식품의약품안전청 고시 제2012-131호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2012. 12. 27

식품의약품안전청

식품의약품안전청 고시 제2012-131호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

「농약관리법」에 따라 신규로 사용․등록된 농약들과 외국에서 사용되고 있는 농약들에 대한 잔류허용기준을 마련하고, 농약, 동물용의약품의 잔류허용기준 설정 등에 따른 관련 시험법 신설 및 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.

2. 주요 내용

가. 잔류농약 분석법 신설 및 개정

1) 새로운 농약이 사용․ 등록됨에 따라 시험법 마련 및 비효율적인 시험법 개선이 필요함

2) 클레소딤, 프로폭시딤 및 세톡시딤 등 12개 시험법 신설(10) 및 개정(2)

- 클레소딤(Clethodim), 프로폭시딤(Profoxydim) 및 세톡시딤(Sethoxydim) [안 제 10, 4.1.3.17]-개정

- 보스칼리드(Boscalid), 플루토라닐(Flutolanil), 메프로닐(Mepronil) 및 티플루자마이드(Thifluzamid)[안 제 10, 4.1.3.40]-신설

- 비페녹스(Bifenox), 에탈풀루라린(Ethalfluralin), 메토라클로르(Metolacholor), 옥시풀루오르펜(Oxyfluorfen), 프레탈라클로르(Pretilachlor), 테닐클로르(Thenylchlor) 및 트리풀루라린(Thrifluralin)[안 제 10, 4.1.3.41] -신설

- 싸이프로코나졸(Cyproconazole), 디니코나졸(Diniconazole), 푸루실라졸(Flusilazole), 펜코나졸(Penconazole) 및 터부코나졸(Tebuconazole)[안 제 10, 4.1.3.42]-신설

- 트리포린(Triforine)[안 제 10, 4.1.4.38]-개정

- 메타조설푸론(Metazosulfuron)[안 제 10, 4.1.4.158]

- 설폭사플로르(Sulfoxaflor)[안 제 10, 4.1.4.159]

- 시아조파미드(Cyazofamid)[안 제 10, 4.1.4.160]

- 옥시카복신(Oxycarboxin)[안 제 10, 4.1.4.161]

- 이미시아포스(Imicyafos)[안 제 10, 4.1.4.162]

- 이소피라잠(Isopyrazam)[안 제 10, 4.1.4.163]

- 플루오피람(Fluopyram)[안 제 10, 4.1.4.164]

3) 식품 중 농약시험법의 신설 및 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급

나. 잔류동물용의약품 시험법 신설 및 개정

1) 동물용의약품 잔류허용기준 신설에 따른 시험법 마련 및 비효율적인 시험법 개선이 필요함

2) 티암페니콜 등 6개 시험법 신설(5) 및 개정(1)

- 티암페니콜(Thiamphenicol)[안 제 10, 5.3.70]-개정

- 메벤다졸(Mebendazole)[안 제 10, 5.3.100]

- 니트록시닐(Nitroxynil), 클로술론(Clorsulon)[안 제 10, 5.3.101]

- 톨페남산(Tolfenamic acid)[안 제 10, 5.3.102]

- 툴라스로마이신(Tulathromycin)[안 제 10, 5.3.103]

- 시미아졸(Cymiazole)[안 제 10, 5.3.104]

3) 식품 중 동물용의약품 시험법의 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급

다. 농산물의 농약잔류허용기준 개정[[별표 4] 중 (101), (112), (235), (309), (409)]

1) 농약 등록사항(안전사용기준) 변경에 따른 잔류허용기준 개정 필요

2) 가지에 대한 이미다크로프리드, 파에 대한 카벤다짐, 고추 및 피망에 대한 플루토라닐, 토마토에 대한 포스치아제이트, 파에 대한 아미설브롬 기준 합리화

3) 농약에 대한 기준 합리화로 국민의 불안감 해소

라. 농산물의 농약잔류허용기준 신설[[별표 4] 중 (1), (26), (55), (61), (101), (133), (149), (186), (206), (214), (221), (223), (235), (239), (246), (285), (301), (323), (326), (332), (337), (339), (349), (355), (361), (373), (386), (390), (394), (403), (405), (408), (415), (416), (417), (421), (422), (423), (428)]

1) 「농약관리법」에 사용·등록되어 있는 농약에 신규로 추가되는 농산물의 잔류허용기준을 마련하여 관리 적정화 필요

2) 농산물 중 이민옥타딘 등 39종에 대한 기준 신설

3) 농약잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

마. 수입농산물의 농약잔류허용기준 신설 및 개정[[별표 4] 중 (72), (97), (432)]

1) 수입식품에 대한 농약잔류허용기준 설정 요청에 따른 잔류허용기준 신설 및 개정 필요

2) 사플루페나실(신설), 아세토클로르(개정) 및 옥시플루오르펜(개정)에 대한 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 수입식품에 대한 농약잔류허용기준 설정으로 안전관리 강화

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조 제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

- 2012.8.8 ～ 2012.10.8 (공고 제2012-160호)

․잔류농약 분석법 신설 및 개정

․잔류동물용의약품 시험법 신설 및 개정

- 2012.8.27 ～ 2012.10.27 (공고 제2012-174호)

․농산물의 농약잔류허용기준 개정

․농산물의 농약잔류허용기준 신설

- 2012.9.28 ～ 2012.11.28 (공고 제2012-209호)

․농산물의 농약잔류허용기준 개정

2) 규제심사 : 비규제로 통과(2012.12.18)

식품의약품안전청 고시 제2012-131호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2012-128호, 2012. 12. 27.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2012년 12월 27일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

“제 10, 4.1.3.17 세톡시딤(Sethoxydim) 및 클레소딤(Clethodim)”을 “제 10, 4.1.3.17 클레소딤(Clethodim), 프로폭시딤(Profoxydim) 및 세톡시딤(Sethoxydim) 시험법”으로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 메탄올/물 혼합액(1/1, v/v)을 가하여 모화합물 및 산화대사산물을 동시에 추출하고 클로로과산화벤조익산(m-CPB)으로 산화반응시킨다. 전환된 술폰체(sulfone)를 액-액 분배하여 플로리실 칼럼으로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클레소딤 및 세톡시딤 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 200 mg/L가 되게 한다. 프로폭시딤 또는 리튬염 분석용 표준품을 메탄올에 녹여 200 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 클레소딤, 프로폭시딤 및 세톡시딤의 농도비가 1:1:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 아세토니트릴에 녹여 적절한 농도로 희석한다.

마) 클로로과산화벤조익산(m-chloroperoxybenzoic acid, m-CPB) 용액 : 디클로로메탄에 1%가 되도록 녹이며 사용 직전 조제한다.

바) 티오황산나트륨(sodium thiosulfate) 용액 :  10% 수용액을 조제한다.

사) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 10 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 10 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 메탄올/물 혼합액(1/1, v/v) 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 곡류 등 건조 검체의 경우 추출 전에  미리 30분간 방치, 습윤화한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 메탄올/물 혼합액(1/1, v/v) 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 50 mL, 초산 0.5 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 1분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 디클로로메탄 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합친 디클로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 디클로로메탄 25 mL에 재용해한다.

나) 산화반응

위 용액에 1% m-CPB 용액 5 mL를 가한 후 가볍게 진탕하고 30℃ 항온수조에서 2분간 정치, 반응시킨다. 반응 후 10% 티오황산나트륨 수용액 30 mL를 가한 후 3분간 진탕, 반응을 종결시킨다. 반응액을 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 잔류물을 재차 디클로로메탄 10 mL로 씻어 옮긴다. 분액깔때기에 10%의 염화나트륨 수용액 80 mL와 0.1N 황산수용액 2 mL를 가하고 진탕한 후 정치, 하부 디클로로메탄 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 30 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 디클로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.

다) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL를 가하여 유출시켜버리고,  디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 40 mL를 유출시켜 버리고 재차 60 mL의 메탄올/아세톤 혼합액(1/99, v/v)으로 유출시켜 받는다. 이를 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 2 mL의 아세토니트릴에 재용해하고 기기분석 전에 0.2% 초산 수용액과 1:1로 혼합하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 초산함유 물 혼합액(35/65, v/v)에서 1분간 정치한 후 75/25(v/v)로 30분간 직선적으로 농도 구배한다.

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 256 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

농도별로 아세토니트릴에 조제한 표준혼합용액 일정량을 반응 플라스크에 취하고 질소 기류 하에서 증발 건고한 직후 위의 m-CPB 산화반응과정을 동일하게 수행한다. 디클로로메탄 추출액을 감압 농축, 건고한 후 아세토니트릴 2 mL에 재용해하고 0.2% 초산 수용액과 1:1로 혼합하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상에서 각 대상성분 술폰체의 피크 면적 또는 높이를 기준으로 모화합물로 환산하여, 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

가. 산화반응 공시험액, 나. 표준품 첨가 후 산화반응 시험액

1. 세톡시딤 술폰체(11.5분), 2. 클레소딤 술폰체(11.9분),

3. 프로폭시딤 술폰체(19.7분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 초산함유 물 혼합액(35/65, v/v)에서 1분간 정치한 후 75/25(v/v)로 30분간 직선적으로 농도 구배한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클레소딤 술폰체	16.1	391	392
세톡시딤 술폰체	15.2	359	360
프로폭시딤 술폰체	26.5	497	498

제 10, 4.1.3 중 4.1.3.40에서 4.1.3.42까지를 다음과 같이 신설한다.

4.1.3.40 보스칼리드(Boscalid), 플루토라닐(Flutolanil), 메프로닐(Mepronil) 및 티플루자마이드(Thifluzamid)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상농약을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용  또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 보스칼리드, 플루토라닐, 메프로닐 및 티플루자마이드 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 등 건조 검체의 경우 추출 전에 미리 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산/디클로로메탄(80/20, v/v) 혼합액  100 mL를 차례로 가한 후 5분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 유기용매층을 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃이하 수욕상에서 감압 농축하여 건고한다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃이하의 수욕상에서 감압 농축하여 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL를 가하여 유출시켜버리고, 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/디클로로메탄 혼합액(70/30, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 다시 헥산/디클로로메탄 혼합액(70/30, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(75/25, v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 58% 아세토니트릴 가하여 최종부피 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토나이트릴 혼합액(42/58, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 220 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

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2

1

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1. 보스칼리드(7.4분), 2. 메프로닐(8.1분), 3. 플루토라닐(8.8분),  4. 티플루자마이드(10.2분)

다) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/아세토니트릴(45/55, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100～600 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
보스칼리드	8.0	342	343
메프로닐	10.0	269	270
플루토라닐	11.1	323	324
티플루자마이드	14.9	528	529

4.1.3.41 비페녹스(Bifenox), 에탈풀루라린(Ethalfluralin),  메토라클로르(Metolachlor),  옥시풀루오르펜(Oxyfluorfen),  프레틸라클로르(Pretilachlor), 테닐클로르(Thenylchlor) 및 트리풀루라린(Trifluralin)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 콩류, 과실류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상농약을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 농약 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산/디클로로메탄(80/20, v/v)  100 mL를 차례로 가한 후 5분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 유기용매층을 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃이하 수욕상에서 감압 농축하여 건고한다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃이하의 수욕상에서 감압 농축하여 헥산 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/디클로로메탄 혼합액(90/10, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/디클로로메탄 혼합액(60/40, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 에탈플루라린 및 트리풀루라린의 시험용액으로 사용하고, 계속하여 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액 (50/49.5/0.5, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받은 후 40℃이하의 수욕상에서 감압농축한다. 다시 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 옥시풀루오르펜 및 비페녹스 시험용액으로 사용하며, 계속하여 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/46/4, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받은 후 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 메토라클로르, 프레틸라클로르 및 테닐클로르의 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：N2, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도： 140℃에서 시험용액을 주입하고 4℃/분의 비율로 온도를 240℃까지 상승시키고 10℃/분의 비율로 280℃까지 상승시킨다.

