나트륨용액 : 1L 용량플라스크에 제이인산수소나트륨(Na2HPO4) 14.2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

마) 0.05 mM 인산수소카륨용액 : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축․수산물

균질화한 시료(소고기, 닭고기, 광어) 2 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20 v/v) 10 mL를 넣고 2분간 균질화시킨다. 균질화시킨 시료를 50 mL 원심분리관으로 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20, v/v) 10 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 시료와 합한다. 합친 시료를 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을 때까지 감압농축한다. 농축액을 여분의 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. ★미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유 및 알

균질화한 시료(유(乳) 20 mL, 알 5 g)를 50 mL 원심분리관에 취하고 유는 아세토니트릴 50 mL, 알은 20% 트리클로로초산 0.5 mL이 포함된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한다. 혼합액을 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 용액을 0.1 M 수산화나트륨 용액으로 pH 9.0±0.2로 조절한다. 추가 정제과정은 위의 ★이후 과정을 따른다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18 (2.0 mm × 150 mm, 3 μm)

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 포름산이 포함된 물

② 이동상 B : 0.1% 포름산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0	98	2
2	98	2
2.1	80	20
8.0	80	20
10	0	100
30	0	100
40	98	2
45	98	2

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy :

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ions(m/z)	Collision energy (V)
아목시실린	366	349, 114	8
암피실린	350	106, 192	17
벤질페니실린	335	160, 176	11
클록사실린	436	277, 160	15
디클록사실린	470	160, 311	13
나프실린	415	199, 171	14
옥사실린	402	160, 243	13

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물	수산물	유	알
아목시실린	0.005	0.005	0.002	0.001
암피실린	0.005	0.001	0.001	0.001
벤질페니실린	0.001	0.001	0.005	0.001
클록사실린	0.005	0.005	0.005	0.001
디클록사실린	0.001	0.005	0.001	0.001
나프실린	0.001	0.005	0.001	0.001
옥사실린	0.001	0.005	0.001	0.001

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 벤질페니실린 (12.5분), 암피실린 (6.4분), 아목시실린 (6.1분), 옥사실린 (12.7분), 나프실린 (12.8분), 클록사실린 (12.8분), 디클록사실린(13.0분)

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.33 ∼ 5.3.35 (생략)

5.3.36 아프라마이신(Apramycin), 콜리스틴(Colistin)

1) 시험법 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) ∼ 7) (생략)

5.3.37 ∼ 5.3.48 (생략)

5.3.49 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline), 테트라싸이클린(Tetracycline), 독시싸이클린(Doxycycline)

1) 시험법 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) ∼ 8) (생략)

<신 설>

5.3.50 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline)

5.3.51 ∼ 5.3.72 (생략)

5.3.73 암피실린(Ampicillin), 아목시실린(Amoxicillin)

5.3.74 암피실린(Ampicillin)

5.3.75 ∼ 5.3.83 (생략)

5.3.84 카나마이신(Kanamycin)

1) 시험법 적용범위

축산물, 수산물 등에 적용한다.

2) ∼ 7) (생략)

5.3.85 ∼ 5.3.106 (생략)

5.3.107 아미카신(Amikacin)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) ∼ 7)  (생략)

5.3.108 ∼ 5.3.116 (생략)

6. ∼ 9. (생략)

제10. ∼ 제11. (생략)

[별표 1] ∼ [별표 3] (생   략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (8) (생   략)

(9) 델타메트린(Deltamethrin)

(생   략)

<신    설>

(10) ∼ (28) (생   략)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(30) ∼ (100) (생   략)

(101) 이미다클로프리드(Imicacloprid)

(생   략)

<신    설>

(102) ∼ (113) (생   략)

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

◎ 잔류물의 정의 : Carbofuran과 3-hydroxycarbofuran의 합을 carbofuran으로 함

(생   략)

(115) (생   략)

(116) 카탑 하이드로클로라이드(Cartap hydrochloride)

(생   략)

<신    설>

(117) ∼ (132) (생   략)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(134) ∼ (226) (생   략)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(생   략)

<신    설>

(228) ∼ (236) (생   략)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(238) ∼ (256) (생   략)

(257) 플루퀸코나졸(Fluquinconazole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(258) ∼ (298) (생   략)

(299) 티플루자마이드(Thifluzamide)

(생   략)

<신    설>

(300) ∼ (320) (생   략)

(321) 디노테퓨란(Dinotefuran)

(생   략)

<신    설>

(322) ∼ (323) (생   략)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(생   략)

<신    설>

(325) ∼ (332) (생   략)

(333) 테부피림포스(Tebupirimfos)

(생   략)

<신    설>

(334) ∼ (351) (생   략)

(352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide)

(생   략)

<신    설>

(353) ∼ (393) (생   략)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(생   략)

엇갈이배추	1.0

배추	0.3

(395) ∼ (407) (생   략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(409) ∼ (415) (생   략)

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(생   략)

<신    설>

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(418) (생   략)

(419) 프로헥사디온-칼슘(Prohexadione -Calcium)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(420) ∼ (421) (생   략)

(422) 펜티오피라드(Pentiopyrad)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

(생   략)

<신    설>

(425) ∼ (427) (생   략)

(428) 플루오피람(Fluopyram)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(429) (생   략)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(431) ∼ (432) (생   략)

(433) 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(434) ∼ (436) (생   략)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(생   략)

<신    설>

(438) 피리오페논(Pyriofenone)

(생   략)

<신    설>

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(440) (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

[별표5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (78) (생   략)

<신    설>

[별표6] 축산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (20) (생   략)

(21) 사이퍼메트린(Cypermethrin)

(생   략)

유	0.05(F)

(22) ∼ (82) (생   략)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (3) (생략)

(4) 노보비오신(Novobiocin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Novobiocin

식품명             mg/kg

소고기	1.0

닭고기	1.0

칠면조고기	1.0

오리고기	1.0

(5) ∼ (28) (생략)

(29) 오르메토프림(Ormethoprim) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Ormethoprim

식품명             mg/kg

칠면조고기	0.1

오리고기	0.1

닭근육	0.1

닭간	0.1

닭지방	0.1

닭신장	0.1

어류*	0.1

(30) 옥소린산(Oxolinic acid) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Oxolinic acid

식품명             mg/kg

소고기	0.05

돼지고기	0.05

닭근육	0.1

닭간	0.15

닭지방	0.05

닭신장	0.15

송어	0.1

연어	0.1

방어	0.1

뱀장어	0.1

은어	0.1

잉어	0.1

갑각류	0.1

(31) (생 략)

(32) 올레안도마이신(Oleandomycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Oleandomycin

식품명         mg/kg

소고기	0.15

유             0.05

(33) ∼ (35) (생략)

(36) 죠렌(Zoalene) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Zoalene

식품명         mg/kg

닭고기	3.0

칠면조고기      3.0

(37) ∼ (127) (생략)

[별표 8]  (생략)

제1. 총칙

(현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준  및 규격

1.(현행과 같음)

2. 식품원료 기준

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 한시적 인정 식품원료의 추가 등재

(1)「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준」에 따라 인정된 식품원료는 다음의 어느 하나를 충족하면 「식품의 기준 및 규격」[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록 또는 [별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록에 추가로 등재할 수 있다.

