식품의약품안전청 고시 제2012-100호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2012. 9. 5.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 고시 제2012-100호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

농약 및 동물용의약품의 잔류허용기준 및 시험법을 신설 및 개정하여 식품 안전관리를 강화하고, 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.

2. 주요 내용

가. 총칙 중 농약 및 동물용의약품에 대한 불검출 판단 기준 신설  [제 1, 1, 32]

1) 식품 중 농약 및 동물용의약품에 불검출 판단시 정확한 기준이 없어 혼돈이 야기되므로 개선이 필요

2) 식품공전 총칙에 불검출 처리에 대한 명확화

3) 시험검사 신뢰성 확보

나. 잔류농약 분석법 신설 및 개정

1) 새로운 농약이 사용․ 등록됨에 따른 시험법 마련 및 비효율적인 시험법 개선이 필요함

2) 다종농약다성분 분석법 등 28개 시험법 신설 및 개정

- 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법 분석법 개정 [안 제 10, 4.1.2.2]

- 디코폴(Dicofol), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate) 및 테트라디폰(Tetradifon) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.3.1]

- 이소프로카브(Isoprocarb, MIPC) 및 카바릴(Carbaryl, NAC) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.3.3]

- 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.3.12]

- 카보후란(Carbofuran 및 3-Hydroxycarbofuran), 벤푸라카브(Benfuracarb), 카보설판(Carbosulfan) 및 푸라치오카브(Furathiocarb) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.30]

- 피로퀼론(Pyroquilon) 및 트리싸이클라졸(Tricyclazole) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.31]

- 클로로타로닐(Chlorothalonil), 캡탄(Captan), 폴펫(Folpet) 및 캡타폴(Captafol) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.32]

- 알드린(Aldrin), BHC(α, β, γ-BHC and δ-BHC), DDT(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE and p,p'-DDD), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin 및 δ-Keto-endrin), 엔도설판(α-Endosulfan, β    -Endosulfan, Endosulfan sulfate), 클로르단(cis-Chlordane 및 trans-Chlordane) 및 헵타크로(Heptachlor 및 Heptachlor epoxide) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.33]

- 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide), 테부페노자이드(Tebufenozide) 및 크로마페노자이드(Chromafenozide) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.34]

- 훼녹시카브(Fenoxycarb), 피리프록시펜(Pyriproxyfen) 및 메토프렌(Methoprene) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.35]

- 페노트린(Phenothrin) 및 실라프루오펜(Silafluofen) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.36]

- 아크리나쓰린(Acrinathrin), 비펜스린(Bifenthrin), 싸이클로프로스린(Cycloprothrin), 테플루스린(Tefluthrin) 및 할펜프록스(Halfenprox) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.37]

- 비페닐(Biphenyl), 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl), 디클로사이메트(Diclocymet), 이소자디펜에틸(Isoxadifen-ethyl), 이소자플루톨(Isoxaflutole), 모노리누론(Monolinuron), 메토미노스트로빈(Metominostrobin) 및 노나클로르(Nonachlor) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.38]

- 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 사이클아니리드(Cyclanilide), 디클로슐람(Diclosulam), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac), 이옥시닐(Ioxynil), 이소카바미드(Isocarbamid), 레나실(Lenacil), 메펜피르(Mefenpyr), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid) 및 트랄콕시딤(Tralkoxydim) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.39]

- 클로르프로팜(Chlorpropham) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.9]

- 도딘(Dodine) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.43]

- 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.59]

- 아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.75]

- 펜헥사미드(Fenhexamid) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.148]

- 프로클로라즈(Prochloraz) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.149]

- 싸이프로디닐(Cyprodinil) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.150]

- 나프로파마이드(Napropamide) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.151]

- 피콕시스트로빈(Picoxystrobin) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.152]

- 플루트리아폴(Flutriafol) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.153]

- 아메톡트라딘(Ametoctradin) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.154]

- 펜티오피라드(Penthiopyrad) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.155]

- 피리미설판(Pyrimisulfan) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.156]

- 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.157]

3) 식품 중 농약시험법의 신설 및 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급

다. 잔류동물용의약품 시험법 개정 및 신설

1) 새로운 동물용의약품 잔류허용기준 신설에 따른 시험법 마련 및 비효율적인 시험법 개선이 필요함

2) 노보비오신 등 13개 시험법 신설 및 개정

- 노보비오신(Novobiocin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.5]

- 데코퀴네이트(Decoquinate) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.8]

- 암프롤리움(Amprolium), 디싸이클라닐(Dicyclanil) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.13]

- 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.20]

- 스펙티노마이신(Spectinomycin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.29]

- 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 나프실린(Nafcillin), 옥사실린(Oxacillin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.32]

- 폭심(Phoxim) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.33]

- 발네물린(Valnemulin) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.40]

- 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol) 분석법 개정[안 제 10, 5.3.63]

- 설파구아니딘(Sulfaguanidine) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.96]

- 로베니딘(Robenidine) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.97]

- 톨트라주릴(Toltrazuril) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.98]

- 디아베리딘(Diaveridine) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.99]

3) 식품 중 동물용의약품 시험법의 신설 및 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급

라. 농산물의 농약잔류허용기준 개정[[별표 4] 중 (21), (29), (32), (35), (38), (63), (66), (73), (85), (112), (131), (132), (133), (151), (163), (164), (168), (170), (183), (188), (190), (196), (200), (206), (207), (209), (212), (213), (218), (224), (227), (239), (242), (249), (254), (255), (291), (302), (324), (325), (333), (335), (338), (356), (357), (358), (370), (371), (380), (394), (395), (403), (408), (409), (410), (417), (419), [별표 5] 중 (11)]

1) 농약 등록, 사용방법 등의 변화에 따른 잔류허용기준 합리화 필요

2) 마늘(풋마늘포함)에 대한 헥사코나졸, 오이에 대한 클로르훼나피르, 엇갈이배추 및 딸기에 대한 테프루벤주론, 감귤에 대한 비페나제이트 기준 합리화

3) 현행 배추기준을 배추와 엇갈이 배추로 분리에 따른 배추 기준 개정, 에토펜프록스의 호밀, 터부코나졸의 감 기준삭제, 아족시스트로빈의 수삼, 인삼농축액, 홍삼농축액의 기준 국제적 조화

4) 농약에 대한 기준 합리화로 국민의 불안감 해소

마. 농산물의 농약잔류허용기준 신설[[별표 4] 중 (1), (3), (4), (8), (9), (11), (21), (26), (29), (30), (31), (32), (35), (38), (50), (63), (66), (67), (71), (73), (78), (85), (97), (111), (112), (131), (132), (148), (149), (151), (152), (161), (163), (164), (170), (178), (183), (188), (190), (196), (206), (207), (214), (218), (221), (224), (225), (227), (229), (233), (237), (242), (243), (246), (248), (290), (297), (302), (304), (308), (321), (324), (335), (337), (338), (349), (356), (357), (358), (361), (370), (371), (380), (388), (391), (393), (394), (395), (403), (408), (409), (410), (416), (417), (419), (423), (427)]

1) 「농약관리법」에 사용·등록되어 있는 농약에 신규로 추가되는 농산물의 잔류허용기준을 마련하여 관리 적정화 필요

2) 농산물 중 이민옥타딘 등 87종에 대한 기준 신설

3) 농약잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

바. 신규등록된 농약의 잔류허용기준 신설[[별표 4] 중 (428), (429), (430), (431)]

1) 「농약관리법」에 신규로 등록되는 농약들에 대한 잔류허용기준을 마련 필요

2) 플루오피람, 메타조설프론, 설폭사플로르, 이소피라잠에 대한 잔류허용기준 신설

3) 농약잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

사. 동물용의약품 잔류허용기준 신설[별표 7]

1) 「약사법」에 사용·등록되어 있는 동물용의약품의 잔류허용기준을 마련하여 관리 적정화 필요

2) 메벤다졸(119), 니트록시닐(120), 클로술론(121), 톨페남산(122), 툴라스로마이신(123) 및 시미아졸(124) 동물용의약품 기준 신설

3) 동물용의약품 잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조 제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

가) 2011.12.29 ～ 2012.1.17 (공고 제2011-249호)

․잔류농약 분석법 개정 및 신설

․잔류동물용의약품 시험법 개정 및 신설

․농산물의 농약잔류허용기준 개정

․농산물의 농약잔류허용기준 신설

․신규등록된 농약의 잔류허용기준 신설

나) 2012.3.30 ～ 2012.5.30 (공고 제2012-59호)

․총칙 중 농약 및 동물용의약품에 대한 불검출 판단기준 신설

․잔류농약 분석법 신설 및 개정

․잔류동물용의약품 시험법 개정

․농산물의 농약잔류허용기준 개정

․농산물의 농약잔류허용기준 신설

․동물용의약품 잔류허용기준 신설

2) 규제심사

가) 규제심사 통과 (비중요규제) : 2012. 7. 27.(행정예고 제2011-249호)

나) 규제심사 완료 : 2012. 8. 13. (행정예고 제2012-59호)

식품의약품안전청 고시 제2012-100호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2012-48호, 2012. 7. 30)을 다음과 같이 개정고시 합니다.

2012년 9월 5일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제 1, 1, 32)를 다음과 같이 신설한다.

32) 식품공전에 정하고 있는 식품 중 잔류 농약 및 동물용의약품 시험법에서 정량한계 미만은 불검출로 처리한다.

제 10, 4, 4.1.2.2를 다음과 같이 한다.

4.1.2.2 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 측정농약은 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 액체크로마토그래프 측정농약은 아미노-프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：전자포획검출기(ECD), 질소․인 검출기(NPD) 또는 불꽃광도검출기(FPD), 질량분석기(MS)

나) 액체크로마토그래프：Post-column derivatization system, 형광검출기(FLD), 자외부흡광검출기(UVD), 질량분석기(MS)

4) 시약

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 일회용 카트리지：플로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

다) 표준원액：각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

라) 표준용액：표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

마) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 아세토니트릴 추출법

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 50 g, 차는 10 g)를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL 분액깔때기에 옮기고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

(2) 아세톤 추출법

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 50 g, 차는 10 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 디클로로메탄을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 디클로로메탄층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

※ 추출은 상기 (1) 또는 (2) 중 선택하여 사용함.

주1) 당근과 같이 크고 단단한 것들은 먼저 칼로 대강 썬 후 분쇄함

주2) 용매추출액을 저온에서 정치하면 층분리가 빨라질 수 있음.

주3) 곡류, 콩류, 견과종실류 등 지방성 검체의 경우 ★까지 시험하고 잔류물에 미리 아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올) 층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔사를 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 측정 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 측정 농약)에 완전히 녹인다.

나) 정제

(1) 기체크로마토그래프 측정 농약

미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

주4) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

주5) 기체크로마토그래프 측정 농약을 전처리할 때 항상 감압농축하기 전에 2% 디에틸렌글리콜(Diethylene glycol) 함유 아세톤 0.2 mL를 첨가한다.

(2) 액체크로마토그래프 측정 농약

미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 유출하여 동일 시험관에 합친다. 유출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) GC-ECD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 캐리어가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 칼럼오븐온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜  20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：split mode(20 : 1)

(마) 검출기온도：280℃

(2) GC-NPD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 검출기온도：280℃

(3) GC-FPD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 검출기온도：230℃

(4) GC-MS

(가) 칼럼：DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상가스 및 유량：He, 0.8 mL/min

(다) 오븐 온도：70℃에서 시험용액을 주입하고 3분간 유지한 후 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 7분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 인터페이스 온도：280℃

(바) Solvent delay time：4 min

나) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함)

(가) 칼럼：C18(3.9 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 검출기：Excitation 340 nm, Emission 455 nm

(다) 이동상：물 및 메탄올

- 메탄올：물(3：7)의 혼합액에서 메탄올：물(7：3)의 혼합액으로 23분간 농도균배한 후 5분 이상 흘려보낸다.

(라) 이동상 유량：0.8 mL/min

(마) Post Reaction Pump 유량：0.5 mL/min(NaOH 0.25 mL/min, OPA 0.25 mL/min) 또는 기타 최적조건

(2) HPLC-UVD

(가) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 등등한 것

(나) 검출기：자외부흡광검출기(254 nm)

(다) 이동상：물 및 아세토니트릴

- 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에서 (80/20, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

- 메탄올/물(35/65, v/v)에서 (90/10, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

※ 이동상의 조건은 상기 두 가지 중 선택하여 사용함

(라) 이동상 유량：1.0 mL/min

(3) LC-MS

(가) 칼럼：C18(100 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상：A(물 + 0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄), B(99% 아세토니트릴 +  0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄)

- A/B(90/10, v/v)에서 (10/90, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(다) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(라) 칼럼 온도 : 40℃

(마) 주입량 : 2 μL

(바) 이온화 : ESI positive 또는 negative-ion mode

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

주6) GC-MS 및 LC-MS 상의 머무름시간 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

주7) 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(201종)

1	Acrinathrin(ECD)	2	Aldrin(ECD)	3	Allidochlor(MS)
4	Ametryn(NPD)	5	Anilofos(NPD)	6	Asulam(ECD)
7	Atraine(NPD)	8	Azaconazole(NPD)	9	Azinphos-ethyl(FPD)
10	Azinphos-methyl(ECD, NPD)*	11	BHC(ECD)	12	Bifenthrin(ECD)
13	Binapacryl(ECD)	14	Bromacil(ECD)	15	Bromobutide(NPD)
16	Bromophos-methyl(FPD)	17	Bromopropylate(ECD)	18	Bromoxynil(ECD)
19	Bupirimate(NPD)	20	Butafenacil(ECD)	21	Cadusafos(NPD, FPD)
22	Captafol(ECD)	23	Captan(ECD)	24	Carbophenothion(ECD, NPD)
25	Chinomethionat(ECD)	26	Chlordane(ECD)	27	Chlorfenapyr(NPD, FPD)
28	Chloridazon(ECD)	29	Chlorobenzilate(ECD)	30	Chlorothalonil(ECD)
31	Chlorpyrifos(ECD, NPD)	32	Chlorpyrifos-methyl(ECD, NPD)	33	Chlorthal-dimethyl(ECD)
34	Cinmethylin(MS)	35	Clomeprop(ECD)	36	Cyanazine(ECD)
37	Cyanophos(NPD)	38	Cycloate(MS)	39	Cycloprothrin(ECD, NPD)
40	Cyflufenamid(ECD)	41	Cyfluthrin(ECD)*	42	Cyhalothrin(ECD)*
43	Cypermethrin(ECD)*	44	Cyproconazole(NPD)	45	Cyprodinil(NPD)
46	DDT(ECD)	47	Deltamethrin(ECD)*	48	Diallate(MS)
49	Diazinon(ECD, NPD)	50	Dichlofluanid(ECD, NPD)	51	Dichlorvos(NPD, FPD)
52	Dicloran(ECD)	53	Dicofol(ECD)	54	Dicrotophos(FPD)
55	Dieldrin(ECD)	56	Diethofencarb(NPD)	57	Diflufenican(ECD)
58	Dimepiperate(ECD, NPD, FPD)	59	Dimethachlor(ECD)	60	Dimethenamid(NPD)
61	Dimethoate(ECD, NPD)	62	Dimethylvinphos(NPD, FPD)	63	Diniconazole(ECD)
64	Diphenamid(NPD)	65	Diphenylamine(NPD)	66	Dithiopyr(ECD)
67	Edifenphos(ECD, NPD)	68	Endosulfan(ECD)	69	Endrin(ECD)
70	EPN(ECD, NPD)	71	Esprocarb(ECD, NPD)	72	Ethion(ECD, NPD)
73	Ethoprophos(ECD, NPD)	74	Etoxazole(NPD)	75	Etrimfos(ECD, NPD)
76	Fenamidone(ECD, NPD)	77	Fenarimol(ECD, NPD)*	78	Fenazaquin(NPD, FPD)*
79	Fenbuconazole(ECD)*	80	Fenitrothion(ECD, NPD)	81	Fenobucarb(NPD)
82	Fenothiocarb(NPD)*	83	Fenoxanil(ECD, NPD)	84	Fenoxycarb(NPD, UVD)
85	Fenpropathrin(ECD, NPD)*	86	Fenthion(ECD, NPD)*	87	Fenvalerate(ECD)*
88	Fipronil(NPD, FPD)	89	Flonicamid(ECD)	90	Fluazinam(ECD)
91	Fludioxonil(NPD)	92	Flumiclorac-pentyl(ECD)	93	Flupyrazofos(NPD, FPD)
94	Flusilazole(NPD)	95	Flusulfamide(ECD)	96	Fluthiacet-methyl(ECD)
97	Flutolanil(ECD)	98	Fluvalinate(ECD)*	99	Folpet(ECD)
100	Fonofos(NPD)	101	Fosthiazate(NPD, FPD)	102	Fthalide(ECD)
103	Furathiocarb(NPD)	104	Heptachlor epoxide(ECD)	105	Heptachlor(ECD)
106	Hexachlorobenzene(ECD)	107	Imazalil(ECD)	108	Indanofan(ECD)
109	Indoxacarb(ECD)	110	Iprobenfos(NPD, FPD)	111	Iprodione(ECD)
112	Iprovalicarb(ECD)	113	Isazofos(NPD)	114	Isazophos(FPD)
115	Isofenphos(NPD)	116	Isofenphos-methyl(NPD)	117	Isoprothiolane(NPD, FPD)
118	Isoxathion(NPD)	119	Kresoxim-methyl(NPD)	120	Lactofen(ECD)
121	Malathion(ECD, NPD)	122	Mecarbam(ECD, NPD)	123	Mefenacet(ECD)
124	Mefenpyr-diethyl(ECD)	125	Mepronil(NPD)	126	Metconazole(NPD)
127	Methidathion(ECD)	128	Methoxychlor(ECD)	129	Metrafenone(ECD)
130	Molinate(NPD)	131	Myclobutanil(ECD, NPD)*	132	Nitrapyrin(ECD)
133	Nitrothal-isopropyl(ECD)	134	Nonachlor(ECD)	135	Nuarimol(ECD)*
136	Ofurace(ECD)	137	Oxadixyl(ECD)	138	Oxydemeton-methyl(FPD)
139	Paclobutrazol(ECD, NPD)*	140	Parathion(ECD, NPD)	141	Parathion-methyl(ECD, NPD)
142	Pebulate(MS)	143	Penconazole(ECD, NPD)	144	Pendimethalin(ECD, NPD)
145	Permethrin(ECD)*	146	Phenthoate(ECD)	147	Phosalone(ECD, NPD)
148	Phosmet(ECD)	149	Phosphamidone(ECD, NPD)	150	Picolinafen(ECD)
151	Picoxystrobin(ECD)	152	Piperophos(NPD, FPD)	153	Pirimicarb(NPD)
154	Pirimiphos-ethyl(NPD)	155	Pirimiphos-methyl(NPD)	156	Probenazole(ECD)
157	Prochloraz(ECD)	158	Procymidone(ECD, NPD)	159	Profenofos(ECD, NPD)
160	Propachlor(MS)	161	Propazine(NPD)	162	Propham(MS)
163	Propisochlor(ECD, NPD)	164	Propyzamide(ECD)	165	Prothiofos(NPD)
166	Pyraclofos(NPD)	167	Pyrazophos(ECD, NPD)	168	Pyridaben(NPD)*
169	Pyridalyl(ECD, NPD, FPD)	170	Pyrifenox(MS)	171	Pyrimidifen(ECD)
172	Pyriminobac-methyl(NPD)	173	Quinalphos(NPD)	174	Quintozene(ECD)
175	Simeconazole(NPD)	176	Sulprofos(FPD)	177	TCMTB(ECD)
178	Tebufenpyrad(NPD)*	179	Tebupirimfos(ECD, NPD, FPD)	180	Tefluthrin(ECD)
181	Terbufos(NPD)*	182	Terbutylazine(ECD, NPD)	183	Tetrachlorvinphos(FPD)
184	Tetradifon(ECD)	185	Thiazopyr(ECD, NPD)	186	Thifluzamide(ECD, NPD)
187	Thiometon(ECD, NPD)	188	Tolclofos-methyl(ECD, NPD)	189	Tolfenpyrad(NPD)
190	Tolylfluanid(ECD, NPD)	191	Tralomethrin(ECD)	192	Triadimefon(ECD, NPD)
193	Triazophos(NPD)	194	Tribuphos(FPD)	195	Triflumizole(ECD, NPD)
196	Triflumuron(ECD)	197	Triticonazole(NPD)	198	Uniconazole(ECD)
199	Vernolate(ECD)	200	Vinclozoline(ECD, NPD)	201	Zoxamide(ECD, NPD)

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(85종)

1	Acetamiprid(UVD)*	2	Aldicarb(FLD)	3	Amisulbrom(UVD)
4	Azafenidin(UVD)	5	Azamethiphos(MS)	6	Azoxystrobin(UVD)
7	Bendiocarb(FLD)	8	Bensulide(MS)	9	Benzoximate(UVD)*
10	Boscalid(UVD)	11	Butocarboxim(FLD)	12	Carbaryl(FLD)
13	Carbofuran(FLD)	14	Chlorantraniliprole(UVD)	15	Chlorimuron-ethyl(UVD)
16	Chlorobenzuron(UVD)	17	Chlorotoluron(UVD)	18	Chromafenozide(UVD)
19	Cinosulfuron(UVD)	20	Clothianidin(UVD)*	21	Cyazofamid(UVD)
22	Cyhalofop-butyl(UVD)	23	Cymoxanil(UVD)	24	Dimethomorph(UVD)
25	Ethaboxam(UVD, 310nm)	26	Ethametsulfuron-methyl(UVD)	27	Ethiofencarb(FLD)
28	Fenhexamid(UVD)	29	Fenpyroximate(UVD)*	30	Ferimzone(UVD)
31	Fluacrypyrim(UVD)	32	Flubendiamide(UVD)	33	Flufenacet(UVD)
34	Flufenoxuron(UVD)	35	Flumioxazine(UVD)	36	Fluquinconazole(UVD)
37	Fluridone(MS)	38	Forchlorfenuron(UVD)	39	Hexaflumuron(UVD)
40	Imazamox(UVD)	41	Imazapic(UVD)	42	Imazaquin(UVD)
43	Imazethapyr(UVD)	44	Imibenconazole(UVD)	45	Isoprocarb(FLD)
46	Isoproturon(UVD)	47	Lufenuron(UVD)	48	Mepanipyrim(NPD, UVD)
49	Metamifop(UVD)	50	Methabenzthiazuron(UVD)	51	Methiocarb(FLD)
52	Methomyl(FLD)*	53	Methoxyfenozide(UVD)	54	Metolcarb(FLD)
55	Nitenpyram(UVD)	56	Novaluron(UVD)	57	Oxamyl(FLD)*
58	Oxaziclomefon(UVD)	59	Pentoxazone(UVD)	60	Phenmedipham(UVD)
61	Promecarb(FLD)	62	Propoxur(FLD)	63	Pyraclostrobin(UVD)
64	Pyrazolate(UVD)	65	Pyribenzoxim(UVD)	66	Pyributicarb(UVD)
67	Pyridate(UVD)	68	Pyrimethanil(UVD)	69	Pyriproxyfen(UVD)
70	Pyroquilon(UVD)	71	Quinoclamine(UVD)	72	Rimsulfuron(UVD)
73	Spirodiclofen(UVD)	74	Tebufenozide(UVD)	75	Teflubenzuron(UVD)
76	Thenychlor(UVD)	77	Thiacloprid(UVD)*	78	Thiamethoxam(UVD)*
79	Thiodicarb(FLD)	80	Tiadinil(UVD)	81	Tribenuron-methyl(UVD)
82	Tricyclazole(NPD, UVD)	83	Trifloxystrobin(ECD, UVD)	84	Trimethacarb(FLD)
85	XMC(MS)

주8) 이 시험법을 이용하여 위의 분석대상 성분중 * 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 정량분석은 아래의 분석법에 따른다.

