식품의약품안전청 공고 제2012-59호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2012. 3. 30.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 공고 제2012- 59호

「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청고시 제2012-1호, 2012. 1. 20)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 「행정절차법」 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2012년 3월 30일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

농약 및 동물용의약품의 잔류허용기준을 신설하여 식품 안전관리를 강화하고, 관련 시험법을 신설 및 개정하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.

2. 주요 내용

가. 총칙 중 농약 및 동물용의약품에 대한 불검출 판단 기준 신설[제 1, 1, 31]

1) 식품 중 농약 및 동물용의약품에 불검출 판단시 정확한 기준이 없어 혼돈이 야기되므로 개선이 필요

2) 식품공전 총칙에 불검출 처리에 대한 명확화

3) 시험검사 신뢰성 확보

나. 잔류농약 분석법 개정 및 신설

1) 새로운 농약이 사용․ 등록됨에 따른 시험법 마련 및 비효율적인 시험법 개선이 필요함

2) 다종농약다성분 분석법 등 23개 시험법 신설 및 개정

- 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법 분석법 개정 [안 제 10, 4.1.2.2]

- 디코폴(Dicofol), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate) 및 테트라디폰(Tetradifon) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.3.1]

- 이소프로카브(Isoprocarb, MIPC) 및 카바릴(Carbaryl, NAC) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.3.3]

- 카보후란(Carbofuran 및 3-Hydroxycarbofuran), 벤푸라카브(Benfuracarb), 카보설판(Carbosulfan) 및 푸라치오카브(Furathiocarb) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.30]

- 피로퀼론(Pyroquilon) 및 트리싸이클라졸(Tricyclazole) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.31]

- 클로로타로닐(chlorothalonil), 캡탄(captan), 폴펫(folpet) 및 캡타폴(captafol) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.32]

- 알드린(Aldrin), BHC(α, β, γ-BHC and δ-BHC), DDT(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE and p,p'-DDD), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin 및 δ-Keto-endrin), 엔도설판(α-Endosulfan, β-Endosulfan, Endosulfan sulfate), 클로르단(cis-Chlordane 및 trans-Chlordane) 및 헵타크로(Heptachlor 및 Heptachlor epoxide) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.33]

- 메톡시페노자이드(methoxyfenozide), 테부페노자이드(tebufenozide) 및 크로마페노자이드(chromafenozide) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.34]

- 훼녹시카브(Fenoxycarb), 피리프록시펜(Pyriproxyfen) 및 메토프렌(Methoprene) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.35]

- 페노트린(Phenothrin) 및 실라프루오펜(Silafluofen) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.36]

- 아크리나쓰린(Acrinathrin), 비펜스린(Bifenthrin), 싸이클로프로스린(Cycloprothrin), 테플루스린(Tefluthrin) 및 할펜프록스(Halfenprox) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.37]

- 비페닐(Biphenyl), 모노리누론(Monolinuron), 노나클로르(Nonachlor), 옥시카르복신 (Oxycarboxin)및 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl), 디클로사이메트(Diclocymet),  이소자디펜에틸(Isoxadifen-ethyl), 이소자플루톨(Isoxaflutole) 및 메토미노스트로빈(Metominostrobin) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.38]

- 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 사이클아니리드(Cyclanilide), 디클로슐람(Diclosulam), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac), 이옥시닐(Ioxynil), 이소카바미드(Isocarbamid), 레나실(Lenacil), 메펜피르(Mefenpyr), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid) 및 트랄콕시딤(Tralkoxydim) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.3.39]

- 클로르프로팜(Chlorpropham) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.9]

- 도딘(Dodine) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.43]

- 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.59]

- 아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.4.75]

- 펜헥사미드(Fenhexamid) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.148]

- 프로클로라즈(Prochloraz) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.148]

- 싸이프로디닐(Cyprodinil) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.150]

- 나프로파마이드(Napropamide) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.151]

- 피콕시스트로빈(Picoxystrobin) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.152]

- 플루트리아폴(Flutriafol) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.153]

3) 식품 중 농약시험법의 신설 및 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급

다. 잔류동물용의약품 시험법 개정

1) 식품공전에 수재된 동물용의약품 중 효율성이 낮은 시험법에 대해 개선이 필요함

2) 5.3.63. 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol) 분석법 개정[안 제 10, 5.3.63]

3) 식품 중 동물용의약품 시험법의 개정을 통하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급

라. 농산물의 농약잔류허용기준 개정[[별표 4] 중 (200), (206), (209), (324)]