① 한시적 기준 및 규격을 인정받은 날로부터 3년이 경과한 경우

② 한시적 기준 및 규격을 인정받은 자가 3인 이상인 경우

③ 한시적 기준 및 규격을 인정받은 자가 등재를 요청하는 경우(다만, 인정받은 자가 2명인 경우 모두 등재를 요청하는 경우)

제3. ∼ 제8. (현행과 같음)

제9. 일반시험법 (현행과 같음)

1 ∼ 3 (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.42 (현행과 같음)

4.1.4 단성분 분석법(Individual residue methods)

4.1.4.1 ∼ 4.1.4.173 (현행과 같음)

4.1.4.174 이프펜카바존(Ipfencarbazone)

1) 분석법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 헥산을 이용하여 액-액 분배하고 실리카 카트리지로 정제한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프 - 전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프 - 질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 한 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 증류수 10 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세톤 100 mL을 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세톤 15 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL와 증류수 100 mL을 차례로 가한 후 헥산 50 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 헥산 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 수용액 층에 헥산 50 mL를 추가로 가하고 헥산 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 헥산 10 mL에 녹인다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 2 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산(10/90,v/v) 10 mL를 유출시켜 버린 후 에틸아세테이트/헥산(20/80, v/v) 10 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5 (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 질소, 1 mL/min.

(3) 오븐 온도 : 200℃에서 검체를 주입하고 10℃/min.의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 10분간 유지

(4) 주입부 온도 : 250℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입량 : 1 μL, split ratio (20:1)

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이프펜카바존 (9.7분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이프펜카바존을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS (0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : 헬륨, 1 mL/min.

(3) 오븐온도 : 200℃에서 검체를 주입하고 10℃/min.의 비율로 온도를 280℃까지 상승시켜 10분간 유지

(4) 주입부 : 260℃

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 분자량 범위 : 100~550 m/z

(7) 주입량 : 1 μL, splitless

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	관측질량 (Exact mass)	관측이온 (m/z)
8.9	427.2	426	198, 228

4.1.4.175 테퓨릴트리온(Tefuryltrione)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 테퓨릴트리온을 포름산을 포함한 아세토니트릴로 추출한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합용매로 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실 카트리지 : 플로리실 고정상(1 g)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 증류수 10 mL를 가한 후 30분방치) 아세토니트릴 30 mL, 증류수 10 mL 및 포름산 0.4 mL를 가하여 진탕기에서 30분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친다. 여과액을 500 mL 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL와 증류수 40 mL를 차례로 가한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 추가로 가하고 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 3회 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 아세톤/디클로로메탄(50/50, v/v) 혼합용매 10 mL에 녹인다.

나) 정제

플로리실 카트리지에 아세톤/디클로로메탄(50/50, v/v) 혼합용매 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 1 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/디클로로메탄(50/50, v/v) 혼합용매 5 mL를 유출시켜 씻어버린 후 4% 포름산이 포함된 아세톤/디클로로메탄(60/40, v/v) 혼합용매 8 mL를 유출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2 mm i.d. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 :

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산 수용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.1	50	50
3	80	20
4	80	20
5.5	50	50
15	50	50

(4) 이동상 유량 : 0.25 mL/min.

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Spray voltage : 3.5 kV

(4) Collision gas : 아르곤

(5) 충돌에너지

분석성분	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragment ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
테퓨릴트리온	443	261	30
		305	20

※ 각 토막이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막이온도 적용이 가능함

나) 검량선 작성

표준용액을 아세토니트릴에 일정농도로 희석한 다음 검체에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

테퓨릴트리온(4.3분)

라) 정량한계

0.03 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

4.1.4.176 트리아파몬(Triafamone)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 트리아파몬을 포름산을 포함한 아세토니트릴로 추출한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합용매로 액-액 분배하고 C18 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 - 질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 :  표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18 고정상(500 mg)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 그 10 g, 과일류․채소류․서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 증류수 10 mL를 가한 후 30분방치) 아세토니트릴 30 mL, 증류수 10 mL 및 포름산 0.4 mL를 가하여 진탕기에서 30분간 진탕한 후 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친다. 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL와 증류수 40 mL를 차례로 가한 후 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕하고 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 에틸아세테이트/디클로로메탄(70/30, v/v) 혼합용매 20 mL를 추가로 가하고 상층의 에틸아세테이트/디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 3회 반복한다.  이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 증류수 10 mL에 녹인다.

나) 정제

C18 카트리지에 1% 포름산이 함유된 메탄올 3 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 1% 포름산이 함유된 메탄올/물(20/80, v/v) 3 mL를  2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 추출액 중 2 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 1% 포름산이 함유된 메탄올/물(80/20, v/v) 4 mL를 유출시켜 받은 시험액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2 mm i.d. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴/0.1% 포름산 수용액(90/10, v/v)

(4) 이동상 유량 : 0.25 mL/min.

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) 이온화 : ESI positive-ion mode

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Spray voltage : 4.0 kV

(4) Collision gas : 아르곤

(5) 충돌에너지

분석성분	선구이온 (Precursor ion, m/z)	토막이온 (Fragment ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리아파몬	407	160	43
		245	24

※ 각 토막이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 토막이온도 적용이 가능함

다) 검량선 작성

표준용액을 아세토니트릴에 일정농도로 희석한 다음 검체에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

트리아파몬(5.8분)

마) 정량한계

0.03 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

4.1.4.177 이마자피르(Imazapyr)

1) 분석법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 과일류 및 채소류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이마자피르를 메탄올로 추출한 후 pH를 2.5로 조절하고 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올/0.5% 아세트산 수용액(50/50, v/v)에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 10 g(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 과일류․채소류·서류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 메탄올 100 mL(과일류, 채소류, 콩류의 경우 60% 메탄올, 곡류 및 서류는 70% 메탄올)를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한 뒤 메탄올 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 합친 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 농축액이 40 mL 이하가 될 때까지 메탄올을 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 증류수 60 mL를 더하고 4N HCl을 가하여 pH 2.5가 되도록 한다. 이를 500 mL 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 15 g 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 메탄올/0.5% 아세트산 수용액(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. [지방성 검체의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 분량의 분액 여두에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 메탄올/0.5% 아세트산 수용액(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.]

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 mm i.d. × 150 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.5% 아세트산 수용액(12/88, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min.

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 260 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이마자피르 (9.6분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이마자피르를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.0 mm i.d. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴/0.1% 포름산 수용액(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.25 mL/min.

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	관측이온 (m/z)
4.0	261.3	261	262

4.2∼4.3 (현행과 같음)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 (현행과 같음)

5.2 정성시험법

5.2.1 생물학적 시험법

1) 시험법의 적용 범위

축·수산물 등에 적용 한다.

2) ∼ 7) (현행과 같음)

5.2.2 물리·화학적 시험법

5.2.2.1 축산물 중 동물용의약품 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알, 벌꿀은 제외) 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 80% 아세토니트릴로 추출한 후 C18 분말로 분산하고 아세토니트릴 포화 헥산으로 정제하여 지방을 제거한 다음 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 및 표준용액：각 동물용의약품의 표준품을 아래의 표1과 같이 조제하여 표준원액 및 표준용액으로 사용하고 모두 냉동실에 보관하여 사용한다.