4.1.3.2 EPN, 다이아지논(Diazinon), 디메토에이트(Dimethoate), 말라치온(Malathion), 파라치온(Parathion), 페니트로치온(Fenitrothion), 펜치온(Fenthion), 펜토에이트(Penthoate), 메티다치온(Methidathion), 클로르피리포스(Chlorpyrifos), 디크로보스(Dichlorvos), 아진포스메틸(Azinphos-methyl), 오메토에이트(Omethoate), 피리미포스메틸(Pirimiphos-methyl), 클로르펜빈포스(Chlorfenvinphos), 에치온(Ethion), 포사론(Phosalone), 포스메트(Phosmet), 카보페노치온(Carbofenothion)

4.1.3.5 델타메쓰린(Deltamethrin), 바이오레스메스린(Bioresmethrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이플러쓰린(Cyfluthrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 트라로메스린(Tralomethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로파스린(Fenpropathrin). 푸르발리네이트(Fluvalinate), 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 및 퍼메쓰린(Permethrin)

4.1.3.6 디노테푸란(Dinotefuran), 아세타미프리드(Acetamiprid), 이미다클로프리드(Imidacloprid), 크로치아니딘(Clothianidin), 티아크로프리드(Thiacloprid), 티아메톡삼(Thiamethoxam)

4.1.3.11  펜치온(Fenthion), 포레이트(Phorate) 및 터브포스(Terbufos)

4.1.3.14 벤족시메이트(Benzoximate), 클로펜테진(Clofentezine), 페나자퀸(Fenazaquin), 훼노치오카브(Fenothiocarb), 펜피록시메이트(Fenpyroximate), 헥시치아족스 (Hexythiazox), 피리다벤(Pyridaben) 및 테부펜피라드(Tebufenpyrad)

4.1.3.15  메소밀(Methomyl) 및 옥사밀(Oxamyl)

4.1.3.23 디페노코나졸(Difenoconazole), 페나리몰(Fenarimol), 펜부코나졸(Fenbuconazole), 헥사코나졸(Hexaconazole), 마이클로부타닐(Myclobutanil), 누아리몰 (Nuarimol), 파클로부트라졸(Paclobutrazol)

4.1.4.105 퀴날포스(Quinalphos)

제 10, 4, 4.1.3.1 “BHC(α, β, γ 및 δ-BHC), DDT(DDD 및 DDE), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin), 디코폴(Dicofol), 캡탄(Captan), 캡타폴(Captafol), 폴펫(Folpet), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon), 엔도설판(α, β-Endosulfan 및 Endosulfan sulfate), 클로로타로닐(Chlorothalonil)”을 “디코폴(Dicofol), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon)"으로 한다.

제 10, 4, 4.1.3.3 “이소프로카브(Isoprocarb, MIPC), 카바릴(Carbaryl, NAC) 및 카보후란(Carbofuran)”을 “이소프로카브(Isoprocarb, MIPC) 및 카바릴(Carbaryl, NAC)"로 한다.

“제 10, 4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin)”을 “제 10, 4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin)”으로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 레피멕틴을 메탄올로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아바멕틴(B1a 및 B1b), 밀베멕틴(A3 및 A4) 및 레피멕틴(A3 및 A4) 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh) 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 아미노 프로필 카트리지 : 아민(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

(곡류 및 콩류 등 지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 50 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴 층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.)

나) 정제

(1) 플로리실 정제 : 안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 메탄올/에틸아세테이트 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

(2) 아민 카트리지 정제 : 미리 헥산 10 mL로 활성화한 아민 카트리지에 상기 헥산 용액을 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 톨루엔 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고 디클로로메탄 10 mL와 아세톤/디클로로메탄 혼합액(20/80, v/v) 5 mL로 2회 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 후 갈색 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 245 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

2

1

3

4

5

6

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1：아바멕틴 B1b (13.0분),  2：아바멕틴 B1a (17.0분),

3：밀베멕틴 A3 (16.9분),   4 : 레피멕틴 A3 (19.7분),

5 : 밀베멕틴 A4 (22.8분),   6 : 레피멕틴 A4 (25.8분)

라) 정량한계

아바멕틴 B1a (0.02 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A4 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아바멕틴, 밀베멕틴, 레피멕틴을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

※ 레피멕틴은 아래 A 및 B의 이동상(40/60, v/v)을 사용

A : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 물

B : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(90/10)

(3) 이동상 유량 : 0.4 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI negative-ion mode

※ 레피멕틴은 ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 300∼1,000 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아바멕틴 B1b	8.0	858	857
아바멕틴 B1a	9.8	872	871
밀베멕틴 A3	10.6	528	527
밀베멕틴 A4	13.6	542	541
레피멕틴 A3	6.0	705	728
레피멕틴 A4	6.5	720	743

제 10, 4, 4.1.3.30에서 4.1.3.39까지를 다음과 같이 신설한다.

4.1.3.30 카보후란(Carbofuran 및 3-Hydroxycarbofuran), 벤푸라카브(Benfuracarb), 카보설판(Carbosulfan) 및 푸라치오카브(Furathiocarb)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 곡류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브를 0.25 N 염산 수용액으로 환류 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 카보후란과 3-수산화카보후란 표준원액을 1:2의 농도 비율이 되도록 아세토니트릴에 녹여 표준 혼합용액을 조제하고 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다. 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 아세토니트릴에 녹여 각각 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

사) 추출용액 : 0.25 N 염산 수용액

아) 여과 보조제 : Hyflo-SuperCel 또는 Celite 545를 전처리 과정 없이 그대로 사용한다.

자) 층 분리 보조제 : sodium lauryl sulfate 4%(w/v) 수용액

차) 검체보정(matrix-matched) 표준용액 : 카보후란/3-수산화카보후란 표준 혼합용액과 검체별 무처리 시료용액을 혼합, 카보후란 기준으로 최종 농도 0.005～0.1 mg/L이 되도록 희석한다. 즉, 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에 녹인 무처리 시료 2배 농축액, 아세토니트릴에 조제한 최종 농도의 10배 농도에 해당하는 표준 혼합용액, 물을 5:1:4(v/v/v)의 비율로 정확히 혼합하여 검체보정 표준용액을 조제하고 LC-MS 검량용으로 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상의 현미는 10 g, 콩류는 5 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 증류플라스크 넣고, 0.25 N 염산 수용액 150 mL를 가하여 가열, 1시간동안 환류 추출한다. 이 과정에서 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 카보후란으로 정량적으로 전환, 추출된다. 플라스크를 신속히 방냉한 후 여분의 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 냉각관 입구로부터 플라스크로 흘려 넣어 냉각관 및 플라스크 입구를 세척하여 환류 추출액과 합친다. 아세톤 20 mL를 가하여 잘 혼합하고(현미 및 대두의 경우 여과보조제 2 g을 추가로 첨가하고 혼합), 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과한다. 플라스크 벽면을 아세톤 5 mL로 씻어 내려 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 가하여 혼합한 후 흡인 여과, 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 염화나트륨 20 g을 첨가하고 완만하게 흔들어 완전히 녹인다. 수용액층을 디클로로메탄 100 mL 및 50 mL로 2회 분배 추출한다(층 분리가 잘 안될 때에는 층분리 보조제 1～5 mL를 첨가하고 가볍게 흔든 후 정치). 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(30/70, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(15/85, v/v)에서 아세토니트릴/물(60/40, v/v)로 15분간 직선적으로 농도 구배조건으로 흘린 후 10분간 아세토니트릴/물(60/40, v/v)을 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1 : 3-수산화카보후란(10.7분), 2 : 카보후란(18.6분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 카보후란, 3-수산화카보후란을 확인한다.

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
카보후란	18.6	221	222
3-수산화카보후란	10.7	237	238, 220

4.1.3.31 피로퀼론(Pyroquilon) 및 트리싸이클라졸(Tricyclazole)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피로퀼론과 트리싸이클라졸을 메탄올로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피로퀼론 및 트리싸이클라졸 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준용액을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 30분간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 균질기 컵 및 잔류물을 메탄올 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL, 물 250 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층을 1 L 용량 분액깔때기에 옮기고 헥산층은 버린다. 수용액층에 포화식염수 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 추출액 10 mL를 가하고 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 내려 버린다.

(1) 피로퀼론 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(15/85, v/v) 40 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v) 10 mL로 용해한다.

(2) 트리사이클라졸 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)  10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 피로퀼론 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸 아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.8 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 피로퀼론 256 nm, 트리사이클라졸 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피로퀼론(12.2분), 2 : 트리사이클라졸(12.1분)

라) 정량한계

피로퀼론 (0.02 mg/kg), 트리사이클라졸 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피로퀼론, 트리사이클라졸을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 피로퀼론-아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸-아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 70 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
피로퀼론	7.4	173	174
트리사이클라졸	7.3	189	190

4.1.3.32 클로로타로닐(Chlorothalonil), 캡탄(Captan), 폴펫(Folpet) 및 캡타폴(Captafol)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴을 아세톤 및 3% 인산용액으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MSD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 25 g)를 정밀히 달아 넣고, 물 20 mL를 넣고 습윤화한다. 아세톤 100 mL와 3% 인산용액 5 mL를 가하여 2분간 균질화한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 넣고 용해하여 분액깔대기에 옮기고 물 450 mL와 포화식염수 50 mL, 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 15 g을 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL으로 재용해하여 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/48.5/1.5, v/v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1(30 mm × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐온도 : 160℃(Chlorotalonil, Captan, Folpet), 200℃(Captafol)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

4

1 : 클로로타로닐(5.8분), 2 : 캡탄(13.5분),

3 : 폴펫(14.4분), 4 : 캡타폴(9.3분)

라) 정량한계

클로로타로닐(0.002 mg/kg), 캡탄, 폴펫, 캡타폴(0.008 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫, 캡타폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1ms(50 mm × 0.25 mm, 0.32 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 240℃

(5) 주입모드 : split mode(30:1)

(6) 주입량 : 1 μL

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로로타로닐	6.0	266	109, 266
캡탄	10.2	301	79, 149, 301
폴펫	10.6	295	76, 104, 260, 295
캡타폴	12.8	347	79, 151, 347

4.1.3.33 알드린(Aldrin), BHC(α, β, γ-BHC and δ-BHC), DDT(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE and p,p'-DDD), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin 및 δ-Keto-endrin), 엔도설판(α-Endosulfan, β-Endosulfan, Endosulfan sulfate), 클로르단(cis-Chlordane 및 trans-Chlordane) 및 헵타크로(Heptachlor 및 Heptachlor epoxide)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 견과종실류, 버섯류, 콩류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC,및cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE, p,p'-DDD, α-endosulfan, β-endosulfan, endosulfan sulfate, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor 및 heptachlor epoxide의 농도비는 각각 1, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD 및 endosulfan sulfate의 농도비는 각각 2가 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)로 2분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.)

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액 (50/0.3/49.7, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 320℃

(6) 주입모드 : split mode(20:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

α-BHC(12.1분), β-BHC(12.7분), γ-BHC(12.9분), δ-BHC(13.4분), heptachlor(14.5분), aldrin(15.4분), heptachlor epoxide(16.5분), trans-chlordane(17.3분), α-endosulfan(17.7분), cis-chlordane(17.8분), p,p'-DDE(18.6분), dieldrin(18.7분), endrin(19.5분), β-endosulfan(19.9분), p,p'-DDD(20.2분), o,p'-DDT(20.4분), endosulfan sulfate(21.7분), p,p'-DDT(21.9분), δ-keto-endrin(23.8분)

라) 정량한계

aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide(0.005 mg/kg), p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD, endosulfan sulfate(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 알드린, 디엘드린, 비에치씨, 클로르단, 디디티, 엔도설판, 엔드린, 헵타크로를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.9 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 :	300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50 ∼ 500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
α-BHC	12.1	288	219, 217, 181
β-BHC	12.7	288	219, 217, 181
γ-BHC	12.9	288	219, 217, 181
δ-BHC	13.4	288	219, 217, 181
Heptachlor	14.5	370	272, 100
Aldrin	15.4	362	263, 66
Heptachlor epoxide	16.5	386	353, 81
trans-Chlordane	17.3	406	375, 373
α-Endosulfan	17.7	404	241, 195
cis-Chlordane	17.8	406	375, 373
p,p'-DDE	18.6	316	318, 246
Dieldrin	18.7	378	277, 263, 79
Endrin	19.5	378	345, 317, 263
β-Endosulfan	19.9	404	338, 195
p,p'-DDD(TDE)	20.2	318	237, 235, 165
o,p'-DDT	20.4	352	237, 235, 165
Endosulfan sulfate	21.7	420	274, 272, 229
p,p'-DDT	21.9	352	237, 235, 165
δ-keto-Endrin	23.8	378	317, 67

4.1.3.34 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide), 테부페노자이드(Tebufenozide) 및 크로마페노자이드(Chromafenozide)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣고 혼합한다. 다시 아세톤 100 mL를 넣은 후 2분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하여 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL, 포화식염수 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL로 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산:에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 증류수: 메탄올(33/67, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/메탄올 혼합액(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 225 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메톡시페노자이드(10.4분), 크로마페노자이드(11.2분), 테부페노자이드(13.0분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 메탄올(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200～500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
메톡시페노자이드	11.6	368	391
크로마페노자이드	13.7	394	417
테부페노자이드	18.3	352	375

4.1.3.35 훼녹시카브(Fenoxycarb), 피리프록시펜(Pyriproxyfen) 및 메토프렌(Methoprene)

1) 시험법 적용범위

과일류, 견과종실류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 훼녹시카브, 메토프렌, 피리프록시펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 훼녹시카브, 피리프록시펜 및 메토프렌 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : 훼녹시카브는 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v), 메토프렌 및 피리프록시펜은 아세토니트릴/물 혼합액(90/10, v/v)에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄/헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 메코프렌과 피리프록시펜은 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 150 mL, 훼녹시카브는 에틸아세테이트/헥산 혼합액(15/85, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 각각 아세토니트릴/물 90/10(v/v) 및 65/35(v/v) 혼합액 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 230 nm(훼녹시카브 및 피리프록시펜), 265 nm(메토프렌)

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피리프록시펜(8.9분), 2 : 훼녹시카브(9.5분), 3 : 메토프렌(11.4분)

라) 정량한계

훼녹시카브(0.04 mg/kg), 피리프록시펜(0.04 mg/kg), 메토프렌(0.04 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 훼녹시카브, 피리프록시펜, 메토프렌을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 아세토니트릴/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 이온화 : ESI positive-ion mode

(6) 주입량 : 5 μL

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
훼녹시카브	6.0	301	302
피리프록시펜	5.4	321	322
메토프렌	4.9	310	279

4.1.3.36 페노트린(Phenothrin) 및 실라프루오펜(Silafluofen)

1) 시험법 적용범위

과일류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 페노트린과 실라프루오펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

다) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 페노트린(cis 및 trans 이성질체의 혼합물) 및 실라프루오펜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액(80/20, v/v)에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관 ․ 사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기 상에서 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 가하여 분배 추출하여 아세토니트릴층을 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 헥산포화아세토니트릴 30 mL씩을 다시 가하여 분배 추출과정을 2회 반복한다. 합친 아세토니트릴 추출액을 40℃에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.)

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 4 mL에 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액[(65/35, v/v)에서 (95/5, v/v)]을 30분간 직선적으로 농도구배한다.

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1, 2 : 페노트린(cis 및 trans; 15.0분, 15.4분), 3 : 실라프루오펜(21.2분)

라) 정량한계

페노트린(0.02 mg/kg), 실라프루오펜(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페노트린, 실라프루오펜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(75/25, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
페노트린	13.6(cis), 14.3(trans)	350	351

나) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린 및 실라프루오펜)

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 50℃에서 2분간 유지하고 20℃/min 비율로 240℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한 후, 3℃/min 비율로 280℃까지 온도를 상승시킨다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 검체 조제 : 아세토니트릴에 녹인 최종 검체용액 0.8 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 헥산 1 mL에 재용해한다.

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
페노트린	18.1 (cis), 18.3 (trans)	350	183, 123
실라프루오펜	24.2	408	286, 179

4.1.3.37 아크리나쓰린(Acrinathrin), 비펜스린(Bifenthrin), 싸이클로프로스린(Cycloprothrin), 테플루스린(Tefluthrin) 및 할펜프록스(Halfenprox)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 콩류, 서류, 견과종실류, 곡류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스, 테플루스린을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체/액체크로마토그래프-질량분석기(GC/LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린(부분입체이성질체의 혼합물), 할펜프록스 및 테플루스린 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스, 테플루스린 농도비가 2.5:2.5:10:10:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관⦁사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.)

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액 (25/75, v/v) 50 mL로 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm)  또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 싸이클로프로스린), 220℃(테플루스린)

(4) 오븐 온도 : 220℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스), 240℃(싸이클로프로스린), 160℃(테플루스린)

(5) 검출기온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

5

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 싸이클로프로스린(15.9분), 2 : 아크리나쓰린(17.9분)

3 : 테플루쓰린(18.6분), 4 : 비펜스린(22.8분), 5 : 할펜프록스(24.2분)

라) 정량한계

아크리나쓰린(0.005 mg/kg), 비펜스린(0.005 mg/kg), 싸이클로프로스린(0.02 mg/kg), 할펜프록스(0.02 mg/kg), 테플루스린(0.002 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체/액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기상의 측정 조건(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 테플루스린)

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 50℃에서 2분간 유지, 180℃까지 20℃/분 속도로 직선적 승온, 2분간 유지한 후 280℃까지 5℃/분 속도로 직선적 승온한다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아크리나쓰린	27.0	541	181, 208, 289
비펜스린	24.5	422	181, 166
할펜프록스	30.0	476	263, 265, 183
테플루스린	13.5	418	177, 197

나) 액체크로마토그래프-질량분석기상의 조건(싸이클로프로스린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 20 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltae : 100 V

(8) 검체 조제 : 헥산에 녹인 최종 검체용액 2 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 2 mL로 재용해한다.

4.1.3.38 비페닐(Biphenyl), 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl), 디클로사이메트(Diclocymet), 이소자디펜에틸(Isoxadifen-ethyl), 이소자플루톨(Isoxaflutole), 모노리누론(Monolinuron), 메토미노스트로빈(Metominostrobin) 및 노나클로르(Nonachlor)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하여 활성탄/아미노프로필 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 각각 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 활성탄/아미노프로필 카트리지 : 활성탄(0.5 g)과 아미노프로필(0.5 g)이 2층으로 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g, 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가하여 혼합하여 2시간 동안 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 2분간 고속 마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출하고 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 미리 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액 (75/25, v/v) 2 mL에 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴 층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL로 재용해한다.

나) 정제

활성탄/아미노프로필 카트리지에 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL를 고정상 상단에 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 15 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한다. 검체별 최종 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 아세톤 10 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 메탄올 10 mL로 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 비페닐(9.9분), 2. 디클로사이메트(17.5, 17.8분), 3. 노나클로르(18.2, 19.3분), 4. 메토미노스트로빈(18.3, 18.7분), 5. 이소자디펜에틸(19.7분)

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 모노리누론(11.7분), 2. 이소자플루톨(13.1분), 3. 클로퀸토셋멕실(18.9분)

마) 정량한계

비페닐(0.025 mg/kg), 디클로사이메트(0.025 mg/kg), 노나클로르(0.025 mg/kg), 메토미노스트로빈(0.05 mg/kg), 이소자디펜에틸(0.025 mg/kg), 모노리누론(0.02 mg/kg), 이소자플루톨(0.02 mg/kg), 클로퀸토셋멕실(0.02 mg/kg)

6) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7) 확인시험

기체/액체 크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 80℃에서 2분간 정치하고 280℃까지 10℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
비페닐	9.9	154	154, 153
디클로사이메트	17.5, 17.8	312	277, 221, 173
노나클로르	18.2, 19.3	440	409, 411, 407
메토미노스트로빈	18.3, 18.7	284	191, 238, 196
이소자디펜에틸	19.7	295	295, 294, 204

나) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액을 35/65(v/v)에서 2분간 정치 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
모노리누론	11.7	214	215
이소자플루톨	13.1	359	360, 251
클로퀸토셋멕실	18.9	335	336, 238

4.1.3.39 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 사이클아니리드(Cyclanilide), 디클로슐람(Diclosulam), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac), 이옥시닐(Ioxynil), 이소카바미드(Isocarbamid), 레나실(Lenacil), 메펜피르(Mefenpyr), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid) 및 트랄콕시딤(Tralkoxydim)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 실리카겔 카트리지 : 실리카겔(0.5 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g. 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류 등 건조 검체는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가한 후 2시간 동안 방치), 0.01 M 염산수용액 20 mL와 아세토니트릴 100 mL를 가하여 20분간 진탕(300 rpm)하여 추출한 후 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 여액 중 수분에 충분히 포화되도록 염화나트륨 50 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 12 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. 즉, C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 추출액 10 mL를 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 20 mL(클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락 분석 시에는 5 mL)를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL로 재용해한다.)

나) 정제

(1) 클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액 (20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 12 mL를 유출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 5 mL를 가하여 용해한다.

(2) 클로퀸토셋 및 메펜피르

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 용출액과 합치고 여기에 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 20 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

(3) 클로란슐람메틸 등 나머지 농약

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL과 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로퀸토셋(5.4분),          2. 메펜피르(17.2분)

3

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 플루멧슐람(2.5분),           2. 플로라슐람(3.3분),

3. 이소카바미드(5.2분),         4. 클로란슐람메틸(8.2분),

5. 디클로슐람(8.7분),           6. 레나실(12.4분),

7. 트랄콕시딤(13.5분)

그림 3. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로프로프(5.0분), 2. 플루미클로락(10.1분), 3.클로메프로프에시드(11.4분)

그림 4. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 초산나프탈렌(4.6분),  2. 이옥시닐(9.9분), 3. 사이클아니리드(11.3분)

마) 정량한계

클로메프로프에시드(0.05 mg/kg), 클로프로프(0.05 mg/kg), 클로퀸토셋(0.05 mg/kg), 클로란슐람메틸(0.05 mg/kg), 사이클아니리드(0.05 mg/kg), 디클로슐람(0.05 mg/kg), 플로라슐람(0.05 mg/kg), 플루멧슐람(0.05 mg/kg), 플루미클로락(0.05 mg/kg), 이옥시닐(0.05 mg/kg), 이소카바미드(0.05 mg/kg), 레나실(0.05 mg/kg), 메펜피르(0.05 mg/kg), 초산나프탈렌(0.05 mg/kg), 트랄콕시딤(0.05 mg/kg)

6) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(35/65, v/v)에서 2분간 유지한 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode 및 negative-ion mode

(7) Cone voltage : 30～50 V(이온화 방식 및 농약별로 최적화한 값을 사용한다.)

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	ESI mode	이온(m/z)
플루멧슐람	2.5	325	Positive	326
플로라슐람	3.3	359	Positive	360
초산나프탈렌	4.6	186	Negative	141, 185
클로프로프	5.0	200	Negative	127, 129
이소카바미드	5.2	185	Positive	186
클로퀸토셋	5.4	237	Positive	238, 240
클로란슐람메틸	8.1	429	Positive	430, 398
디클로슐람	8.7	405	Positive	406
이옥시닐	9.9	371	Negative	370
플루미클로락	10.1	353	Negative	294, 352, 296
사이클아니리드	11.3	273	Negative	272, 228
클로메프로프에시드	11.4	248	Negative	247, 175
레나실	12.4	234	Positive	153
트랄콕시딤	13.5	329	Positive	284, 330
메펜피르	17.2	316	Positive	327, 329

제 10, 4, 4.1.4.9를 다음과 같이 한다.

4.1.4.9 클로르프로팜(Chlorpropham)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 콩류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로르프로팜을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로르프로팜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L 가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 1시간 동안 진탕 추출(180 rpm 이상)한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 메탄올에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 200 μL를 첨가하고 35℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 증류수 50 mL과 헥산 100 mL로 차례로 씻어  포화식염수 50 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층은 별도의 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 35℃ 이하에서 감압농축하여 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출'로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 35℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 240 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 클로르프로팜(11.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로르프로팜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로르프로팜	4.2	213	214

제 10, 4, 4.1.4.43를 다음과 같이 한다.

4.1.4.43 도딘(Dodine)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 도딘을 아세토니트릴로 추출하고 포스트칼럼 유도체 반응장치 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD) 및 포스트칼럼 유도체 반응장치를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 도딘 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 과염소산나트륨(sodium perchlorate) 용액 : 14.1 g의 과염소산나트륨, 400 mg의 수산화나트륨 및 1.8 mL의 락트산(lactic acid, DL racemate)을 물에 함께 녹여 1 L로 한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(과일류 및 채소류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 3분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 100 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 물을 가하여 총 부피를 240 mL로 조절, 혼합한 후 이 중 120 mL(시료 10 g 해당량)를 취해 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 에틸아세테이트 100 mL로 씻어 내리고 10% 염화나트륨 수용액 100 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 에틸아세테이트층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 메탄올 2 mL로 재용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/과염소산나트륨수용액 혼합액(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 여기파장(Ex) 395 nm, 형광파장(Em) 500 nm

(6) 주입량 : 20 μL

(7) 포스트칼럼 유도체 반응액

1차 펌프 이송액 : 0.5 M 수산화나트륨 수용액 0.2 mL/min

2차 펌프 이송액 : 0.3% ninhydrin 수용액 0.1 mL/min

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

도딘(12.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 도딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(50 mm × 3.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산 암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
도딘	3.2	287	288

제 10, 4, 4.1.4.59를 다음과 같이 한다.