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입부 : 직접주입법

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

3

4

5

7

1

2

6

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1. 에탈풀루라린(5.1분), 2. 트리풀루라린(5.5분),

3. 메토라클로르(10.2분), 4. 프레틸라클로르(14.1분),

5. 옥시풀루오르펜(14.6분), 6. 테닐클로르(17.3분),

7. 비페녹스(19.7분)

라) 정량한계

에탈풀루라린 및 트리풀루라린(0.004 mg/kg), 메토라클로르 및 프레틸라클로르(0.008 mg/kg), 옥시풀루오르펜(0.002 mg/kg), 테닐클로르(0.02 mg/kg), 비페녹스(0.006 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1MS(50 m×0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도： 80℃에서 시험용액을 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 220℃까지 상승시켜 3분간 유지한다. 다시 3℃/분의 비율로 240℃까지 상승시키고 20℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입부：Split mode(30:1)

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50～500  m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
비페녹스	21.1	341	311, 341, 343
에탈풀루라린	5.2	333	276, 316
메토라클로르	10.3	283	162, 238
옥시풀루오르펜	14.5	361	252, 300, 361
프레틸라클로르	14.2	311	162, 176, 238
테닐클로르	18.2	323	127, 288
트리풀루라린	5.3	335	264, 306

4.1.3.42 싸이프로코나졸(Cyproconazole), 디니코나졸(Diniconazole), 푸루실라졸(Flusilazole), 펜코나졸(Penconazole) 및 터부코나졸(Tebuconazole)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소․인검출기(GC-NPD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 싸이프로코나졸(부분입체이성질체의 혼합물), 디니코나졸(부분입체이성질체의 혼합물), 푸루실라졸, 펜코나졸 및 터부코나졸 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 내부표준원액 : 4-dimethylamino-2-methylazobenzene (DAMAB) 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

마) 표준용액 1 : 싸이프로코나졸 및 펜코나졸의 농도비가 1:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 에틸아세테이트에 녹여 적절한 농도로 희석한다. GC 검량용 표준혼합용액은 싸이프로코나졸 기준으로 0.1～1 mg/L 농도 범위가 되도록 하고 내부표준물질 DAMAB의 농도는 항상 0.4 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

바) 표준용액 2 : 디니코나졸, 푸루실라졸 및 터부코나졸의 농도비가 1:1:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 에틸아세테이트에 녹여 적절한 농도로 희석한다. GC 검량용 표준혼합용액은 디니코나졸 기준으로 0.1～1 mg/L 농도 범위가 되도록 하고 내부표준물질 DAMAB의 농도는 항상 0.4 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

사) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL 및 40 mL를 각각 첨가하고 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 1분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 디클로로메탄 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 디클로로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한다. 비유지 검체의 경우 잔류물을 디클로로로메탄 10 mL에 재용해하여 플로리실 칼럼크로마토그래피에 직접 공시한다. 현미 및 콩류 등 유지 검체의 경우 잔류물을 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 40 mL에 재용해한 후 125 mL 용량의 분액깔때기에 정량적으로 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL를 가한 후 1분 이상 격렬하게 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 아세토니트릴 층을 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 분액깔때기에 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL를 재차 가하여 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 아세토니트릴 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 잔류물을 디클로로로메탄 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 그 위에 2 cm 높이로 무수황산나트륨을 차례로 건식 충전하고 디클로로로메탄 25 mL를 유출시켜버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, ‘가)추출’로부터 얻은 디클로로로메탄 용액 10 mL를 칼럼에 가하고 여분의 디클로로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(4/96, v/v) 50 mL를 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다. 이를 40℃에서 감압농축, 건고한 후 내부표준물질이 0.4 mg/L의 농도로 함유되어 있는 에틸아세테이트 5 mL에 재용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 180℃ (싸이프로코나졸, 펜코나졸), 190℃ (디니코나졸, 푸루실라졸, 터부코나졸)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입부 : 직접주입법

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품(I)의 크로마토그램

1. 펜코나졸(4.5분), 2. 싸이프로코나졸(7.9분),

3. DAMAB(내부표준물질, 10.3분)

그림 2. 기체크로마토그래프에서 표준품(II)의 크로마토그램

1. 푸루실라졸(5.1분), 2. 디니코나졸(6.0분),

3. DAMAB(내부표준물질, 6.8분), 4. 터부코나졸(8.8분)

라) 정량한계

싸이프로코나졸, 디니코나졸, 푸루실라졸 및 펜코나졸(0.02 mg/kg),터부코나졸(0.03 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m×0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 45℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고, 200℃까지 20℃/분 비율로 온도를 상승시켜 2분간 유지한 후  280℃까지 5℃/분 비율로 온도를 상승시킨다.

(5) 인터페이스온도 : 300℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입부 : Splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 100～500  m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
싸이프로코나졸	18.1, 18.2	291	222, 224, 139
디니코나졸	18.7	325	268, 270
푸루실라졸	17.6	315	233, 206
펜코나졸	15.5	283	248, 159, 161, 250
터부코나졸	20.6	307	250, 125

“제 10, 4.1.4.38 트리포린(Triforine)”을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 채소류 및 과일류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 트리포린을 아세토니트릴로 추출한 후 Dispersive-SPE로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 트리포린 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) Dispersive-SPE :  PSA(Primary-secondary amine) 25 mg과 황산마그네슘 150 mg을 1.5 mL 튜브에 담아 둔다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄한 후 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 5 mL를 넣고 20분간 습윤화), 아세토니트릴 10 mL를 넣은 후 15분간 균질화한다. 이에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산나트륨 1 g, 제2구연산나트륨 0.5 g을 첨가하고, 1분간 격렬히 흔들어 준다. 이를 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한다.

나) 정제

미리 PSA와 황산마그네슘을 담아둔 튜브에 ‘가) 추출’로부터 얻은 용액 중 상등액 1 mL를 넣고 1분간 격렬히 진탕한다. 이를 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하고, 상등액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)에서 2분간 유지 후 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(10/90, v/v)으로 2분간 직선적으로 농도 구배하고 1분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 390 (m/z) 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

트리포린(4.1분)

라) 정량한계

0.005 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 트리포린을 확인한다.

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy(V)
4.1	435	435	390 215	15 30

제 10, 4.1.4 중 4.1.4.158에서 4.1.4.164까지를 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.158 메타조설푸론(Metazosulfuron)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메타조설푸론을 아세토니트릴로 추출하고 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 메타조설푸론 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 아미노프로필 카트리지 : 아미노프로필(1 g)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL)를 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시키고 25 g을 정밀히 달아 삼각 플라스크에 넣고, 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 1시간 정치한다. 여기에 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 1시간 동안 진탕하여 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔때기에 옮긴다. 이에 포화식염수 50 mL, 물 50 mL 및 에틸아세테이트 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 디클로로메탄 5 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도까지 유출시켜 버린 후, ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 5 mL 중 1mL를 고정상 상단에 가한다. 여기에 아세톤/디클로로메탄 혼합액(50/50, v/v) 10 mL을 유출시켜 버린 후, 다시 아세톤/디클로로메탄/초산 혼합액(20/80/1, v/v/v) 10 mL를 15 mL 시험관에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 질소 농축한 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 1 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 245 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메타조설푸론(5.9분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 메타조설푸론을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(100 mm × 2.1 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200~500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
3.29	475	476

4.1.4.159 설폭사플로르(Sulfoxflor)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류, 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 설폭사플로르를 메탄올 및 1 N 염산으로 추출한 후 아미노 프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 설폭사플로르 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/0.2% 아세트산 함유 물 혼합액(50/50)으로 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 아미노프로필 카트리지 : 아민(1 g) 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 1 N 염산 용액 5 mL와 메탄올 또는 아세톤 45 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 5분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 메탄올(곡류, 콩류, 서류의 경우 아세톤 이용) 30 mL로 씻어내려 앞의 여액과 합하여 40℃이하 수욕상에서 감압농축한다. (추출물이 여과가 잘 되지 않을 경우 여과지에 Celite  545를 깔고 여과한다.) 농축액을 포화식염수 100 mL가 담겨있는 500 mL 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리 될 때까지 정치 한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. (지방성 검체의 경우 40℃이하 수욕상에서 감압농축한 후 아세토니트릴 포화 헥산 30 mL에 재용해하고 250 mL 분액깔때기에 옮긴 후 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL로 2회 분액하여 아세토니트릴 층을 감압농축플라스크에 받는다.) 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산/아세톤 혼합액(95/5, v/v) 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

아미노프로필 카트리지에 헥산 10 mL를 넣고 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산/아세톤 혼합액(95/5, v/v) 5 mL를 가하여 유출시켜버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/아세톤 혼합액(95/5, v/v) 5 mL와 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(60/40, v/v) 10 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴/0.2% 아세트산 함유 물 혼합액(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물과 아세토니트릴의 농도 구배조건에 따라 사용한다.

시간(분)	물(%)	아세토니트릴(%)
0	70	30
5	70	30
18	30	70
20	70	30
25	70	30

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 220 nm

(6) 주입량 : 40 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

설폭사플로르(7.9분, 8.3분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 설폭사플로르를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.01% 포름산 함유 물과 0.01% 포름산 함유 아세토니트릴의 농도 구배조건에 따라 사용한다.

시간(분)	0.01% 포름산 함유 아세토니트릴(%)	0.01% 포름산 함유 물(%)
0	0	100
5	30	70
12	70	30
13	0	100
15	0	100

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100～500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
8.9, 9.1	277	300

4.1.4.160 시아조파미드(Cyazofamid)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 시아조파미드를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 시아조파미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄 한 후 25 g을 정밀히 달아 삼각 플라스크에 넣고, 아세톤 100 mL를 넣은 후 1시간 동안 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔때기에 옮긴다. 이에 포화식염수 50 mL, 물 50 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 상기 감압농축플라스크에 합한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 5 mL를 가하여 용해한다. (대두 등의 유지작물의 추가 분배를 위하여 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 50 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 50 mL를 분액깔때기에 가하여 2분간 격렬히 진탕하고 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하고 헥산 5 mL를 가하여 용해한다.)

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 350 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 3 g을 차례로 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 유출시켜 버린 후, 다시 에틸아세테이트/헥산 혼합액(30/70, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다.  이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압 농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(35/65, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 280 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

시아조파미드(8.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 시아조파미드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(50 mm × 2.1 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~400 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
1.9	324	325

4.1.4.161 옥시카복신(Oxycarboxin)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 옥시카복신을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 물 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 옥시카복신 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한 후 40℃이하의 수욕상에서 감압농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 첨가한 후 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL, 포화식염수 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될때까지 정치하여 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을  무수황산나트륨 에 통과하여 감압농축플라스크에 받는다. 위의 디클로로메탄과 합한다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 디클로로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축한다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔때기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴 층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이 한다. 합한 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리 칼럼에 플로리실 10 g과 그 위에 무수황산나트륨 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 칼럼에 가하고 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/45/5, v/v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/40/10, v/v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 254 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

옥시카복신(8.5분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/아세토니트릴(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200～600  m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
3.9	267	268

4.1.4.162 이미시아포스(Imicyafos)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이미시아포스를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 이미시아포스 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세톤  30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 1 L 용량의 분액깔때기로 옮긴다. 이에 포화식염수 500 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 수용액층을 별도의 1 L 용량의 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한  후 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄 50 mL 및 아세톤/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/디클로로메탄 혼합액(45/55, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 25℃

(5) 검출기 파장 : 227 nm

(6) 주입량 : 10 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이미시아포스(14.9분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이미시아포스를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 3 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 25℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
3.0	304	305

4.1.4.163 이소피라잠(Isopyrazam)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이소피라잠을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 이소피라잠 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 감압농축플라스크에 받아 약 10 mL가 될 때까지 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 헥산 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 300 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 10 mL 중 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(90/10, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 254 nm

(6) 주입량 : 10 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이소피라잠(Syn-isomer 14.7분, anti-isomer 14.0분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이소피라잠을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(100 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : A: 0.1% 포름산 함유 물 B: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 농도 구배조건에 따라 사용한다.

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
2	80	20
10	40	60
15	40	60
16	80	20
30	80	20

(3) 이동상 유량 : 0.18 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 1 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100～400 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

이소피라잠	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
Syn-isomer	18.78	359	360
Anti-isomer	18.43	359	360

4.1.4.164 플루오피람(fluopyram)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루오피람을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루오피람 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세톤 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 넣고 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 16 mm, 길이 300 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(5/95, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 50 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 1분간 유지한 후 30℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 260℃ 이후 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입부：Split mode(30:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루오피람(9.9분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플루오피람을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m×0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도： 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 280℃에서 20분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 200℃

(7) 주입부 : Splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
16.1	397	223, 173, 145

“제 10, 5.3.70 티암페니콜(Thiamphenicol)”을 다음과 같이 한다.

5.3.70 티암페니콜(Thiamphenicol)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중의 티암페니콜을 축, 수산물의 경우 초산에틸/수산암모늄 혼합용액으로 추출하고, 유의 경우에는 20% TCA로 추출하고 헥산으로 지방을 제거하여 SPE(MCX)카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 티암페니콜 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액(10/90, v/v)으로 희석하여 사용한다.

마) MCX(Mixed-mode Cation-Exchange, 3 mL, 60 mg) 카트리지 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 축·수산물

균질화 된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 초산에틸/수산암모늄(98/2, v/v) 혼합용액 20 mL을 가하여 5분간 진탕하고 2,300 G에서 5분간 원심 분리하여 상층액을 100 mL 농축플라스크에 옮긴다. 원심분리 후 남은 잔사에 초산에틸/수산암모늄(98/2, v/v) 혼합용액 20 mL를 넣고 다시 2,300 G에서 5분간 원심 분리하여 나온 상층액을 앞의 농축플라스크에 합하여 이 액을 추출액으로 한다. 상층액이 모아진 농축플라스크에 2 mL의 5% 초산을 가하고 이를 40℃에서 1∼2 mL이 남을 때까지 감압 농축한다. 감압농축 후 남은 액을 15 mL 원심 분리관에 취하고 농축플라스크를 5% 초산 1 mL로 세척하여 이를 앞의 원심 분리관에 합한다. 원심 분리관에 핵산 5 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 2,300 G에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 제거하는 과정을 2회 반복하여 지방을 제거한다. 이 액을 추출액으로 한다.