표 1. 표준원액 및 표준용액의 조제방법

물질명	용매	표준원액 (μg/mL)	희석 용매	표준용액 (μg/mL)
나프실린(Nafcillin)	DMSO	5,000	물	1,500
날리딕스산(Nalidixic acid)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	150
노르플록사신(Norfloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
노보비오신(Novobiocin)	DMSO	5,000	-	-
다노플록사신(Danofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	1,000
답손(Dapsone)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
독시싸이클린(Doxycycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
디클록사실린(Dicloxacillin)	DMSO	5,000	물	1,500
디플록사신(Difloxacin)	50% 메탄올	2,000	50% 메탄올	2,000
린코마이신(Lincomycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
마보플록사신(Marbofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	750
발네물린(Valnemulin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
버지니아마이신(Virginiamycin M1)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
벤질페니실린(Benzylpenicillin)	DMSO	5,000	물	250
사라플록사신(Sarafloxacin)	메탄올	1,000	아세토니트릴	50
세파졸린(Cefazolin)	DMSO	5,000	물	250
세파피린(Cephapirin)	DMSO	5,000	물	250
세팔렉신(Cephalexin)	50% DMSO	2,500	물	1,000
세팔로니움(Cefalonium)	DMSO	5,000	물	50
세포페라존(Cefoperazone)	DMSO	5,000	물	150
세푸록심(Cefuroxime)	DMSO	5,000	물	100
세프퀴놈(Cefquinome)	DMSO	5,000	물	250
세프티오퍼(Ceftiofur)	DMSO	5,000	-	-
스피라마이신(Spiramycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
시프로플록사신(Ciprofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
암피실린(Ampicillin)	DMSO	5,000	물	250
에리스로마이신(Erythromycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
엔로플록사신(Enrofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
오르메토프림(Ormetoprim)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
오비플록사신(Orbifloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	100
오플록사신(Ofloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
옥사실린(Oxacillin)	DMSO	5,000	물	500
옥소린산(Oxolinic acid)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	250
옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
조사마이신(Josamycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	200
클로람페니콜(Chloramphenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline)	Methanol	5,000	아세토니트릴	1,000
클록사실린(Cloxacillin)	DMSO	5,000	물	1,500
클린다마이신(Clindamycin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
타일로신(Tylosin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
테트라싸이클린(Tetracycline)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
트리메토프림(Trimethoprim)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
티아물린(Tiamulin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
티암페니콜(Thiamphenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	250
틸미코신(Tilmicosin)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
페플록사신(Pefloxacin)	0.5% 개미산	5,000	아세토니트릴	500
플로르페니콜(Florfenicol)	DMSO	5,000	아세토니트릴	1,000
플로르페니콜아민(Florfenicol amine, 플로르페니콜 대사체)	DMSO	10,000	아세토니트릴	1,000
플루메퀸(Flumequine)	0.1% 암모니아수	5,000	아세토니트릴	500
MQCA1 (올라퀸독스 대사체)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500
QCA2 (카바독스 대사체)	DMSO	5,000	아세토니트릴	500

1 MQCA : 3-methyl quinoxaline-2-carboxylic acid

2 QCA : quinoxaline-2-carboxylic acid

라) 혼합 표준용액의 조제 : 100 mL 용량플라스크에 50종의 표준용액을 각각 1 mL 씩 넣고 50% 아세토니트릴로 표시선까지 채워 조제하고, 각 성분의 농도가 잔류허용기준의 50배(성분별 최저 0.5에서 최대 50 μg/mL)가 되도록 하여 냉동실에 보관한다. 혼합한 표준용액은 0.1% 개미산과 메탄올의 1:1 비율로 혼합한 용액으로 희석하여 사용한다.

마) 0.5% 개미산 : 50 mL 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 개미산 250 μL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 암모니아수 : 10 mL 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 10% 수산화암모늄 용액 0.1 mL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채운다.

사) 이동상 A의 조제 : 1 L 용량플라스크에 증류수를 적당히 넣고 개미산 1 mL를 가한 뒤 증류수로 표시선까지 채워 0.1% 개미산을 조제하고, 0.1% 개미산 650 mL와 메탄올 50 mL를 혼합하여 사용한다.

아) C18 분말 : 잔여실란올기가 제거된 C18 분말(55-105um, 125Å) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 80% 아세토니트릴 10 mL를 가한 뒤, 1분간 균질화하고 15분간 진탕한다. 5,000 g에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 C18 분말 1 g을 미리 넣어 둔 원심분리관과 합한다. 남은 침전물에 다시 80% 아세토니트릴 10 mL를 가하고 1분간 균질화한 후 15분간 진탕한다. 5,000 g에서 10분간 원심분리하고 상층액을 이전의 상층액과 합한 후 아세토니트릴 포화 헥산 10 mL을 가한다. 1분간 진탕하고 5,000 g에서 5분간 원심분리 한 후 상층(헥산 층)을 제거하고 하층(80% 아세토니트릴 층)을 새로운 원심분리관으로 옮긴다. 이를 50°C 이하에서 질소 건고한 후 메탄올 0.25 mL와 0.1% 개미산 0.25 mL로 재분산하고 5분간 초음파 추출한다. 이 용액을 0.2 μm PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 ｘ 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 : 메탄올(95 : 5, v/v)

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
0.25	95	5
8.25	0	100
10.25	0	100