4.1.4.59 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 에마멕틴 벤조에이트를 아세톤으로 추출하고 에틸아세테이트로 분배, 추출한 후 트리에칠아민과 trifluoroacetic anhydride로 유도체화하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 에마멕틴 벤조에이트 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량 취하여 5) 시험용액의 조제에 따라 실험(유도체화 과정)하고 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 분액깔때기에 미리 포화식염수 50 mL를 넣고 잔류물을 물 50 mL로 용해하고 다시 에틸아세테이트 100 mL로 용해하여 합친 후, 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받고 수용액층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 분배 추출하여 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL로 재용해하고 그 중 1 mL를 취하여 2 mL 바이알에 담아 질소 가스로 농축한다. 잔류물을 0.5 M 트리에칠아민 0.5 mL를 가하여 용해한 후 0.5 M trifluoroacetic anhydride 0.5 mL를 가하여 볼텍스 믹서로 약 30초간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 메탄올/물(97/3, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 여기파장(Ex) 365 nm, 형광파장(Em) 470 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에마멕틴 벤조에이트(15.8분)

라) 정량한계

0.004 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

제 10, 4, 4.1.4.75를 다음과 같이 한다.

4.1.4.75 아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아시벤졸라-에스-메칠을 메탄올로 추출하고 염산을 이용하여 디클로르메탄으로 산-염기 분배, 추출한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아시벤졸라-산 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량 취하여 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 물 16 mL와 1 N 수산화나트륨 용액 4 mL를 가하여 60℃의 항온조(60 rpm)에서 1시간 동안 반응하여 공기 중에서 상온까지 식힌 후 메탄올 100 mL, 염화칼슘 2 g을 가하여 1시간 동안 진탕추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 20 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 메탄올을 이용하여 150 mL로 맞춘다. 이 중 60 mL를 취하여 분액깔때기에 옮겨 포화식염수 50 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 버리는 과정을 2회 반복한다. 수용액 층에 1 N 염산 20 mL, 디클로르메탄 100 mL를 가하여 진탕한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴 2 mL를 가하여 녹인 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴/0.1% 아세트산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아시벤졸라-산(acibenzolar acid) (9.3분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아시벤졸라-산을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴)/0.1% 포름산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아시벤졸라-산	3.8	180	181

제 10, 4, 4.1.4.148에서 4.1.4.153까지를 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.148 펜헥사미드(Fenhexamid)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜헥사미드를 아세톤으로 추출하고 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜헥사미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 1시간동안 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 잔류물을 물 50 mL로 헹구고 다시 디클로르메탄 100 mL로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화 식염수 50 mL를 가하여 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 5 mL로 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 35 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 3 g을 차례로 충진한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 0.1% 아세트산 함유 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하고 농축잔사를 약 1 mL로 헹구어 합쳐 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(1/9, v/v) 혼합액 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(3/17, v/v) 혼합액 100 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL를 가하여 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(55/45, v/v(배추)), 아세토니트릴/물(53/47, v/v(사과, 감귤)), 아세토니트릴/물(52/48, v/v(고추))

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 205 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

펜헥사미드(11.0분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜헥사미드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
펜헥사미드	3.7	301	302

4.1.4.149 프로클로라즈(Prochloraz)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 프로클로라즈 및 프로클로라즈 대사체를 아세토니트릴로 추출하고 pyridine hydrochloride를 가하여 2,4,6-TCP로 전환하여 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 2,4,6-TCP 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 30분간 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물을 물 100 mL와 디클로르메탄 50 mL으로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로르메탄 50 mL에 재용해한 용액 중 1 mL를 취하여 40 mL의 바이알에 담아 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 질소건고한다. 여기에 pridine hydrochloride 5 g를 넣고 밀봉한 다음 바이알을 220℃(silicon oil bath)에서 1시간동안 가열한 후 실온으로 냉각시키고 0.2 M 염산 20 mL를 가하여 용해하여 분액깔때기에 옮겨 물 100 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 분리될 때까지 정치한다. 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 여기에 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 아세톤 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 300℃

(4) 오븐 온도 : 110℃

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 :  splitless mode

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

2,4,6-TCP (8.2분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 2,4,6-TCP를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 5분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 3분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 270℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 80～500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
2,4,6-TCP	11.9	197	196

4.1.4.150 싸이프로디닐(Cyprodinil)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 싸이프로디닐을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 싸이프로디닐 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라)  표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(채소류 및 과일류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL이 들어 있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 2분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층은 여분의 250 mL 용량의 분액여두에 옮기고 헥산층은 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 다시 분배 추출하고 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다.이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18 칼럼(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 270 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

싸이프로디닐(8.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 싸이프로디닐을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(30 mm × 2.1 mm, 1.9 μm)

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 96 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
싸이프로디닐	2.7	225	226

4.1.4.151 나프로파마이드(Napropamide)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 견과종실류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 나프로파마이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 나프로파마이드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 40 mesh를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(콩류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세톤을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL가 들어있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 다시 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 40 cm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시키고 이를 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

나프로파마이드(8.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 나프로파마이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(30 mm × 3.0 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 44 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
나프로파마이드	1.9	271	272

4.1.4.152 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피콕시스트로빈을 아세톤으로 추출한 후 플로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 피콕시스트로빈 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화하고 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔대기에 옮긴다. 이에 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합친다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(95/5, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

※ 추가 정제(고추 등 추가 정제가 필요한 검체)

상기 ‘나) 정제’로부터 얻은 시험용액을 미리 헥산 10 mL로 활성화한 NH2 카트리지(2 g, 12 mL)에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 헥산/에틸아세테이트(90/10, v/v) 혼합액 12 mL를 가하여 유출시켜 버린 후, 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 12 mL로 유출시켜 감압농출플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 5분 이상 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

피콕시스트로빈(28.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피콕시스트로빈을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.8 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 3분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
17.54	367.32	145, 335

4.1.4.153 플루트리아폴(Flutriafol)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루트리아폴을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루트리아폴 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g. 채소류, 과일류 및 종실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡인여과하고 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 500 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 약 1 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 20 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고, 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 아세톤을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루트리아폴(19.3분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 플루트라아폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그라프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 µL

(8) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
17.1	301	219, 123

제 10, 4.1.4.154 부터 4.1.4.157 까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.154 아메톡트라딘(Ametoctradin)

1) 시험법 적용범위

채소류 및 과일류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아메톡트라딘을 메탄올로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아메톡트라딘 표준품을 메탄올에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡입여과하고 메탄올 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 약 10 mL가 될 때까지  40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 100 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(40/60, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 292 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아메톡트라딘(6.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아메톡트라딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(90/10, v/v) 혼합액에서 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 혼합액(10/90, v/v)으로 10분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
6.6	275	276

4.1.4.155 펜티오피라드(Penthiopyrad)

1) 시험법 적용범위

과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜티오피라드를 아세톤으로 추출하고 다공성규조토 칼럼으로 분배한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소・인 검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜티오피라드 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 다공성규조토 칼럼 : 다공성 규조토를 재충전하여 사용할 수 있는 15 g 용

바) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하 수욕상에서 약 20 mL가 될 때까지 감압농축한다. 이를 다공성규조토 칼럼에 옮겨 충분히 흡수시키고 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)  10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜티오피라드(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜티오피라드를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 260℃

(6) 이온원 온도 : 250℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
9.7	359	177, 152

4.1.4.156 피리미설판(Pyrimisulfan)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리미설판을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리미설판 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2∼3분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합한 후  40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 500 mL 분액깔대기에 옮긴다. 이에 1 N 염산 용액 2 mL를 가하여 산성화 한 후, 포화식염수 40 mL, 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 5 ml를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

(8) Collision energy : 20 ∼ 25

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 m/z 370 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 피리미설판(8.1분)

라) 정량한계

0.005 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피리미설판을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy(V)
8.1	420	370 255	20 25

4.1.4.157 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

1) 시험법 적용범위

과일류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리플루퀴나존을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리플루퀴나존 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 1% 포름산 20 mL를 가하여 산성화한 후 아세토니트릴 80 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL, 헥산 100 mL를 차례로 가한다. 이를 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 물층을 취하여 별도의 분액깔때기에 옮긴다. 이에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 20 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/5, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 받고, 아세톤 10 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 10 mM 인산/아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 250 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 피리플루퀴나존(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리플루퀴나존을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산/아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
7.8	464	465

제 10, 5.3.5 노보비오신(Novobiocin)을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 노보비오신을 메탄올로 추출하고 헥산/메탄올 분배로 지방을 제거한 후 실리카로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 노보비오신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액 (60 : 40 : 0.1, v/v/v)으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 실리카 카트리지(1 g, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g(유(乳)의 경우에는 5 mL)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 무수황산나트륨 30 g과 메탄올 30 mL를 넣은 후 3분간 균질화 한다. 균질화한 시료를 50 mL 원심분리관에 옮기고 8,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리한다. 상등액 15 mL를 정확히 취하여 40℃이하 수욕상에서 건고한다. 잔류물에 메탄올포화헥산 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화메탄올 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 메탄올층을 여분의 농축플라스크로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화메탄올 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 메탄올층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 감압농축 한후 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL에 녹인다. 미리 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL로 활성화 시킨 실리카 카트리지에 추출액을 흡착시키고 추가의 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL를 유출시키고, 고정상 상단이 노출되기 직전에 메탄올 : 아세톤 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL를 용출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 질소농축 하고 잔류물에 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v) 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 20 μL

(바) 검출기 파장 : UV 340 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

축산물 0.02 mg/kg, 유 0.02 mg/L

그림 1. 노보비오신(10.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

9) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(가) 칼럼 : C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(50 : 50 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) Ionization : ESI(positive)

(바) Capillary temperature : 350℃

(사) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
11.3	612	613

제 10, 5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate)를 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 데코퀴네이트 표준품을 정밀히 달아 클로로포름에 녹여 200 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 이것을 3,500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL를 통과시켜 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2번 용출한다. 용출액을  60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 메탄올 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA 수용액

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	55	45
3.0	55	45
5.0	40	60
7.0	5	95
18.0	5	95
18.01	55	45
23	55	45

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 데코퀴네이트(12.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 데코퀴네이트

소 : 0.07 mg/kg, 닭 : 0.09 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 데코퀴네이트의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 데코퀴네이트 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 27 eV

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
데코퀴네이트	418	204, 232, 372

“제 10. 5.3.13 디싸이클라닐(Dicyclanil)”을 “제 10, 5.3.13 암프롤리움(Amprolium), 디싸이클라닐(Dicyclanil)”로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 암프롤리움 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 1000 mg/L 이상이 되게 하고, 디싸이클라닐 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 150 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 추출물을 3,500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2회 용출한다. 용출액을 60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 0.5 M HCl을 사용하여 pH 5.0 조절된 증류수 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

ⓛ 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

② 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1:1.8)

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	75	25
3.0	75	25
16.0	65	35
16.5	75	25
21.5	75	25

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 디싸이클라닐(9.2분), 암프롤리움(14.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 암프롤리움

소 : 0.04 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

(2) 디싸이클라닐

양 : 0.05 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 디싸이클라닐 및 암프롤리움의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 디싸이클라닐 및 암프롤리움 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1 : 1.8)

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 15 eV(암프롤리움), 25 eV(디싸이클라닐)

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
암프롤리움	243	94, 122, 150
디싸이클라닐	191	56, 109, 150

제 10, 5.3.20 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin)을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 모넨신과 살리노마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것다

다) 표준원액 : 모넨신, 살리노마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L 이상이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올을 이용해 적당한 농도로 희석한다.

마) 0.1% 포름산 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 포름산 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료를 5 g 취하여 50 mL 원심분리 튜브에 넣고 수분을 제거하기 위해 황산나트륨(Na2SO4) 15 g을 첨가한 후, 아세토니트릴을 20 mL 첨가하여 진탕 혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 시료를 5℃, 12,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 시험관으로 옮긴 후, 시료의 방해물질을 제거하기 위해 8 mL n-헥산과 2 mL의 디클로로메탄을 첨가하여 진탕 혼합기로 10분간 혼합한다. 이후 5℃, 5000 G에서 5분간 원심분리 한 후 중간층(아세토니트릴 층)을 수집하여 추출액으로 한다. 미리 아세토니트릴 2 mL로 활성화시킨 실리카 카트리지에 추출액을 넣어 방해물질을 제거하고 용출액은 재수집한다. 아세토니트릴 2 mL를 사용하여 카트리지를 세척한 것까지 수집을 한 후, 질소 농축기를 이용해 40℃에서 완전히 증발시킨다. 잔류물은 아세토니트릴 500 μL로 녹여 멤버레인 필터로 여과한 후  시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
10.0	6	94

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Collision energy : 모넨신 : 60 eV, 살리노마이신 : 50 eV

라) 표준품 크로마토그램

그림 1. 살리노마이신(5.7분), 모넨신(6.6분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 모넨신은 m/z 461, 살리노마이신은 m/z 431 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 모넨신 및 살리노마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
모넨신	693	479, 501, 461
살리노마이신	773	413, 531, 431

나) 정량한계

(1) 모넨신 정량한계

소 : 0.0029 mg/kg, 돼지 : 0.0016 mg/kg,

닭 : 0.0019 mg/kg, 유 : 0.0018 mg/kg

(2) 살리노마이신 정량한계

소 : 0.0028 mg/kg, 돼지 : 0.0035 mg/kg,

닭 : 0.0020 mg/kg, 알 : 0.0025 mg/kg

제 10, 5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin)을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 스펙티노마이신을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 스펙티노마이신 표준품을 정밀히 달아 20 mM HFBA에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 20 mM HFBA으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고-HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) 30% NaOH : NaOH 30 g에 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)를 가해 최종 100 mL가 되도록 한다.

사) 5% TCA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 TCA 25g 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

아) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (6 cc, 200 mg,) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질기로 균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 5% TCA 20 mL를 가하여 진탕혼합기로 20분간 흔들어 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 12,000 G으로 10분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 여과지를 이용하여 여과한 후 30% NaOH로 pH 8.5로 조정하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 6 mL와 20 mM HFBA 6 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 5분간 진공 감압하여 건조한 후 아세토니트릴 : 20 mM HFBA(4 : 1, v/v) 12 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 0.3 mL까지 농축시킨 후 1 mL 까지 20 mM HFBA로 조정한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터로 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
2.0	15	85
10.0	15	85
10.1	90	10
20.0	90	10

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 23 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 스펙티노마이신(4.9분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 207 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
스펙티노마이신	351	333, 98, 207

나) 정량한계

소 : 0.05 mg/kg, 돼지 : 0.04 mg/kg,

닭 : 0.1 mg/kg, 유 : 0.06 mg/kg, 알 : 0.02 mg/kg

“제 10, 5.3.32 아목시실린(Amoxicillin)”을 “제 10, 5.3.32 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 나프실린(Nafcillin), 옥사실린(Oxacillin)”으로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법의 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에 아세토니트릴 : 물 혼합액(유 및 알의 경우 트리클로로초산이 함유된 아세토니트릴)을 가한 후 대상성분을 추출하고 액-액 분배 및 고상추출법으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액 : 아목시실린, 암피실린, 벤질페니실린, 클록사실린, 디클록사실린 및 나프실린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100  mg/L 농도가 되게 한다

나) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 적당한 농도가 되게 희석하여 사용한다.

다) HLB 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

라) 0.1 M 인산수소나트륨용액 : 1L 용량플라스크에 제이인산수소나트륨(Na2HPO4) 14.2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

마) 0.05 mM 인산수소카륨용액 : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축․수산물

균질화한 시료(소고기, 닭고기, 광어) 2 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20 v/v) 10 mL를 넣고 2분간 균질화시킨다. 균질화시킨 시료를 50 mL 원심분리관으로 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20, v/v) 10 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 시료와 합한다. 합친 시료를 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을 때까지 감압농축한다. 농축액을 여분의 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. ★미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유 및 알

균질화한 시료(유(乳) 20 mL, 알 5 g)를 50 mL 원심분리관에 취하고 유는 아세토니트릴 50 mL, 알은 20% 트리클로로초산 0.5 mL이 포함된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한다. 혼합액을 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 용액을 0.1 M 수산화나트륨 용액으로 pH 9.0±0.2로 조절한다. 추가 정제과정은 위의 ★이후 과정을 따른다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18 (2.0 mm × 150 mm, 3 μm)

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 포름산이 포함된 물

② 이동상 B : 0.1% 포름산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0	98	2
2	98	2
2.1	80	20
8.0	80	20
10	0	100
30	0	100
40	98	2
45	98	2

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy :

물질	Precursor ion(m/z)	Product ions(m/z)	Collision energy (V)
아목시실린	366	349, 114	8
암피실린	350	106, 192	17
벤질페니실린	335	160, 176	11
클록사실린	436	277, 160	15
디클록사실린	470	160, 311	13
나프실린	415	199, 171	14
옥사실린	402	160, 243	13

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물	수산물	유	알
아목시실린	0.005	0.005	0.002	0.001
암피실린	0.005	0.001	0.001	0.001
벤질페니실린	0.001	0.001	0.005	0.001
클록사실린	0.005	0.005	0.005	0.001
디클록사실린	0.001	0.005	0.001	0.001
나프실린	0.001	0.005	0.001	0.001
옥사실린	0.001	0.005	0.001	0.001

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

벤질페니실린 (12.5분), 암피실린 (6.4분), 아목시실린 (6.1분), 옥사실린 (12.7분), 나프실린 (12.8분), 클록사실린 (12.8분), 디클록사실린(13.0분)

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

“제 10, 5.3.33 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin)”을 삭제하고, “제 10, 5.3.33 폭심(Phoxim)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 폭심을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 폭심 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% formic acid 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 formic acid 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토나이트릴 20 mL를 가하여 200 G으로 20분간 진탕 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 5000 G으로 5분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 다시 아세토나이트릴 20 mL를 가해 다시 추출한다. 모은 상층액 40 mL를 250 mL 농축플라스크에 넣어  감압 농축한 후 n-헥산 5 mL로 2번 재용해하여 n-헥산 10 mL로 활성화된 실리카 카트리지(6 cc, 500 mg)에 적재한다. 적재가 끝난 카트리지에 디클로로메탄 20 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 농축시킨 후 아세토니트릴 500 μL로 재 용해한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터를 사용하여 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 mm × 100 mm,   3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	60	40
2.0	10	90
10.0	10	90
10.1	60	40
20.0	60	40

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 3 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 폭심 표준품(6.0분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 129 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 폭심의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
폭심	299	77, 97, 129

나) 정량한계

소 :  0.025 mg/kg, 돼지 : 0.025 mg/kg

“제 10, 5.3.40 암프롤리움(Amprolium)”을 삭제하고, “제 10. 5.3.40 발네물린(Valnemulin)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 발네물린을 메탄올로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량 분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 발네물린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 희석한다

마) 내부표준용액 : 내부표준원액을 메탄올/물 혼합액 (70 : 30, v/v)로 희석하여 10 mg/L가 되게 한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 1% 포름산(formic acid)을 함유한 메탄올 15 mL를 가하여 20분간 진탕추출한다. 추출액을 4,000 G에서 10분간 원리분리한 후 상층액 5 mL를 여분의 15 mL 튜브에 옮기고 50℃이하에서 질소가스로 용매를 날려보낸 후 메탄올/물 혼합액(50 : 50, v/v) 1 mL에 녹인다. 녹인 용액에 헥산 1 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 헥산층은 버리고 남은 용액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(2.1 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 0.1% 포름산(formic acid)이 함유된 아세토니트릴/물 혼합액 (90/10, v/v)

(라) 유속 : 0.25 mL/min

(마) 시료 주입량 : 5 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy(V)
발네물린	565	263, 245	24

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 0.01 mg/kg

그림 1. 발네물린(5.3분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

제 10, 5, “5.3.63 클렌부테롤(Clenbuterol)” 을 “5.3.63 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol)”로 하고, 다음과 같이 한다.

5.3.63 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol)

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중 베타-아고니스트 분해효소제를 사용하여 조직에서 분해한 후 에틸아세테이트로 추출하고 베타-아고니스트 전용 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 락토파민, 클렌부테롤 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 락토파민 D3(Ractopamine D3), 클렌부테롤 D9(Clenbuterol D9) 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 락토파민-D3는 100 ng/mL, 클렌부테롤-D9은 40 ng/mL로 한다.

사) 분해효소제 : β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/ arylsulfatase)

아) 0.2 M 초산암모늄완충용액(pH 5.2) : 초산암모늄 1.54 g을 100 mL 메스플라스크에 취하여 물로 녹여 표시선까지 채우고 초산을 넣어 pH 5.2로 한다.

자) 베타 아고니스트 전용 카트리지 : MIP(Molecular Imprinted Polymer) 카트리지(25 mg, 10 mL) 또는 이와 동등한 것

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고, 0.2 M 초산 암모늄완충용액(pH 5.2) 10 mL, 포화염화나트륨 2 mL, 분해효소제 100 μL를 가하여 37℃에서 12시간 반응시킨다. 반응 후 5 M 수산화나트륨용액을 사용하여 pH 12로 조정한 뒤, 이 용액에 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 진탕하고 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취한다. 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 추출을 한번 더 반복하여 상층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물을 20 mL 메탄올 포화 헥산으로 재용해 하여 분액여과에 옮긴 뒤 20 mL 헥산 포화 메탄올을 첨가하여 3분간 흔들어준다. 하층액을 무수황산나트륨에 통과시켜 모은 뒤, 이 과정을 한번 반복한 뒤, 하층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물은 0.025 M 초산암모늄용액 2 mL로 재용해한다. 미리 메탄올 1 mL, 물 1 mL와 0.025 M 초산암모늄용액 1 mL로 활성화시킨 MIP 카트리지(Molecular imprinted polymer, 25 ㎎, 10 mL)에 추출액을 흡착시킨다. 메탄올 1 mL로 카트리지를 세척한 후 메탄올 : 초산(9 : 1) 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 2 mL 이동상A에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 초산 암모늄(pH 4.3) : 아세토니트릴(95 : 5, v/v)

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
1	100	0
2	100	0
6	10	90
8	0	100
10	0	100
11	100	0
15	100	0

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) Collision energy

물질	Precursor Ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
락토파민	302	107, 284
락토파민 D3	305	107, 124
클렌부테롤	277	203, 259
클렌부테롤 D9	286	204, 268

나) 표준품의 크로마토그램

Ractopamine

Ractopamine D3

Clenbuterol

Clenbuterol D9

그림 1. 락토파민(6.70분), 락토파민 D3(6.69분), 클렌부테롤(7.04분), 클렌부테롤 D9(7.03분)

다) 정량한계

(1) 락토파민 : 0.5 μg/kg

(2) 클렌부테롤 : 0.2 μg/kg

7) 정량시험

표준용액을 농도별로 시험관에 취하고 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고 질소농축한 후 이동상 2 mL에 녹인 용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특정이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 내부표준물질 락토파민 D3의 m/z 107 이온에 대한 락토파민 m/z 284 이온, 클렌부테롤 D9의 204 m/z 이온에 대한 클렌부테롤 m/z 203 이온의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 락토파민과 클렌부테롤의 함량을 구한다.

제 10, 5, 5.3.87 락토파민(Ractopamine)을 삭제한다.

제 10, 5.3.96 부터 5.3.99 까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

5.3.96 설파구아니딘(Sulfaguanidine)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 염기성화시킨 후 설파구아니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 유도체하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 설파구아니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량을 취하여 질소가스로 용매를 날려보낸 후 물 0.1 mL를 가하여 녹인 후 아래의 유도체 과정을 거친다.