(2) 유

균질화 된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 20% TCA 5 mL를 가하여 원심분리한 후 상층액을 50 mL를 원심 분리관에 취하여 위 과정을 한번 반복한다. 상층액이 모아진 농축플라스크에 2 mL의 5% 초산을 가하고 이를 40℃에서 1～2 mL이 남을 때까지 감압 농축한다. 감압농축 후 남은 액을 15 mL 원심 분리관에 취하고 농축플라스크를 5% 초산 1 mL로 세척하여 이를 앞의 원심 분리관에 합한다. 원심 분리관에 핵산 5 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 2,300 G에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 제거하는 과정을 2회 반복하여 지방을 제거한다. 이 액을 추출액으로 한다.

나) 정제

미리 메탄올 2 mL과 물 2 mL로 활성화시킨 양이온교환 카트리지에 흡착시키고 2 mL의 5% 초산으로 카트리지를 세척한 후 메탄올/수산암모늄(90/10, v/v) 혼합용액 3 mL로 용출한다. 용출액을 50℃에서 질소농축하고 30% 아세토니트릴 0.5 mL을 가하여 충분히 녹인 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	90	10
5	90	10
10	30	70
13	90	10
20	90	10

(4) 유속 : 1 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 224 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 티암페니콜(9.7분) 표준품의 크로마토그램

다) 정량한계

축·수산물 : 0.01 mg/kg, 유 : 0.01 mg/L

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 티암페니콜의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 티암페니콜 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 실온

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 물

(나) 이동상 B : 메탄올

min	A(%)	B(%)
0	90	10
1	30	70
3	30	70
3.1	90	10
6	90	10

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화방법 : ESI(negative)

(7) Capillary : 4,000 V

(8) Nebulizer : 40 psi

(9) Gas Temperature : 350℃

(10) Gas flow : 10 L/min

(11) Collision energy

물질	Precursor Ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy(eV)
티암페니콜	354	185, 290	17, 6

제 10, 5.3 중 5.3.100에서 5.3.104까지를 다음과 같이 신설한다.

5.3.100 메벤다졸(Mebendazole)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메벤다졸 및 그 대사물질을 아세토니트릴로 추출한 후 MgSO4 및 Primary secondary amine(PSA)를 이용하여 정제하고 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：메벤다졸 및 대사물질(메벤다졸-아민 및 5-하이드록시 메벤다졸) 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액：표준원액을 DMSO에 적당한 농도로 희석하여 사용하며, 냉장고에 보관한다.

마) 내부표준원액 : 5-OH-메벤다졸-d3 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

바) 내부표준용액 : 내부표준원액을 DMSO로 희석하여 1 mg/L가 되게 한다.

사) 맥일바인(MacIlvaine) 완충용액(pH 2) ： 0.6M 구연산(citric acid monohydrate) 및 0.3M 제이인산나트륨(disodium hydrogen phosphate dihydrate) 물에 녹인 후 HCl로 pH를 조절한다.

아) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 조직(간, 신장), 유(乳)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 5-OH-메벤다졸-d3 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 물 2 mL 넣고 1분간 균질화한다. 여기에 1% 초산을 포함한 아세토니트릴 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

(2) 조직(근육), 알(卵)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 5-OH-메벤다졸-d3 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 맥일바인 완충용액 2 mL 넣고 1분간 균질화 한다. 여기에 아세토니트릴 : 메탄올(9 : 1) 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

나) 정제

상징액을 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg 포함한 키트 또는 이와 동등한 것을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30 초간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 유리튜브에 옮긴 후 50℃, 질소가스 감압농축으로 건조한 후 남은 잔사에 500 μL DMSO로 용해한 후 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A：20 mM 암모늄포메이트 수용액

(나) 이동상 B：메탄올

min	A(%)	B(%)
0	70	30
0.5	70	30
1	20	80
4	20	80
4.1	70	30
8	70	30

(4) 유속 : 0.25 mL/분

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary : 4,000 V

(3) Nebulizer : 45 psi

(4) Gas Temperature : 350℃

(5) Gas flow : 10 L/min

(6) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
메벤다졸	296	264, 105	20, 35
5-OH-메벤다졸	298	160, 266	40, 20
메벤다졸-아민	238	77, 105	40, 30
내부표준물질(5-OH-메벤다졸-d3)	301	160, 266	40, 25

다) 표준품 크로마토그램

메벤다졸

5-OH-메벤다졸

메벤다졸-아민

5-OH-메벤다졸-d3

그림 1. 메벤다졸(4.7분), 5-OH-메벤다졸(4.3분), 메벤다졸 아민(4.2분),  5-OH-메벤다졸-d3(4.9분) 표준품의 크로마토그램

라) 정량한계

축산물 : 0.005 mg/kg, 유 : 0.005 mg/L

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여, 내부표준물질 5-OH-메벤다졸-d3의 m/z 160에 대한 메벤다졸 m/z 264, 5-OH-메벤다졸 m/z 160, 메벤다졸-아민 m/z 77의 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

5.3.101 니트록시닐(Nitroxynil), 클로술론(Clorsulon)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 니트록시닐 및 클로술론을 아세토니트릴로 추출한 후 MgSO4 및 Primary secondary amine(PSA)를 이용하여 정제하고 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：니트록시닐, 클로술론 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액：표준원액을 DMSO에 적당한 농도로 희석하여 사용하며, 냉장고에 보관한다.

마) 내부표준원액 : 살리실아마이드 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

바) 내부표준용액 : 내부표준원액을 DMSO로 희석하여 1 mg/L가 되게 한다.

사) 맥일바인(MacIlvaine) 완충용액(pH 2) ： 0.6M 구연산(citric acid monohydrate) 및 0.3M 제이인산나트륨(disodium hydrogen phosphate dihydrate) 물에 녹인 후 HCl로 pH를 조절한다.

아) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 조직(간, 신장)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 살리실아마이드 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 물 2 mL 넣고 1분간 균질화 한다. 여기에 1% 초산을 포함한 아세토니트릴 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

(2) 조직(근육), 알(卵), 유(乳)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 살리실아마이드 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 맥일바인 완충용액 2 mL 넣고 1분간 균질화 한다. 여기에 아세토니트릴 : 메탄올(9 : 1) 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

나) 정제

상징액을 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg 포함한 키트 또는 이와 동등한 것을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30 초간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 유리튜브에 옮긴 후 50℃, 질소가스 감압농축으로 건조한 후 남은 잔사에 500 μL DMSO로 용해한 후 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM 암모늄포메이트 수용액

(나) 이동상 B：메탄올

min	A(%)	B(%)
0	70	30
0.5	70	30
1	20	80
4	20	80
4.1	70	30
8	70	30

(4) 유속 : 0.25 mL/분

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(negative)

(2) Capillary : 4,000 V

(3) Nebulizer : 45 psi

(4) Gas Temperature : 350℃

(5) Gas flow : 10 L/min

(6) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
니트록시닐	289	127, 162	25, 10
클로술론	378, 380	342, 344	3, 6
내부표준물질 (살리실아마이드)	212	92, 64	25, 40

다) 표준품 크로마토그램

니트록시닐

살리실아마이드

클로술론

그림 1. 니트록시닐(4.2분), 클로술론(3.9분),

살리실아마이드(4.8분) 표준품의 크로마토그램

라) 정량한계(니트록시닐, 클로술론)

축산물 : 0.01 mg/kg, 유 : 0.01 mg/L

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여, 내부표준물질 살리실아마이드의 m/z 92에 대한 니트록시닐 m/z 127, 클로술론 m/z 342의 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

5.3.102 톨페남산(Tolfenamic acid)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 톨페남산을 아세토니트릴로 추출하고, 헥산으로 지방 및 불순물을 제거한 후 pH 조절과 에틸아세테이트로 액-액 추출하여 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 톨페남산 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합 희석한다.

마) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g에 아세토니트릴 10 mL씩 2회 가한 후 20분간 진탕한다.  4,000 rpm에서 10분간 원심분리한 다음 상징액을 취해 헥산 20 mL를 가하고 흔들어 방치한다. 하층을 모아 50℃ 질소 기류 하에서 건고시킨 후 잔류물을 에테르 4 mL로 재용해하여, 10분간 진탕하고, 2 mM NaOH 수용액 10 mL(4 mL, 4 mL, 2 mL씩 세 번), NaCl 수포화 용액을 2 mM NaOH 수용액 1 mL당 75 μL를 가하여 액-액 추출로 20분간 흔들어준 후 4,000 rpm에서 10분간 원심분리 한다. 상층액인 에테르를 취하지 아니하고, 아래 수층을 취하고 새 튜브에 담은 후 600 μL의 1/50로 희석한 아세트산 용액을 가하여 약산성화 시킨 후 40 mL의 에틸아세테이트(20 mL, 10 mL, 10 mL씩 세 번)를 가하고 액-액 추출로  20분간 흔들어준 후 4,000 rpm에서 5분간 원심분리 한다. 상층액을 취하여 50℃ 질소 기류 하에서 건고시킨 후 다시 에틸아세테이트 5 mL(2 mL, 2 mL, 1 mL씩 세 번)에 용해하여 50℃ 질소 기류 하에서 건고시킨다. 잔류물을 메탄올 500 μL을 가하여 10분간 진탕하고, 4,000 rpm에서 2분간 원심분리한 후 상징액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 : 0.1% 초산/아세토니트릴(50/50, v/v)

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

(6) UV 검출기 파장 : 218 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 톨페남산(12.6분) 크로마토그램

다) 정량한계

축산물 : 0.01 mg/kg, 유 : 0.01 mg/L

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 톨페남산의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 톨페남산 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.0 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 A : 0.2% 초산암모늄

(4) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	80	20
1	80	20
12	0	100
13	0	100
14	80	20
17	80	20

(5) 유속 : 0.3 mL/min

(6) 이온화 방법 : ESI(negative)

(7) Capillary temperature : 300℃

(8) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
톨페남산	260	216, 260	16

5.3.103 툴라스로마이신(Tulathromycin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중의 툴라스로마이신을 아세토니트릴로 추출하고, 개미산으로 재용해하여 SPE(HLB)카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 툴라스로마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 아지스로마이신(Azithromycin) 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

사) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance, 3 mL) 카트리지 또는 이와 동등한 것

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 10 g에 내부표준물질(아지스로마이신, 5 mg/L) 1 mL를 가하고 아세토니트릴 10 mL를 가하여 5분간 균질화 한다. 4℃, 3,500 rpm에서 20분간 원심분리하고 상징액을 질소퍼지용 튜브에 모은 뒤, 다시 시료에 아세토니트릴 10 mL를 넣고 30초간 흔들어 준 다음 5분간 균질화 한다. 4℃, 3,500 rpm에서 20분간 원심분리하고 상징액을 이전의 상징액과 합한 뒤, 50℃ 질소 기류 하에서 건고한다. 이를 2% 개미산 수용액 3 mL로 재용해하고 헥산 500 μL를 가하여 1분간 균질화한 뒤, 4℃, 13,000 rpm에서 20분간 원심분리 한 후 헥산 층을 제거하여 이 액을 추출액으로 한다.

나) 정제

미리 메탄올 3 mL과 물 3 mL로 활성화 시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고, 2% 개미산 수용액 3 mL로 세척한 후 2% 수산화암모늄을 함유한 메탄올 3 mL로 용출시킨다. 용출액은 50℃ 질소 기류 하에서 건고한 후 잔류물을 2 mL 증류수에 녹인 뒤 1분간 균질화 한다. 이 액을 4℃, 13,000 rpm에서 20분간 원심분리 한 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	95	5
1.5	95	5
2	10	90
2.5	10	90
4	95	5
15	95	5

(4) 유속 : 0.25 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
툴라스로마이신	577	116, 158	51, 49
내부표준물질(아지스로마이신)	749	83, 158	75, 61

다) 표준품 크로마토그램

툴라스로마이신

아지스로마이신

그림 1. 툴라스로마이신(6.5분), 아지스로마이신(6.5분)

표준품의  크로마토그램

라) 정량한계 : 0.05 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여, 내부표준물질 아지스로마이신의 m/z 83에 대한 툴라스로마이신 m/z 116의 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 함량을 구한다.

5.3.104 시미아졸(Cymiazole)

1) 시험법 적용범위

벌꿀에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 시미아졸을 1% 초산으로 추출하고, SPE(MCX)카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 시미아졸 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 혼합 희석한다.