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive, negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.0 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	나프실린 (Nafcillin)	positive	7.43	414.47	414.1249	415.22	199.12 171.05 115.09	14 40 60
1‘	나프실린-Na (Nafcillin-Na2)	positive	7.43	436.45	436.1068	437.20	278.17 261.18 319.18	18 16 16
2	날리딕스산 (Nalidixic acid)	positive	6.36	232.24	232.0849	233.12	215.12 187.11 159.09	14 26 30
3	노르플록사신 (Norfloxacin)	positive	3.92	319.33	319.1333	320.23	302.23 233.15 276.25	22 24 18
4	노보비오신 (Novobiocin)	positive	8.92	612.62	612.2319	613.33	189.15 133.07 218.13	34 60 12
4‘	노보비오신-Na (Novobiocin-Na)	positive	8.91	634.60	634.2138	635.25	418.25 240.14 211.16	22 20 38
5	다노플록사신 (Danofloxacin)	positive	4.06	357.37	357.1490	358.25	340.22 96.07 314.25	24 24 18
6	답손 (Dapsone)	positive	3.78	248.30	248.0619	249.03	155.96 92.03 108.00	14 26 22
7	독시싸이클린 (Doxycycline)	positive	5.79	444.43	444.1532	445.25	428.22 98.02 154.05	20 42 30
8	디클록사실린 (Dicloxacillin)	positive	7.42	470.32	469.0265	470.12	160.05 311.12 114.05	16 14 36
8‘	디클록사실린-Na (Dicloxacillin-Na)	positive	7.42	492.30	491.0085	492.10	333.06 182.07	14 14
9	디플로삭신 (Difloxacin)	positive	4.26	399.39	399.1396	400.24	356.29 299.21 382.25	20 28 20
10	린코마이신 (Lincomycin)	positive	3.72	406.53	406.2237	407.31	126.17 359.34 389.33	30 20 18
11	마보플록사신 (Marbofloxacin)	positive	3.57	362.36	362.1392	363.24	72.08 345.22 320.23	22 22 16
12	발네물린 (Valnemulin)	positive	7.22	564.81	564.3596	565.46	263.20 147.08 164.02	14 40 34
13	버지니아마이신 (Virginiamycin M1)	positive	7.20	525.59	525.2474	526.28	508.38 355.24 109.10	14 20 36
14	벤질페니실린-Na (Benzylpenicillin-Na)	positive	6.56	356.37	356.0806	357.11	198.11 181.24 239.79	14 16 18
15	사라플록사신 (Sarafloxacin)	positive	4.40	385.36	385.1239	386.22	368.22 299.17 342.26	20 28 20
16	세파졸린 (Cefazolin)	positive	4.26	454.50	454.0299	455.13	323.13 156.01 124.02	12 16 38
17	세파피린 (Cephapirin)	positive	3.09	423.46	423.0558	424.15	292.17 152.04 181.09	14 22 24
18	세팔렉신 (Cephalexin)	positive	4.12	347.38	347.0939	348.19	158.05 174.07 106.11	8 14 26
19	세팔로니움 (Cefalonium)	positive	3.67	458.51	458.0718	459.17	152.03 337.13 123.11	20 10 12
20	세포페라존 (Cefoperazone)	positive	4.47	645.66	645.1423	646.24	143.11 530.26 290.20	34 12 20
21	세푸록심-Na (Cefuroxime-Na)	positive	4.28	446.36	446.0508	447.15	386.13 174.96 342.15	12 20 14
22	세프퀴놈 (Cefquinome)	positive	3.33	528.60	528.1249	529.22	134.12 167.03 396.12	16 24 12
23	세프티오퍼 (Ceftiofur)	positive	5.65	523.56	523.0289	524.13	241.13 125.19 210.07	18 56 22
24	스피라마이신 (Spiramycin)	positive	4.99	843.05	842.5139	843.55	174.11 101.02 142.13	36 46 32
25	시프로플록사신 (Ciprofloxacin)	positive	4.02	331.35	331.1333	332.23	314.241 231.11 288.27	22 34 18
26	암피실린 (Ampicillin)	positive	4.39	349.40	349.1096	350.14	106.04 174.07 160.07	18 14 12
27	에리스로마이신 (Erythromycin)	positive	6.61	733.93	733.4612	734.49	158.09 116.06 576.41	30 40 20
28	엔로플록사신 (Enrofloxacin)	positive	4.05	359.40	359.1647	360.26	316.27 342.24 245.18	18 20 26
29	오르메토프림 (Ormetoprim)	positive	4.03	274.31	274.1429	275.18	123.12 259.20 81.01	26 26 42
30	오비플록사신 (Orbifloxacin)	positive	4.22	395.37	395.1258	396.24	352.30 226.15 295.22	18 46 26
31	오플록사신 (Ofloxacin)	positive	3.80	361.37	361.1439	362.24	318.26 261.17 221.65	20 28 38
32	옥사실린 (Oxacillin)	positive	6.98	401.43	401.1045	402.20	160.06 243.16 114.06	12 14 38
32‘	옥사실린-Na (Oxacillin-Na)	positive	6.98	423.41	423.0864	424.18	182.08 265.11 248.12	18 18 16
33	옥소린산 (Oxolinic acid)	positive	5.54	261.33	261.0637	262.16	244.14 216.08 157.59	20 28 34
34	옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	positive	4.19	460.43	460.1481	461.18	426.20 201.01 443.31	20 40 14
35	조사마이신 (Josamycin)	positive	6.97	827.99	827.4667	828.56	109.09 174.11 229.20	42 34 32
36	클로람페니콜 (Chloramphenicol)	negative	5.49	323.13	322.0123	321.11	151.98 257.15 194.12	20 12 14
37	클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	positive	5.10	478.88	478.1142	479.27	444.24 154.06 462.20	22 28 18
38	클록사실린 (Cloxacillin)	positive	7.14	435.88	435.0655	436.16	277.13 114.05 160.05	16 48 12
38‘	클록사실린-Na (Cloxacillin-Na)	positive	7.14	475.87	475.0580	458.14	299.13 182.06	14 14
39	클린다마이신 (Clindamycin)	positive	5.94	424.98	424.1798	425.28	126.14 377.25 389.35	28 20 20
40	타일로신 (Tylosin)	positive	6.50	916.10	915.5191	916.55	174.11 83.09 101.01	40 52 40
41	테트라싸이클린 (Tetracycline)	positive	4.10	444.43	444.1532	445.25	410.26 154.05 427.37	18 28 12
42	트리메토프림 (Trimethoprim)	positive	3.68	290.31	290.1378	291.23	230.15 123.05 261.15	24 24 24
43	티아물린 (Tiamulin)	positive	6.43	493.74	493.3225	494.42	192.16 73.06 119.07	22 60 38
44	티암페니콜 (Thiamphenicol)	negative	3.79	356.22	355.0047	354.10	185.08 290.11 78.99	18 12 32
45	틸미코신 (Tilmicosin)	positive	5.63	869.13	868.5660	869.66	174.11 88.05 696.64	44 64 42
46	페플록사신 (Pefloxacin)	positive	3.80	333.36	333.1490	334.25	290.29 316.26 233.19	18 20 26
47	플로르페니콜 (Florfenicol)	negative	4.55	358.21	357.0004	356.03	185.07 336.12 119.07	18 10 38
47‘	플로르페니콜아민 (Florfenicol amine, 플로르페니콜 대사체)	positive	1.58	247.28	247.0678	248.10	230.13 130.21 91.05	12 22 42
48	플루메퀸 (Flumequine)	positive	6.56	261.25	261.0802	262.18	244.16 202.09 174.01	20 32 38
49	MQCA (올라퀸독스 대사체)	positive	4.99	188.18	188.0585	189.09	145.08 143.00 102.07	14 15 32
50	QCA (카바독스 대사체)	positive	4.82	174.15	174.0429	175.07	129.00 131.02 102.02	18 15 30

1밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

2 Compound-Na : sodium adduct를 의미

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온 및 생성이온이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 상대비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 퀴놀론계 크로마토그램

그림 2. 페니실린계 크로마토그램

그림 3. 세팔로스포린계 크로마토그램

그림 4. 테트라싸이클린계 크로마토그램

그림 5. 마크로라이드계 크로마토그램

그림 6. 린코사마이드계 크로마토그램

그림 7. 플레로무티린계 크로마토그램

그림 8. 암페니콜계 크로마토그램

그림 9. 기타 항균제 크로마토그램

5.2.2.2 수산물 중 동물용의약품 동시 다성분 시험법

1) 시험법 적용범위

수산물(어류, 갑각류) 등에 적용한다.

2) 분석원리

균질화한 검체에 개미산암모늄용액과 80% 아세토니트릴을 넣어 분석대상물질을 추출하고, C18 분말을 분산시켜 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：각 동물용의약품 표준품을 정밀히 달아 용매(메탄올, 물 또는 50% 메탄올)에 녹여 50～100 mg/L로 조제하여 표준원액으로 한다. ※주1) 참조

라) 혼합표준용액：50 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 각 동물용의약품 잔류허용기준의 10배 농도가 되도록 취하여 혼합한 후 물로 표시선까지 채워 냉동실에 보관한다. 혼합표준용액은 물로 희석하여 사용한다.

마) 2 mM 개미산암모늄용액 : 1 L 용량 플라스크에 초산암모늄 0.12 g을 넣고 아세토니트릴/물(80/20, v/v) 혼합용매로 용해하여 표시선까지 채운다.

바) C18 분말 : 잔여실란올기가 제거된 C18 분말(55-105um, 125Å) 혹은 이와 동등한 것

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 2 mM 개미산암모늄용액 10 mL를 가하여 20분간 진탕한 후, 10,000 g에서 10분간 원심분리하고 추출액을 다른 원심분리관에 취한다. 분리된 추출액에 C18 분말 500 mg을 분산시킨 후, 헥산 10 mL을 가하여 30초간 진탕한다. 10,000 g에서 5분간 원심분리하고, 하층액 중 5 mL만을 취해 눈금이 표시된 새로운 원심분리관에 옮긴다. 40℃ 수욕상에서 액이 1 mL 남을 때까지 질소농축한 후, 0.2 μm PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm i.d. ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
1	90	10
6	60	40
10	5	95
15	5	95
15.1	90	10
20	90	10

(3) 유속 : 0.4 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive, negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : positive - 5.0 kV, negative - 3.5 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤, 또는 비활성 기체)

(5) 분석 대상(45종) 및 개별조건(MRM 조건)