마) 50 mM 인산완충용액(pH 3.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 3.0으로 조절한다

바) 유도체시약 : Fluorescamine을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g(유(乳)의 경우 5 mL)을 50 mL 원심분리관에 취하고 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하여 30분간 진탕한 후 10분간 초음파추출한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 50 mL 원심분리관에 취한다. 잔류물에 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 다시 가한 후 위의 과정을 반복하고 분리한 상층액을 합한다. 이 합친 용액을 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 물 0.5 mL에 녹인다. 녹인용액에 헥산 0.5 mL를 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 물층 0.1 mL를 취하여 2 mL 원심분리관으로 옮긴다. 원심분리관에 인산완충용액 0.2 mL과 유도체 시약 0.2 mL을 넣고 충분히 섞은 후 실온에서 30분간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18 (4.6 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 메탄올 : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
3	70	30
20	70	30
21	10	90
26	10	90

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : 여기파장(405 nm), 측정파장(495 nm)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

그림 1. 설파구아니딘 유도체(17.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계 : 소, 돼지, 어류 0.03 mg/kg

유 0.002 mg/kg

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.97 로베니딘(Robenidine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 로베니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 로베니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 2% 포름산(formic acid)을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하고 20분간 진탕한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 튜브에 취하고 50℃ 수욕상에서 질소가스를 이용하여 용매를 날려보낸다. 잔류물에 2% 포름산을 함유한 70% 메탄올 수용액 0.5 mL에 녹인 후 헥산 0.5 mL을 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 수용액층을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상 : 2% 삼염화초산을 함유한 메탄올 : 물 혼합액(70 : 30, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 312 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.03 mg/kg

그림 1. 로베니딘(6.8분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.98 톨트라주릴(Toltrazuril)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 톨트라주릴 설폰을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 톨트라주릴 설폰 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM 인산완충용액(pH 2.5) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 2.7 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 2.5로 조절한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL를 가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 메탄올 : 물 혼합액 (60 : 40, v/v)에 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	40	60
15	0	100
16	40	60
21	40	60

(라) 유속 : 1 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 255 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 소, 돼지 0.02 mg/kg

닭 0.05 mg/kg

알 0.01 mg/kg

그림 1. 톨트라주릴 설폰(10.2분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.99 디아베리딘(Diaveridine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디아베리딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산/아세토니트릴 분배로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 디아베리딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 50 mM 인산완충용액 (pH 6.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소나트륨 (NaH2PO4) 6 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 수산화나트륨을 가하여 pH 6.0으로 조절한다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 15 mL를 가하가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 4 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 50 mM 인산완충용액 혼합액 pH 6.0  (15 : 85, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 254 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.02 mg/kg

그림 1. 디아베리딘(13.1분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

별표 4 (1) 이민옥타딘(Iminoctadine) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

별표 4, (3) 글리포세이트(Glyphosate) 중 “감 0.2”, “배 0.2”, “사과 0.2”를 각각 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

인과류	0.2

복숭아	0.2

별표 4, (4) 나프로파마이드(Napropamide) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.1

별표 4, (8) 다이아지논(Diazinon) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.1

별표 4, (9) 델타메쓰린(Deltamethrin) 중 “감 0.5”, “배 0.5”, “사과 0.5”를 삭제하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.1

풋콩	0.3

인과류	0.5

별표 4, (21) 디크로보스(Dichlorvos : DDVP) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설 한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4 (26) 디페노코나졸(Difenoconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

별표 4, (29) 디플루벤주론(Diflubenzuron) 중 “양송이 0.1”을 “양송이 0.3”으로 하고, “느타리버섯 0.1”을 “느타리버섯 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

참외	1.0

별표 4, (30) 리누론(Linuron) 중 다음 항목을 신설한다.

풋콩	0.1

별표 4, (31) 마이클로부타닐(Myclobutanil) 중 “감 0.5”, “배 0.5”, “사과 0.5”를 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

인과류	0.5

별표 4, (32) 말라치온(Malathion) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (35) 메소밀(Methomyl) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (38) 메타락실(Metalaxyl) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

마늘(풋마늘포함)	0.05

별표 4 (50) 베나락실(Benalaxyl) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

토마토	2.0

참외	1.0

별표 4, (63) 세톡시딤(Sethoxydim) 중 “배추 10.0”을 “배추 3.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	10

별표 4, (66) 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin) 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4, (67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

참깨	0.5

엇갈이배추	2.0

별표 4, (71) 아미트라즈(Amitraz) 중 “감 0.2”, “배 0.5”, “사과 0.5”를 각각 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

인과류	0.5

별표 4, (73) 아세페이트(Acephate) 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4, (78) 알라클로르(Alachlor) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

풋콩	0.05

딸기	0.05

무(잎)	0.2

별표 4, (85) 에토펜프록스(Etofenprox) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로, “배추(건조) 7.0”을 “배추(건조) 2.5”로 하고, “감 1.0”, “배 1.0”, “사과 1.0”, “호밀 0.05”를 각각 삭제하며, 다음 항목을 신설한다.

인과류	1.0

별표 4, (97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen) 중 “감 0.05”, “배 0.05”, “사과 0.05”를 삭제하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

풋마늘	0.05

인과류	0.05

별표 4, (111) 카바릴(Carbaryl) 중 다음 항목을 신설한다.

복숭아	1.0

별표 4, (112) 카벤다짐(Carbendazim) 중 “쌀 0.05”를 “쌀 0.5”로 하고, “참다래(키위) 0.5”를 “참다래(키위) 3.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

유자	3.0

별표 4, (131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos) 중 “감 0.5”, “배 0.5”, “사과 1.0”을 각각 삭제하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

인과류	1.0

엇갈이배추	0.2

별표 4, (132) 클로르피리포스-메틸(Chlorpyrifos-methyl) 중 “배추 0.2”를 “배추 0.07”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.2

별표 4, (133) 터부코나졸(Tebuconazole) 중 “감 1.0”을 삭제한다.

별표 4, (148) 트리풀루라린(Trifluralin) 중 다음 항목을 신설한다.

풋콩	0.05

엇갈이배추	0.05

별표 4 (149) 트리프루미졸(Triflumizole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘	0.05

풋마늘	1.0

별표 4, (151) 티오디카브(Thiodicarb) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	3.0

별표 4, (152) 티오벤카브(Thiobencarb) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.2

별표 4, (161) 페녹사프로프-에칠(Fenoxaprop-ethyl) 중 다음 항목을 신설한다.

풋콩	0.05

별표 4, (163) 펜디메타린(Pendimethalin) 중 “배추 0.2”를 “배추 0.07”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘(풋마늘포함)	0.05

엇갈이배추	0.07

별표 4, (164) 펜발러레이트(Fenvalerate) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, “감 1.0”, “배 2.0”, “사과 2.0”을 각각 삭제하며, 다음 항목을 각각 신설한다.

인과류	2.0

엇갈이배추	1.0

별표 4, (168) 펜치온(Fenthion : MPP) 중 “쌀 0.1”을 “쌀 0.5”로 한다.

별표 4, (170) 펜토에이트(Phenthoate : PAP) “배추 0.1”을 “배추 0.03”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

밤	0.05

엇갈이배추	0.1

별표 4, (178) 폭심(Phoxim) 중 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	0.05

별표 4, (183) 풀루아지호프-부틸(Fluazifop-butyl) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (188) 프로파모카브(Propamocarb) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

생강	0.05

엇갈이배추	3.0

별표 4, (190) 프로페노포스(Profenofos) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (196) 피리미포스-메틸(Pirimiphos-methyl) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4 (200) 헥사코나졸(Hexaconazole) 중 “마늘(풋마늘포함) 0.05”를 “마늘(풋마늘포함) 0.5”로 한다.

별표 4 (206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, “배추(건조) 3.0”을 “배추(건조) 1.0”로 하고, “오이 0.1”을 “오이 0.5”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

참나물	20

별표 4, (207) 테부페노자이드(Tebufenozide) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, “감 0.5”, “배 0.7”, “사과 0.7”을 각각 삭제하며, 다음 항목을 각각 신설한다.

인과류	1.0

엇갈이배추	1.0

별표 4 (209) 테프루벤주론(Teflubenzuron) 중 “엇갈이배추 0.2”를 “엇갈이배추 1.0”으로 하고, “딸기 0.2”를 “딸기 1.0”으로 한다.

별표 4, (212) 플루페녹수론(Flufenoxuron) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (213) 피라크로포스(Pyraclofos) 중 “배추 0.1”을 “배추 0.05”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.1

별표 4 (214) 피리다벤(Pyridaben) 중 다음 항목을 신설한다.

복숭아	1.0

별표 4, (218) 디메토모르프(Dimethomorph) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로, “배추(건조) 7.0”을 “배추(건조) 2.5”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

딸기	2.0

별표 4, (221) 디치아논(Dithianon) 중 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	5.0

별표 4, (224) 싸이목사닐(Cymoxanil) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

시금치	2.0

엇갈이배추	0.5

별표 4 (225) 싸이프로디닐(Cyprodinil) 중 다음 항목을 신설한다.

감	1.0

별표 4, (227) 아세타미프리드(Acetamiprid) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로, “배추(건조) 10.0”을 “배추(건조) 3.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

비름나물	10

별표 4 (237) 피메트로진(Pymetrozine) 중 다음 항목을 신설한다.

보리	0.05

별표 4, (239) 후루아지남(Fluazinam) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.05

별표 4, (242) 루페누론(Lufenuron) 중 “배추 0.2”를 “배추 0.07”로 하고 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.2

별표 4, (243) 메타벤즈티아주론(Methabenzthiazuron) 중 “보리 0.1”, “양파 0.1”을 각각 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	0.05

별표 4 (246)스피노사드(Spinosad) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기	1.0

별표 4 (248) 아바멕틴(Abamectin) 중 다음 항목을 신설한다.

토마토	0.01

별표 4, (249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate) 중 “배추 0.05”를 “배추 0.02”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.05

별표 4, (254) 카보설판(Carbosulfan) 중 “배추 0.3”을 “배추 0.1”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.3

별표 4, (255) 파목사돈(Famoxadone) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 한다.

별표 4 (290) 인독사카브(Indoxacarb) 중 다음 항목을 신설한다.

참나물	10

별표 4, (291) 족사마이드(Zoxamide) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	3.0

별표 4, (297) 테트라코나졸(Tetraconazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

파	5.0

포도	2.0

별표 4, (302) 포세틸-알루미늄(Fosetyl-aluminium) 중 “배추 20.0”을 “배추 7.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	20

별표 4, (304) 프로베나졸(Probenazole) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.07

별표 4, (308) 플루설파마이드(Flusulfamide) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.05

별표 4 (321) 디노테푸란(Dinotefuran) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	1.0

별표 4 (324) 비페나제이트(Bifenazate) 중 “감귤 0.1”을 “감귤 1.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	3.0

오이	0.5

별표 4, (325) 시아조파미드(Cyazofamid) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 한다.

별표 4, (333) 테부피림포스(Tebupirimfos) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.01

별표 4, (335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

보리	1.0

복분자	1.0

엇갈이배추	0.5

별표 4 (337) 티아메톡삼(Thiamethoxam) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

보리	0.4

상추	15

별표 4, (338) 티아크로프리드(Thiacloprid) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.05

풋콩	1.0

별표 4 (349) 노발루론(Novaluron) 중 다음 항목을 신설한다.

참나물	10

별표 4, (356) 에타복삼(Ethaboxam) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (357) 에틸렌비스디치오카바메이트(EBDC[Ethylenebis(dithio-carbamate)s] 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4, (358) 이프로발리카브(Iprovalicarb) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (361) 테플루스린(Tefluthrin) 중 다음 항목을 신설한다.

수박	0.05

엇갈이배추	0.1

별표 4, (370) 벤티아발리카브아이소프로필(Benthiavalicarb-isopropyl) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (371) 디니코나졸(Diniconazole) 중 “배추 0.3”을 “배추 0.1”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.3

별표 4, (380) 피리다릴(Pyridaryl) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

참나물	20

별표 4, (388) 시안화 수소(Hydrogen cyanide) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4 (391) 만디프로파미드(Mandipropamid) 중 다음 항목을 신설한다.

시금치	25

별표 4, (393) 메트알데히드(Metaldehyde) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (394) 비스트리플루론(Bistrifluron) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (395) 플루오피콜라이드(Fluopicolide) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (403) 메타플루미존(Metaflumizone) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

딸기	2.0

엇갈이배추	2.0

별표 4, (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

멜론	0.2

별표 4, (409) 아미설브롬(Amisulbrom) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

브로콜리	2.0

별표 4, (410) 옥솔린산(Oxolinic acid) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

복숭아	2.0

감귤	0.5

자두	0.1

엇갈이배추	3.0

별표 4 (416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

호박	0.7

호박잎	7.0

딸기	1.0

별표 4, (417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

옥수수	0.05

별표 4, (419) 프로헥사디온-칼슘(Prohexadione-calcium) 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4 (423) 피콕시스트로빈(Pycoxystrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감	1.0

오이	1.0

별표 4 (427) 이미시아포스(Imicyafos) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마(건조포함)	0.05

멜론	0.05

토마토	0.05

별표 4 중 (428)부터 (431)까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

별표 4, (428) 플루오피람(Fluopyram)

오이	1.0

별표 4, (429) 메타조설푸론(Metazosulfuron)

쌀	0.05

별표 4, (430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

고추	0.5

배	0.4

사과	0.4

별표 4, (431) 이소피라잠(Isopyrazam)

오이	2.0

참외	0.5

별표 5, (11) 아족시스트로빈(Azoxystrobin) 중 “수삼 0.5”를 “수삼 0.1”로, “인삼농축액 2.0”을 “인삼농축액 0.5”로, “홍삼농축액 2.0”을 “홍삼농축액 0.5”로 한다.

별표 7 중 (119) ∼ (124)까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

별표 7, (119) 메벤다졸(Mebendazole) : 구충제

돼지근육	0.06

돼지지방	0.06

돼지간	0.4

돼지신장	0.06

말근육	0.06

말지방	0.06

말간	0.4

말신장	0.06

가금근육	0.06

가금지방	0.06

가금간	0.4

가금신장	0.06

별표 7, (120) 니트록시닐(Nitroxinil) : 구충제

소근육	0.4

소지방	0.2

소간	0.02

소신장	0.4

양근육	0.4

양지방	0.2

양간	0.02

양신장	0.4

별표 7, (121) 클로술론(Clorsulon) : 구충제

소근육	0.035

소간	0.1

소신장	0.2

별표 7, (122) 톨페남산(Tolfenamic acid) : 항염증제

소근육	0.05

소간	0.4

소신장	0.1

돼지근육	0.05

돼지간	0.4

돼지신장	0.1

유	0.05

별표 7, (123) 툴라스로마이신(Tulathriomycin) : 항생제

소근육	0.1

소지방	0.1

소간	3.0

소신장	3.0

돼지근육	0.1

돼지지방	0.1

돼지간	3.0

돼지신장	3.0

별표 7, (124) 시미아졸(Cymiazole) : 구충제

벌꿀	1.0

부  칙

제1조(시행일) 이 고시는 2012년 9월 17일부터 시행한다. 단, 제 10.5.3의 제·개정 시험법은 2012년 10월 1일부터 시행한다.

제2조(농약 및 동물용의약품 잔류허용기준 적용례) 이 고시는 이 고시 시행 당시 이미 제조·가공 또는 수입한 식품(수입하기 위해 선적한 식품 및 유통중인 농산물을 포함한다)에 대하여도 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

신∙구조문 대비표

현  행

개  정 안

제 1. 총칙. 1. 일반원칙

<신  설>

제 10. 일반시험법

1 ∼ 4.1.2.1 (생  략)

4.1.2.2 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법

1) ∼ 4) 가) (생  략)

나) 일회용 카트리지：플로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

4) 다) ∼ 6) 나) (2) (생  략)

<신  설>

7) ∼ 8) (생  략)

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(154종)

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(68종)

주7)  (생  략)

4.1.2.3 ∼ 4.1.3 (생  략)

4.1.3.1 BHC(α, β, γ 및 δ-BHC), DDT(DDD 및 DDE), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin), 디코폴(Dicofol), 캡탄(Captan), 캡타폴(Captafol), 폴펫(Folpet), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon), 엔도설판(α, β-Endosulfan 및 Endosulfan sulfate), 클로로타로닐(Chlorothalonil)

4.1.3.2 (생  략)

4.1.3.3 이소프로카브(Isoprocarb, MIPC), 카바릴(Carbaryl, NAC) 및 카보후란

4.1.3.4 ∼ 4.1.3.11 (생  략)

4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin)

1) 시험법 적용범위

가지, 고추, 고춧잎, 녹차추출물, 도라지, 두릅, 딸기, 밀감, 배, 사과, 셀러리, 수박, 시금치,  쑥갓, 오이, 차, 참외, 파, 호박 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 메탄올로 추출한 후 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프：자외부흡광검출기 (UV Detector)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 플로리실(Florisil)：칼럼크로마토그래프용 플로리실을 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 아미노프로필(Aminopropyl) 카트리지：아미노프로필(0.5 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

마) 표준원액：아바멕틴 및 밀베멕틴을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

바) 표준용액：표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

사) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 [채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 20 g]를 정밀히 달아 균질기(Omni mixer)병에 넣고 메탄올 100 mL를 넣은 후 균질기로 2분간 균질화 한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L용량의 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL의 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 분배과정을 되풀이 하고 추출된 용액을 합친다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 40 cm의 칼럼관에 플로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 1 g을 충전한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 디클로로메탄 추출액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충전제 표면이 노출되기 직전 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액 (10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 다시 메탄올/에틸아세테이트 혼합액 (0.5/99.5, v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 감압농축 하여 건고하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.  미리 아미노프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 카트리지에 위의 추출액 10 mL를 가한 후 2 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 카트리지의 필터 표면이 노출되기 직전 톨루엔 3 mL ,디클로로메탄 5 mL로 통과시켜 버리고, 다시 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (20/80, v/v) 6 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 질소가스로 완전히 날려 보낸 후 아세토니트릴/메탄올/물 혼합액 (52.5/22.5/25, v/v/v) 2 mL 에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18(150 mm × 3.9 mm, 4 ㎛)

(2) 칼럼온도：40℃

(3) 이동상：아세토니트릴/메탄올/물 (52.5/22.5/25, v/v/v)

(4) 이동상 유량：1.0 mL/min

(5) 검출기파장：UV 246 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1：아바멕틴 B1a (10.9분) 18.8 ng, 2：아바멕틴 B1b (8.1분) 1.2 ng, 3：밀베멕틴 A3 (9.7분) 8.5 ng, 밀베멕틴 A4 (13.2분) 19.5 ng.

라) 정량한계

아바멕틴 B1a (0.003 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.003 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.003 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.003 mg/kg), 아바멕틴 B1a (0.005 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.005 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.005 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.005 mg/kg)

마) 액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18(150 mm × 2.1 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도：40℃

(3) 이동상：아세토니트릴/물 (70/30, v/v)의 혼합액

(4) 이동상 유량：0.2 mL/min

(5) 이온화：ESI negative-ion mode

(6) 분자량 범위：300～1,000

(7)  주입량：10 μL

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored (m/z)
아바멕틴 B1b 아바멕틴 B1a 밀베멕틴 A3 밀베멕틴 A4	8.0 9.8 10.6 13.6	858 872 528 542	857 871 527 541

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

주1) 액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.3.13 ∼ 4.1.3.29 (생 략)

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4.1.4 ∼ 4.1.4.8 (생  략)

4.1.4.9 클로르프로팜(Chlorpropham)

1) 시험법 적용범위

사과 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가)  기체크로마토그래프∶질소․인 검출기(NPD) 또는 불꽃광도검출기(FPD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 플로리실(Florisil)：칼럼크로마토그래프용 플로리실을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식한다.

라) 표준원액：클로르프로팜을 헥산에 녹여 100 mg/kg으로 한다.

마) 표준용액：표준원액을 헥산에 녹여 적절한 농도로 희석한다.

사) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(과실류는 약 1 kg을 정밀히 달아 균질화한 후 그 50 g에 상당하는 양을 단다) 50 g을 브렌더에 넣고 이에 아세톤 200 mL를 넣고 5분간 고속으로 균질화하여 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 다시 아세톤 100 mL를 넣고 5분간 균질화한 후 위와 같이 되풀이하여 여과한다. 여액을 합쳐 40℃ 이하의 수욕상에서 아세톤을 감압하여 날려보낸다. 수용액을 미리 10% 염화나트륨용액 100 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 이에 헥산 50 mL를 넣어 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산층을 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 앞의 헥산층에 합쳐 물 50 mL로 씻는다. 헥산층을 무수황산나트륨칼럼에 통과시켜 탈수하고 다시 칼럼을 헥산 약 20 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 거의 날려보내고 다시 실온에서 질소가스로 용매를 완전히 날려보낸다. 잔사를 헥산 10 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 이에 헥산포화아세토니트릴 20 mL를 넣고 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 아세토니트릴층을 다른 분액깔때기에 취한다. 헥산층에 다시 헥산포화아세토니트릴 20 mL씩 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 아세토니트릴층을 앞의 분액깔때기에 합쳐 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 씻는다. 아세토니트릴을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 거의 날려보내고 다시 실온에서 질소가스로 용매를 완전히 날려보낸 후 잔사를 5% 에테르함유헥산 10 mL로 녹인다.

나) 정제

안지름 20 mm의 칼럼관에 플로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 8 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 녹인액을 넣고 5% 에테르함유헥산 100 mL로 유출시킨 후 5% 아세톤함유헥산 150 mL로 용출한다. 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 일정량으로 농축하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼충전제

(가) 고정상담체：기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(60～80 mesh) 또는 이와 동등한 것

(나) 고정상액체：10% FFAP, 10% PEG 및 10% DC-200

(2) 칼럼：안지름 2～4 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

(3) 검체주입부 온도：180～200℃

(4) 칼럼온도：160～180℃

(5) 검출기의 온도：230～250℃

(6) 캐리어 가스 및 유량：질소, 30～50 mL/min

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정성시험

4.1.4.10 다미노자이드 7) 정성시험에 따른다.

8) 정량시험

4.1.4.10 다미노자이드 8) 정량시험에 따른다.

4.1.4.10 ∼ 4.1.4.42 (생  략)

4.1.4.43 도딘(Dodine)

1) 시험법 적용범위

딸기, 배, 사과, 체리, 포도 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 메탄올로 추출한 후 유도체화 반응을 거쳐 칼럼크로마토그래피(충진제 : silicic acid)로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가)  기체크로마토그래프：전자포획검출기(ECD)를 사용한다. 또는 질량분석기(MSD)의 사용도 가능하다.

4) 시약

가) 용매：잔류농약시험용

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 물

다) 기타시약：특급

라) 표준용액：도딘 500 mg (1.74 mmoL)과 Hexafluoroacetyl acetone 2.0 g(9.6 mmoL)을 벤젠 10 mL에 녹여 4시간 동안 환류시킨다. 반응이 끝난 후 용액을 무수황산나트륨으로 건조한 후 농축하고 잔류물의 헥산에 녹이고 희석하여 적당한 농도로 하여 표준용액으로 한다.

마) 유도체 시약：Hexafluoroacetyl acetone(10 μL) in benzene(400 μL)：시약급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 잘게 썰거나 갈은 후 20 g을 달아 메탄올 200 mL를 넣고 1분간 균질화한 후 부흐너깔때기를 사용하여 감압여과한다. 여과된 용액의 양을 기록하여 두고 여액 중 20 mL를 취하여 0.1M 수산화나트륨용액 120 mL와 함께 분액깔때기에 넣고 클로로포름 40 mL를 넣어 진탕 추출한 후 용매층을 분리하여 무수황산나트륨으로 건조시키고 질소가스의 흐름으로 농축시킨다.

나) 유도체화 및 정제

농축된 용기에 유도체시약(10 μL/400 μL 벤젠)을 넣고 1시간 동안 85℃에서 환류시킨다. 반응이 끝난 후 반응액을 냉각시키고 질소로 농축한다. 잔사를 헥산 1 mL로 녹인다. 이를 안지름 5 mm의 파스퇴르피펫(끝부분을 유리솜으로 막고 silicic acid(100 mesh)를 25 mm 높이로 충전) 칼럼에 넣고 벤젠 및 헥산(3：7)의 혼합액 10 mL를 용출시킨다. 이 용출액을 40℃에서 농축․건고시킨 후 헥산 소량으로 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼충전제

(가) 고정상담체：기체크로마토그래프용 크로모솔브W(HP;100～125 mesh) 또는 이와 동등한 것

(나) 고정상액체：75% Phenly 25% Methyl siloxane을 5%로 입힌 것 또는 이와 동등한 것(4. 식품 중 잔류농약 분석법, 4.1.2.1의 ｢사용이 가능한 동등한 칼럼｣ 참조)

(2) 칼럼：안지름 4 mm, 길이 150 cm의 규산유리관

(3) 검체용액 주입부 및 검출기의 온도：각각 200℃, 280℃

(4) 칼럼온도：200℃항온

(5) 캐리어가스 및 유량：헬륨(30 mL/분)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.44 ∼ 4.1.4.58 (생  략)

4.1.4.59 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

1) 시험법 적용범위

가지, 감자, 고추, 배추, 브로콜리, 상추, 수박, 시금치, 오일, 참외, 케일, 토마토, 파, 피망, 호박 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 에틸아세테이트로 추출한 후 아미노 프로필 카트리지로 정제하고 유도체화하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프：형광검출기(Fluorescence Detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등 이상인 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 아미노 프로필(Amino-propyl) 카트리지：SPE용 또는 이와 등등한 것

라) 표준원액：에마멕틴 벤조에이트를 아세토니트릴에 녹여 100 mg/kg이 되게 한다.

마) 표준용액：표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

바) 유도체시약：메틸이미다졸(N-methylimidazole)과 트리플루오로초산(trifluoro-acetic acid)은 특급 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 잘게 썰거나 분쇄한 후 20 g을 정밀히 달아 용기에 취하고 아세토니트릴 1 mL, 증류수 4 mL, 염화나트륨 1 g과 에틸아세테이트 20 mL를 첨가하여 5분 동안 균질화한 다음 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 잔류물에 에틸아세테이트 10 mL를 가하고 위와 같이 2회 반복한 후 여액을 합한다. 여액은 분액깔때기로 옮겨 물층을 분리한 다음 에틸아세테이트층을 취하고 40℃이하의 수욕중에서 감압하여 용매를 모두 날려보낸다. 잔류물은 일정량의 에틸아세테이트로 녹인다.