마) MCX(Mixed-mode Cation-Exchange) 카트리지 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g에 1% 초산 15 mL를 가하고 10분간 진탕한다. 미리 메탄올 3 mL과 1% 초산 3 mL로 활성화 시킨 MCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고, 메탄올 3 mL와 1N HCl 3 mL로 세척한 후 5% 수산화암모늄을 포함한 메탄올 3 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상 : 0.1% 초산/아세토니트릴(81/19, v/v)

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 264 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 시미아졸(8.3분) 표준품의 크로마토그램

다) 정량한계 : 0.02 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 시미아졸의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 시미아졸 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.0 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 A : 0.2% 초산암모늄

(4) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	80	20
1	80	20
8	10	90
9	10	90
10	80	20
15	80	20

(5) 유속 : 0.3 mL/min

(6) 이온화 방법 : ESI(positive)

(7) Capillary temperature : 300℃

(8) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
시미아졸	219	105, 144, 171	30

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

별표 4 (1) 이민옥타딘(Iminoctadine) 중 다음 항목을 신설한다.

파	1.0

별표 4 (26) 디페노코나졸(Difenoconazolle) 중 다음 항목을 신설한다.

구기자(건조)	7.0

별표 4 (55) 부프로페진(Buprofezin) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	0.7

별표 4 (61) 비펜스린(Bifenthrin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

가지	0.3

고구마	0.05

고구마줄기	0.05

별표 4 (72) 아세토클로르(Acetochlor) 중 “수수 0.02”를 “수수 0.05”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

※ 밀, 수수, 옥수수는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임.

별표 4 (97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen) 중 다음 항목을 신설한다.

※ 견과류, 대두, 면실, 바나나, 복숭아, 살구, 아보카도, 양배추, 옥수수, 자두, 체리, 커피, 키위는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임

별표 4 (101) 이미다크로프리드(Imidacloprid) 중 “가지 0.2”를 “가지 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

멜론	0.2

별표 4 (112) 카벤다짐(Carbendazim) 중 “파 0.5”를 “파 2.0”으로 한다.

별표 4 (133) 터부코나졸(Tebuconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

감	2.0

별표 4 (149) 트리프루미졸(Triflumizole) 중 다음 항목을 신설한다.

자두	0.2

별표 4 (186) 프로클로라즈(Prochloraz) 중 다음 항목을 신설한다.

가지	2.0

별표 4 (206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

멜론	0.5

체리	1.0

살구	1.0

별표 4 (214) 피리다벤(Pyridaben) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	1.0

별표 4 (221) 디치아논(Dithianon) 중 다음 항목을 신설한다.

석류	2.0

별표 4 (223) 벤설탑(Bensultap) 중 다음 항목을 신설한다.

마	0.05

별표 4 (235) 포스치아제이트(Fosthiazate) 중  “토마토 0.02”를 “토마토 0.05”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

복분자	0.05

별표 4 (239) 후루아지남(Fluazinam) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

구기자(건조)	15

오이	0.05

포도	0.05

별표 4 (246)스피노사드(Spinosad) 중 다음 항목을 신설한다.

쌀	0.05

별표 4 (285) 아크리나쓰린(Acrinathrin) 중 다음 항목을 신설한다.

복숭아	0.2

별표 4 (301) 펜헥사미드(Fenhexamid) 중 다음 항목을 신설한다.

가지	2.0

별표 4 (309) 플루토라닐(Flutolanil) 중 “고추 0.05”를 “고추 1.0”으로 하고, “피망 0.05”를 “피망 1.0”으로 한다.

별표 4 (323) 보스칼리드(Boscalid) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

별표 4 (326) 아세퀴노실(Acequinocyl) 중 다음 항목을 신설한다.

살구	2.0

별표 4 (332) 크로치아니딘(Clothianidin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

멜론	0.05

마	0.05

별표 4 (337) 티아메톡삼(Thiamethoxam) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	0.3

별표 4 (339) 티오사이크람(Thiocyclam) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감귤	0.5

배	1.0

별표 4 (349) 노발루론(Novaluron) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	1.0

별표 4 (355) 스피로디크로펜(Spirodiclofen) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

살구	5.0

체리	2.0

별표 4 (361) 테플루스린(Tefluthrin) 중 다음 항목을 신설한다.

갓	0.05

별표 4 (373) 스피로메시펜(Spiromesifen) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

살구	1.0

체리	1.0

별표 4 (386) 플로니카미드(Flonicamid) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

매실	2.0

메론	1.0

대두	0.05

풋콩	0.5

별표 4 (390) 시메코나졸(Simeconazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

복분자	0.3

머루	3.0

별표 4 (394) 비스트리플루론(Bistrifluron) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	1.0

별표 4 (403) 메타플루미존(Metaflumizone) 중 다음 항목을 신설한다.

수박	0.5

별표 4 (405) 사이에노피라펜(Cyenopyrafen) 중 다음 항목을 신설한다.

가지	2.0

별표 4 (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

무	0.05

무잎	0.5

부추	0.5

별표 4 (409) 아미설브롬(Amisulbrom) 중 “파 1.0”을 “파 3.0”으로 한다.

별표 4 (415) 크로마페노자이드(Chromafenozide) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	2.0

엇갈이배추	5.0

별표 4 (416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantaniliprole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

복분자	1.0

취나물	7.0

옥수수	0.05

별표 4 (417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide) 중 다음 항목을 신설한다.

부추	3.0

별표 4 (421) 레피멕틴(Lepimectin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

엇갈이배추	0.05

상추	1.0

시금치	0.05

파	0.05

호박	0.05

호박잎	2.0

별표 4 (422) 펜티오피라드(Penthiopyrad) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

포도	2.0

참외	0.5

별표 4 (423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

포도	5.0

감귤	0.5

별표 4 (430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor) 중 다음 항목을 신설한다.

감귤	1.0

별표 4 중 (432)을 다음과 같이 신설한다.

(432) 사플루페나실(Saflufenacil)

대두	0.05

레몬	0.03

망고	0.03

면실	0.2

밀	0.03

바나나	0.03

배	0.03

보리	0.03

복숭아	0.03

사과	0.03

사탕수수	0.03

쌀	0.03

수수	0.03

아몬드	0.03

오렌지	0.03

옥수수	0.03

유채씨	0.5

자두	0.03

자몽	0.03

체리	0.03

커피	0.03

포도	0.03

피칸	0.03

해바라기씨	0.7

※ 대두, 레몬, 망고, 면실, 밀, 바나나, 배, 보리, 복숭아, 사과, 사탕수수, 쌀, 수수, 아몬드, 오렌지, 옥수수, 유채씨, 자두, 자몽, 체리, 커피, 포도, 피칸, 해바라기씨는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임

부칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시 후 7일이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(잔류농약시험법 등에 관한 적용례) ① 제 10. 일반시험법의 개정규정은 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품 및 유통중인 농산물을 포함한다)부터 적용한다.

② 제 10. 일반시험법의 개정규정은 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행중인 사항에 대하여는 적용하지 아니한다.

제3조(농약 잔류허용기준 적용례) ① 별표 4의 개정규정은 이 고시 시행 당시 이미 제조·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품 및 유통중인 농산물을 포함한다)에 대하여도 적용한다.

② 별표 4의 개정규정은 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여도 적용한다.

신∙구조문 대비표

현  행

개  정 안

제 10. 일반시험법

1 ∼ 3 (생  략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.16 (생  략)

4.1.3.17 세톡시딤(Sethoxydim) 및 클레소딤(Clethodim)

1) 시험법 적용범위

고구마, 고추, 대두, 딸기, 땅콩, 마늘,밤, 배, 배추,  오이, 옥수수, 완두콩, 은행, 양파, 키위, 토란, 토마토, 파, 호도, 호박 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 메탄올로 추출한 후 실리카 칼럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가)  액체크로마토그래프：자외부흡광검출기(UV-Detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 실리카：칼럼크로마토그래프용 실리카(212～425 μm)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 표준원액：세톡시딤 및 클레소딤을 각각 헥산에 녹여 100 mg/kg으로 한다.

마) 표준용액：각각의 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

바) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

<신  설>

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g을 달아 분액깔때기에 옮긴다. 채소류, 과실류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 정밀히 달아 필요하면 적당량의 물을 넣어 균질화한 후 그 20 g에 상당하는 양을 달아 분액깔때기에 옮긴다)에 메탄올 100 mL를 넣고 진탕기로 30분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과하여 여액을 삼각플라스크(Ⅰ)에 옮긴다. 잔류물은 다시 분액깔때기에 넣고 메탄올 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 여과하여 여액을 위의 삼각플라스크(Ⅰ)에 합친다. 이에 물 150 mL 및 수산화칼슘 4 g을 넣고 1분간 흔들어 섞은 후 정치하여 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과하여 여액을 삼각플라스크(Ⅱ)에 옮긴다. 다시 물：메탄올(1：1)의 혼합액 30 mL로 삼각플라스크(Ⅰ)를 씻고 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 씻고 여액을 위의 삼각플라스크(Ⅱ)에 합친다. 이에 1N 염산으로 pH 3～4로 조정하고 과산화수소수 0.5 mL를 넣어 50℃에서 16시간 가열하고 식힌 후 분액깔때기에 옮긴다. 이에 염화나트륨 5 g 및 헥산 50 mL를 넣어 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산층을 버린다. 물층에 디클로로메탄 80 mL를 넣고 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층을 분액깔때기에 옮긴다. 다시 물층에 디클로로메탄 80 mL를 넣어 위와 같이 2회 되풀이한 후 디클로로메탄층을 위의 분액깔때기에 합친다. 이에 염화나트륨 5 g 및 0.01N 수산화나트륨용액 50 mL를 넣고 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 디클로로메탄층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 디클로로메탄층을 액상분리용 여과지로 여과하고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 30 mL로 농축한다.

나) 설폰화

위의 농축액에 m-클로로과안식향산 약 20 mg을 넣고 마개를 하여 때때로 흔들어 섞으면서 30℃에서 10분간 방치한다. 이에 5% 티오황산나트륨용액 30 mL를 넣고 진탕기로 10분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 디클로로메탄 20 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 디클로로메탄층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 이를 액상분리여지로 여과하여 40℃이하의 수욕상에서 감압하에 날려보낸다. 잔사를 에틸아세테이트：헥산(2：3)의 혼합액 10 mL에 녹인다.

다) 정제

안지름 15 mm, 길이 300 mm의 칼럼관에 실리카 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 5 g을 각각 에틸아세테이트：헥산(2：3)의 혼합액에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 에틸아세테이트：헥산(2：3)의 혼합액이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 녹인액을 넣고 에틸아세테이트∶헥산(2∶3)의 혼합액 150 mL를 넣어 유출시켜버리고 이어서 아세톤∶헥산(3∶7)의 혼합액 200 mL로 용출한다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 날려보낸 후 잔사를 디클로로메탄에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼충전제∶칼럼크로마토그래프용 실리카

(2) 칼럼：안지름 2～3 mm, 길이 200～500 mm의 스테인리스관

(3) 검출기：254nm

(4) 이동상：디클로로메탄：메탄올(49：1)의 혼합액

(5) 유속：6-[2-(에틸설포닐)프로필]-4-옥시-2-프로필-4, 5, 6, 7-테트라히드로벤조옥사졸이 약 6～8분에서 유출하는 유속으로 조정한다.

<신  설>

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진   크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

<신  설>

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

4.1.4 ∼ 4.1.4.37 (생  략)

4.1.4.38 트리포린(Triforine)

1) 시험법 적용범위

가지, 고추, 구기자, 기타곡류, 딸기, 밀, 보리, 복숭아, 사과, 수박, 쌀, 오이, 옥수수, 자두, 체리, 토마토, 피망, 호박 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 실리카 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프∶전자포획검출기(ECD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 셀룰로오즈(Cellulose)：칼럼크로마토그래프용 미결정 셀룰로오즈 분말

라) 실리카(silica)：칼럼크로마토그래프용 실리카

마) 표준원액：트리포린을 아세톤에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

바) 표준용액：표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

사) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 그 20 g을 단다. 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 정밀히 달아 필요하면 적당량의 물을 넣고 균질화한 후 그 20 g에 상당하는 양을 단다) 균질기에 넣고 아세톤 150 mL를 넣어 5분간 균질화한 후 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 다시 균질기에 넣고 아세톤 50 mL를 넣어 5분간 균질화한 후 위와 같이 되풀이하여 여과한다. 여액을 합쳐 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 아세톤을 거의 날려보낸다. 잔류물은 미리 5% 염화나트륨용액 200 mL 및 벤젠 100 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 진탕기로 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 벤젠층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 벤젠 100 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 벤젠층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 벤젠층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣어 때때로 흔들어 섞으면서 30분간 방치한 후 여과한다. 다시 벤젠 20 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 씻고 여과한다. 여액을 합쳐 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 날려 보낸 후 잔사를 아세톤 10 mL에 녹인다.