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온1 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	날리딕스산 (Nalidixic acid)	positive	7.50	232.2	232.0848	233	104 187 215	39 24 14
2	노르플록사신 (Norfloxacin)	positive	3.65	319.3	319.1332	320	205 233 276	31 23 16
3	독시싸이클린 (Doxycycline)	positive	5.80	444.4	444.1533	445	267 321 428	34 29 16
4	디플록사신 (Difloxacin)	positive	4.88	399.3	399.1394	400	299 356 381	27 17 20
							5	린코마이신 (Lincomycin)
							6	설파구아니딘 (Sulfaguanidine)
7	설파독신 (Sulfadoxine)	positive	5.50	310.3	310.0736	311	92 108 156	29 25 17
8	설파디메톡신 (Sulfadimethoxine)	positive	6.53	310.3	310.0736	311	92 108 156	31 29 19
9	설파디아진 (Sulfadiazine)	positive	2.50	250.2	250.0524	251	65 92 156	40 26 15
10	설파메라진 (Sulfamerazine)	positive	3.49	264.3	264.0681	265	92 108 155	28 24 15
							11	설파메타진 (Sulfamethazine)
							12	설파메톡사졸 (Sulfamethoxazole)
13	설파메톡시피리다진 (Sulfamethoxypyridazine)	positive	4.33	280.3	280.0630	281	92 108 156	29 25 15
14	설파모노메톡신 (Sulfamonomethoxine)	positive	4.89	280.0	280.0630	281	156 248 265	17 27 21
15	설파퀴녹살린 (Sulfaquinoxaline)	positive	6.57	300.3	300.0681	301	92 155 208	29 15 13
16	설파클로르피라진 (Sulfachlorpyrazine)	positive	6.36	284.7	284.0135	285	65 92 155	45 28 13
17	설파클로르피리다진 (Sulfachlorpyridazine)	positive	5.09	284.7	284.0135	285	92 108 155	29 22 13
18	설파티아졸 (Sulfathiazole)	positive	2.87	255.3	255.0136	256	92 108 156	24 22 15
19	설파페나졸 (Sulfaphenazole)	positive	6.66	314.3	314.0837	315	131 158 160	46 28 20
20	설피속사졸 (Sulfisoxazole)	positive	5.82	267.3	267.0678	268	65 92 155	39 27 13
21	세팔렉신 (Cefalexin)	positive	3.48	347.3	347.0940	348	106 157 174	32 6 13
22	세프티오퍼 (Ceftiofur)	positive	6.18	523.6	523.0290	524	95 126 241	42 58 16
22‘	데스후로일세프티오퍼 (Desfuroylceftiofur)	positive	4.28	429.5	429.0235	430	126 227 241	32 22 14
23	스피라마이신 (Spiramycin)	positive	5.29	843.0	842.5140	422	83 88 174	31 35 18
24	시프로플록사신 (Ciprofloxacin)	positive	3.95	331.3	331.1332	332	148 231 314	53 35 19
25	아목시실린 (Amoxicillin)	positive	1.35	365.4	365.1045	366	113 133 349	19 31 5
26	암피실린 (Ampicillin)	positive	3.61	349.4	349.1096	350	106 114 174	19 29 11
27	에리스로마이신 (Erythomycin)	positive	6.97	733.9	733.4612	734	82 115 157	35 34 29
28	엔로플록사신 (Enrofloxacin)	positive	4.34	359.4	359.1645	360	245 316 342	25 17 20
29	오르메토프림 (Ormethoprim)	positive	4.01	274.3	274.1430	275	81 123 259	42 25 27
30	오플록사신 (Ofloxacin)	positive	3.67	361.3	361.1438	362	261 318 344	25 17 19
31	옥소린산 (Oxolinic acid)	positive	6.05	261.2	261.0637	262	160 216 244	35 28 17
32	옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	positive	3.93	460.4	460.1482	461	200 426 443	36 16 10
33	조사마이신 (Josamycin)	positive	8.27	827.9	827.4667	828	108 173 228	35 30 29
34	클로람페니콜 (Chloramphenicol)	negative	6.20	322.1	322.0123	321	120 151 257	40 24 14
35	클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	positive	5.48	478.8	478.1143	479	98 444 462	35 18 14
36	클린다마이신 (Clindamycin)	positive	5.70	424.9	424.1799	425	83 126 377	51 31 17
37	키타사마이신 (Kitasamycin)	positive	7.68	771.9	771.4405	772	82 108 173	35 34 28
38	테트라싸이클린 (Tetracycline)	positive	4.32	444.4	444.1533	445	153 410 427	25 16 10
39	트리메토프림 (Trimethoprim)	positive	3.62	290.3	290.1379	291	123 230 261	33 22 24
40	티아물린 (Tiamulin)	positive	7.57	493.7	493.3226	494	73 118 192	53 34 19
41	티암페니콜 (Thiamphenicol)	negative	4.15	356.2	355.0048	354	118 184 290	37 23 15
42	페플록사신 (Pefloxacin)	positive	3.71	333.3	333.1489	334	233 290 316	23 16 18
43	프라지콴텔 (Praziquantel)	positive	8.79	312.4	312.1838	313	55 132 203	36 33 16
44	플로르페니콜 (Florfenicol)	negative	5.73	358.2	357.0005	356	118 184 336	40 21 13
44‘	플로르페니콜아민 (Florfenicol amine)	positive	1.12	247.2	247.0678	248	91 130 230	42 25 10
45	플루메퀸 (Flumequine)	positive	7.73	261.2	261.0801	262	126 202 244	47 31 17
43	티아물린 (Tiamulin)	positive	7.57	493.7	493.3226	494	73 118 192	53 34 19
44	프라지콴텔 (Praziquantel)	positive	8.79	312.4	312.1838	313	55 132 203	36 33 16
45	세프티오퍼 (Ceftiofur)	positive	6.18	523.6	523.0290	524	95 126 241	42 58 16
45‘	데스후로일세프티오퍼 (Desfuroylceftiofur)	positive	4.28	429.5	429.0235	430	126 227 241	32 22 14

1밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 상대비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주2) 참조

8) 정량시험

정성시험에서 검출된 잔류동물용의약품은 식품공전 5.3의 정량시험법을 따른다.

주1) 표준원액 조제에 사용되는 용매

용매	대상 동물용의약품 표준품
메탄올	날리딕스산, 노르플록사신, 독시싸이클린, 디플록사신, 린코마이신, 설파구아니딘, 설파독신, 설파디메톡신, 설파디아진, 설파메라진, 설파메타진, 설파메톡사졸, 설파메톡시피리다진, 설파모노메톡신, 설파퀴녹살린, 설파클로르피라진, 설파클로르피리다진, 설파티아졸, 설파페나졸, 설피속사졸, 스피라마이신, 시프로플록사신, 에리스로마이신, 엔로플록사신, 오르메토프림, 오플록사신, 옥시테트라싸이클린, 조사마이신, 클로르테트라싸이클린, 클린다마이신, 키타사마이신, 테트라싸이클린, 트리메토프림, 티아물린, 페플록사신, 플로르페니콜아민, 플루메퀸
50% 메탄올	세팔렉신, 세프티오퍼, 데스후로일세프티오퍼, 클로람페니콜, 티암페니콜, 프라지콴텔, 플로르페니콜
물	아목시실린, 암피실린, 옥소린산

주2) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 수산물 중 45종 동물용의약품의 크로마토그램

5.3 정량시험법

5.3.1 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin), 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin), 스트렙토마이신(Streptomycin), 스펙티노마이신(Spectinomycin), 아미카신(Amikacin), 아프라마이신(Apramycin), 카나마이신(Kanamycin), 하이그로마이신B(Hygromycin B)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼염화초산이 함유된 인산완충용액으로 추출한 후 HLB 및 약양이온 교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 물 40 mL에 녹인 후 아세토니트릴 20 mL와 초산 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동실에 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 아세토니트릴/초산/물(10/1/39) 혼합용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 토브라마이신 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 물 40 mL에 녹인 후 아세토니트릴 20 mL와 초산 2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 조제한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준원액을 아세토니트릴/초산/물(10/1/39) 혼합용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