나) 정제

미리 1% 초산암모늄 함유 메탄올, 1% 인산 함유 메탄올, 증류수, 메탄올, 에틸아세테이트 순으로 각각 5 mL씩 넣어 활성화한 아미노프로필 카트리지에 상기 농축액을 초당 2～3방울의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 에틸아세테이트 3 mL로 유출한 후 1% 초산암모늄 함유 메탄올 20 mL로 용출하고 용출액을 질소가스 또는 공기를 사용하여 1 mL가 되도록 농축한다. 농축액에 증류수 1 mL를 첨가하고, 에틸아세테이트 10 mL로 4회 추출한 후 질소를 사용하여 용매를 모두 날려보낸다. 잔류물을 에틸아세테이트 1 mL로 녹이고 아세토니트릴 3 mL를 첨가하여 총 4 mL가 되게 한다.

다)  유도체화

상기 녹인 액에 메틸이미다졸 0.3 mL를 첨가하여 1분간 심하게 흔들어 섞은 후 실온으로 냉각하고 트리플루오로초산：아세토니트릴(2:1) 혼합액 0.3 mL를 첨가하여 혼합한 다음 5분 후에 증류수 0.4 mL를 첨가하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼충전제：칼럼크로마토그래프용 ODS 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼：안지름 4.6 mm, 길이 250 mm의 스테인리스관

(3) 검출기：형광검출기

(4) 파장：여기：365 nm, 형광：470 nm

(5) 이동상：메탄올：물(92:8)

(6) 이동상 유량：에마멕틴 벤조에이트가 약 15분정도에서 유출하는 유속으로 조정한다.

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.60 ∼ 4.1.4.74 (생  략)

4.1.4.75 아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl)

1) 시험법 적용범위

감, 고추, 고춧잎, 밀감, 복숭아, 사과, 수박, 쌀, 포도, 피망 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 메탄올로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프：자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등 이상인 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 실리카(Silica) 카트리지：SPE용 또는 이와 동등한 것

라) 표준원액：아시벤졸라-에스-메칠 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/kg으로 조제하여 표준원액으로 한다.

마) 표준용액：표준원액을 일정량 취하여 5) 시험용액의 조제에 따라 실험하고 0.02 M 인산용액으로 적절한 농도로 희석하여 사용한다.

바) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 잘게 썰거나 갈은 후 10 g을 달아 용기에 넣고 물 20 mL와 1 M 수산화나트륨 2 mL를 가하여 60℃오븐에서 1시간 방치한 다음 공기중에서 식힌다. 여기에 메탄올 100 mL와 염화칼슘 2 g을 가하고 20분간 격렬히 흔들어 섞은 후 이를 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여액은 약 10 mL가 남도록 50℃이하의 수욕상에서 감압 농축한 후 물 10 mL를 이용하여 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 2 mL를 가하여 흔들어 섞는다. 여기에 30% t-butylmethyl ether 함유 헥산 20 mL를 넣고 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층은 버린다. 여기에 다시 30% t-butylmethyl ether 함유 헥산 20 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 유기용매층은 버린다. 물층에 85% 인산용액 2 mL와 30% t-butylmethyl ether 함유 헥산 20 mL를 넣고 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 유기용매층을 취한 다음 다시 물층에 30% t-butylmethyl ether 함유 헥산 20 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 유기용매층을 합한다. 유기용매층은 50℃이하의 수욕상에서 감압하에 완전히 날려버리고 잔류물을 15% 메탄올 함유 t-butylmethyl ether 5 mL로 녹인다.

나) 정제

메탄올을 15% 함유한 t-butylmethyl ether 10 mL로 미리 활성화한 실리카 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 카트리지를 통과시켜 버린 다음 40% 메탄올 함유 t-buty-lmethyl ether 10 mL로 용출하여 그 용출액을 40℃이하의 수욕상에서 감압하에 날려버린다. 이를 0.02 M 인산용액 2 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18(250 mm × 4.6 mm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출기 및 파장：자외부흡광검출기(235 nm)

(3) 이동상：0.1% 인산：아세토니트릴(80：20)

(4) 이동상 유량：1.0 mL/분

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.4.76 ∼ 4.1.4.147 (생  략)

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5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.4 (생  략)

5.3.5 노보비오신(Novobiocin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 노보비오신을 메탄올로 추출한 후 헥산으로 지방성분을 제거하여 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：노보비오신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 물 10 mL를 가하여 잘 녹인 다음 물로 표시선까지 채워 100 mg/L의 농도가 되게 한다.

라) 표준용액：표준원액을 물로 적당한 농도가 되도록 희석하여 사용한다.

마) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 메탄올 15 mL와 무수황산나트륨 5 g을 첨가하고 균질기로 2분간 균질화한 후 1시간 진탕한다. 이 액을 10분간 원심분리(3,000 G)하여 상층액을 3 mL 취한 후 헥산 3 mL를 가하고 진탕한다. 헥산층은 버리고 남은 액을 바로 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：10 mM 인산：아세토니트릴(40：60)

(3) 측정파장：340 nm

(4) 칼럼온도：25℃

(5) 유속：1.0 mL/분

(6) 주입량：20 μL

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 노보비오신의 함량을 구한다.

5.3.6 ∼ 5.3.7 (생  략)

5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에 메탄올 및 클로로포름 혼합액을 넣어 균질기로 균질하게 하고 초음파 추출한 후 메타인산을 넣어 클로로포름으로 추출한다. 플로리실 칼럼을 사용하여 정제한 후 염화칼슘 -메탄올 혼합액으로 용출시켜 형광광도계로 측정한다.

3) 장치

형광광도계

4) 시약 및 시액

가) 유기용매：잔류농약 시험용

나) 용출용 용액：염화칼륨(무수) 10 g을 재증류한 후 메탄올에 녹여 1,000 mL로 하고 24시간 방치한 후 여과하여 사용한다.

다) 5% 메타인산용액：메타인산 50 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다. 이 액은 냉장보관하여 사용한다.

라) 플로리실(Florisil)：60～1,000 mesh의 칼럼크로마토그래프용

마) 기타시약：최순품

바) 표준원액：데코퀴네이트 표준품 20 mg을 정밀히 달아 클로로포름에 녹여 100 mL로 한다.

사) 표준용액：데코퀴네이트 표준원액 50 mL를 취해 클로로포름을 넣어 100 mL로 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 20 g을 달아 황산나트륨(무수) 20 g과 메탄올․클로로포름(4：1)의 혼합액 40 mL를 넣어 균질기로 1분간 균질하게 한 후 원심분리하여 상등액을 취한다. 잔류물에 메탄올․클로로포름(4：1)의 혼합액 적당량으로 위의 조작을 되풀이하여 상등액을 위의 상등액에 합해 메탄올․클로로포름(4：1)의 혼합액을 넣어 100 mL로 한다. 약 10분간 초음파 진탕한 후 약 2,000 rpm에서 원심분리하여 상등액 50 mL를 분액깔때기에 취해 5% 메타인산용액 100 mL를 넣어 가볍게 흔들고 10분간 정치하여 클로로포름층을 취한다. 다시 분액깔때기에 클로로포름 10 mL를 넣어 위의 조작을 되풀이하여 클로로포름층을 취한다. 클로로포름층을 합하고 메탄올 2 mL를 넣어 클로로포름으로 전량을 25 mL로 한다.

나) 정제

안지름 7 mm, 길이 300 mm의 칼럼에 플로리실 4 g을 클로로포름에 현탁시켜 넣고 칼럼의 상단에 소량의 클로로포름이 남을 때까지 흘려보낸다. 이 칼럼에 위의 추출액 25 mL를 넣고 메탄올 10 mL를 넣어 씻은 후 용출용 용액을 넣어 용출액 15 mL를 취해 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 형광광도계의 측정조건

(1) 여기파장：270 nm

(2) 측정파장：360, 380, 400 nm

7) 정량시험

검체 20 g씩을 4개 달아 그중 3개에 데코퀴네이트 표준용액을 각각 0.2, 0.4 및 0.8 mL를 넣고 5) 시험용액의 조제에 따라 조작한 후 형광광도를 측정하여 아래식에 의해 각각의 시험용액의 I치를 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 데코퀴네이트의 함량을 구한다.

I＝I380-(I360＋I400)/2

5.3.9 ∼ 5.3.12 (생  략)

5.3.13 디싸이클라닐(Dicyclanil)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 디싸이클라닐을 아세토니트릴로 추출하여 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 디싸이클라닐 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 하고 냉장보관한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 사용한다.

마) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 5 mL를 가하여 10분간 균질화한 후 10분간 초음파 추출한다. 이 용액을 2,500 G에서 20분간 원심분리한 후 상징액을 취하고 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 가드칼럼 : C8(4.6 mm× 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 분석칼럼 : C18(2.1 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(3) 칼럼온도 : 25℃

(4) 이동상 : 1 mM 초산암모늄/아세토니트릴(85:15)

(5) 유속 : 1.5 mL/min

(6) 주입량 : 10 μL

(7) 측정파장 : 267 nm

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각각의 피크 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 디싸이클라닐의 함량을 구한다.

5.3.14 ∼ 5.3.19 (생  략)

5.3.20 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 균질화하여 여과하고 아세토니트릴포화헥산으로 정제한 후 감압건고한다. 잔류물을 클로로포름에 용해하고 실리카카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/시차굴절계검출기 또는 형광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/시차굴절계검출기 또는 형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액 : 모넨신, 살리노마이신 표준품을 메탄올로 용해해서 1 mg/mL의 농도로 조제한다.

나) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 적당히 희석해서 표준용액으로 한다.

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 10 g을 균질기에 달아 넣고, 아세토니트릴 30 mL를 가해서 5분간 균질화하고 분당 3,000 rpm으로 5분간 원심분리한 후 분액깔때기에 면전 여과하여 옮긴다. 잔류물에 아세토니트릴 30 mL를 가해서 똑같이 조작하고 여액을 합한다. 여액에 아세토니트릴포화헥산 50 mL를 가해 5분간 진탕혼합한 후 정치하고 하층(아세토니트릴층)을 감압농축기로 40℃에서 감압건고한다.

잔류물을 클로로포름 5 mL로 용해해서 SEP-PAK 실리카카트리지에 전량을 통과한 후 소량의 클로로포름으로 용기를 세정해서 세액도 카트리지에 통과시킨다. 클로로포름 8 mL로 카트리지를 세정한 후 클로로포름․메탄올(9：1) 10 mL를 이용해서 50 mL 플라스크에 용출한다. 용출액을 40℃에서 감압건고한 후 잔류물을 메탄올 2.0 mL로 용해하고 0.45 μm의 멤브레인 필터로 여과해서 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 모넨신 및 살리노마이신의 동시분석조건

(가) 칼럼：길이 300 mm, 안지름 4 mm, 전다공성화학결합실리카충전칼럼

(나) 검출기：시차굴절계검출기

(다) 이동상：아세토니트릴․희석인산용액(990 mL의 물에 10 mL의 인산) (85：15)

(라) 유속：1.5 mL/분

(2) 모넨신의 분석조건

(가) 시험용액의 유도체화법

시험용액 0.5 mL에 0.1% 9-안스릴디아조메탄(ADAM) 메탄올용액 0.5 mL 및 0.3% 크라운에테르․메탄올용액 0.1 mL를 가해 실온에 방치해서 60분간 반응시킨다. 반응 후 용액을 제거하고 잔류물을 n-헥산․클로로포름(1：1) 10 mL로 용해하고 SEP-PAK 실리카카트리지에 통과한다. 클로로포름 5 mL로 세정 후 클로로포름․메탄올(9：1) 5 mL로 ADAM-모넨신유도체를 용출하고 용출액을 농축건조하여 잔류물을 메탄올 1 mL로 용해하여 이를 시험용액으로 한다.

(나) 칼럼：길이 250 mm, 안지름 4.6 mm 전다공성화학결합실리카충전칼럼

(다) 검출기：형광검출기

(라) 검출파장：여기파장(Ex) 365 nm, 측정파장(Em) 412 nm

(마) 이동상：메탄올․물(95：5)

(바) 유속：0.8 mL/min

(3) 살리노마이신의 분석조건

(가) 칼럼：길이 250 mm, 안지름 4.6 mm, Altex Ultrashere octyl reverse phase column

(나) 검출기：시차굴절계검출기

(다) 이동상：150 mL의 물에 인산 0.1 mL를 가하고 아세토니트릴 1 L로 채운다.

(라) 유속：2.0 mL/분

7) 정량시험

각각의 표준용액을 측정조건에 따라서 액체크로마토그래피를 행하고 각각의 피크 머무름시간을 측정한다. 이어서 시험용액에 대해서도 똑같게 조작하고 검출한 검체의 피크 머무름시간을 구하고 미리 표준용액에 대해서 피크 높이법에 따라 검량선을 작성하고 이에 따라 모넨신과 살리노마이신의 양을 구한다.

5.3.21 ∼ 5.3.28 (생  략)

5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin)

5.3.29.1 제1법

1) 시험법 적용범위

우유, 산양유 등 유(乳)류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 스펙티노마이신을 추출하고 중합역상칼럼(polymeric reversed-phase column)을 통과시킨 후 electrospray interface에 의해 이온화시킨 다음 질량분석기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액：스펙티노마이신 표준품을 정확히 달아 물에 녹여 100 μg/mL 가 되게 한다.

나) 표준용액：8 mM HFBA(heptafluorobutric acid)로 희석하여 0.125～12.5 μg/mL가 되게 한다.

다) Sep-Pak Vac tC18 카트리지

라) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

검체 5.0 mL에 30% TCA 0.25 mL를 넣고 혼합한 후 2,200 G에서 10분 동안 원심분리한다. 중간층(2.5±0.1 mL)을 주의깊게 취하여 20 mM HFBA 2 mL가 함유된 시험관에 옮긴다. 이 용액을 혼합한 후 미리 메탄올 2.5～3.0 mL, 8 mM HFBA 1.5 mL를 2회 통과시킨 Sep-Pak Vac tC18 카트리지에 적용한다. 이온쌍 추출물을 중력하에서 통과시키고 진공으로 카트리지를 건조시킨다. 메탄올：20 mM HFBA(4：1) 3 mL로 용출시키고 이 용출액을 50℃ 질소하에서 0.5 mL까지 농축시킨다. 물로 1.0 mL로 조정하여 5분동안 초음파처리한 후 0.2 μm 13 mm PVDF 시린지 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：PLRP-S(2.1 X 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：이동상 A：메탄올

이동상 B：물

이동상 C：20 mM HFBA

(3) 유속：0.23 mL/분(이동상 ABC의 혼합비 40：20：40)

나) 질량분석기(Ion trap)측정조건

Sheath gas(질소) flow rate, 86; auxiliary gas flow rate, 43; spray voltage, 5.50 kV; capillary temperature, 250℃; capillary voltage, 23.00 V; tube lens offset, 31.00 V

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 20 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 첨가검체에서 얻은 스펙티노마이신 피크의 면적 또는 높이와 농도에 대한 검량선을 작성한 후 검체 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

5.3.29.2 제2법

1) 시험법 적용범위

계란, 메추리알 등 알(卵)류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 스펙티노마이신을 구연산, 트리클로로초산, 디클로로메탄으로 추출하고 CBA-SPE 칼럼으로 정제, 농축한 후 유도체화하여 액체크로마토그래프/형광검출기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준용액：스펙티노마이신 표준품을 정확히 달아 물에 용해한 후 희석하여 최종 농도가 10 μg/mL 농도가 되게 한다.

나) 표준용액의 유도체화：기기 시스템은 두 개의 액체크로마토그래프 펌프, 자동주입기 그리고 액체크로마토그래프 칼럼 1과 칼럼 2와 연결되는 six-port switching unit 두 개를 갖는 valve-switching unit를 포함한다. 시험조작에서 칼럼 1은 이동상 2와 연결되고 칼럼 2는 이동상 1과 연결된다. 시스템에서 칼럼 후 유도체화는 이동상 3과 이동상 4가 만나서 2.2 m×0.5 mm 반응코일이 깔려있는 70℃의 수욕상에서 칼럼후 산화반응이 이루어진 다음 1.7 m×0.3 mm 반응코일이 깔려있는 25℃수욕상에서 유도체화가 이루어 지도록 한다.

다) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 첨가검체의 준비

음성대조검체 5 g에 스펙티노마이신 10 μg/mL 용액을 첨가하여 0.5 ppm 농도가 되게 한다.

나) 검체의 처리

50 mL 원심분리관에 담은 균질화한 검체 5.0 g에 25 mM 구연산 (pH 4.0) 25 mL과 10% 트리클로로초산용액 1 mL 그리고 10 mL 디클로로메탄을 가하여 교반기에서 20분간 혼합한 후에 4,000 G로 원심분리한다. 상층액을 여과지로 여과후에 1 M 수산화나트륨으로 pH를 6.7로 조정한다. 여과액을 미리 활성화시킨 카르복실산 SPE 칼럼에 약 분당 1 mL의 유속으로 통과시킨다. 이때 SPE 칼럼은 미리 메탄올 3 mL과 25 mM 인산칼륨완충용액(pH 6.7) 5 mL로 흘려주어 활성화시키고 마르지 않도록 주의한다. SPE 칼럼을 통과시킨 후 스펙티노마이신은 50 mM 구연산(pH 2.6) 3.5 mL로 용출시킨다. 용출액은 5 mL 유리관에 모아 10초간 혼합하고 2,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 여과하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 분석칼럼

(가) 칼럼1：integral dedicated 가드 칼럼(10 mm × 4.6 mm) 장착 Spherisorb SCX 칼럼(50 mm × 4.6 mm, 5 μm; Phase- Separation) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼2：Spherisorb SCX (4.6 mm × 250 mm, 5 μm; Phase-Separations) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상과 유속

(가) 이동상1：0.1 M 황산나트륨(pH 2.6):아세토니트릴(80:20), 0.80 mL/분

(나) 이동상2：0.15 M 인산칼륨완충용액(pH 3.5):아세토니트릴(80:20), 1.50 mL/분

(다) 이동상3：mL당 10 μL 하이포아염소산 나트륨(sodium hypochlorite)을 함유하는 1 mM 인산칼륨완충용액(pH 7.0), 0.25 mL/분

(라) 이동상4：0.5 M 붕산나트륨(pH 10.2), 0.75 mL/분

(마) 이동상5：3.0 mM OPA와 14 mM 2-머캅토에탄올을 함유하는 0.3 M 붕산나트륨(pH 10.2), 0.6 mL/분

(3) 측정파장：여기파장 362 nm, 형광파장 435 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 50 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 첨가검체에서 얻은 스펙티노마이신 피크의 면적 또는 높이와 농도에 대한 검량선을 작성한 후 검체 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

5.3.30 ∼ 5.3.31 (생  략)

5.3.32 아목시실린(Amoxicillin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

본 정량법은 칼럼전 유도체화법을 이용한다. 검체 중의 아목시실린을 물로 추출한 후 트리클로로초산(trichloroacetic acid)으로 불순물을 침전시키고 에테르로 다시 추출한 다음 유도체화하여 형광검출기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준용액：아목시실린 표준품을 정확히 달아 물에 용해한 후 희석하여 최종 농도가 10 μg/mL 농도가 되도록 한 다음 아래의 방법으로 유도체화하여 아목시실린의 머무름 시간을 확인한다.

나) 표준용액의 유도체화：50 mL 원심분리관에 위에서 조제한 표준용액 200 μL와 pH 2.0 완충용액 3 mL, 7% 포름알데히드 1.5 mL, 물 10 mL를 가한 후 진탕하여 혼합하고 95℃ 항온수조에서 140분간 반응시킨 다음 얼음에 5분간 방치하여 냉각 후 염화메틸렌(methylene chloride)과 메탄올이 95：5의 비율로 혼합된 용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕한 다음 3,500 rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 버리고 하층을 액체크로마토그래프에 주입한다.

다) pH 2.0 완충용액：염화칼륨 375 mg과 1.0 N 염산 1.3 mL를 가한 후 물로 100 mL가 되게 한다.

라) 7% 포름알데히드：37% 포름알데히드를 희석하여 조제

마) 기타 시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 검체의 준비

아목시실린을 검사할 균질화한 검체 15 g을 50 mL 원심분리관에 담는다. 이때 미리 준비한 아목시실린이 잔류하지 않는 검체도 동일하게 원심분리관 2개에 담는다. 이 중 1개의 원심분리관에는 10 μg/mL 농도의 아목시실린 표준용액을 15 μL 가하고(이 검체는 0.01 ppm 농도의 첨가검체이다.) 나머지 1개의 검체는 음성대조구로 하여 아래의 방법에 따라 각각의 검체를 처리한다.

나) 검체의 처리

물 20 mL를 시험관에 가하고 3분간 강하게 진탕하여 3,500 rpm에서 30분간 원심분리한 후 상층액을 다른 50 mL 원심분리관에 담는다. 1.5 g의 트리클로로초산(trichloroacetic acid)을 두 원심분리관에 가한 후 1분간 강하게 진탕하고 얼음에서 5～10분간 냉각하여 3,500 rpm에서 10분간 원심분리한 다음 상층액을 다른 50 mL 원심분리관에 모은다. 상층액을 모은 원심분리관에 에테르 15 mL를 가하고 20초간 강하게 진탕한 후 3,500 rpm에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 버리고 20% 트리클로로초산 1 mL, pH 2.0 완충용액 3 mL, 7% 포름알데히드 1.5 mL를 차례로 가하여 유리구슬 5～6개를 넣고 강하게 진탕한 후 95℃ 항온수조에서 140분간 반응시킨다. 이때 시험관의 마개를 열어 에테르가 휘발되어 완전히 제거되도록 한 후 마개를 느슨하게 닫는다. 이 작업은 후드에서 실시한다. 반응이 끝난 시험관을 얼음에서 5분간 냉각하고 에테르 15 mL를 가한 후 2분간 매우 약하게 혼합한 다음 3,500 rpm에서 10분간 원심분리 한다. 유리주사기를 이용하여 하층액(물층)을 제거한 후 60℃의 수조에서 질소로 에테르를 완전히 제거시키고 염화메틸렌과 메탄올이 95：5의 비율로 혼합된 용액 2 mL를 가해 용해한 다음 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：μ-Polasil(waters사, 300 mm × 3.9 mm, 10 μm) 또는 이와 동등한 것.

(2) 이동상：염화메틸렌：메탄올(95：5)

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：여기파장 362 nm, 형광파장 435 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 50 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 첨가검체에서 얻은 아목시실린 피크의 면적 또는 높이와 농도에 대한 검량선을 작성한 후 검체 중 아목시실린의 함량을 구한다.

5.3.33 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

5.3.34 ∼ 5.3.39 (생  략)

5.3.40 암프롤리움(Amprolium)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

5.3.41 ∼ 5.3.62 (생  략)

5.3.63 클렌부테롤(Clenbuterol)

1) 시험법 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 분해효소로 분해한 후 에틸아세테이트로 추출하거나 아세토니트릴과 에틸아세테이트를 넣어 추출하고 농축한 후 메탄올:물(20:80) 혼합용매를 넣어 용해한 다음 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 분해효소제：β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/ arylsulfatase)

라) 내부표준물질：클렌부테롤 D9 (Clenbuterol D9)

마) 표준원액：클렌부테롤 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다.

바) 표준용액：표준원액을 메탄올로 희석하여 10 ng/mL로 한다.

사) 내부표준용액：클렌부테롤 D9의 10 ng/mL 메탄올용액으로 한다.

아) 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0)：500 mL 메스플라스크에 1 M 인산일수소칼륨(K2HPO4) 용액 6.6 mL와 1 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 용액 43.4 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 0.1 M 트리스완충용액(Tris-buffer, pH 9.5)：Tris(hydroxymethyl)aminomethane 1.21 g을 100 mL 메스플라스크에 취하여 물로 녹여 표시선까지 채우고 염산을 넣어 pH 9.5로 한다.

차) Divinylbenzene-N-vinylpyrrolidone Copolymer (충진제) 카트리지 칼럼：HLB (Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 또는 이와 동등한 것

카) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)

균질화한 검체 5 g를 50 mL 원심분리관에 취하여 내부표준용액 400 μL를 넣고 초산 200 μL, 아세토니트릴 5 mL, 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 10분간 균질화한 후 4,000 G에서 5분간 원심분리한다. 상등액을 55℃에서 감압하여 농축하고 잔류물에 메탄올:물(20:80) 혼합용액 20 mL를 가하여 용해한 후 염산으로 pH 1.0으로 맞춘다. 이 액에 헵탄 3 mL를 가하여 섞은 다음 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 유기용매층(상층)은 제거하고 이 과정을 한 번 반복한다. 물층에 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH 7.0이 되도록 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 3 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 200 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유(乳)를 제외한 식품

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 내부표준용액 400 μL를 넣고, 0.1 M 트리스 완충용액(pH 9.5) 5 mL와 프로테아제(Protease) 5 mg을 넣어 60℃에서 16시간 반응시킨다. 실온까지 냉각한 후 초산 15 μL와 2 M 초산암모늄완충용액(pH 5.2) 1 mL를 넣고 분해효소제 40 μL를 가한다. 37℃에서 2시간 동안 가수분해한 후 포화염화나트륨용액 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액를 사용하여 pH 12로 조정한다. 이 용액에 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 진탕하고 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 2회 추출하고 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물에 메탄올:물(20:80) 혼합용액 20 mL를 가하여 용해한 후 염산으로 pH 1.0이 되도록 한다. 이 액에 헵탄 3 mL를 가하여 섞은 다음 4,000 G에서 5분간 원심분리하고 유기용매층(상층)은 제거하고 이 과정을 한 번 반복한다. 물층에 0.1 M 인산완충용액(pH 6.0) 2 mL를 넣고 10 M 수산화나트륨용액을 가하여 pH 7.0이 되도록 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 3 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지(충진제 200 mg)에 추출액을 흡착시키고 물 3 mL로 세척한 후 메탄올 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C18(1.5 mm× 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도：40℃

(다) 이동상

① 이동상 A：물:아세토니트릴(95:5) 용액에 10 mM 초산암모늄이 되도록 녹인 후 초산으로 pH 4.3으로 조정한다.