나) 정제

(1) 활성탄, 셀룰로오즈 칼럼크로마토그래프

안지름 1.5 cm, 길이 30 cm의 칼럼관에 활성탄：셀룰로오즈(1：9)의 혼합물 2 g, 다음에 무수황산나트륨 약 5 g을 각각 아세톤에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 아세톤이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 녹인 액을 넣고 아세톤 100 mL로 용출한다. 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압하에 날려 보낸 후 잔사를 아세톤：헥산(1：9)의 혼합액 10 mL에 녹인다.

(2) 실리카 칼럼크로마토그래프

안지름 1.5 cm, 길이 30 cm의 칼럼관에 실리카 10 g, 다음에 무수황산나트륨을 각각 아세톤：헥산(1：9)의 혼합액에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 아세톤：헥산(1：9)의 혼합액이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 녹인 액을 넣고 아세톤：헥산(1：9)의 혼합액 150 mL로 유출시킨 후 아세톤：헥산(3：7)의 혼합액 100 mL로 용출한다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 날려보낸 후 잔사를 에틸아세테이트：메탄올(1：1)의 혼합액에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼충전제

(가) 고정상담체：기체크로마토그래프용 규조토(149～177 μm)를 6N 염산으로 2시간 환류시켜 씻고 물로 유출액이 중성이 될 때까지 씻은 후 건조하여 메틸실라잔처리[트리메틸클로로실란：피리딘：헥사메틸디실라잔(1：5：3)의 혼합액에 침지하고 10분간 물로 씻어 건조한다]한다.

(나) 고정상액체：5% 기체크로마토그래프용 실리콘

(2) 칼럼：안지름 3～4 mm, 길이 100～150 cm의 유리관

(3) 시험용액 주입부 및 검출기 온도：240～300℃

(4) 칼럼오븐온도：170～190℃

(5) 캐리어가스 및 유량：질소(트리포린이 약 3분에서 유출하는 유속으로 조정한다)

<신  설>

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

<신  설>

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.39 ∼ 4.1.4.147 (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.69 (생  략)

5.3.70 티암페니콜(Thiamphenicol)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세톤으로 추출하여 염화나트륨용액을 넣고 에틸아세테이트로 추출하여 에틸아세테이트를 날려보낸 후 아세토니트릴 및 n-헥산의 혼합액에 녹여 아세토니트릴층을 감압건고한다. 에틸아세테이트, 초산(무수), 피리딘을 사용하여 아세틸화하여 실리카 칼럼으로 정제한 후 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

기체크로마토그래프/질소․인검출기(GC/NPD)

4) 시약 및 시액

가) 유기용매：잔류농약 시험용

나) 표준원액：티암페니콜 10 mg을 정밀히 달아 아세톤에 녹여 50 mL로 한다.

다) 표준용액：티암페니콜 표준용액 5 mL를 취해 아세톤을 넣어 50 mL로 한다.

라) 실리카：칼럼크로마토그래프용(100～200메쉬)

마) 기타시약：최순품

<신  설>

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 2 g을 달아 아세톤 30 mL를 넣어 균질기로 균질하게 한 후 3,000～3,500 rpm에서 5분간 원심분리하여 상등액을 취한다. 다시 잔류물에 아세톤 20 mL를 10 mL씩 나누어 위의 조작을 되풀이 한 후 상등액을 합하여 다시 5분간 원심분리한다. 상등액을 분액깔때기에 옮기고 3% 염화나트륨용액 150 mL를 넣은 후 에틸아세테이트 150 mL를 넣고 진탕하여 에틸아세테이트층을 취한다. 물층은 다시 에틸아세테이트 100 mL를 50 mL씩 나누어 위와 같이 2회 되풀이한 후 에틸아세테이트층을 합하여 감압건고한다. 잔류물은 아세토니트릴 10 mL를 5, 3 및 2 mL로 나누어 녹여 분액깔때기에 옮기고 n-헥산 30 mL를 넣어 진탕후 아세토니트릴층을 취해 감압건고한다. 잔류물에 에틸아세테이트 0.5 mL, 초산(무수) 0.5 mL 및 피리딘 2방울을 넣고 혼합하여 30분간 방치한다.

이 액에 물 5 mL를 넣고 혼합한 후 클로로포름 5 mL씩으로 3회 추출하여 클로로포름층을 물 5 mL씩으로 3회 씻는다. 클로로포름층은 황산나트륨(무수) 5 g을 넣어 흔들어 섞으면서 방치한 후 여과한다.

나) 정제

안지름 10 mm, 길이 300 mm의 칼럼에 실리카 3 g을 넣고 그 위에 황산나트륨(무수) 1 g을 클로로포름에 현탁시켜 넣은 후 충전물의 상단에 소량의 클로로포름이 남을 때까지 흘려버린다. 이 칼럼에 위의 여액을 넣고 클로로포름 약 30 mL로 씻은 후 메탄올 및 클로로포름(2：8)의 혼합액 50 mL로 용출시킨다. 이 액을 감압건고한 후 잔류물을 아세톤 0.5 mL로 녹여 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼충전제

(가) 고정상담체：크로모솔브 W(AW)

(나) 고정상액체：2% OV-17

(2) 칼럼：안지름 3 mm, 길이 1 mm 유리관

(3) 검출기온도：300℃

(4) 칼럼온도：280℃

(5) 캐리어가스 및 유량：질소, 60 mL/분

<신  설>

7) 정량시험

티암페니콜 표준용액 0.1, 0.3, 0.5 및 1.0 mL를 취해 감압건고한 후 에틸아세테이트, 초산(무수)을 각각 0.5 mL씩 넣고 피리딘 2방울을 넣어 잘 혼합한 후 30분간 방치하여 이후 5) 시험용액의 조제항에 따라 조작하여 얻은 표준용액 및 시험용액 2 μL를 위의 조건에 따라 기체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간(Retention time)을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 티암페니콜의 함량을 구한다.

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

제 10. 일반시험법

1 ∼ 3 (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.16 (현행과 같음)

4.1.3.17 클레소딤(Clethodim), 프로폭시딤(Profoxydim) 및 세톡시딤(Sethoxydim) 시험법

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 메탄올/물 혼합액(1/1, v/v)을 가하여 모화합물 및 산화대사산물을 동시에 추출하고 클로로과산화벤조익산(m-CPB)으로 산화반응시킨다. 전환된 술폰체(sulfone)를 액-액 분배하여 플로리실 칼럼으로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클레소딤 및 세톡시딤 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 200 mg/L가 되게 한다. 프로폭시딤 또는 리튬염 분석용 표준품을 메탄올에 녹여 200 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 클레소딤, 프로폭시딤 및 세톡시딤의 농도비가 1:1:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 아세토니트릴에 녹여 적절한 농도로 희석한다.

마) 클로로과산화벤조익산 (m-chloroperoxybenzoic acid, m-CPB) 용액 : 디클로로메탄에 1%가 되도록 녹이며 사용 직전 조제한다.

바) 티오황산나트륨(sodium thiosulfate) 용액 :  10% 수용액을 조제한다.

사) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 10 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 10 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 메탄올/물 혼합액(1/1, v/v) 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 곡류 등 건조 검체의 경우 추출 전에  미리 30분간 방치, 습윤화한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 메탄올/물 혼합액 (1/1, v/v) 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 50 mL, 초산 0.5 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 1분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 디클로로메탄 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합친 디클로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 디클로로메탄 25 mL에 재용해한다.

나) 산화반응

위 용액에 1% m-CPB 용액 5 mL를 가한 후 가볍게 진탕하고 30℃ 항온수조에서 2분간 정치, 반응시킨다. 반응 후 10% 티오황산나트륨 수용액 30 mL를 가한 후 3분간 진탕, 반응을 종결시킨다. 반응액을 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 잔류물을 재차 디클로로메탄 10 mL로 씻어 옮긴다. 분액깔때기에 10%의 염화나트륨 수용액 80 mL와 0.1N 황산수용액 2 mL를 가하고 진탕한 후 정치, 하부 디클로로메탄 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 30 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 디클로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.

다) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL를 가하여 유출시켜버리고,  디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 40 mL를 유출시켜 버리고 재차 60 mL의 메탄올/아세톤 혼합액(1/99, v/v)으로 유출시켜 받는다. 이를 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 2 mL의 아세토니트릴에 재용해하고 기기분석 전에 0.2% 초산 수용액과 1:1로 혼합하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 초산함유 물 혼합액(35/65, v/v)에서 1분간 정치한 후 75/25 (v/v)로 30분간 직선적으로 농도 구배한다.

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 256 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

농도별로 아세토니트릴에 조제한 표준혼합용액 일정량을 반응 플라스크에 취하고 질소 기류 하에서 증발 건고한 직후 위의 m-CPB 산화반응과정을 동일하게 수행한다. 디클로로메탄 추출액을 감압 농축, 건고한 후 아세토니트릴 2 mL에 재용해하고 0.2% 초산 수용액과 1:1로 혼합하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상에서 각 대상성분 술폰체의 피크 면적 또는 높이를 기준으로 모화합물로 환산하여, 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1.	액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

가. 산화반응 공시험액, 나. 표준품 첨가 후 산화반응 시험액

1. 세톡시딤 술폰체(11.5분), 2. 클레소딤 술폰체(11.9분), 3. 프로폭시딤 술폰체(19.7분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 초산함유 물 혼합액(35/65, v/v)에서 1분간 정치한 후 75/25(v/v)로 30분간 직선적으로 농도 구배한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간 (분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클레소딤 술폰체	16.1	391	392
세톡시딤 술폰체	15.2	359	360
프로폭시딤 술폰체	26.5	497	498

4.1.3.40 보스칼리드(Boscalid), 플루토라닐(Flutolanil), 메프로닐(Mepronil) 및 티플루자마이드(Thifluzamid)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상농약을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용  또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 보스칼리드, 플루토라닐, 메프로닐 및 티플루자마이드 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 등 건조 검체의 경우 추출 전에 미리 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산/디클로로메탄(80/20, v/v) 혼합액  100 mL를 차례로 가한 후 5분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 유기용매층을 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃이하 수욕상에서 감압 농축하여 건고한다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃이하의 수욕상에서 감압 농축하여 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL를 가하여 유출시켜버리고, 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/디클로로메탄 혼합액(70/30, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 다시 헥산/디클로로메탄 혼합액(70/30, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(75/25, v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 58% 아세토니트릴 가하여 최종부피 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토나이트릴 혼합액 (42/58, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출기 파장 : 220 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4

3

2

1

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1. 보스칼리드(7.4분), 2. 메프로닐(8.1분), 3. 플루토라닐(8.8분),  4. 티플루자마이드(10.2분)

다) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/아세토니트릴(45/55, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100～600 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온 (m/z)
보스칼리드	8.0	342	343
메프로닐	10.0	269	270
플루토라닐	11.1	323	324
티플루자마이드	14.9	528	529

4.1.3.41 비페녹스(Bifenox), 에탈풀루라린(Ethalfluralin), 메토라클로르(Metolachlor), 옥시풀루오르펜(Oxyfluorfen), 프레틸라클로르(Pretilachlor), 테닐클로르(Thenylchlor) 및 트리풀루라린(Trifluralin)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 콩류, 과실류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상농약을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 농약 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산/디클로로메탄(80/20, v/v)  100 mL를 차례로 가한 후 5분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 유기용매층을 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃이하 수욕상에서 감압 농축하여 건고한다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃이하의 수욕상에서 감압 농축하여 헥산 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/디클로로메탄 혼합액(90/10, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/디클로로메탄 혼합액(60/40, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 에탈플루라린 및 트리풀루라린의 시험용액으로 사용하고, 계속하여 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액 (50/49.5/0.5, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받은 후 40℃이하의 수욕상에서 감압농축한다. 다시 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 옥시풀루오르펜 및 비페녹스 시험용액으로 사용하며, 계속하여 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/46/4, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받은 후 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 잘 녹인 후 메토라클로르, 프레틸라클로르 및 테닐클로르의 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：N2, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도： 140℃에서 시험용액을 주입하고 4℃/분의 비율로 온도를 240℃까지 상승시키고 10℃/분의 비율로 280℃까지 상승시킨다.