사) 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 : 2 L 용량플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 2.72 g을 넣고 물 1.9 L로 녹인 후 1 M 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨(Na2EDTA dihydrate) 0.3 g과 삼염화초산 40 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

아) 1.6% 삼염화초산 용액 : 250 mL 용량플라스크에 삼염화초산 4 g을 넣고 물 100 mL를 넣어 용해시킨 후 아세토니트릴 50 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 20 mM HFBA(heptafluorobutyric acid)/5% 아세토니트릴 : 1 L 용량플라스크에 아세토니트릴 50 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

차) 20 mM HFBA(heptafluorobutyric acid)/50% 아세토니트릴 : 1 L 용량플라스크에 아세토니트릴 500 mL와 HFBA (heptafluorobutyric acid) 2.6 mL를 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

카) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 : Divinylbenzene -N-vinylpyrrolidone Copolymer가 200 mg 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

타) 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지 : 약양이온교환수지가 150 mg 충진된 카트리지 또는 이와 동등한 것

파) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

하) 기구 : 사용하는 모든 용기는 폴리프로필렌 재질 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 3 g 을 50 mL 원심분리관에 취하고 내부표준물질(토브라마이신)을 첨가한다. 2% 삼염화초산이 함유된 10 mM 인산완충용액 15 mL를 가하여 10분간 진탕한 후 4℃에서 5,000 g로 15분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취한 후 5 M 수산화나트륨용액 0.2∼0.3 mL 을 가하여 pH 7.5로 조정하고(필요시 1 M 염산용액 또는 1 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH를 조정한다) 이 액을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 HLB 카트리지와 WCX(약양이온교환) 카트리지를 각각 활성화시킨 후 HLB 카트리지 위에 WCX 카트리지를 연결한다. 연결한 카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL로 세척한 후 감압하여 물을 완전히 제거해 준다. 15 mL 프로필렌 원심분리관에 1.6% 삼염화초산 용액 6 mL로 용출한다. 이 용액을 균질화 한 후 0.2 ㎛ PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 액체크로마토그래프용 폴리프로필렌 바이알에 옮겨 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA / 5% 아세토니트릴

(나) 이동상 B : 20 mM HFBA / 50% 아세토니트릴

시간(분)	이동상A(%)	이동상B(%)
0.0	80	20
0.5	80	20
9.0	5	95
10.0	5	95
10.1	80	20
15.0	80	20

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤, 또는 비활성 기체)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	겐타마이신 C1a (Gentamicin C1a )	8.6	450	160 322	20 11
2	겐타마이신 C2, C2a (Gentamicin C2, C2a)	8.6	464	160 322	22 10
3	겐타마이신 C1 (Gentamicin C1)	8.6	478	157	20
				322	13
4	네오마이신 (Neomycin)	8.74	615	161 293	28 21
5	디히드로스트렙토마이신 (Dihydrostreptomycin)	5.93	584	246 263	33 29
6	스트렙토마이신 (Streptomycin)	5.84	582	246 263	36 29
7	스펙티노마이신 (Spectinomycin)	4.66	351	98 207 333	29 20 17
8	아미카신 (Amikacin)	6.80	586	163 264	32 23
9	아프라마이신 (Apramycin)	7.94	540	217 378	26 14
10	카나마이신 (Kanamycin)	7.04	485	163 324	24 14
11	파로모마이신 (Paromomycin)	8.91	616	163 293	32 22
12	하이그로마이신 (Hygromycin B)	5.62	528	177 352	27 21
13	토브라마이신 (Tobramycin, 내부표준물질)	8.15	468	163 324	22 13

(4) 분석대상물질의 개별 조건

1밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다. 단 겐타마이신은 겐타마이신 C1, 겐타마이신 C1a, 겐타마이신 C2, 겐타마이신 C2a의 각 정량값의 합으로 정량한다.

물질	정량한계 (mg/kg)
겐타마이신(Gentamicin)	0.006
네오마이신(Neomycin)	0.030
스트렙토마이신(Streptomycin)/ 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin)	0.02
스펙티노마이신 (Spectinomycin)	0.020
아미카신(Amikacin)	0.006
아프라마이신(Apramycin)	0.030
카나마이신(Kanamycin)	0.006
파로모마이신 (Paromomycin)	0.006
하이그로마이신 (Hygromycin B)	0.006

※단, 벌꿀, 알, 유에서 6) 나) (4)의 분석대상물질이 검출될 경우 정량분석은 유에서 겐타마이신을 제외하고 5.3의 물질별 정량분석법을 따른다.

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위(CAC/GL-71-2009)

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램. 스펙티노마이신(4.6분), 하이그로마이신(5.6분), 스트렙토마이신(5.8분), 디히드로스트렙토마이신(5.9분), 아미카신(6.8분), 카나마이신(7.0분), 아프라마이신(7.9분), 토브라마이신(내부표준물질, 8.1분), 겐타마이신(8.6분), 네오마이신(8.7분), 파로모마이신(8.9분)

5.3.2 ∼ 5.3.25 (현행과 같음)

<삭 제>

5.3.26 ∼ 5.3.27 (현행과 같음)

5.3.28 스펙티노마이신(Spectinomycin)

5.3.28.1 제1법

1) 시험법 적용범위

유에 적용한다.

2) ∼ 7) (현행과 같음)

5.3.29.2 제2법 (현행과 같음)

5.3.29 ∼ 5.3.30 (현행과 같음)

5.3.31 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G),아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 옥사실린(Oxacillin),   페녹시메틸페니실린 (Phenoxymethyl penicillin, Penicillin V)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 나트륨이 함유된 인산완충용액(축산물), 아세토니트릴 수용액(수산물) 또는 트리클로로초산이 함유된 아세토니트릴(유 및 알)로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다. 표준품과 시료는 직사광선을 피하고 어두운 냉동실에 보관한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올 50 mL로 용해한 후 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동실에 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 피페라실린 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올 50 mL로 용해한 후 물로 표시선까지 채워 100 mg/L로 한다. 조제된 내부 표준물질 표준원액은 냉동실에 보관한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도로 조제한다.

사) 0.05% 포름산 용액 : 1 L 용량 플라스크에 포름산 5 mL 첨가 한 후, 물로 표시선까지 채운다.

아) 0.05% 포름산 아세토니트릴 용액 : 1 L 용량 플라스크에 포름산 5 mL 첨가 한 후 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 0.1 M 인산나트륨완충용액(pH 4.5) : 500 mL 용량 플라스크에 제일인산나트륨(NaH2PO4) 6 g 을 넣어 물로 표시선까지 채운 후 5 M NaOH를 가하여 pH 4.5로 맞춘다.

차) 0.17 M 황산 : 100 mL 용량 플라스크에 황산 1.67 g 을 넣은 후 물로 표시선까지 채운다.

카) 25 mM 인산칼륨완충용액(pH 9.0) : 100 mL 용량 플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 0.34 g 넣은 후 물로 표시선까지 채운 후, NaOH를 가하여 pH 9.0이 되도록 조절한다.