② 이동상 B：아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	100	0
2.0	100	0
6.0	10	90
8.0	0	100

(라) 유속：0.15 mL/분

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Capillary Temperature：330℃

(다) Collision gas：아르곤(Ar)

(라) Collision energy：16 V

7) 정량시험

가) 표준용액을 0, 20, 40, 100, 200, 400 μL를 시험관에 취하고 각각 내부표준용액 400 μL를 넣고 질소농축한 후 메탄올:물(10:90) 혼합용액 2 mL에 녹인 용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특정이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 내부표준물질 클렌부테롤 D9의 m/z 204 이온에 대한 클렌부테롤 m/z 203 이온의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 클렌부테롤의 함량을 구한다.

물질	Precursor Ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
클렌부테롤	277	203, 259
클렌부테롤 D9	286	204, 268

나) 정량한계

(1) 유(乳)：0.05 μg/kg

(2) 유(乳)를 제외한 식품：0.2 μg/kg

5.3.64 ∼ 5.3.86 (생  략)

5.3.87 락토파민(Ractopamine)

5.3.88 ∼ 5.3.95 (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

[별표 1] ∼ [별표 3] (생  략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이민옥타딘(Iminoctadine)

(생  략)

<신  설>

(2) (생  략)

(3) 글리포세이트(Glyphosate)

(생  략)

감	0.2

배	0.2

사과	0.2

<신  설>

<신  설>

(4) 나프로파마이드(Napropamide)

(생  략)

<신  설>

(5) ∼ (7) (생  략)

(8) 다이아지논(Diazinon)

(생  략)

<신  설>

(9) 델타메쓰린(Deltamethrin)

(생  략)

감	0.5

배	0.5

사과	0.5

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(10) ∼ (20) (생  략)

(21) 디크로보스(Dichlorvos : DDVP)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(22) ∼ (25) (생  략)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(생  략)

<신  설>

(27) ∼ (28) (생  략)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(생  략)

양송이	0.1

느타리버섯	0.1

<신  설>

(30) 리누론(Linuron)

(생  략)

<신  설>

(31) 마이클로부타닐(Myclobutanil)

(생  략)

감	0.5

배	0.5

사과	0.5

<신  설>

(32) 말라치온(Malathion)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(33) ∼ (34) (생  략)

(35) 메소밀(Methomyl)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(36) ∼ (37) (생  략)

(38) 메타락실(Metalaxyl)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

<신  설>

(39) ∼ (49) (생  략)

(50) 베나락실(Benalaxyl)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(51)  ∼ (62) (생  략)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(생  략)

배추	10.0,

<신  설>

(64) ∼ (65) (생  략)

(66) 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin)

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

(67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(68) ∼ (70) (생  략)

(71) 아미트라즈(Amitraz)

(생  략)

감	0.2

배	0.5

사과	0.5

<신  설>

(72) (생  략)

(73) 아세페이트(Acephate)

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

(74) ∼ (77) (생  략)

(78) 알라클로르(Alachlor)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(79) ∼ (84) (생  략)

(85) 에토펜프록스(Etofenprox)

(생  략)

감	1.0

배	1.0

배추	2.0

배추(건조)	7.0

사과	1.0

호밀	0.05

<신  설>

(86) ∼ (96) (생  략)

(97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen)

(생  략)

감	0.05

배	0.05

사과	0.05

<신  설>

<신  설>

(98) ∼ (110) (생  략)

(111) 카바릴(Carbaryl)

(생  략)

<신  설>

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(생  략)

쌀	0.05

참다래(키위)	0.5

<신  설>

(113) ∼ (130) (생  략)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(생  략)

감	0.5

배	0.5

사과	1.0

<신  설>

<신  설>

(132) 클로르피리포스-메틸(Chlorpyrifos-methyl)

(생  략)

배추	0.2

<신  설>

(133) 터부코나졸(Tebuconazole)

(생  략)

감	1.0

(134) ∼ (147) (생  략)

(148) 트리풀루라린(Trifluralin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(149) 트리프루미졸(Triflumizole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(150) (생  략)

(151) 티오디카브(Thiodicarb)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

(152) 티오벤카브(Thiobencarb)

(생  략)

<신  설>

(153) ∼ (160) (생  략)

(161) 페녹사프로프-에칠(Fenoxaprop-ethyl)

(생  략)

<신  설>

(162) (생  략)

(163) 펜디메타린(Pendimethalin)

(생  략)

배추	0.2

마늘	0.2

<신  설>

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(생  략)

감	1.0

배	2.0

배추	1.0

사과	2.0

<신  설>

<신  설>

(165) ∼ (167) (생  략)

(168) 펜치온(Fenthion : MPP)

(생  략)

쌀	0.1

(169) (생  략)

(170) 펜토에이트(Phenthoate : PAP)

(생  략)

배추	0.1

<신  설>

<신  설>

(171) ∼ (177) (생  략)

(178) 폭심(Phoxim)

(생  략)

<신  설>

(179) ∼ (182) (생  략)

(183) 풀루아지호프-부틸(Fluazifop-butyl)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(184) ∼ (187) (생  략)

(188) 프로파모카브(Propamocarb)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

<신  설>

(189) (생  략)

(190) 프로페노포스(Profenofos)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(191) ∼ (195) (생  략)

(196) 피리미포스-메틸(Pirimiphos-methyl)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(197) ∼ (199) (생  략)

(200) 헥사코나졸(Hexaconazole)

(생  략)

마늘(풋마늘포함)	0.05

(201) ∼ (205) (생  략)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(생  략)

배추	0.5

배추(건조)	3.0

오이	0.1

<신  설>

(207) 테부페노자이드(Tebufenozide)

(생  략)

감	0.5

배	0.7

배추	1.0

사과	0.7

<신  설>

<신  설>

(208) (생  략)

(209) 테프루벤주론(Teflubenzuron)

(생  략)

엇갈이배추	0.2

딸기	0.2

(210) ∼ (211) (생  략)

(212) 플루페녹수론(Flufenoxuron)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(213) 피라크로포스(Pyraclofos)

(생  략)

배추	0.1

<신  설>

(214) 피리다벤(Pyridaben)

(생  략)

<신  설>

(215) ∼ (217) (생  략)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(생  략)

배추	2.0

배추(건조)	7.0

<신  설>

(219) ∼ (220) (생  략)

(221) 디치아논(Dithianon)

(생  략)

<신  설>

(222) ∼ (223) (생  략)

(224) 싸이목사닐(Cymoxanil)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

<신  설>

(225) 싸이프로디닐(Cyprodinil)

(생  략)

<신  설>

(226) (생  략)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(생  략)

배추	3.0

배추(건조)	10.0

<신  설>

(228) ∼ (236) (생  략)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(생  략)

<신  설>

(238) (생  략)

(239) 후루아지남(Fluazinam)

(생  략)

<신  설>

(240) ∼ (241) (생  략)

(242) 루페누론(Lufenuron)

(생  략)

배추	0.2

<신  설>

(243) 메타벤즈티아주론(Methabenzthiazuron)

(생  략)

보리	0.1

양파	0.1

<신  설>

(244) ∼ (245) (생  략)

(246) 스피노사드(Spinosad)

(생  략)

<신  설>

(247) (생  략)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(생  략)

<신  설>

(249) 에마멕틴 벤조에이트

(Emamectin benzoate)

(생  략)

배추	0.05

<신  설>

(250) ∼ (253) (생  략)

(254) 카보설판(Carbosulfan)

(생  략)

배추	0.3

<신  설>

(255) 파목사돈(Famoxadone)

(생  략)

배추	1.0

(256) ∼ (289) (생  략)

(290) 인독사카브(Indoxacarb)

(생  략)

<신  설>

(291) 족사마이드(Zoxamide)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

(292) ∼ (296) (생  략)

(297) 테트라코나졸(Tetraconazole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(298) ∼ (301) (생  략)

(302) 포세틸-알루미늄(Fosetyl-aluminium)

(생  략)

배추	20.0

<신  설>

(303) (생  략)

(304) 프로베나졸(Probenazole)

(생  략)

<신  설>

(305) ∼ (307) (생  략)

(308) 플루설파마이드(Flusulfamide)

(생  략)

<신  설>

(309) ∼ (320) (생  략)

(321) 디노테푸란(Dinotefuran)

(생  략)

<신  설>

(322) ∼ (323) (생  략)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(생  략)

감귤	0.1

<신  설>

<신  설>

(325) 시아조파미드(Cyazofamid)

(생  략)

배추	2.0

(326) ∼ (332) (생  략)

(333) 테부피림포스(Tebupirimfos)

(생  략)

<신  설>

(334) (생  략)

(335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(336) (생  략)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(338) 티아클로프리드(Thiacloprid)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

<신  설>

(339) ∼ (348) (생  략)

(349) 노발루론(Novaluron)

(생  략)

<신  설>

(350) ∼ (355) (생  략)

(356) 에타복삼(Ethaboxam)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(357) 에틸렌비스디치오카바메이트

(EBDC[Ethylenebis(dithio-carbamate)s])

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

(358) 이프로발리카브(Iprovalicarb)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(359) ∼ (360) (생  략)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(362) ∼ (369) (생  략)

(370) 벤티아발리카브아이소프로필

(Benthiavalicarb-isopropyl)

(생  략)

배추	1.0

<신  설>

(371) 디니코나졸(Diniconazole)

(생  략)

배추	0.3

<신  설>

(372) ∼ (379) (생  략)

(380) 피리다릴(Pyridalyl)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(381) ∼ (387) (생  략)

(388) 시안화 수소(Hydrogen cyanide)

(생  략)

<신  설>

(389) ∼ (390) (생  략)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

(생  략)

<신  설>

(392) (생  략)

(393) 메트알데히드(Metaldehyde)

(생  략)

<신  설>

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(생  략)

배추	1.0

<신  설>

(395) 플루오피콜라이드(Fluopicolide)

(생  략)

배추	1.0

<신  설>

(396) ∼ (402) (생  략)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

<신  설>

(404) ∼ (407) (생  략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생  략)

배추	1.0

<신  설>

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(411) ∼ (415) (생  략)

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

(418) (생  략)

(419) 프로헥사디온-칼슘

(Prohexadione-Calcium)

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

(418)～(422) (생  략)

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(424) ∼ (426) (생  략)

(427) 이미시아포스(Imicyafos)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (10) (생  략)

(11) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(생  략)

수삼	0.5

인삼농축액	2.0

홍삼농축액	2.0

(12) ∼ (67) (생  략)

[별표 6]  (생  략)

〔별표7〕식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (118) (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(현행과 같음)

31) 식품공전에 정하고 있는 식품 중 잔류 농약 및 동물용의약품 시험법에서 정량한계 미만은 불검출로 처리한다.

(현행과 같음)

1 ∼ 4.1.2.1 (현행과 같음)

(현행과 같음)

1) ∼ 4) 가) (현행과 같음)

나) 일회용 카트리지：플로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

4) 다) ∼ 6) 나 (2) (현행과 같음)

(3) LC-MS

(가) 칼럼：C18(100 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상：A(물 + 0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄), B(99% 아세토니트릴 +  0.1% 포름산, 2 mM 아세트산암모늄)

- A/B(90/10, v/v)에서 (10/90, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분이상 흘려보낸다.

(다) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(라) 칼럼 온도 : 40℃

(마) 주입량 : 2 μL

(바) 이온화 : ESI positive 또는 negative-ion mode

7) ∼ 8) (현행과 같음)

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(201종)

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(85종)

주7) (현행과 같음)

4.1.2.3 ∼ 4.1.3 (현행과 같음)

4.1.3.1 디코폴(Dicofol), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon)

4.1.3.2 (현행과 같음)

4.1.3.3 이소프로카브(Isoprocarb, MIPC) 및 카바릴(Carbaryl, NAC)

4.1.3.4 ∼ 4.1.3.11 (현행과 같음)

4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin)

1) 시험법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 레피멕틴을 메탄올로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아바멕틴(B1a 및 B1b), 밀베멕틴(A3 및 A4) 및 레피멕틴(A3 및 A4) 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh) 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 아미노 프로필 카트리지 : 아민(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

(곡류 및 콩류 등 지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 50 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴 층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.)

나) 정제

(1) 플로리실 정제 : 안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 메탄올/에틸아세테이트 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

(2) 아민 카트리지 정제 : 미리 헥산 10 mL로 활성화한 아민 카트리지에 상기 헥산 용액을 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 톨루엔 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고 디클로로메탄 10 mL와 아세톤/디클로로메탄 혼합액(20/80, v/v) 5 mL로 2회 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 후 갈색 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 245 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

2

1

3

4

5

6

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1：아바멕틴 B1b (13.0분),

2：아바멕틴 B1a (17.0분),

3：밀베멕틴 A3 (16.9분),

4 : 레피멕틴 A3 (19.7분),

5 : 밀베멕틴 A4 (22.8분),

6 : 레피멕틴 A4 (25.8분)

라) 정량한계

아바멕틴 B1a (0.02 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A4 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아바멕틴, 밀베멕틴, 레피멕틴을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

※ 레피멕틴은 아래 A 및 B의 이동상(40/60, v/v)을 사용

A : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 물

B : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(90/10)

(3) 이동상 유량 : 0.4 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI negative-ion mode

※ 레피멕틴은 ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 300∼1,000 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
아바멕틴 B1b	8.0	858	857
아바멕틴 B1a	9.8	872	871
밀베멕틴 A3	10.6	528	527
밀베멕틴 A4	13.6	542	541
레피멕틴 A3	6.0	705	728
레피멕틴 A4	6.5	720	743

4.1.3.13 ∼ 4.1.3.29 (현행과 같음)

4.1.3.30 카보후란(Carbofuran 및 3-Hydroxycarbofuran), 벤푸라카브(Benfuracarb), 카보설판(Carbosulfan) 및 푸라치오카브(Furathiocarb)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 곡류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브를 0.25 N 염산 수용액으로 환류 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 카보후란과 3-수산화카보후란 표준원액을 1:2의 농도 비율이 되도록 아세토니트릴에 녹여 표준 혼합용액을 조제하고 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다. 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

사) 추출용액 : 0.25 N 염산 수용액

아) 여과 보조제 : Hyflo-SuperCel 또는 Celite 545를 전처리 과정 없이 그대로 사용한다.

자) 층 분리 보조제 : sodium lauryl sulfate 4%(w/v) 수용액

차) 검체보정(matrix-matched) 표준용액 : 카보후란/3-수산화카보후란 표준 혼합용액과 검체별 무처리 시료용액을 혼합, 카보후란 기준으로 최종 농도 0.005～0.1 mg/L이 되도록 희석한다. 즉, 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에 녹인 무처리 시료 2배 농축액, 아세토니트릴에 조제한 최종 농도의 10배 농도에 해당하는 표준 혼합용액, 물을 5:1:4(v/v/v)의 비율로 정확히 혼합하여 검체보정 표준용액을 조제하고 LC/MS 검량용으로 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상의 현미는 10 g, 콩류는 5 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 증류플라스크 넣고, 0.25 N 염산 수용액 150 mL를 가하여 가열, 1시간동안 환류 추출한다. 이 과정에서 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 카보후란으로 정량적으로 전환, 추출된다. 플라스크를 신속히 방냉한 후 여분의 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 냉각관 입구로부터 플라스크로 흘려 넣어 냉각관 및 플라스크 입구를 세척하여 환류 추출액과 합친다. 아세톤 20 mL를 가하여 잘 혼합하고(현미 및 대두의 경우 여과보조제 2 g을 추가로 첨가하고 혼합), 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과한다. 플라스크 벽면을 아세톤 5 mL로 씻어 내려 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 가하여 혼합한 후 흡인 여과, 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 염화나트륨 20 g을 첨가하고 완만하게 흔들어 완전히 녹인다. 수용액층을 디클로로메탄 100 mL 및 50 mL로 2회 분배 추출한다(층 분리가 잘 안될 때에는 층분리 보조제 1～5 mL를 첨가하고 가볍게 흔든 후 정치). 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(30/70, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(15/85, v/v)에서 아세토니트릴/물(60/40, v/v)로 15분간 직선적으로 농도 구배조건으로 흘린 후 10분간 아세토니트릴/물(60/40, v/v)을 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1 : 3-수산화카보후란(10.7분),

2 : 카보후란(18.6분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 카보후란, 3-수산화카보후란을 확인한다.

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
카보후란	18.6	221	222
3-수산화카보후란	10.7	237	238, 220

4.1.3.31 피로퀼론(Pyroquilon) 및 트리싸이클라졸(Tricyclazole)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피로퀼론과 트리싸이클라졸을 메탄올로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피로퀼론 및 트리싸이클라졸 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 30분간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 균질기 컵 및 잔류물을 메탄올 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL, 물 250 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층을 1 L 용량 분액깔때기에 옮기고 헥산층은 버린다. 수용액층에 포화식염수 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 추출액 10 mL를 가하고 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 내려 버린다.

(1) 피로퀼론 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(15/85, v/v) 40 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v) 10 mL로 용해한다.

(2) 트리사이클라졸 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)  10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 피로퀼론 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸 아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.8 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 피로퀼론 256 nm, 트리사이클라졸 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피로퀼론(12.2분), 2 : 트리사이클라졸(12.1분)

라) 정량한계

피로퀼론 (0.02 mg/kg), 트리사이클라졸 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피로퀼론, 트리사이클라졸을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 피로퀼론-아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸-아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 70 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
피로퀼론	7.4	173	174
트리사이클라졸	7.3	189	190

4.1.3.32 클로로타로닐(Chlorothalonil), 캡탄(Captan), 폴펫(Folpet) 및 캡타폴(Captafol)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴을 아세톤 및 3% 인산용액으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MSD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫, 캡타폴 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 25 g)를 정밀히 달아 넣고, 물 20 mL를 넣고 습윤화한다. 아세톤 100 mL와 3% 인산용액 5 mL를 가하여 2분간 균질화한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 넣고 용해하여 분액깔대기에 옮기고 물 450 mL와 포화식염수 50 mL, 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 15 g을 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL으로 재용해하여 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/48.5/1.5, v/v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐온도 : 160℃(Chlorotalonil, Captan, Folpet), 200℃(Captafol)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

4

1 : 클로로타로닐(5.8분),

2 : 캡탄(13.5분),

3 : 폴펫(14.4분),

4 : 캡타폴(9.3분)

라) 정량한계

클로로타로닐(0.002 mg/kg), 캡탄, 폴펫, 캡타폴(0.008 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫, 캡타폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1ms(50 m × 0.25 mm, 0.32 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 240℃

(5) 주입모드 : split mode(30:1)

(6) 주입량 : 1 μL

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로로타로닐	6.0	266	109, 266
캡탄	10.2	301	79, 149, 301
폴펫	10.6	295	76, 104, 260, 295
캡타폴	12.8	347	79, 151, 347

4.1.3.33 알드린(Aldrin), BHC(α, β, γ-BHC and δ-BHC), DDT(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE and p,p'-DDD), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin 및 δ-Keto-endrin), 엔도설판(α-Endosulfan, β-Endosulfan, Endosulfan sulfate), 클로르단(cis-Chlordane 및 trans-Chlordane) 및 헵타크로(Heptachlor 및 Heptachlor epoxide)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 견과종실류, 버섯류, 콩류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC,및cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE, p,p'-DDD, α-endosulfan, β-endosulfan, endosulfan sulfate, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor 및 heptachlor epoxide의 농도비는 각각 1, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD 및 endosulfan sulfate의 농도비는 각각 2가 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)로 2분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액 (50/0.3/49.7, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.)

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 320℃

(6) 주입모드 : split mode(20:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

α-BHC(12.1분), β-BHC(12.7분), γ-BHC(12.9분), δ-BHC(13.4분), heptachlor(14.5분), aldrin(15.4분), heptachlor epoxide(16.5분), trans-chlordane(17.3분), α-endosulfan(17.7분), cis-chlordane(17.8분), p,p'-DDE(18.6분), dieldrin(18.7분), endrin(19.5분), β-endosulfan(19.9분), p,p'-DDD(20.2분), o,p'-DDT(20.4분), endosulfan sulfate(21.7분), p,p'-DDT(21.9분), δ-keto-endrin(23.8분)

라) 정량한계

aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide(0.005 mg/kg), p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD, endosulfan sulfate(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 알드린, 디엘드린, 비에치씨, 클로르단, 디디티, 엔도설판, 엔드린, 헵타크로를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.9 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 :	300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50 ∼ 500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온 (m/z)
α-BHC	12.1	288	219, 217, 181
β-BHC	12.7	288	219, 217, 181
γ-BHC	12.9	288	219, 217, 181
δ-BHC	13.4	288	219, 217, 181
Heptachlor	14.5	370	272, 100
Aldrin	15.4	362	263, 66
Heptachlor epoxide	16.5	386	353, 81
trans-Chlordane	17.3	406	375, 373
α-Endosulfan	17.7	404	241, 195
cis-Chlordane	17.8	406	375, 373
p,p'-DDE	18.6	316	318, 246
Dieldrin	18.7	378	277, 263, 79
Endrin	19.5	378	345, 317, 263
β-Endosulfan	19.9	404	338, 195
p,p'-DDD(TDE)	20.2	318	237, 235, 165
o,p'-DDT	20.4	352	237, 235, 165
Endosulfan sulfate	21.7	420	274, 272, 229
p,p'-DDT	21.9	352	237, 235, 165
δ-keto-Endrin	23.8	378	317, 67

4.1.3.34 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide), 테부페노자이드(Tebufenozide) 및 크로마페노자이드(Chromafenozide)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣고 혼합한다. 다시 아세톤 100 mL를 넣은 후 2분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하여 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL, 포화식염수 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL로 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산:에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 증류수: 메탄올(33/67, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/메탄올 혼합액(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 225 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메톡시페노자이드(10.4분), 크로마페노자이드(11.2분), 테부페노자이드(13.0분)

라) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 메탄올(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200～500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
메톡시페노자이드	11.6	368	391
크로마페노자이드	13.7	394	417
테부페노자이드	18.3	352	375

4.1.3.35 훼녹시카브(Fenoxycarb), 피리프록시펜(Pyriproxyfen) 및 메토프렌(Methoprene)

1) 시험법 적용범위

과일류, 견과종실류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 훼녹시카브, 메토프렌, 피리프록시펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 훼녹시카브, 피리프록시펜 및 메토프렌 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : 훼녹시카브는 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v), 메토프렌 및 피리프록시펜은 아세토니트릴/물 혼합액(90/10, v/v)에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 데시게이터에서 보관․사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 40 mesh를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄/헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 메코프렌과 피리프록시펜은 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 150 mL, 훼녹시카브는 에틸아세테이트/헥산 혼합액(15/85, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 각각 아세토니트릴/물 90/10(v/v) 및 65/35(v/v) 혼합액 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 230 nm(훼녹시카브 및 피리프록시펜), 265 nm(메토프렌)

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피리프록시펜(8.9분),

2 : 훼녹시카브(9.5분),

3 : 메토프렌(11.4분)

라) 정량한계

훼녹시카브(0.04 mg/kg), 피리프록시펜(0.04 mg/kg), 메토프렌(0.04 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 훼녹시카브, 피리프록시펜, 메토프렌을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 아세토니트릴/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 이온화 : ESI positive-ion mode

(6) 주입량 : 5 μL

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
훼녹시카브	6.0	301	302
피리프록시펜	5.4	321	322
메토프렌	4.9	310	279

4.1.3.36 페노트린(Phenothrin) 및 실라프루오펜(Silafluofen)

1) 시험법 적용범위

과일류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 페노트린과 실라프루오펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

다) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 페노트린(cis 및 trans 이성질체의 혼합물) 및 실라프루오펜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액(80/20, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관 ․ 사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기 상에서 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 가하여 분배 추출하여 아세토니트릴층을 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 헥산포화아세토니트릴 30 mL씩을 다시 가하여 분배 추출과정을 2회 반복한다. 합친 아세토니트릴 추출액을 40℃에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.)