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입부 : 직접주입법

(7)  주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

5

6

7

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1. 에탈풀루라린(5.1분), 2. 트리풀루라린(5.5분), 3. 메토라클로르(10.2분), 4. 프레틸라클로르(14.1분), 5. 옥시풀루오르펜(14.6분), 6. 테닐클로르(17.3분), 7. 비페녹스(19.7분)

라) 정량한계

에탈풀루라린 및 트리풀루라린(0.004 mg/kg), 메토라클로르 및 프레틸라클로르(0.008 mg/kg), 옥시풀루오르펜(0.002 mg/kg), 테닐클로르(0.02 mg/kg), 비페녹스(0.006 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1MS(50 m×0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도： 80℃에서 시험용액을 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 220℃까지 상승시켜 3분간 유지한다. 다시 3℃/분의 비율로 240℃까지 상승시키고 20℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입부：Split mode(30:1)

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50～500  m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
비페녹스	21.1	341	311, 341, 343
에탈풀루라린	5.2	333	276, 316
메토라클로르	10.3	283	162, 238
옥시풀루오르펜	14.5	361	252, 300, 361
프레틸라클로르	14.2	311	162, 176, 238
테닐클로르	18.2	323	127, 288
트리풀루라린	5.3	335	264, 306

4.1.3.42 싸이프로코나졸(Cyproconazole), 디니코나졸(Diniconazole), 푸루실라졸(Flusilazole), 펜코나졸(Penconazole) 및 터부코나졸(Tebuconazole)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소․인검출기(GC-NPD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 싸이프로코나졸(부분입체이성질체의 혼합물), 디니코나졸(부분입체이성질체의 혼합물), 푸루실라졸, 펜코나졸 및 터부코나졸 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 내부표준원액 : 4-dimethylamino-2-methylazobenzene (DAMAB) 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

마) 표준용액 1 : 싸이프로코나졸 및 펜코나졸의 농도비가 1:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 에틸아세테이트에 녹여 적절한 농도로 희석한다. GC 검량용 표준혼합용액은 싸이프로코나졸 기준으로 0.1～1 mg/L 농도 범위가 되도록 하고 내부표준물질 DAMAB의 농도는 항상 0.4 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

바) 표준용액 2 : 디니코나졸, 푸루실라졸 및 터부코나졸의 농도비가 1:1:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 에틸아세테이트에 녹여 적절한 농도로 희석한다. GC 검량용 표준혼합용액은 디니코나졸 기준으로 0.1～1 mg/L 농도 범위가 되도록 하고 내부표준물질 DAMAB의 농도는 항상 0.4 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

사) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL 및 40 mL를 각각 첨가하고 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한다. 합한 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 1분 이상 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 디클로로메탄 층을 20 g의 무수황산나트륨 층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 디클로로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한다. 비유지 검체의 경우 잔류물을 디클로로로메탄 10 mL에 재용해하여 플로리실 칼럼크로마토그래피에 직접 공시한다. 현미 및 콩류 등 유지 검체의 경우 잔류물을 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 40 mL에 재용해한 후 125 mL 용량의 분액깔때기에 정량적으로 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL를 가한 후 1분 이상 격렬하게 진탕한다. 두 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 하부 아세토니트릴 층을 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 분액깔때기에 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL를 재차 가하여 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 아세토니트릴 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 잔류물을 디클로로로메탄 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 그 위에 2 cm 높이로 무수황산나트륨을 차례로 건식 충전하고 디클로로로메탄 25 mL를 유출시켜버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, ‘가)추출’로부터 얻은 디클로로로메탄 용액 10 mL를 칼럼에 가하고 여분의 디클로로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 흘려버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(4/96, v/v) 50 mL를 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다. 이를 40℃에서 감압농축, 건고한 후 내부표준물질이 0.4 mg/L의 농도로 함유되어 있는 에틸아세테이트 5 mL에 재용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 180℃ (싸이프로코나졸, 펜코나졸), 190℃ (디니코나졸, 푸루실라졸, 터부코나졸)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입부 : 직접주입법

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품(I)의 크로마토그램

1. 펜코나졸(4.5분), 2. 싸이프로코나졸(7.9분), 3. DAMAB(내부표준물질, 10.3분)

그림 2. 기체크로마토그래프에서 표준품(II)의 크로마토그램

1. 푸루실라졸(5.1분), 2. 디니코나졸(6.0분), 3. DAMAB(내부표준물질, 6.8분), 4. 터부코나졸(8.8분)

라) 정량한계

싸이프로코나졸, 디니코나졸, 푸루실라졸 및 펜코나졸(0.02 mg/kg),터부코나졸(0.03 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m×0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 45℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고, 200℃까지 20℃/분 비율로 온도를 상승시켜 2분간 유지한 후  280℃까지 5℃/분 비율로 온도를 상승시킨다.

(5) 인터페이스온도 : 300℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입부 : Splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 100～500  m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
싸이프로코나졸	18.1, 18.2	291	222, 224, 139
디니코나졸	18.7	325	268, 270
푸루실라졸	17.6	315	233, 206
펜코나졸	15.5	283	248, 159, 161, 250
터부코나졸	20.6	307	250, 125

4.1.4 ∼ 4.1.4.37 (생  략)

4.1.4.38 트리포린(Triforine)

1) 시험법 적용범위

곡류, 채소류 및 과일류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 트리포린을 아세토니트릴로 추출한 후 Dispersive-SPE로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 트리포린 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) Dispersive-SPE :  PSA(Primary-secondary amine) 25 mg과 황산마그네슘 150 mg을 1.5 mL 튜브에 담아 둔다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄한 후 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 5 mL를 넣고 20분간 습윤화), 아세토니트릴 10 mL를 넣은 후 15분간 균질화한다. 이에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산나트륨 1 g, 제2구연산나트륨 0.5 g을 첨가하고, 1분간 격렬히 흔들어 준다. 이를 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한다.

나) 정제

미리 PSA와 황산마그네슘을 담아둔 튜브에 ‘가) 추출’로부터 얻은 용액 중 상등액 1 mL를 넣고 1분간 격렬히 진탕한다. 이를 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하고, 상등액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)에서 2분간 유지 후 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(10/90, v/v)으로 2분간 직선적으로 농도 구배하고 1분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 390 (m/z) 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

트리포린(4.1분)

라) 정량한계

0.005 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 트리포린을 확인한다.

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy (V)
4.1	435	435	390 215	15 30

4.1.4.39 ∼ 4.1.4.147 (현행과 같음)

4.1.4.158 메타조설푸론(Metazosulfuron)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메타조설푸론을 아세토니트릴로 추출하고 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 메타조설푸론 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 아미노프로필 카트리지 : 아미노프로필(1 g)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL)를 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시키고 25 g을 정밀히 달아 삼각 플라스크에 넣고, 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 1시간 정치한다. 여기에 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 1시간 동안 진탕하여 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔때기에 옮긴다. 이에 포화식염수 50 mL, 물 50 mL 및 에틸아세테이트 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 디클로로메탄 5 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도까지 유출시켜 버린 후, ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 5 mL 중 1 mL를 고정상 상단에 가한다. 여기에 아세톤/디클로로메탄 혼합액(50/50, v/v) 10 mL을 유출시켜 버린 후, 다시 아세톤/디클로로메탄/초산 혼합액(20/80/1, v/v/v) 10 mL를 15 mL 시험관에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 질소 농축한 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 1 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 245 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메타조설푸론(5.9분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 메타조설푸론을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(100 mm × 2.1 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200~500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
3.29	475	476

4.1.4.159 설폭사플로르(Sulfoxflor)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 곡류, 콩류, 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 설폭사플로르를 메탄올 및 1 N 염산으로 추출한 후 아미노 프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 설폭사플로르 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/0.2% 아세트산 함유 물 혼합액(50/50)으로 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 아미노프로필 카트리지 : 아민(1 g) 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 1 N 염산 용액 5 mL와 메탄올 또는 아세톤 45 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 5분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 메탄올(곡류, 콩류, 서류의 경우 아세톤 이용) 30 mL로 씻어내려 앞의 여액과 합하여 40℃이하 수욕상에서 감압농축한다. (추출물이 여과가 잘 되지 않을 경우 여과지에 Celite  545를 깔고 여과한다.) 농축액을 포화식염수 100 mL가 담겨있는 500 mL 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리 될 때까지 정치 한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. (지방성 검체의 경우 40℃이하 수욕상에서 감압농축한 후 아세토니트릴 포화 헥산 30 mL에 재용해하고 250 mL 분액깔때기에 옮긴 후 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL로 2회 분액하여 아세토니트릴 층을 감압농축플라스크에 받는다.) 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산/아세톤 혼합액(95/5, v/v) 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

아미노프로필 카트리지에 헥산 10 mL를 넣고 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산/아세톤 혼합액(95/5, v/v) 5 mL를 가하여 유출시켜버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/아세톤 혼합액(95/5, v/v) 5 mL와 헥산/아세톤 혼합액(90/10, v/v) 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/아세톤 혼합액(60/40, v/v) 10 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴/0.2% 아세트산 함유 물 혼합액(50/50, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물과 아세토니트릴의 농도 구배조건에 따라 사용한다.

시간(분)	물(%)	아세토니트릴(%)
0	70	30
5	70	30
18	30	70
20	70	30
25	70	30

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 220 nm

(6) 주입량 : 40 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

설폭사플로르(7.9분, 8.3분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 설폭사플로르를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.01% 포름산 함유 물과 0.01% 포름산 함유 아세토니트릴의 농도 구배조건에 따라 사용한다.

시간 (분)	0.01% 포름산 함유 아세토니트릴(%)	0.01% 포름산 함유 물(%)
0	0	100
5	30	70
12	70	30
13	0	100
15	0	100

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
8.9, 9.1	277	300

4.1.4.160 시아조파미드(Cyazofamid)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 시아조파미드를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 시아조파미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄 한 후 25 g을 정밀히 달아 삼각 플라스크에 넣고, 아세톤 100 mL를 넣은 후 1시간 동안 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔때기에 옮긴다. 이에 포화식염수 50 mL, 물 50 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 상기 감압농축플라스크에 합한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 5 mL를 가하여 용해한다. (대두 등의 유지작물의 추가 분배를 위하여 건고물에 아세토니트릴 포화 헥산 50 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴 50 mL를 분액깔때기에 가하여 2분간 격렬히 진탕하고 정치한다. 분리된 아세토니트릴층을 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 30 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이한다. 합친 아세토니트릴 여액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축하고 헥산 5 mL를 가하여 용해한다.)

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 350 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 3 g을 차례로 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 유출시켜 버린 후, 다시 에틸아세테이트/헥산 혼합액(30/70, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다.  이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압 농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(35/65, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 280 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

시아조파미드(8.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 시아조파미드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(50 mm × 2.1 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~400 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
1.9	324	325

4.1.4.161 옥시카복신(Oxycarboxin)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 옥시카복신을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 옥시카복신 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 0.5～1 cm 내외로 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣는다. 곡류 및 콩류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치, 습윤화한다. 이에 아세톤 100 mL를 가한 후 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여액과 합한 후 40℃이하의 수욕상에서 감압농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 첨가한 후 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL, 포화식염수 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될때까지 정치하여 디클로로메탄 층을 취하고, 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한 다음 디클로로메탄 층을  무수황산나트륨 에 통과하여 감압농축플라스크에 받는다. 위의 디클로로메탄과 합한다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 디클로로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축한다. 잔류물에 아세토니트릴 포화 헥산 40 mL를 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산 포화 아세토니트릴을 40 mL를 분액깔때기에 가하여 5분간 격렬하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 분리된 아세토니트릴 층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산 포화 아세토니트릴 40 mL를 가하여 위의 과정을 되풀이 한다. 합한 아세토니트릴 여액을 40℃이하의 수욕상에서 감압농축하여 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리 칼럼에 플로리실 10 g과 그 위에 무수황산나트륨 2 g을 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 칼럼에 가하고 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/45/5, v/v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/40/10, v/v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 254 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

옥시카복신(8.5분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/아세토니트릴(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200～600  m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
3.9	267	268

4.1.4.162 이미시아포스(Imicyafos)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 및 서류 등의 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이미시아포스를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 이미시아포스 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60~100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2~3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세톤  30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 1 L 용량의 분액깔때기로 옮긴다. 이에 포화식염수 500 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 수용액층을 별도의 1 L 용량의 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한  후 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄 50 mL 및 아세톤/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/디클로로메탄 혼합액(45/55, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 :  1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 25℃

(5) 검출기 파장 : 227 nm

(6) 주입량 : 10 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이미시아포스(14.9분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이미시아포스를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 3 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 25℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100~500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
3.0	304	305+

4.1.4.163 이소피라잠(Isopyrazam)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이소피라잠을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 이소피라잠 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 감압농축플라스크에 받아 약 10 mL가 될 때까지 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL 및 헥산 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 300 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 10 mL 중 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(90/10, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피 5 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(40/60, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 254 nm

(6) 주입량 : 10 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

이소피라잠(Syn-isomer 14.7분, anti-isomer 14.0분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 이소피라잠을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(100 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : A: 0.1% 포름산 함유 물 B: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 농도 구배조건에 따라 tkdydg나다.

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
2	80	20
10	40	60
15	40	60
16	80	20
30	80	20

(3) 이동상 유량 : 0.18 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 1 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100～400 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

이소피라잠	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
Syn-isomer	18.78	359	360
Anti-isomer	18.43	359	360

4.1.4.164 플루오피람(fluopyram)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루오피람을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루오피람 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2~3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 아세톤 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화식염수 50 mL를 넣고 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 16 mm, 길이 300 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가)추출’로부터 얻은 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(5/95, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 50 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 1분간 유지한 후 30℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 260℃ 이후 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입부：Split mode(30:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루오피람(9.9분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 플루오피람을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5MS(30 m×0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유량：He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도： 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 280℃에서 20분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 200℃

(7) 주입부 : Splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
16.1	397	223, 173, 145

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.69 (현행과 같음)

5.3.70 티암페니콜(Thiamphenicol)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중의 티암페니콜을 축, 수산물의 경우 초산에틸/수산암모늄 혼합용액으로 추출하고, 유의 경우에는 20% TCA로 추출하고 헥산으로 지방을 제거하여 SPE(MCX)카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 티암페니콜 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액 (10/90, v/v)으로 희석하여 사용한다.