타) 0.1 M 인산수소나트륨용액 : 1L 용량플라스크에 제이인산수소나트륨(Na2HPO4) 14.2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

파) 0.05 mM 인산수소칼륨용액 : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

하) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

거) HLB 카트리지(500 mg, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 내부표준물질(피페라실린)을 첨가한다. 0.1 M 인산나트륨완충용액(pH 4.5) 6 mL, 0.17 M 황산 1.5 mL, 5% 텅스텐산나트륨 1.5 mL를 넣고 10분간 진탕한 후 4℃에서 5,000 g로 15분간 원심분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 5 M NaOH를 가하여 pH 8.1∼8.5로 조절 후 4℃에서 5,000 g로 15분간 원심분리후 상층액을 취하여 20% NaCl 10 mL를 넣고 이액을 추출액으로 한다. 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 2% NaCl 5 mL으로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% NaCl 5 mL, 25 mM 인산칼륨완충용액(pH 9.0) 5 mL 순서로 세척한 후 카트리지를 건조시킨다. 아세토니트릴 3 mL로 두 번에 걸쳐 대상성분을 용출시키고 40℃이하의 수욕상에서 질소농축시킨다.  5 mM 인산칼륨완충용액(pH 9.0) 1 mL으로 재용해하고 0.2 μm PVDF 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유 및 알

균질화한 검체(유 20 mL, 알 5 g)를 50 mL 원심분리관에 취하고 유는 아세토니트릴 50 mL, 알은 20% 트리클로로초산 0.5 mL이 포함된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한다. 혼합액을 9,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 9,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 용액을 0.1 M 수산화나트륨 용액으로 pH 9.0±0.2로 조절한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm PVDF 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 수산물

균질화한 검체 2 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20 v/v) 10 mL를 넣고 2분간 균질화시킨다. 균질화시킨 검체를 50 mL 원심분리관으로 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20, v/v) 10 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞의 시료와 합한다. 합친 시료를 5,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을 때까지 감압농축한다. 농축액을 여분의 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 5,000 g, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm PVDF 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.05% 포름산이 포함된 물

(나) 이동상 B : 0.05% 포름산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	90	10
10.0	50	50
15.0	25	75
15.1	90	10
20.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤, 또는 비활성 기체)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	나프실린 (Nafcillin)	12.86	415	171 199 256	33 14 14
2	디클록사실린 (Dicloxacillin),	13.52	470	114 160 198 311	36 13 36 15
3	벤질페니실린, 페니실린 G (Benzylpenicillin, Penicillin G)	10.30	335	160 176	12 13
4	아목시실린 (Amoxicillin)	2.65	366	114 349	20 7
5	암피실린 (Ampicillin)	5.15	350	106 114 192	17 29 17
6	옥사실린 (Oxacillin)	11.72	402	114 144 160 243	33 27 13 13
7	클록사실린 (Cloxacillin)	12.48	436	160 164 277	14 33 14
8	페녹시메틸페니실린, 페니실린 V (Phenoxymethylpenicillin, Penicillin V)	11.22	351	114 160 192	34 11 11
9	피페라실린 (내부표준물질, Piperacillin)	9.66	518	143 160	20 12

1밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

가) 정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물	수산물	유	알
나프실린	0.03	0.005	0.001	0.001
디클록사실린	0.03	0.005	0.001	0.001
벤질페니실린 (페니실린 G)	0.01	0.001	0.005	0.001
아목시실린	0.01	0.005	0.002	0.001
암피실린	0.01	0.001	0.001	0.001
옥사실린	0.01	0.005	0.001	0.001
클록사실린	0.03	0.005	0.005	0.001
페녹시메틸페니실린 (페니실린 V)	0.01	-	-	-

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램. 아목시실린(2.6분), 암피실린(5.1분), 피페라실린(내부표준물질, 9.6분), 벤질페니실린(10.3분), 페녹시메틸페니실린(11.2분), 옥사실린(11.7분), 클록사실린(12.5분), 나프실린(12.8분), 디클록사실린(13.5분)

5.3.32 ∼ 5.3.34 (현행과 같음)

5.3.35 아프라마이신(Apramycin), 콜리스틴(Colistin)

1) 시험법 적용범위

아프라마이신은 유, 알 및 수산물 등에 적용하고 콜리스틴은 축․수산물 등에 적용한다.

2) ∼ 7) (현행과 같음)

5.3.36 ∼ 5.3.47 (현행과 같음)

5.4.48 독시싸이클린(Doxycycline), 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline), 테트라싸이클린(Tetracycline)

5.3.48.1 제1법

1) 시험법 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) ∼ 8) (현행과 같음)

5.3.48.2 제2법

1) 시험법 적용범위

벌꿀 등에 적용한다.

2) 분석원리

아카시아꿀, 유채꿀, 잡화꿀 중의 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린은 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0)으로 추출한 후 약양이온교환 카트리지로 정제하고 밤꿀 등 기타 꿀 중의 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시싸이클린은 맥바인(Macllvaine) 완충용액으로 추출하여 페닐카트리지와 약양이온교환 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가)  용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 옥시테트라싸이클린, 클로르테트라싸이클린, 테트라싸이클린, 독시 싸이클린 표준품을 각각 정밀히 달아 100 μg/mL이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 개미산 수용액으로 희석하여 사용한다.

마) 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0) : 1 L 메스플라스크에 초산나트륨(CH3COONa) 8.2 g을 취하여 물에 녹이고 초산으로 pH 5.0으로 맞춘 후 표시선까지 채운다.

바) 2% 개미산 메탄올 용액 : 100 mL 메스플라스크에 개미산 용액(≥95%) 2.1 mL를 취한 후 메탄올에 녹여 표시선까지 채운다.

아) 페닐(Phenyl) 카트리지 : 페닐 충진제(1,000 mg, 6cc) 또는 이와 동등한 것

사) 약양이온교환 카트리지 : WCX(Weak Cation Exchange) 카트리지(150 mg, 6cc) 또는 이와 동등한 것

아) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 아카시아꿀, 유채꿀, 잡화꿀

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심관에 취하여 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0) 10 mL를 가한 후 흔들어 섞는다. 이 용액을 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 약양이온교환 카트리지에 흡착시키고, 물 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 세척 후 2% 개미산 메탄올 용액 10 mL로 용출한다. 용출액은 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축하고, 잔류물은 0.1% 개미산 수용액 1 mL에 녹인 후 0.2 ㎛ PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 밤꿀, 기타 꿀(현행과 같음)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심관에 취하고 맥바인(Macllvaine) 완충용액 10 mL를 가하여 흔들어 섞는다. 이 용액을 미리 메탄올 5 mL, 아세토니트릴 5 mL, 0.01 M 수산 5 mL, 포화 Na2EDTA 용액 5 mL 순으로 활성화시킨 페닐 카트리지에 흡착시키고, 0.01 M 수산 용액 5 mL로 세척 후, 에틸아세테이트:메탄올(9:1)  10 mL로 용출시킨다. 이 용출액에 물 2 mL를 가하고 40℃ 이하의 수욕중에서 감압하여 잔류물이 2 mL가 되도록 농축한다. 이 농축액에 0.1 M 초산나트륨 완충용액(pH 5.0) 5 mL를 가한 후 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 약양이온교환 카트리지에 흡착시키고, 물 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 세척 후 2% 개미산 메탄올 용액 10 mL로 용출시킨다. 용출액은 40℃ 이하의 수욕중에서 감압하여 농축하고 잔류물은 0.01 M 수산 용액:아세토니트릴(8:2) 용액 1 mL로 녹인 후 0.2 ㎛ PVDF 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산이 함유된 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2	90	10
7	10	90
9	10	90
12	90	10
15	90	10

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 4.2 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준물질 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～50% 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

8) 정량시험

가) 정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 각 물질에 대한 정량이온(옥시테트라싸이클린 m/z 426 이온, 클로르테트라싸이클린 m/z 154 이온, 테트라싸이클린 m/z 154 이온, 독시싸이클린 m/z 428 이온)의 피크 면적값을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액 크로마토그램상의 각 물질에 대한 정량이온의 피크 면적값에 따라 각각의 함량을 구한다.