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 4 mL에 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액[(65/35, v/v)에서 (95/5, v/v)]을 30분간 직선적으로 농도구배한다.

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1, 2 : 페노트린(cis 및 trans; 15.0분, 15.4분), 3 : 실라프루오펜(21.2분)

라) 정량한계

페노트린(0.02 mg/kg), 실라프루오펜(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페노트린, 실라프루오펜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(75/25, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온 (m/z)
페노트린	13.6(cis), 14.3(trans)	350	351

나) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린 및 실라프루오펜)

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 50℃에서 2분간 유지하고 20℃/min 비율로 240℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한 후, 3℃/min 비율로 280℃까지 온도를 상승시킨다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 검체 조제 : 아세토니트릴에 녹인 최종 검체용액 0.8 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 헥산 1 mL에 재용해한다.

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온 (m/z)
페노트린	18.1 (cis), 18.3 (trans)	350	183, 123
실라프루오펜	24.2	408	286, 179

4.1.3.37 아크리나쓰린(Acrinathrin), 비펜스린(Bifenthrin), 싸이클로프로스린(Cycloprothrin), 테플루스린(Tefluthrin) 및 할펜프록스(Halfenprox)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 콩류, 서류, 견과종실류, 곡류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스, 테플루스린을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체/액체크로마토그래프-질량분석기(GC/LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린(부분입체이성질체의 혼합물), 할펜프록스 및 테플루스린 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스 및테플루스린의 농도비가 2.5:2.5:10:10:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에	녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관⦁사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 증류수 450 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액 (25/75, v/v) 50 mL로 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm , 0.5 μm)  또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 싸이클로프로스린), 220℃(테플루스린)

(4) 오븐 온도 : 220℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스), 240℃(싸이클로프로스린), 160℃(테플루스린)

(5) 검출기온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

5

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 싸이클로프로스린(15.9분),

2 : 아크리나쓰린(17.9분)

3 : 테플루쓰린(18.6분),

4 : 비펜스린(22.8분),

5 : 할펜프록스(24.2분)

라) 정량한계

아크리나쓰린(0.005 mg/kg), 비펜스린(0.005 mg/kg), 싸이클로프로스린(0.02 mg/kg), 할펜프록스(0.02 mg/kg), 테플루스린(0.002 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체/액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기상의 측정 조건(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 테플루스린)

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 50℃에서 2분간 유지, 180℃까지 20℃/분 속도로 직선적 승온, 2분간 유지한 후 280℃까지 5℃/분 속도로 직선적 승온한다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아크리나쓰린	27.0	541	181, 208, 289
비펜스린	24.5	422	181, 166
할펜프록스	30.0	476	263, 265, 183
테플루스린	13.5	418	177, 197

나) 액체크로마토그래프-질량분석기상의 조건(싸이클로프로스린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 20 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltae : 100 V

(8) 검체 조제 : 헥산에 녹인 최종 검체용액 2 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 2 mL로 재용해한다.

4.1.3.38 비페닐(Biphenyl), 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl), 디클로사이메트(Diclocymet), 이소자디펜에틸(Isoxadifen-ethyl), 이소자플루톨(Isoxaflutole), 모노리누론(Monolinuron), 메토미노스트로빈(Metominostrobin) 및 노나클로르(Nonachlor)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하여 활성탄/아미노프로필 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 활성탄/아미노프로필 카트리지 : 활성탄(0.5 g)과 아미노프로필(0.5 g)이 2층으로 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g, 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가하여 혼합하여 2시간 동안 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 2분간 고속 마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출하고 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 미리 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액 (75/25, v/v) 2 mL에 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴 층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL로 재용해한다.)

나) 정제

활성탄/아미노프로필 카트리지에 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL를 고정상 상단에 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 15 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한다. 검체별 최종 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 아세톤 10 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 메탄올 10 mL로 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 비페닐(9.9분), 2. 디클로사이메트(17.5, 17.8분), 3. 노나클로르(18.2, 19.3분), 4. 메토미노스트로빈(18.3, 18.7분), 5. 이소자디펜에틸(19.7분)

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 모노리누론(11.7분),

2. 이소자플루톨(13.1분),

3. 클로퀸토셋멕실(18.9분)

마) 정량한계

비페닐(0.025 mg/kg), 클로퀸토셋멕실(0.02 mg/kg), 디클로사이메트(0.025 mg/kg), 이소자디펜에틸(0.025 mg/kg), 이소자플루톨(0.02 mg/kg), 메토미노스트로빈(0.05 mg/kg), 모노리누론(0.02 mg/kg), 노나클로르(0.025 mg/kg), 옥시카르복신(0.02 mg/kg)

6) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7) 확인시험

기체/액체 크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 80℃에서 2분간 정치하고 280℃까지 10℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
비페닐	9.9	154	154, 153
디클로사이메트	17.5, 17.8	312	277, 221, 173
노나클로르	18.2, 19.3	440	409, 411, 407
메토미노스트로빈	18.3, 18.7	284	191, 238, 196
이소자디펜에틸	19.7	295	295, 294, 204

나) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액을 35/65(v/v)에서 2분간 정치 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
옥시카르복신	5.5	267	268
모노리누론	11.7	214	215
이소자플루톨	13.1	359	360, 251
클로퀸토셋멕실	18.9	335	336, 238

4.1.3.39 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 사이클아니리드(Cyclanilide), 디클로슐람(Diclosulam), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac), 이옥시닐(Ioxynil), 이소카바미드(Isocarbamid), 레나실(Lenacil), 메펜피르(Mefenpyr), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid) 및 트랄콕시딤(Tralkoxydim)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 녹도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 실리카겔 카트리지 : 실리카겔(0.5 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g. 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류 등 건조 검체는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가한 후 2시간 동안 방치), 0.01 M 염산수용액 20 mL와 아세토니트릴 100 mL를 가하여 20분간 진탕(300 rpm)하여 추출한 후 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 여액 중 수분에 충분히 포화되도록 염화나트륨 50 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 12 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. 즉, C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 추출액 10 mL를 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 20 mL(클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락 분석 시에는 5 mL)를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL에 재용해한다.)

나) 정제

(1) 클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액 (20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 12 mL를 유출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 5 mL를 가하여 용해한다.

(2) 클로퀸토셋 및 메펜피르

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 용출액과 합치고 여기에 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 20 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

(3) 클로란슐람메틸 등 나머지 농약

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL과 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로퀸토셋(5.4분),

2. 메펜피르(17.2분)

3

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 플루멧슐람(2.5분),

2. 플로라슐람(3.3분),

3. 이소카바미드(5.2분),

4. 클로란슐람메틸(8.2분),

5. 디클로슐람(8.7분)

6. 레나실(12.4분),

7. 트랄콕시딤(13.5분)

그림 3. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로프로프(5.0분),

2. 플루미클로락(10.1분),

3.클로메프로프에시드(11.4분)

그림 4. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 초산나프탈렌(4.6분),

2. 이옥시닐(9.9분),

3. 사이클아니리드(11.3분)

마) 정량한계

클로메프로프에시드(0.05 mg/kg), 클로프로프(0.05 mg/kg), 클로퀸토셋(0.05 mg/kg), 클로란슐람메틸(0.05 mg/kg), 사이클아니리드(0.05 mg/kg), 디클로슐람(0.05 mg/kg), 플로라슐람(0.05 mg/kg), 플루멧슐람(0.05 mg/kg), 플루미클로락(0.05 mg/kg), 이옥시닐(0.05 mg/kg), 이소카바미드(0.05 mg/kg), 레나실(0.05 mg/kg), 메펜피르(0.05 mg/kg), 초산나프탈렌(0.05 mg/kg), 트랄콕시딤(0.05 mg/kg)

6) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(35/65, v/v)에서 2분간 유지한 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode 및 negative-ion mode

(7) Cone voltage : 30～50 V(이온화 방식 및 농약별로 최적화한 값을 사용한다.)

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간 (분)	분자량(MW)	ESI mode	이온 (m/z)
플루멧슐람	2.5	325	Positive	326
플로라슐람	3.3	359	Positive	360
초산나프탈렌	4.6	186	Negative	141, 185
클로프로프	5.0	200	Negative	127, 129
이소카바미드	5.2	185	Positive	186
클로퀸토셋	5.4	237	Positive	238, 240
클로란슐람메틸	8.1	429	Positive	430, 398
디클로슐람	8.7	405	Positive	406
이옥시닐	9.9	371	Negative	370
플루미클로락	10.1	353	Negative	294, 352, 296
사이클아니리드	11.3	273	Negative	272, 228
클로메프로프에시드	11.4	248	Negative	247, 175
레나실	12.4	234	Positive	153
트랄콕시딤	13.5	329	Positive	284, 330
메펜피르	17.2	316	Positive	327, 329

4.1.4 ∼ 4.1.4.8 (현행과 같음)

4.1.4.9 클로르프로팜(Chlorpropham)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 콩류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로르프로팜을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로르프로팜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L 가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 1시간 동안 진탕 추출(180 rpm 이상)한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 메탄올에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 200 μL를 첨가하고 35℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 증류수 50 mL과 헥산 100 mL로 차례로 씻어  포화식염수 50 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층은 별도의 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 35℃ 이하에서 감압농축하여 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출'로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 35℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 240 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

클로르프로팜(11.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로르프로팜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로르프로팜	4.2	213	214

4.1.4.10 ∼ 4.1.4.42 (현행과 같음)

4.1.4.43 도딘(Dodine)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 도딘을 아세토니트릴로 추출하고 포스트칼럼 유도체 반응장치 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD) 및 포스트칼럼 유도체 반응장치를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 도딘 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 과염소산나트륨(sodium perchlorate) 용액 : 14.1 g의 과염소산나트륨, 400 mg의 수산화나트륨 및 1.8 mL의 락트산(lactic acid, DL racemate)을 물에 함께 녹여 1 L로 한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(과일류 및 채소류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 3분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 100 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 물을 가하여 총 부피를 240 mL로 조절, 혼합한 후 이 중 120 mL(시료 10 g 해당량)를 취해 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 에틸아세테이트 100 mL로 씻어 내리고 10% 염화나트륨 수용액 100 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 에틸아세테이트층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 메탄올 2 mL로 재용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/과염소산나트륨수용액 혼합액(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 여기파장(Ex) 395 nm, 형광파장(Em) 500 nm

(6) 주입량 : 20 μL

(7) 포스트칼럼 유도체 반응액

1차 펌프 이송액 : 0.5 M 수산화나트륨 수용액 0.2 mL/min

2차 펌프 이송액 : 0.3% ninhydrin 수용액 0.1 mL/min

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

도딘(12.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 도딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(50 mm × 3.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산 암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
도딘	3.2	287	288

분석을 위한 특성이온

4.1.4.44 ∼ 4.1.4.58 (현행과 같음)

4.1.4.59 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 에마멕틴 벤조에이트를 아세톤으로 추출하고 에틸아세테이트로 분배, 추출한 후 트리에칠아민과 trifluoroacetic anhydride로 유도체화하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 에마멕틴 벤조에이트 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량 취하여 5) 시험용액의 조제에 따라 실험(유도체화 과정)하고 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 분액깔때기에 미리 포화식염수 50 mL를 넣고 잔류물을 물 50 mL로 용해하고 다시 에틸아세테이트 100 mL로 용해하여 합친 후, 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받고 수용액층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 분배 추출하여 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL로 재용해하고 그 중 1 mL를 취하여 2 mL 바이알에 담아 질소 가스로 농축한다. 잔류물을 0.5 M 트리에칠아민 0.5 mL를 가하여 용해한 후 0.5 M trifluoroacetic anhydride 0.5 mL를 가하여 볼텍스 믹서로 약 30초간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 메탄올/물(97/3, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 여기파장(Ex) 365 nm, 형광파장(Em) 470 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에마멕틴 벤조에이트(15.8분)

라) 정량한계

0.004 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

4.1.4.60 ∼ 4.1.4.74 (현행과 같음)

4.1.4.75 아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아시벤졸라-에스-메칠을 메탄올로 추출하고 염산을 이용하여 디클로르메탄으로 산-염기 분배, 추출한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아시벤졸라-산 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량 취하여 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 물 16 mL와 1 N 수산화나트륨 4 mL를 가하여 60℃의 항온조(60 rpm)에서 1시간 동안 반응하여 공기 중에서 상온까지 식힌 후 메탄올 100 mL, 염화칼슘 2 g을 가하여 1시간 동안 진탕추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 20 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 메탄올을 이용하여 150 mL로 맞춘다. 이 중 60 mL를 취하여 분액깔때기에 옮겨 포화식염수 50 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 버리는 과정을 2회 반복한다. 수용액 층에 1 N 염산 20 mL, 디클로르메탄 100 mL를 가하여 진탕한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴 2 mL를 가하여 녹인 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴/0.1% 아세트산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아시벤졸라-산(acibenzolar acid) (9.3분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아시벤졸라-산을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아시벤졸라-산	3.8	180	181

4.1.4.76 ∼ 4.1.4.147 (현행과 같음)

4.1.4.148 펜헥사미드(Fenhexamid)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜헥사미드를 아세톤으로 추출하고 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜헥사미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 1시간동안 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 잔류물을 물 50 mL로 헹구고 다시 디클로르메탄 100 mL로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화 식염수 50 mL를 가하여 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 5 mL로 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 35 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 3 g을 차례로 충진한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 0.1% 아세트산 함유 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하고 농축잔사를 약 1 mL로 헹구어 합쳐 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(1/9, v/v) 혼합액 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(3/17, v/v) 혼합액 100 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL를 가하여 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(55/45, v/v(배추)), 아세토니트릴/물(53/47, v/v(사과, 감귤)), 아세토니트릴/물(52/48, v/v(고추))

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 205 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

펜헥사미드(11.0분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜헥사미드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
펜헥사미드	3.7	302	301

4.1.4.149 프로클로라즈(Prochloraz)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 프로클로라즈 및 프로클로라즈 대사체를 아세토니트릴로 추출하고 pyridine hydrochloride를 가하여 2,4,6-TCP로 전환하여 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 2,4,6-TCP 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 30분간 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물을 물 100 mL와 디클로르메탄 50 mL으로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로르메탄 50 mL에 재용해한 용액 중 1 mL를 취하여 40 mL의 바이알에 담아 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 질소건고한다. 여기에 pridine hydrochloride 5 g를 넣고 밀봉한 다음 바이알을 220℃(silicon oil bath)에서 1시간동안 가열한 후 실온으로 냉각시키고 0.2 M 염산 20 mL를 가하여 용해하여 분액깔때기에 옮겨 물 100 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 분리될 때까지 정치한다. 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 여기에 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 아세톤 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 300℃

(4) 오븐 온도 : 110℃(2min)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

2,4,6-TCP (8.2분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 프로클로라즈를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 5분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 3분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 270℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 80～700 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
2,4,6-TCP	11.9	197	196

4.1.4.150 싸이프로디닐(Cyprodinil)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 싸이프로디닐을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 싸이프로디닐 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라)  표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)를 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(채소류 및 과일류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합쳐 40℃이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL이 들어 있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 2분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액 층은 여분의 250 mL 용량의 분액여두에 옮기고 헥산층은 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 다시 분배 추출하고 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다.이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 270 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

싸이프로디닐(8.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 싸이프로디닐을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(30 mm × 2.1 mm, 1.9 μm)

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 96 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
싸이프로디닐	2.7	225	226

4.1.4.151 나프로파마이드(Napropamide)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 견과종실류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 나프로파마이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 나프로파마이드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 6시간 이상 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 40 mesh를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(콩류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세톤을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL가 들어있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 다시 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 40 cm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시키고 이를 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

나프로파마이드(8.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 나프로파마이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(30 mm × 3.0 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 44 V

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
나프로파마이드	1.9	271	272

4.1.4.152 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피콕시스트로빈을 아세톤으로 추출한 후 플로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 피콕시스트로빈 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화하고 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔대기에 옮긴다. 이에 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합친다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(95/5, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

※ 추가 정제(고추 등 추가 정제가 필요한 검체)

상기 ‘나) 정제’로부터 얻은 시험용액을 미리 헥산 10 mL로 활성화한 NH2 카트리지(2 g, 12 mL)에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 헥산/에틸아세테이트(90/10, v/v) 혼합액 12 mL를 가하여 유출시켜 버린 후, 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 12 mL로 유출시켜 감압농출플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 5분 이상 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

피콕시스트로빈(28.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피콕시스트로빈을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.8 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 3분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50∼400 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
17.54	367.32	145, 335

특성이온

4.1.4.153 플루트리아폴(Flutriafol)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루트리아폴을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루트리아폴 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g. 채소류, 과일류 및 종실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡인여과하고 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 500 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 약 1 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 20 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고, 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 아세톤을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루트리아폴(19.3분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 플루트라아폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그라프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 µL

(8) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표 1. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온 (m/z)
17.1	301	219, 123

4.1.4.154 아메톡트라딘(Ametoctradin)

1) 시험법 적용범위

채소류 및 과일류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아메톡트라딘을 메탄올로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아메톡트라딘 표준품을 메탄올에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡입여과하고 메탄올 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 약 10 mL가 될 때까지  40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 100 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(40/60, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 292 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아메톡트라딘(6.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아메톡트라딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유물/0.1% 함유 아세토니트릴(90/10, v/v) 혼합액에서 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 함유 아세토니트릴 혼합액(10/90, v/v)으로 10분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
6.6	275	276

4.1.4.155 펜티오피라드(Penthiopyrad)

1) 시험법 적용범위

과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜티오피라드를 아세톤으로 추출하고 다공성규조토 칼럼으로 분배한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소・인 검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜티오피라드 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 다공성규조토 칼럼 : 다공성 규조토를 재충전하여 사용할 수 있는 15 g 용

바) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하 수욕상에서 약 20 mL가 될 때까지 감압농축한다. 이를 다공성규조토 칼럼에 옮겨 충분히 흡수시키고 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)  10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜티오피라드(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜티오피라드를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 260℃

(6) 이온원 온도 : 250℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
9.7	359	177, 152

4.1.4.156 피리미설판(Pyrimisulfan)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리미설판을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리미설판 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2∼3분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합한 후  40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 500 mL 분액깔대기에 옮긴다. 이에 1 N 염산 용액 2 mL를 가하여 산성화 한 후, 포화식염수 40 mL, 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 5 ml를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

(8) Collision energy : 20 ∼ 25

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 m/z 370 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램     피리미설판(8.1분)

라) 정량한계

0.005 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피리미설판을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (V)
8.1	420	370 255	20 25

4.1.4.157 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

1) 시험법 적용범위

과일류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리플루퀴나존을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리플루퀴나존 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 1% 포름산 20 mL를 가하여 산성화한 후 아세토니트릴 80 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL, 헥산 100 mL를 차례로 가한다. 이를 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 물층을 취하여 별도의 분액깔때기에 옮긴다. 이에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 20 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/5, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 받고, 아세톤 10 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 10 mM 인산/아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 250 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 피리플루퀴나존(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리플루퀴나존을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산/아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
7.8	464	465

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.4 (현행과 같음)

5.3.5 노보비오신(Novobiocin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 노보비오신을 메탄올로 추출하고 헥산/메탄올 분배로 지방을 제거한 후 실리카로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 노보비오신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액 (60 : 40 : 0.1, v/v/v)으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 실리카 카트리지(1 g, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g(유(乳)의 경우에는 5 mL)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 무수황산나트륨 30 g과 메탄올 30 mL를 넣은 후 3분간 균질화 한다. 균질화한 시료를 50 mL 원심분리관에 옮기고 8,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리한다. 상등액 15 mL를 정확히 취하여 40℃이하 수욕상에서 건고한다. 잔류물에 메탄올포화헥산 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화메탄올 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 메탄올층을 여분의 농축플라스크로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화메탄올 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 메탄올층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 감압농축 한후 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL에 녹인다. 미리 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL로 활성화 시킨 실리카 카트리지에 추출액을 흡착시키고 추가의 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL를 유출시키고, 고정상 상단이 노출되기 직전에 메탄올 : 아세톤 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL를 용출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 질소농축 하고 잔류물에 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v) 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm× 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 20 μL

(바) 검출기 파장 : UV 340 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

축산물 0.02 mg/kg, 유 0.02 mg/L

그림 1. 노보비오신(10.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

9) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(가) 칼럼 : C18(2.0 mm× 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 포름산 혼합액(50 : 50 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) Ionization : ESI(positive)

(바) Capillary temperature : 350℃

(사) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
11.3	612	613

5.3.6 ∼ 5.3.7 (현행과 같음)

5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate)

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 데코퀴네이트 표준품을 정밀히 달아 클로로포름에 녹여 200 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 이것을 3,500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL를 통과시켜 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2번 용출한다. 용출액을  60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 메탄올 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

ⓛ 이동상 A : 20 mM HFBA 수용액

② 이동상 B : 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	55	45
3.0	55	45
5.0	40	60
7.0	5	95
18.0	5	95
18.01	55	45
23	55	45

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 데코퀴네이트(12.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 데코퀴네이트

소 : 0.07 mg/kg, 닭 : 0.09 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 데코퀴네이트의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 데코퀴네이트 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 27 eV

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
데코퀴네이트	418	204, 232, 372

5.3.9 ∼ 5.3.12 (현행과 같음)

5.3.13 암프롤리움(Amprolium), 디싸이클라닐(Dicyclanil)

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 암프롤리움 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 1,000 mg/L 이상이 되게 하고, 디싸이클라닐 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 150 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 추출물을 3,500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2회 용출한다. 용출액을 60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 0.5 M HCl을 사용하여 pH 5.0 조절된 증류수 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

ⓛ 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

② 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1:1.8)

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	75	25
3.0	75	25
16.0	65	35
16.5	75	25
21.5	75	25

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 디싸이클라닐(9.2분), 암프롤리움(14.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 암프롤리움

소 : 0.04 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

(2) 디싸이클라닐

양 : 0.05 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 디싸이클라닐 및 암프롤리움의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 디싸이클라닐 및 암프롤리움 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1 : 1.8)

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 15 eV(암프롤리움), 25 eV(디싸이클라닐)

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
암프롤리움	243	94, 122, 150
디싸이클라닐	191	56, 109, 150

5.3.14 ∼ 5.3.19 (현행과 같음)

5.3.20 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 모넨신과 살리노마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것다

다) 표준원액 : 모넨신, 살리노마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L 이상이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올을 이용해 적당한 농도로 희석한다.

마) 0.1% 포름산 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 포름산 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료를 5 g 취하여 50 mL 원심분리 튜브에 넣고 수분을 제거하기 위해 황산나트륨(Na2SO4) 15 g을 첨가한 후, 아세토니트릴을 20 mL 첨가하여 진탕 혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 시료를 5℃, 12,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 시험관으로 옮긴 후, 시료의 방해물질을 제거하기 위해 8 mL n-헥산과 2 mL의 디클로로메탄을 첨가하여 진탕 혼합기로 10분간 혼합한다. 이후 5℃, 5,000 G에서 5분간 원심분리 한 후 중간층(아세토니트릴 층)을 수집하여 추출액으로 한다. 미리 아세토니트릴 2 mL로 활성화시킨 실리카 카트리지에 추출액을 넣어 방해물질을 제거하고 용출액은 재수집한다. 아세토니트릴 2 mL를 사용하여 카트리지를 세척한 것까지 수집을 한 후, 질소 농축기를 이용해 40℃에서 완전히 증발시킨다. 잔류물은 아세토니트릴 500 μL로 녹여 멤버레인 필터로 여과한 후  시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산를 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
10.0	6	94

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Collision energy : 모넨신 : 60 eV, 살리노마이신 : 50 eV

라) 표준품 크로마토그램

그림 1. 살리노마이신(5.7분), 모넨신(6.6분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 모넨신은 m/z 461, 살리노마이신은 m/z 431 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 모넨신 및 살리노마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
모넨신	693	479, 501, 461
살리노마이신	773	413, 531, 431

나) 정량한계

(1) 모넨신 정량한계

소 : 0.0029 mg/kg, 돼지 : 0.0016 mg/kg,

닭 : 0.0019 mg/kg, 유 : 0.0018 mg/kg

(2) 살리노마이신 정량한계

소 : 0.0028 mg/kg, 돼지 : 0.0035 mg/kg,

닭 : 0.0020 mg/kg, 알 : 0.0025 mg/kg

5.3.21 ∼ 5.3.28 (현행과 같음)

5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 스펙티노마이신을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 스펙티노마이신 표준품을 정밀히 달아 20 mM HFBA에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 20 mM HFBA으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고-HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) 30% NaOH : NaOH 30 g에 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)를 가해 최종 100 mL가 되도록 한다.