마) MCX(Mixed-mode Cation-Exchange, 3 mL, 60 mg) 카트리지 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 축·수산물

균질화 된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 초산에틸/수산암모늄(98/2, v/v) 혼합용액 20 mL을 가하여 5분간 진탕하고 2,300 G에서 5분간 원심 분리하여 상층액을 100 mL 농축플라스크에 옮긴다. 원심분리 후 남은 잔사에 초산에틸/수산암모늄(98/2, v/v) 혼합용액 20 mL를 넣고 다시 2,300 G에서 5분간 원심 분리하여 나온 상층액을 앞의 농축플라스크에 합하여 이 액을 추출액으로 한다. 상층액이 모아진 농축플라스크에 2 mL의 5% 초산을 가하고 이를 40℃에서 1~2 mL이 남을 때까지 감압 농축한다. 감압농축 후 남은 액을 15 mL 원심 분리관에 취하고 농축플라스크를 5% 초산 1 mL로 세척하여 이를 앞의 원심 분리관에 합한다. 원심 분리관에 핵산 5 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 2,300 G에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 제거하는 과정을 2회 반복하여 지방을 제거한다. 이 액을 추출액으로 한다.

(2) 유

균질화 된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 20% TCA 5 mL를 가하여 원심분리한 후 상층액을 50 mL를 원심 분리관에 취하여 위 과정을 한번 반복한다. 상층액이 모아진 농축플라스크에 2 mL의 5% 초산을 가하고 이를 40℃에서 1~2 mL이 남을 때까지 감압 농축한다. 감압농축 후 남은 액을 15 mL 원심 분리관에 취하고 농축플라스크를 5% 초산 1 mL로 세척하여 이를 앞의 원심 분리관에 합한다. 원심 분리관에 핵산 5 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 2,300 G에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 제거하는 과정을 2회 반복하여 지방을 제거한다. 이 액을 추출액으로 한다.

나) 정제

미리 메탄올 2 mL과 물 2 mL로 활성화시킨 양이온교환 카트리지에 흡착시키고 2 mL의 5% 초산으로 카트리지를 세척한 후 메탄올/수산암모늄(90/10, v/v) 혼합용액 3 mL로 용출한다. 용출액을 50℃에서 질소농축하고 30% 아세토니트릴 0.5 mL을 가하여 충분히 녹인 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	90	10
5	90	10
10	30	70
13	90	10
20	90	10

(4) 유속 : 1 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 224 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 티암페니콜(9.7분) 표준품의 크로마토그램

다) 정량한계

축·수산물 : 0.01 mg/kg, 유 : 0.01 mg/L

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 티암페니콜의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 티암페니콜 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 실온

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 물

(나) 이동상 B : 메탄올

min	A(%)	B(%)
0	90	10
1	30	70
3	30	70
3.1	90	10
6	90	10

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화방법 : ESI(negative)

(7) Capillary : 4,000 V

(8) Nebulizer : 40 psi

(9) Gas Temperature : 350℃

(10) Gas flow : 10 L/min

(11) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
티암페니콜	354	185, 290	17, 6

5.3.100 메벤다졸(Mebendazole)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메벤다졸 및 그 대사물질을 아세토니트릴로 추출한 후 MgSO4 및 Primary secondary amine(PSA)를 이용하여 정제하고 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：메벤다졸 및 대사물질(메벤다졸-아민 및 5-하이드록시 메벤다졸) 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액：표준원액을 DMSO에 적당한 농도로 희석하여 사용하며, 냉장고에 보관한다.

마) 내부표준원액 : 5-OH-메벤다졸-d3 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

바) 내부표준용액 : 내부표준원액을 DMSO로 희석하여 1 mg/L가 되게 한다.

사) 맥일바인(MacIlvaine) 완충용액(pH 2) ： 0.6M 구연산(citric acid monohydrate) 및 0.3M 제이인산나트륨(disodium hydrogen phosphate dihydrate) 물에 녹인 후 HCl로 pH를 조절한다.

아) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 조직(간, 신장), 유(乳)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 5-OH-메벤다졸-d3 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 물 2 mL 넣고 1분간 균질화한다. 여기에 1% 초산을 포함한 아세토니트릴 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

(2) 조직(근육), 알(卵)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 5-OH-메벤다졸-d3 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 맥일바인 완충용액 2 mL 넣고 1분간 균질화 한다. 여기에 아세토니트릴 : 메탄올(9 : 1) 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

나) 정제

상징액을 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg 포함한 키트 또는 이와 동등한 것을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30 초간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 유리튜브에 옮긴 후 50℃, 질소가스 감압농축으로 건조한 후 남은 잔사에 500 μL DMSO로 용해한 후 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A：20 mM 암모늄포메이트 수용액

(나) 이동상 B：메탄올

min	A(%)	B(%)
0	70	30
0.5	70	30
1	20	80
4	20	80
4.1	70	30
8	70	30

(4) 유속 : 0.25 mL/분

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary : 4,000 V

(3) Nebulizer : 45 psi

(4) Gas Temperature : 350℃

(5) Gas flow : 10 L/min

(6) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
메벤다졸	296	264, 105	20, 35
5-OH-메벤다졸	298	160, 266	40, 20
메벤다졸-아민	238	77, 105	40, 30
내부표준물질(5-OH-메벤다졸-d3)	301	160, 266	40, 25

다) 표준품 크로마토그램

메벤다졸

5-OH-메벤다졸

메벤다졸-아민

5-OH-메벤다졸-d3

그림 1. 메벤다졸(4.7분), 5-OH-메벤다졸(4.3분), 메벤다졸 아민(4.2분),  5-OH-메벤다졸-d3(4.9분) 표준품의 크로마토그램

라) 정량한계

축산물 : 0.005 mg/kg, 유 : 0.005 mg/L

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여, 내부표준물질 5-OH-메벤다졸-d3의 m/z 160에 대한 메벤다졸 m/z 264, 5-OH-메벤다졸 m/z 160, 메벤다졸-아민 m/z 77의 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

5.3.101 니트록시닐(Nitroxynil), 클로술론(Clorsulon)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 니트록시닐 및 클로술론을 아세토니트릴로 추출한 후 MgSO4 및 Primary secondary amine(PSA)를 이용하여 정제하고 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：니트록시닐, 클로술론 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 하고 이를 영하 20℃에 보관한다. 사용 시 표준품을 실온에 두어 용액의 온도가 실온과 동일해지면 사용한다.

라) 표준용액：표준원액을 DMSO에 적당한 농도로 희석하여 사용하며, 냉장고에 보관한다.

마) 내부표준원액 : 살리실아마이드 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

바) 내부표준용액 : 내부표준원액을 DMSO로 희석하여 1 mg/L가 되게 한다.

사) 맥일바인(MacIlvaine) 완충용액(pH 2) ： 0.6M 구연산(citric acid monohydrate) 및 0.3M 제이인산나트륨(disodium hydrogen phosphate dihydrate) 물에 녹인 후 HCl로 pH를 조절한다.

아) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 조직(간, 신장)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 살리실아마이드 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 물 2 mL 넣고 1분간 균질화 한다. 여기에 1% 초산을 포함한 아세토니트릴 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

(2) 조직(근육), 알(卵), 유(乳)

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 살리실아마이드 표준용액을 첨가한다. 15초 동안 혼합한 후 염화나트륨 1 g을 넣고 균질화한 후 맥일바인 완충용액 2 mL 넣고 1분간 균질화 한다. 여기에 아세토니트릴 : 메탄올(9 : 1) 10 mL을 넣고 15분간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취한다.

나) 정제

상징액을 MgSO4 900 mg, PSA 150 mg 포함한 키트 또는 이와 동등한 것을 포함한 15 mL 원심분리관에 옮긴 후 30 초간 강하게 균질화한 후 4,500 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 유리튜브에 옮긴 후 50℃, 질소가스 감압농축으로 건조한 후 남은 잔사에 500 μL DMSO로 용해한 후 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM 암모늄포메이트 수용액

(나) 이동상 B：메탄올

min	A(%)	B(%)
0	70	30
0.5	70	30
1	20	80
4	20	80
4.1	70	30
8	70	30

(4) 유속 : 0.25 mL/분

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(negative)

(2) Capillary : 4,000 V

(3) Nebulizer : 45 psi

(4) Gas Temperature : 350℃

(5) Gas flow : 10 L/min

(6) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)*	Collision energy (eV)
니트록시닐	289	127, 162	25, 10
클로술론	378, 380	342, 344	3, 6
내부표준물질(살리실아마이드)	212	92, 64	25, 40

다) 표준품 크로마토그램

니트록시닐

살리실아마이드

클로술론

그림 1. 니트록시닐(4.2분), 클로술론(3.9분), 살리실아마이드(4.8분) 표준품의 크로마토그램

라)	정량한계(니트록시닐, 클로술론)

축산물 : 0.01 mg/kg, 유 : 0.01 mg/L

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간을 비교하여, 내부표준물질 살리실아마이드의 m/z 92에 대한 니트록시닐 m/z 127, 클로술론 m/z 342의 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

5.3.102 톨페남산(Tolfenamic acid)

1) 시험법 적용범위

축산물(알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 톨페남산을 아세토니트릴로 추출하고, 헥산으로 지방 및 불순물을 제거한 후 pH 조절과 에틸아세테이트로 액-액 추출하여 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 톨페남산 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합 희석한다.

마) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g에 아세토니트릴 10 mL씩 2회 가한 후 20분간 진탕한다.  4,000 rpm에서 10분간 원심분리한 다음 상징액을 취해 헥산 20 mL를 가하고 흔들어 방치한다. 하층을 모아 50℃ 질소 기류 하에서 건고시킨 후 잔류물을 에테르 4 mL로 재용해하여, 10분간 진탕하고, 2 mM NaOH 수용액 10 mL(4 mL, 4 mL, 2 mL씩 세 번), NaCl 수포화 용액을 2 mM NaOH 수용액 1 mL당 75 μL를 가하여 액-액 추출로 20분간 흔들어준 후 4,000 rpm에서 10분간 원심분리 한다. 상층액인 에테르를 취하지 아니하고, 아래 수층을 취하고 새 튜브에 담은 후 600 μL의 1/50로 희석한 아세트산 용액을 가하여 약산성화 시킨 후 40 mL의 에틸아세테이트(20 mL, 10 mL, 10 mL씩 세 번)를 가하고 액-액 추출로  20분간 흔들어준 후 4,000 rpm에서 5분간 원심분리 한다. 상층액을 취하여 50℃ 질소 기류 하에서 건고시킨 후 다시 에틸아세테이트 5 mL(2 mL, 2 mL, 1 mL씩 세 번)에 용해하여 50℃ 질소 기류 하에서 건고시킨다. 잔류물을 메탄올 500 μL을 가하여 10분간 진탕하고, 4,000 rpm에서 2분간 원심분리한 후 상징액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 : 0.1% 초산/아세토니트릴(50/50, v/v)

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

(6) UV 검출기 파장 : 218 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 톨페남산(12.6분) 크로마토그램

다) 정량한계

축산물 : 0.01 mg/kg, 유 : 0.01 mg/L

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 톨페남산의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 톨페남산 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.0 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 A : 0.2% 초산암모늄

(4) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	80	20
1	80	20
12	0	100
13	0	100
14	80	20
17	80	20

(5) 유속 : 0.3 mL/min

(6) 이온화 방법 : ESI(negative)

(7) Capillary temperature : 300℃

(8) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
톨페남산	260	216, 260	16

5.3.103 툴라스로마이신(Tulathromycin)

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중의 툴라스로마이신을 아세토니트릴로 추출하고, 개미산으로 재용해하여 SPE(HLB)카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 툴라스로마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 아지스로마이신(Azithromycin) 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

사) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance, 3 mL) 카트리지 또는 이와 동등한 것

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 10 g에 내부표준물질(아지스로마이신, 5 mg/L,) 1 mL를 가하고 아세토니트릴 10 mL를 가하여 5분간 균질화 한다. 4℃, 3,500 rpm에서 20분간 원심분리하고 상징액을 질소퍼지용 튜브에 모은 뒤, 다시 시료에 아세토니트릴 10 mL를 넣고 30초간 흔들어 준 다음 5분간 균질화 한다. 4℃, 3,500 rpm에서 20분간 원심분리하고 상징액을 이전의 상징액과 합한 뒤, 50℃ 질소 기류 하에서 건고한다. 이를 2% 개미산 수용액 3 mL로 재용해하고 헥산 500 μL를 가하여 1분간 균질화한 뒤, 4℃, 13,000 rpm에서 20분간 원심분리 한 후 헥산 층을 제거하여 이 액을 추출액으로 한다.