물질명 (Compounds)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy,eV)
독시싸이클린 (Doxycycline)	444.4	444.1533	445	98 154 428	44 32 22
옥시테트라싸이클린 (Oxytetracycline)	460.4	460.1482	461	201 426 443	42 22 16
클로르테트라싸이클린 (Chlortetracycline)	478.9	478.1143	479	154 444 462	28 24 18
테트라싸이클린 (Tetracycline)	444.4	444.1533	445	154 410 427	30 18 16

1밑줄 그은 이온은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

나) 정량한계 : 0.01 mg/kg

주1) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

상대이온강도(% of base peak)	LC-MS/MS (relative)
> 50%	≤ 20%
20% to 50%	≤ 25%
10% to 20%	≤ 30%
≤ 10%	≤ 50%

옥시테트라싸이클린

클로르테트라싸이클린

테트라싸이클린

독시싸이클린

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램. 옥시테트라싸이클린(1 ng, 5.1분), 테트라싸이클린(1 ng, 5.3분),클로르테트라싸이클린(1 ng, 5.7분),  독시싸이클린(1 ng, 5.8분)

<삭 제>

5.3.49 ∼ 5.3.70 (현행과 같음)

<삭 제>

<삭 제>

5.3.71 ∼ 5.3.79 (현행과 같음)

5.3.80 카나마이신(Kanamycin)

1) 시험법 적용범위

유, 알 및 수산물에 적용한다.

2) ∼ 7) (현행과 같음)

5.3.81 ∼ 5.3.102 (현행과 같음)

5.3.103 아미카신(Amikacin)

1) 시험법 적용범위

유에 적용한다.

2) ∼ 7) (현행과 같음)

5.3.104 ∼ 5.3.112 (현행과 같음)

6. ∼ 9. (현행과 같음)

제10. ∼ 제11. (현행과 같음)

[별표 1] ∼ [별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (8) (현행과 같음)

(9) 델타메트린(Deltamethrin)

(현행과 같음)

앙파	0.05

(10) ∼ (28) (현행과 같음)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(현행과 같음)

대두	0.1

풋콩	1.0

(30) ∼ (100) (현행과 같음)

(101) 이미다클로프리드(Imicacloprid)

(현행과 같음)

참깨	0.05

(102) ∼ (113) (현행과 같음)

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

◎ 잔류물의 정의 : Benfuracarb, Carbofuran, 3-hydroxycarbofuran, Carbosulfan, Furathiocarb의 합을 carbofuran으로 함

(현행과 같음)

(115) (현행과 같음)

(116) 카탑 하이드로클로라이드(Cartap hydrochloride)

(현행과 같음)

마늘	0.05

(117) ∼ (132) (현행과 같음)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(현행과 같음)

상추	0.05

양상추	0.05

(134) ∼ (226) (현행과 같음)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(현행과 같음)

풋콩	0.5

(228) ∼ (236) (현행과 같음)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

참외	0.1

(238) ∼ (256) (현행과 같음)

(257) 플루퀸코나졸(Fluquinconazole)

(현행과 같음)

상추	0.05

오디	2.0

(258) ∼ (298) (현행과 같음)

(299) 티플루자마이드(Thifluzamide)

(현행과 같음)

파	0.05

(300) ∼ (320) (현행과 같음)

(321) 디노테퓨란(Dinotefuran)

(현행과 같음)

마늘	0.05

(322) ∼ (323) (현행과 같음)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(현행과 같음)

토마토	0.3

(325) ∼ (332) (현행과 같음)

(333) 테부피림포스(Tebupirimfos)

(현행과 같음)

양파	0.05

(334) ∼ (351) (현행과 같음)

(352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide)

(현행과 같음)

당근	0.05

(353) ∼ (393) (현행과 같음)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(현행과 같음)

엇갈이배추	3.0

배추	1.0

(395) ∼ (407) (현행과 같음)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

가지	0.5

브로콜리	0.5

양배추	0.05

(409) ∼ (415) (현행과 같음)

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(현행과 같음)

면실	0.3†

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(현행과 같음)

대두	0.1

풋콩	1.0

(418) (현행과 같음)

(419) 프로헥사디온-칼슘(Prohexadione -Calcium)

(현행과 같음)

마늘	0.05

풋마늘	0.05

양파	0.05

(420) ∼ (421) (현행과 같음)

(422) 펜티오피라드(Pentiopyrad)

(현행과 같음)

고추	1.0

피망	1.0

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(현행과 같음)

마늘	0.05

풋마늘	2.0

파	0.3

(424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

(현행과 같음)

감	0.5

(425) ∼ (427) (현행과 같음)

(428) 플루오피람(Fluopyram)

(현행과 같음)

가지	2.0

복숭아	0.4

(429) (현행과 같음)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(현행과 같음)

양상추	5.0

매실	0.3

(431) ∼ (432) (현행과 같음)

(433) 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole)

(현행과 같음)

마늘	0.05

아몬드	0.04†

피칸	0.01†

면실	1.5†

유채씨	0.8†

해바라기씨	0.5†

(434) ∼ (436) (현행과 같음)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(현행과 같음)

양파	0.05

(438) 피리오페논(Pyriofenone)

(현행과 같음)

토마토	3.0

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(현행과 같음)

감자	0.3

피망	2.0

(440) (현행과 같음)

(442) 이프펜카바존(Ipfencarbazone)

◎ 잔류물의 정의 : Ipfencarbazone

쌀	0.05

(443) 테퓨릴트리온(Tefuryltrione)

◎ 잔류물의 정의 : Tefuryltrione

쌀	0.05

(444) 트리아파몬(Triafamone)

◎ 잔류물의 정의 : Triafamone

쌀	0.05

(445) 이마자픽(Imazapic)

◎ 잔류물의 정의 : Imazapic

대두	0.3†

(446) 이마자피르(Imazapyr)

◎ 잔류물의 정의 : Imazapyr

대두	3.0†

[별표5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (78) (현행과 같음)

(79) 포스티아제이트(Fosthiazate)

◎ 잔류물의 정의 : Fosthiazate

수삼	0.05

건삼	0.1

[별표6] 축산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (20) (현행과 같음)

(21) 사이퍼메트린(Cypermethrin)

(현행과 같음)

<삭      제>

(22) ∼ (82) (현행과 같음)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 노보비오신(Novobiocin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Novobiocin

식품명             mg/kg

소근육	1.0

닭근육	1.0

칠면조근육	1.0

오리근육	1.0

(5) ∼ (28) (현행과 같음)

(29) 오르메토프림(Ormethoprim) : 항염증제

◎ 잔류물의 정의 : Ormethoprim

식품명             mg/kg

칠면조근육	0.1

오리근육	0.1

닭근육	0.1

닭간	0.1

닭지방	0.1

닭신장	0.1

어류*	0.1

(30) 옥소린산(Oxolinic acid) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Oxolinic acid

식품명             mg/kg

소근육	0.05

돼지근육	0.05

닭근육	0.1

닭간	0.15

닭지방	0.05

닭신장	0.15

송어	0.1

연어	0.1

방어	0.1

뱀장어	0.1

은어	0.1

잉어	0.1

갑각류	0.1

(31) (현행과 같음)

(32) 올레안도마이신(Oleandomycin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Oleandomycin

식품명         mg/kg

소근육	0.15

유             0.05

(33) ∼ (35) (현행과 같음)

(36) 죠렌(Zoalene) : 항원충제

◎ 잔류물의 정의 : Zoalene

식품명         mg/kg

닭근육	3.0

칠면조근육      3.0

(37) ∼ (127) (현행과 같음)

[별표 8] (현행과 같음)