사) 5% TCA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 TCA 25g 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

아) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질기로 균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 5% TCA 20 mL를 가하여 진탕혼합기로 20분간 흔들어 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 12,000 G으로 10분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 여과지를 이용하여 여과한 후 30% NaOH로 pH 8.5로 조정하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 6 mL와 20 mM HFBA 6 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 5분간 진공 감압하여 건조한 후 아세토니트릴 : 20 mM HFBA(4 : 1, v/v) 12 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 0.3 mL까지 농축시킨 후 1 mL 까지 20 mM HFBA로 조정한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터로 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
2.0	15	85
10.0	15	85
10.1	90	10
20.0	90	10

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 23 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 스펙티노마이신(4.9분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 207 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
스펙티노마이신	351	333, 98, 207

나) 정량한계

소 : 0.05 mg/kg, 돼지 : 0.04 mg/kg,

닭 : 0.1 mg/kg, 유 : 0.06 mg/kg, 알 : 0.02 mg/kg

5.3.30 ∼ 5.3.31 (생  략)

5.3.32 아목시실린 (amoxicillin), 암피실린 (ampicillin), 벤질페니실린(benzylpenicillin), 클록사실린 (cloxacillin), 디클록사실린 (dicloxacillin), 나프실린 (nafcillin), 옥사실린 (oxacillin) 시험법

1) 시험법의 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에 아세토니트릴 : 물 혼합액(유 및 알의 경우 트리클로로초산이 함유된 아세토니트릴)을 가한 후 대상성분을 추출하고 액-액 분배 및 고상추출법으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액 : 아목시실린, 암피실린, 벤질페니실린, 클록사실린, 디클록사실린 및 나프실린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100  mg/L 농도가 되게 한다

나) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 적당한 농도가 되게 희석하여 사용한다.

다) HLB 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

라) 0.1 M 인산수소나트륨용액 : 1 L 용량플라스크에 제이인산수소나트륨(Na2HPO4) 14.2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

마) 0.05 mM 인산수소카륨용액 : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축․수산물

균질화한 시료(소고기, 닭고기, 광어) 2 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20 v/v) 10 mL를 넣고 2분간 균질화시킨다. 균질화시킨 시료를 50 mL 원심분리관으로 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20, v/v) 10 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 시료와 합한다. 합친 시료를 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 여분의 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. ★미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유 및 알

균질화한 시료(유(乳) 20 mL, 알 5 g)를 50 mL 원심분리관에 취하고 유는 아세토니트릴 50 mL, 알은 20% 트리클로로초산 0.5 mL이 포함된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한다. 혼합액을 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 용액을 0.1 M 수산화나트륨 용액으로 pH 9.0±0.2로 조절한다. 추가 정제과정은 위의 ★이후 과정을 따른다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(2.0 mm × 150 mm, 3 μm)

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 포름산이 포함된 물

② 이동상 B : 0.1% 포름산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0	98	2
2	98	2
2.1	80	20
8.0	80	20
10	0	100
30	0	100
40	98	2
45	98	2

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy :

물질	Precursor ion(m/z)	Product ions(m/z)	Collision energy (V)
아목시실린	366	349, 114	8
암피실린	350	106, 192	17
벤질페니실린	335	160, 176	11
클록사실린	436	277, 160	15
디클록사실린	470	160, 311	13
나프실린	415	199, 171	14
옥사실린	402	160, 243	13

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물	수산물	유	알
아목시실린	0.005	0.005	0.002	0.001
암피실린	0.005	0.001	0.001	0.001
벤질페니실린	0.001	0.001	0.005	0.001
클록사실린	0.005	0.005	0.005	0.001
디클록사실린	0.001	0.005	0.001	0.001
나프실린	0.001	0.005	0.001	0.001
옥사실린	0.001	0.005	0.001	0.001

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

벤질페니실린 (12.5분), 암피실린 (6.4분), 아목시실린 (6.1분), 옥사실린 (12.7분), 나프실린 (12.8분), 클록사실린 (12.8분), 디클록사실린(13.0분)

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

<삭  제>

5.3.33 폭심(Phoxim)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 폭심을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 폭심 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% formic acid 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 formic acid 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토나이트릴 20 mL를 가하여 200 G으로 20분간 진탕 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 5,000 G으로 5분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 다시 아세토나이트릴 20 mL를 가해 다시 추출한다. 모은 상층액 40 mL를 250 mL 농축플라스크에 넣어  감압 농축한 후 n-헥산 5 mL로 2번 재용해하여 n-헥산 10 mL로 활성화된 실리카 카트리지(6 cc, 500 mg)에 적재한다. 적재가 끝난 카트리지에 디클로로메탄 20 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 농축시킨 후 아세토니트릴 500 μL로 재 용해한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터를 사용하여 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 100 mm,   3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	60	40
2.0	10	90
10.0	10	90
10.1	60	40
20.0	60	40

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 3 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 폭심 표준품(6.0분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 129 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 폭심의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
폭심	299	77, 97, 129

나) 정량한계

(1) 폭심

소 :  0.025 mg/kg, 돼지 : 0.025 mg/kg

5.3.34 ∼ 5.3.39 (생  략)

<삭  제>

5.3.40 발네물린(Valnemulin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 발네물린을 메탄올로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량 분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 발네물린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 희석한다

마) 내부표준용액 : 내부표준원액을 메탄올/물 혼합액 (70 : 30, v/v)로 희석하여 10 mg/L가 되게 한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 1% 포름산(formic acid)을 함유한 메탄올 15 mL를 가하여 20분간 진탕추출한다. 추출액을 4,000 G에서 10분간 원리분리한 후 상층액 5 mL를 여분의 15 mL 튜브에 옮기고 50℃이하에서 질소가스로 용매를 날려보낸 후 메탄올/물 혼합액(50 : 50, v/v) 1 mL에 녹인다. 녹인 용액에 헥산 1 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 헥산층은 버리고 남은 용액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(2.1 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 0.1% 포름산(formic acid)이 함유된 아세토니트릴/물 혼합액 (90/10, v/v)

(라) 유속 : 0.25 mL/min

(마) 시료 주입량 : 5 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy (V)
발네물린	565	263, 245	24

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 0.01 mg/kg

그림 1. 발네물린(5.3분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.41 ∼ 5.3.62 (현행과 같음)

5.3.63. 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol) 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중 베타-아고니스트 분해효소제를 사용하여 조직에서 분해한 후 에틸아세테이트로 추출하고 베타-아고니스트 전용 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 락토파민, 클렌부테롤 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 락토파민 D3(Ractopamine D3), 클렌부테롤 D9(Clenbuterol D9) 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 락토파민-D3는 100 ng/mL, 클렌부테롤-D9은 40 ng/mL로 한다.

사) 분해효소제 : β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/arylsulfatase)

아) 0.2 M 초산암모늄완충용액(pH 5.2) : 초산암모늄 1.54 g을 100 mL 메스플라스크에 취하여 물로 녹여 표시선까지 채우고 초산을 넣어 pH 5.2로 한다.

자) 베타 아고니스트 전용 카트리지 : MIP(Molecular Imprinted Polymer) 카트리지(25 mg, 10 mL) 또는 이와 동등한 것

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고, 0.2 M 초산 암모늄완충용액(pH 5.2) 10 mL, 포화염화나트륨 2 mL, 분해효소제 100 μL를 가하여 37℃에서 12시간 반응시킨다. 반응 후 5 M 수산화나트륨용액을 사용하여 pH 12로 조정한 뒤, 이 용액에 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 진탕하고 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취한다. 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 추출을 한번 더 반복하여 상층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물을 20 mL 메탄올 포화 헥산으로 재용해 하여 분액여과에 옮긴 뒤 20 mL 헥산 포화 메탄올을 첨가하여 3분간 흔들어준다. 하층액을 무수황산나트륨에 통과시켜 모은 뒤, 이 과정을 한번 반복한 뒤, 하층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물은 0.025 M 초산암모늄용액 2 mL로 재용해한다. 미리 메탄올 1 mL, 물 1 mL와 0.025 M 초산암모늄용액 1 mL로 활성화시킨 MIP 카트리지(Molecular imprinted polymer, 25 ㎎, 10 mL)에 추출액을 흡착시킨다. 메탄올 1 mL로 카트리지를 세척한 후 메탄올 : 초산(9 : 1) 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 2 mL 이동상A에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 초산 암모늄(pH 4.3) : 아세토니트릴(95 : 5, v/v)

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
1	100	0
2	100	0
6	10	90
8	0	100
10	0	100
11	100	0
15	100	0

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) Collision energy

물질	Precursor Ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
락토파민	302	107, 284
락토파민 D3	305	107, 124
클렌부테롤	277	203, 259
클렌부테롤 D9	286	204, 268

나) 표준품의 크로마토그램

Ractopamine

Ractopamine D3

Clenbuterol

Clenbuterol D9

그림 1. 락토파민(6.70분), 락토파민 D3(6.69분), 클렌부테롤(7.04분), 클렌부테롤 D9(7.03분)

다) 정량한계

(1) 락토파민 : 0.5 μg/kg

(2) 클렌부테롤 : 0.2 μg/kg

7) 정량시험

표준용액을 농도별로 시험관에 취하고 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고 질소농축한 후 이동상 2 mL에 녹인 용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특정이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 내부표준물질 락토파민 D3의 m/z 107 이온에 대한 락토파민 m/z 284 이온, 클렌부테롤 D9의 204 m/z 이온에 대한 클렌부테롤 m/z 203 이온의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 락토파민과 클렌부테롤의 함량을 구한다.

5.3.64 ∼ 5.3.86 (생  략)

<삭  제>

5.3.88 ∼ 5.3.95 (현행과 같음)

5.3.96 설파구아니딘(Sulfaguanidine)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 염기성화시킨 후 설파구아니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 유도체하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 설파구아니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량을 취하여 질소가스로 용매를 날려보낸 후 물 0.1 mL를 가하여 녹인 후 아래의 유도체 과정을 거친다.

마) 50 mM 인산완충용액(pH 3.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 3.0으로 조절한다

바) 유도체시약 : Fluorescamine을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g(유(乳)의 경우 5 mL)을 50 mL 원심분리관에 취하고 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하여 30분간 진탕한 후 10분간 초음파추출한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 50 mL 원심분리관에 취한다. 잔류물에 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 다시 가한 후 위의 과정을 반복하고 분리한 상층액을 합한다. 이 합친 용액을 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 물 0.5 mL에 녹인다. 녹인용액에 헥산 0.5 mL를 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 물층 0.1 mL를 취하여 2 mL 원심분리관으로 옮긴다. 원심분리관에 인산완충용액 0.2 mL과 유도체 시약 0.2 mL을 넣고 충분히 섞은 후 실온에서 30분간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 메탄올 : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
3	70	30
20	70	30
21	10	90
26	10	90

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : 여기파장(405 nm), 측정파장(495 nm)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 소, 돼지, 어류 0.03 mg/kg

유 0.002 mg/kg

그림 1. 설파구아니딘 유도체(17.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.97 로베니딘(Robenidine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 로베니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 로베니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 2% 포름산(formic acid)을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하고 20분간 진탕한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 튜브에 취하고 50℃ 수욕상에서 질소가스를 이용하여 용매를 날려보낸다. 잔류물에 2% 포름산을 함유한 70% 메탄올 수용액 0.5 mL에 녹인 후 헥산 0.5 mL을 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 수용액층을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18 (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상 : 2% 삼염화초산을 함유한 메탄올 : 물 혼합액(70 : 30, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 312 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.03 mg/kg

그림 1. 로베니딘(6.8분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.98 톨트라주릴(Toltrazuril)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 톨트라주릴 설폰을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 톨트라주릴 설폰 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM 인산완충용액(pH 2.5) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 2.7 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 2.5로 조절한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL를 가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 메탄올 : 물 혼합액 (60 : 40, v/v)에 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	40	60
15	0	100
16	40	60
21	40	60

(라) 유속 : 1 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 255 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 :

소, 돼지 0.02 mg/kg

닭 0.05 mg/kg

알 0.01 mg/kg

그림 1. 톨트라주릴 설폰(10.2분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.99 디아베리딘(Diaveridine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디아베리딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산/아세토니트릴 분배로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 디아베리딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 50 mM 인산완충용액 (pH 6.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소나트륨 (NaH2PO4) 6 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 수산화나트륨을 가하여 pH 6.0으로 조절한다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 15 mL를 가하가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 4 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 50 mM 인산완충용액 혼합액 pH 6.0  (15 : 85, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 254 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.02 mg/kg

그림 1. 디아베리딘(13.1분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

[별표 1] ∼ [별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이민옥타딘(Iminoctadine)

(현행과 같음)

양파	0.05

(2) (현행과 같음)

(3) 글리포세이트(Glyphosate)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	0.2

복숭아	0.2

(4) 나프로파마이드(Napropamide)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.1

(5) ∼ (7) (현행과 같음)

(8) 다이아지논(Diazinon)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.1

(9) 델타메쓰린(Deltamethrin)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

대두	0.1

풋콩	0.3

인과류	0.5

(10) ∼ (20) (현행과 같음)

(21) 디크로보스(Dichlorvos : DDVP)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(22) ∼ (25) (현행과 같음)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(현행과 같음)

양파	0.05

(27) ∼ (28) (현행과 같음)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(현행과 같음)

양송이	0.3

느타리버섯	1.0

참외	1.0

(30) 리누론(Linuron)

(현행과 같음)

풋콩	0.1

(31) 마이클로부타닐(Myclobutanil)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	0.5

(32) 말라치온(Malathion)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(33) ∼ (34) (현행과 같음)

(35) 메소밀(Methomyl)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(36) ∼ (37) (현행과 같음)

(38) 메타락실(Metalaxyl)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

마늘(풋마늘포함)	0.05

(39) ∼ (49) (현행과 같음)

(50) 베나락실(Benalaxyl)

(현행과 같음)

토마토	2.0

참외	1.0

(51) ∼ (62) (현행과 같음)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(현행과 같음)

배추	3.0,

엇갈이배추	10

(64) ∼ (65) (현행과 같음)

(66) 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin)

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

(현행과 같음)

참깨	0.5

엇갈이배추	2.0

(68) ∼ (70) (현행과 같음)

(71) 아미트라즈(Amitraz)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	0.5

(72) (현행과 같음)

(73) 아세페이트(Acephate)

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(74) ∼ (77) (현행과 같음)

(78) 알라클로르(Alachlor)

(현행과 같음)

풋콩	0.05

딸기	0.05

무(잎)	0.2

(79) ∼ (84) (현행과 같음)

(85) 에토펜프록스(Etofenprox)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

배추	0.7

배추(건조)	2.5

<삭  제>

<삭  제>

인과류	1.0

(86) ∼ (96) (현행과 같음)

(97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

풋마늘	0.05

인과류	0.05

(98) ∼ (110) (현행과 같음)

(111) 카바릴(Carbaryl)

(현행과 같음)

복숭아	1.0

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(현행과 같음)

쌀	0.5

참다래(키위)	3.0

유자	3.0

(113) ∼ (130) (현행과 같음)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	1.0

엇갈이배추	0.2

(132) 클로르피리포스-메틸(Chlorpyrifos-methyl)

(현행과 같음)

배추	0.07

엇갈이배추	0.2

(133) 터부코나졸(Tebuconazole)

(현행과 같음)

<삭  제>

(134) ∼ (147) (현행과 같음)

(148) 트리풀루라린(Trifluralin)

(현행과 같음)

풋콩	0.05

엇갈이배추	0.05

(149) 트리프루미졸(Triflumizole)

(현행과 같음)

마늘	0.05

풋마늘	1.0

(150) (현행과 같음)

(151) 티오디카브(Thiodicarb)

(현행과 같음)

배추	1.0

엇갈이배추	3.0

(152) 티오벤카브(Thiobencarb)

(현행과 같음)

엇갈이배추 0.2

(153) ∼ (160) (현행과 같음)

(161) 페녹사프로프-에칠(Fenoxaprop-ethyl)

(현행과 같음)

풋콩	0.05

(162) (현행과 같음)

(163) 펜디메타린(Pendimethalin)

(현행과 같음)

배추	0.07

마늘(풋마늘포함)0.05

엇갈이배추	0.07

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

배추	0.3

<삭  제>

인과류	2.0

엇갈이배추	1.0

(165) ∼ (167) (현행과 같음)

(168) 펜치온(Fenthion : MPP)

(현행과 같음)

쌀	0.5

(169) (현행과 같음)

(170) 펜토에이트(Phenthoate : PAP)

(현행과 같음)

배추	0.03

밤	0.05

엇갈이배추	0.1

(171) ∼ (177) (현행과 같음)

(178) 폭심(Phoxim)

(현행과 같음)

풋마늘	0.05

(179) ∼ (182) (현행과 같음)

(183) 풀루아지호프-부틸(Fluazifop-butyl)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(184) ∼ (187) (현행과 같음)

(188) 프로파모카브(Propamocarb)

(현행과 같음)

배추	1.0

생강	0.05

엇갈이배추	3.0

(189) (현행과 같음)

(190) 프로페노포스(Profenofos)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(191) ∼ (195) (현행과 같음)

(196) 피리미포스-메틸(Pirimiphos-methyl)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(197) ∼ (199) (현행과 같음)

(200) 헥사코나졸(Hexaconazole)

(현행과 같음)

마늘(풋마늘포함)	0.5

(201) ∼ (205) (현행과 같음)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(현행과 같음)

배추	0.2

배추(건조)	1.0

오이	0.5

참나물	20

(207) 테부페노자이드(Tebufenozide)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

배추	0.3

<삭  제>

인과류	1.0

엇갈이배추	1.0

(208) (현행과 같음)

(209) 테프루벤주론(Teflubenzuron)

(현행과 같음)

엇갈이배추	1.0

딸기	1.0

(210) ∼ (211) (현행과 같음)

(212) 플루페녹수론(Flufenoxuron)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(213) 피라크로포스(Pyraclofos)

(현행과 같음)

배추	0.05

엇갈이배추	0.1

(214) 피리다벤(Pyridaben)

(현행과 같음)

복숭아	1.0

(215) ∼ (217) (현행과 같음)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(현행과 같음)

배추	0.7

배추(건조)	2.5

딸기	2.0

(219) ∼ (220) (현행과 같음)

(221) 디치아논(Dithianon)

(현행과 같음)

풋마늘	5.0

(222) ∼ (223) (현행과 같음)

(224) 싸이목사닐(Cymoxanil)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

시금치	2.0

(225) 싸이프로디닐(Cyprodinil)

(현행과 같음)

감	1.0

(226) (현행과 같음)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(현행과 같음)

배추	1.0

배추(건조)	3.0

비름나물	10

(228) ∼ (236) (현행과 같음)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(현행과 같음)

보리	0.05

(238) (현행과 같음)

(239) 후루아지남(Fluazinam)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.05

(240) ∼ (241) (현행과 같음)

(242) 루페누론(Lufenuron)

(현행과 같음)

배추	0.07

엇갈이배추	0.2

(243) 메타벤즈티아주론(Methabenzthiazuron)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

풋마늘	0.05

(244) ∼ (245) (현행과 같음)

(246) 스피노사드(Spinosad)

(현행과 같음)

딸기	1.0

(247) (현행과 같음)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(현행과 같음)

토마토	0.01

(249) 에마멕틴 벤조에이트

(Emamectin benzoate)

(현행과 같음)

배추	0.02

엇갈이배추	0.05

(250) ∼ (253) (현행과 같음)

(254) 카보설판(Carbosulfan)

(현행과 같음)

배추	0.1

엇갈이배추	0.3

(255) 파목사돈(Famoxadone)

(현행과 같음)

배추	0.3

(256) ∼ (289) (현행과 같음)

(290) 인독사카브(Indoxacarb)

(현행과 같음)

참나물	10

(291) 족사마이드(Zoxamide)

(현행과 같음)

배추	1.0

엇갈이배추	3.0

(292) ∼ (296) (현행과 같음)

(297) 테트라코나졸(Tetraconazole)

(현행과 같음)

파	5.0

포도	2.0

(298) ∼ (301) (현행과 같음)

(302) 포세틸-알루미늄(Fosetyl-aluminium)

(현행과 같음)

배추	7.0

엇갈이배추	20

(303) (현행과 같음)

(304) 프로베나졸(Probenazole)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.07

(305) ∼ (307) (현행과 같음)

(308) 플루설파마이드(Flusulfamide)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.05

(309) ∼ (320) (현행과 같음)

(321) 디노테푸란(Dinotefuran)

(현행과 같음)

멜론	1.0

(322) ∼ (323) (현행과 같음)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(현행과 같음)

감귤	1.0

고추	3.0

오이	0.5

(325) 시아조파미드(Cyazofamid)

(현행과 같음)

배추	0.7

(326) ∼ (332) (현행과 같음)

(333) 테부피림포스(Tebupirimfos)

(현행과 같음)

엇갈이배추 0.01

(334) (현행과 같음)

(335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

보리	1.0

복분자	1.0

(336) (현행과 같음)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(현행과 같음)

보리	0.4

상추	15

(338) 티아클로프리드(Thiacloprid)

(현행과 같음)

배추	0.2

대두	0.05

풋콩	1.0

(339) ∼ (348) (현행과 같음)

(349) 노발루론(Novaluron)

(현행과 같음)

참나물	10

(350) ∼ (355) (현행과 같음)

(356) 에타복삼(Ethaboxam)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(357) 에틸렌비스디치오카바메이트

(EBDC[Ethylenebis(dithio-carbamate)s])

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(358) 이프로발리카브(Iprovalicarb)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(359) ∼ (360) (현행과 같음)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(현행과 같음)

수박	0.05

엇갈이배추	0.1

(362) ∼ (369) (현행과 같음)

(370) 벤티아발리카브아이소프로필

(Benthiavalicarb-isopropyl)

(현행과 같음)

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

(371) 디니코나졸(Diniconazole)

(현행과 같음)

배추	0.1

엇갈이배추	0.3

(372) ∼ (379) (현행과 같음)

(380) 피리다릴(Pyridalyl)

(현행과 같음)

배추	0.7

참나물	20

(381) ∼ (387) (현행과 같음)

(388) 시안화 수소(Hydrogen cyanide)

(현행과 같음)

엇갈이배추	5.0

(389) ∼ (390) (현행과 같음)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

(현행과 같음)

시금치	25

(392) (현행과 같음)

(393) 메트알데히드(Metaldehyde)

(현행과 같음)

엇갈이배추	1.0

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(현행과 같음)

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

(395) 플루오피콜라이드(Fluopicolide)

(현행과 같음)

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

(396) ∼ (402) (현행과 같음)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

딸기	2.0

(404) ∼ (407) (현행과 같음)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

배추	0.3

멜론	0.2

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(현행과 같음)

배추	0.7

브로콜리	2.0

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(현행과 같음)

배추	1.0

복숭아	2.0

감귤	0.5

자두	0.1

엇갈이배추	3.0

(411) ∼ (415) (현행과 같음)

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(현행과 같음)

호박	0.7

호박잎	7.0

딸기	1.0

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(현행과 같음)

배추	1.0

옥수수	0.05

(418) (현행과 같음)

(419) 프로헥사디온-칼슘

(Prohexadione-Calcium)

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(418)～(422) (현행과 같음)

(423) 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

(현행과 같음)

감	1.0

오이	1.0

(424) ∼ (426) (현행과 같음)

(427) 이미시아포스(Imicyafos)

(현행과 같음)

마(건조포함)	0.05

멜론	0.05

토마토	0.05

(428) 플루오피람(Fluopyram)

오이	1.0

(429) 메타조설푸론(Metazosulfuron)

쌀	0.05

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

고추	0.5

배	0.4

사과	0.4

(431) 이소피라잠(Isopyrazam)

오이	2.0

참외	0.5

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (10) (현행과 같음)

(11) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(현행과 같음)

수삼	0.1

인삼농축액	0.5

홍삼농축액	0.5

(12) ∼ (67) (현행과 같음)

[별표 6] (현행과 같음)

〔별표7〕식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (118) (현행과 같음)

(119) 메벤다졸(Mebendazole) : 구충제

돼지근육	0.06

돼지지방	0.06

돼지간	0.4

돼지신장	0.06

말근육	0.06

말지방	0.06

말간	0.4

말신장	0.06

가금근육	0.06

가금지방	0.06

가금간	0.4

가금신장	0.06

(120) 니트록시닐(Nitroxinil) : 구충제

소근육	0.4

소지방	0.2

소간	0.02

소신장	0.4

양근육	0.4

양지방	0.2

양간	0.02

양신장	0.4

(121) 클로술론(Clorsulon) : 구충제

소근육	0.035

소간	0.1

소신장	0.2

(122) 톨페남산(Tolfenamic acid) : 항염증제

소근육	0.05

소간	0.4

소신장	0.1

돼지근육	0.05

돼지간	0.4

돼지신장	0.1

유	0.05

(123) 툴라스로마이신(Tulathriomycin) : 항염증제

소근육	0.1

소지방	0.1

소간	3.0

소신장	3.0

돼지근육	0.1

돼지지방	0.1

돼지간	3.0

돼지신장	3.0

(124) 시미아졸(Cymiazole) : 구충제

벌꿀	1.0