나) 정제

미리 메탄올 3 mL과 물 3 mL로 활성화 시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고, 2% 개미산 수용액 3 mL로 세척한 후 2% 수산화암모늄을 함유한 메탄올 3 mL로 용출시킨다. 용출액은 50℃ 질소 기류 하에서 건고한 후 잔류물을 2 mL 증류수에 녹인 뒤 1분간 균질화 한다. 이 액을 4℃, 13,000 rpm에서 20분간 원심분리 한 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	95	5
1.5	95	5
2	10	90
2.5	10	90
4	95	5
15	95	5

(4) 유속 : 0.25 mL/min

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
툴라스로마이신	577	116, 158	51, 49
내부표준물질(아지스로마이신)	749	83, 158	75, 61

다) 표준품 크로마토그램

툴라스로마이신

아지스로마이신

그림 1. 툴라스로마이신(6.5분), 아지스로마이신(6.5분) 표준품의  크로마토그램

라) 정량한계 : 0.05 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여, 내부표준물질인 아지스로마이신의 피크면적비에 대한 툴라스로마이신의 피크면적비의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 툴라스로마이신의 함량을 구한다.

5.3.104 시미아졸(Cymiazole)

1) 시험법 적용범위

벌꿀에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 시미아졸을 1% 초산으로 추출하고, SPE(MCX)카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 시미아졸 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 혼합 희석한다.

마) MCX(Mixed-mode Cation- Exchange) 카트리지 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g에 1% 초산 15 mL를 가하고 10분간 진탕한다. 미리 메탄올 3 mL과 1% 초산 3 mL로 활성화 시킨 MCX 카트리지에 추출액을 흡착시키고, 메탄올 3 mL와 1N HCl 3 mL로 세척한 후 5% 수산화암모늄을 포함한 메탄올 3 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 1 mL에 녹인후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상 : 0.1% 초산/아세토니트릴(81/19, v/v)

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 264 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 시미아졸(8.3분) 표준품의 크로마토그램

다) 정량한계 : 0.02 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 시미아졸의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 시미아졸 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.0 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상 A : 0.2% 초산암모늄

(4) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
0	80	20
1	80	20
8	10	90
9	10	90
10	80	20
15	80	20

(5) 유속 : 0.3 mL/min

(6) 이온화 방법 : ESI(positive)

(7) Capillary temperature : 300℃

(8) Collision energy

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (eV)
시미아졸	219	105, 144, 171	30

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이민옥타딘(Iminoctadine)

(생  략)

<신  설>

(2) ∼ (25) (생  략)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(생  략)

<신  설>

(27) ∼ (54) (생  략)

(55) 부프로페진(Buprofezin)

(생  략)

<신  설>

(56) ∼ (60) (생  략)

(61) 비펜스린(Bifenthrin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(62) ∼ (71) (생  략)

(72) 아세토클로르(Acetochlor)

(생  략)

수수	0.02

<신  설>

(73) ∼ (96) (생  략)

(97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen)

(생  략)

<신  설>

(98) ∼ (100) (생  략)

(101) 이미다크로프리드(Imidacloprid)

(생  략)

가지	0.2

<신  설>

(102) ∼ (111) (생  략)

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(생  략)

파	0.5

(113) ∼ (132) (생  략)

(133) 터부코나졸(Tebuconazole)

(생  략)

<신  설>

(134) ∼ (148) (생  략)

(149) 트리프루미졸(Triflumizole)

(생  략)

<신  설>

(150) ∼ (185) (생  략)

(186) 프로클로라즈(Prochloraz)

(생  략)

<신  설>

(187) ∼ (205) (생  략)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(207) ∼ (213) (생  략)

(214) 피리다벤(Pyridaben)

(생  략)

<신  설>

(215) ∼ (220) (생  략)

(221) 디치아논(Dithianon)

(생  략)

<신  설>

(222) (생  략)

(223) 벤설탑(Bensultap)

(생  략)

<신  설>

(224) ∼ (234) (생  략)

(235) 포스치아제이트(Fosthiazate)

(생  략)

<신  설>

토마토	0.02

(236) ∼ (238) (생  략)

(239) 후루아지남(Fluazinam)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(240) ∼ (245) (생  략)

(246) 스피노사드(Spinosad)

(생  략)

<신  설>

(247) ∼ (284) (생  략)

(285) 아크리나쓰린(Acrinathrin)

(생  략)

<신  설>

(286) ∼ (300) (생  략)

(301) 펜헥사미드(Fenhexamid)

(생  략)

<신  설>

(302) ∼ (308) (생  략)

(309) 플루토라닐(Flutolanil)

(생  략)

고추	0.05

피망	0.05

(310) ∼ (322) (생  략)

(323) 보스칼리드(Boscalid)

(생  략)

<신  설>

(324) ∼ (325) (생  략)

(326) 아세퀴노실(Acequinocyl)

(생  략)

<신  설>

(327) ∼ (331) (생  략)

(332) 크로치아니딘(Clothianidin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(333) ∼ (336) (생  략)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(생  략)

<신  설>

(338) (생  략)

(339) 티오사이크람(Thiocyclam)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(340) ∼ (348) (생  략)

(349) 노발루론(Novaluron)

(생  략)

<신  설>

(350) ∼ (354) (생  략)

(355) 스피로디크로펜(Spirodiclofen)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(356) ∼ (360) (생  략)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(생  략)

<신  설>

(362) ∼ (372) (생  략)

(373) 스피로메시펜(Spiromesifen)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(374) ∼ (385) (생  략)

(386) 플로니카미드(Flonicamid)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(387) ∼ (389) (생  략)

(390) 시메코나졸(Simeconazole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(391) ∼ (393) (생  략)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(생  략)

<신  설>

(395) ∼ (402) (생  략)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(생  략)

<신  설>

(404) (생  략)

(405) 사이에노피라펜(Cyenopyrafen)

(생  략)

<신  설>

(406) ∼ (407) (생  략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(생  략)

파	1.0

(410) ∼ (414) (생  략)

(415) 크로마페노자이드(Chromafenozide)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(생  략)

<신  설>

(418) ∼ (420) (생  략)

(421) 레피멕틴(Lepimectin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(424) ∼ (429) (생  략)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

<신  설>

(431) (생  략)

<신  설>

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이민옥타딘(Iminoctadine)

(현행과 같음)

파	1.0

(2) ∼ (25) (현행과 같음)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(현행과 같음)

구기자(건조)	7.0

(27) ∼ (54) (현행과 같음)

(55) 부프로페진(Buprofezin)

(현행과 같음)

멜론	0.7

(56) ∼ (60) (현행과 같음)

(61) 비펜스린(Bifenthrin)

(현행과 같음)

가지	0.3

고구마	0.05

고구마줄기	0.05

(62) ∼ (71) (현행과 같음)

(72) 아세토클로르(Acetochlor)

(현행과 같음)

수수	0.05

※ 밀, 수수, 옥수수는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임

(73) ∼ (96) (현행과 같음)

(97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen)

(현행과 같음)

※ 견과류, 대두, 면실, 바나나, 복숭아, 살구, 아보카도, 양배추, 옥수수, 자두, 체리, 커피, 키위는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임

(98) ∼ (100) (현행과 같음)

(101) 이미다크로프리드(Imidacloprid)

(현행과 같음)

가지	1.0

멜론	0.2

(102) ∼ (111) (현행과 같음)

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(현행과 같음)

파	2.0

(113) ∼ (132) (현행과 같음)

(133) 터부코나졸(Tebuconazole)

(현행과 같음)

감	2.0

(134) ∼ (148) (현행과 같음)

(149) 트리프루미졸(Triflumizole)

(현행과 같음)

자두	0.2

(150) ∼ (185) (현행과 같음)

(186) 프로클로라즈(Prochloraz)

(현행과 같음)

가지	2.0

(187) ∼ (205) (현행과 같음)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(현행과 같음)

멜론	0.5

체리	1.0

살구	1.0

(207) ∼ (213) (현행과 같음)

(214) 피리다벤(Pyridaben)

(현행과 같음)

멜론	1.0

(215) ∼ (220) (현행과 같음)

(221) 디치아논(Dithianon)

(현행과 같음)

석류	2.0

(222) (현행과 같음)

(223) 벤설탑(Bensultap)

(현행과 같음)

마	0.05

(224) ∼ (234) (현행과 같음)

(235) 포스치아제이트(Fosthiazate)

(현행과 같음)

복분자	0.05

토마토	0.05

(236) ∼ (238) (현행과 같음)

(239) 후루아지남(Fluazinam)

(현행과 같음)

구기자(건조)	15

오이	0.05

포도	0.05

(240) ∼ (245) (현행과 같음)

(246) 스피노사드(Spinosad)

(현행과 같음)

쌀	0.05

(247) ∼ (284) (현행과 같음)

(285) 아크리나쓰린(Acrinathrin)

(현행과 같음)

복숭아	0.2

(286) ∼ (300) (현행과 같음)

(301) 펜헥사미드(Fenhexamid)

(현행과 같음)

가지	2.0

(302) ∼ (308) (현행과 같음)

(309) 플루토라닐(Flutolanil)

(현행과 같음)

고추	1.0

피망	1.0

(310) ∼ (322) (현행과 같음)

(323) 보스칼리드(Boscalid)

(현행과 같음)

양파	0.05

(324) ∼ (325) (현행과 같음)

(326) 아세퀴노실(Acequinocyl)

(현행과 같음)

살구	2.0

(327) ∼ (331) (현행과 같음)

(332) 크로치아니딘(Clothianidin)

(현행과 같음)

멜론	0.05

마	0.05

(333) ∼ (336) (현행과 같음)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(현행과 같음)

멜론	0.3

(338) (현행과 같음)

(339) 티오사이크람(Thiocyclam)

(현행과 같음)

감귤	0.5

배	1.0

(340) ∼ (348) (현행과 같음)

(349) 노발루론(Novaluron)

(현행과 같음)

멜론	1.0

(350) ∼ (354) (현행과 같음)

(355) 스피로디크로펜(Spirodiclofen)

(현행과 같음)

살구	5.0

체리	2.0

(356) ∼ (360) (현행과 같음)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(현행과 같음)

갓	0.05

(362) ∼ (372) (현행과 같음)

(373) 스피로메시펜(Spiromesifen)

(현행과 같음)

살구	1.0

체리	1.0

(374) ∼ (385) (현행과 같음)

(386) 플로니카미드(Flonicamid)

(현행과 같음)

매실	2.0

멜론	1.0

대두	0.05

풋콩	0.5

(387) ∼ (389) (현행과 같음)

(390) 시메코나졸(Simeconazole)

(현행과 같음)

복분자	0.3

머루	3.0

(391) ∼ (393) (현행과 같음)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(현행과 같음)

멜론	1.0

(395) ∼ (402) (현행과 같음)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(현행과 같음)

수박	0.5

(404) (현행과 같음)

(405) 사이에노피라펜(Cyenopyrafen)

(현행과 같음)

가지	2.0

(406) ∼ (407) (현행과 같음)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

무	0.05

무잎	0.5

부추	0.5

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(현행과 같음)

파	3.0

(410) ∼ (414) (현행과 같음)

(415) 크로마페노자이드(Chromafenozide)

(현행과 같음)

고추	2.0

엇갈이배추	5.0

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(현행과 같음)

복분자	1.0

취나물	7.0

옥수수	0.05

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(현행과 같음)

부추	3.0

(418) ∼ (420) (현행과 같음)

(421) 레피멕틴(Lepimectin)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.05

상추	1.0

시금치	0.05

파	0.05

호박	0.05

호박잎	2.0

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(현행과 같음)

포도	2.0

참외	0.5

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(현행과 같음)

포도	5.0

감귤	0.5

(424) ∼ (429) (현행과 같음)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

감귤	1.0

(431) (현행과 같음)

(432) 사플루페나실(Saflufenacil)

대두	0.05

레몬	0.03

망고	0.03

면실	0.2

밀	0.03

바나나	0.03

배	0.03

보리	0.03

복숭아	0.03

사과	0.03

사탕수수	0.03

쌀	0.03

수수	0.03

아몬드	0.03

오렌지	0.03

옥수수	0.03

유채씨	0.5

자두	0.03

자몽	0.03

체리	0.03

커피	0.03

포도	0.03

피칸	0.03

해바라기씨	0.7

※ 대두, 레몬, 망고, 면실, 밀, 바나나, 배, 보리, 복숭아, 사과, 사탕수수, 쌀, 수수, 아몬드, 오렌지, 옥수수, 유채씨, 자두, 자몽, 체리, 커피, 포도, 피칸, 해바라기씨는 수입식품에 대한 농약 잔류허용기준임