1) 농약 등록, 사용방법 등의 변화에 따른 잔류허용기준 합리화 필요

2) 마늘(풋마늘포함)에 대한 헥사코나졸, 오이에 대한 클로르훼나피르, 엇갈이배추 및 딸기에 대한 테프루벤주론, 감귤에 대한 비페나제이트 기준 합리화

3) 농약에 대한 기준 합리화로 국민의 불안감 해소

마. 농산물의 농약잔류허용기준 신설[[별표 4] 중 (1), (26), (29), (38), (50), (149), (206), (214), (218), (224), (225), (227), (237), (246), (248), (290), (321), (324), (335), (337), (349), (361), (380), (391), (403), (408), (409), (416), (417), (423), (427)]

1) 「농약관리법」에 사용·등록되어 있는 농약에 신규로 추가되는 농산물의 잔류허용기준을 마련하여 관리 적정화 필요

2) 농산물 중 이민옥타딘 등 31종에 대한 기준 신설

3) 농약잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

바. 동물용의약품 잔류허용기준 신설[별표 7]

1) 「약사법」에 사용·등록되어 있는 동물용의약품의 잔류허용기준을 마련하여 관리 적정화 필요

2) 메벤다졸(111), 니트록시닐(112), 클로술론(113), 톨페나믹산(114), 툴라스로마이신(115) 및 시미아졸(116) 동물용의약품 기준 신설

3) 동물용의약품 잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

3. 의견 제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는  단체 또는 개인은 2012년 5월 30일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전청장(우편번호 : 363-700, 주소 : 충북 청원군 오송읍 오송생명2로 187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전청, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2420,  팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬·반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 전화번호 및 주소

다. 기타 참고사항

식품의약품안전청 고시 제2012-  호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2012-1호, 2012. 1. 20)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2012년  월   일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

제 1. 총칙. 1. 일반원칙 중 31)을 다음과 같이 신설한다.

31) 식품 중 잔류 농약 및 동물용의약품 시험법의 경우 정량한계 미만을 불검출로 처리한다.

제 10. 일반시험법 4. 식품 중 잔류농약 분석법

“4.1.2.2 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법”을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 측정농약은 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 액체크로마토그래프 측정농약은 아미노-프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：전자포획검출기(ECD), 질소․인 검출기(NPD) 또는 불꽃광도검출기(FPD), 질량분석기(MS)

나) 액체크로마토그래프：Post-column derivatization system, 형광검출기(FLD), 자외부흡광검출기(UVD), 질량분석기(MS)

4) 시약

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 일회용 카트리지：플로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

다) 표준원액：각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

라) 표준용액：표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

마) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 아세토니트릴 추출법

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 50 g, 차는 10 g)를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL 분액깔때기에 옮기고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

(2) 아세톤 추출법

검체[곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 50 g. 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 약 1 kg을 대형분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 50 g, 차는 10 g]를 정밀히 달아 혼합추출분쇄기(Omni mixer)병에 넣고(곡류 및 콩류의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 균질기로 2～3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 디클로로메탄을 가하여 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 디클로로메탄층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 용해한다.

※ 추출은 상기 (1) 또는 (2) 중 선택하여 사용함.

주1) 당근과 같이 크고 단단한 것들은 먼저 칼로 대강 썬 후 분쇄함

주2) 용매추출액을 저온에서 정치하면 층분리가 빨라질 수 있음.

주3) 곡류, 콩류, 견과종실류 등 지방성 검체의 경우 ★까지 시험하고 잔류물에 미리 아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 가하여 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올) 층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔사를 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 측정 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 측정 농약)에 완전히 녹인다.

나) 정제

(1) 기체크로마토그래프 측정 농약

미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출하여 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

주4) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

주5) 기체크로마토그래프 측정 농약을 전처리할 때 항상 감압농축하기 전에 2% 디에틸렌글리콜(Diethylene glycol) 함유 아세톤 0.2 mL를 첨가한다.

(2) 액체크로마토그래프 측정 농약

미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 유출하여 동일 시험관에 합친다. 유출액은 40℃ 이하 수욕상에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 맴브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) GC-ECD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 캐리어가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 칼럼오븐온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜  20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：split mode(20 : 1)

(마) 검출기온도：280℃

(2) GC-NPD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 검출기온도：280℃

(3) GC-FPD

(가) 칼럼：DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상가스 및 유량：N2, 1.0 mL/min

(다) 오븐 온도：80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 검출기온도：230℃

(4) GC-MS

(가) 칼럼：DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상가스 및 유량：He, 0.8 mL/min

(다) 오븐 온도：70℃에서 시험용액을 주입하고 3분간 유지한 후 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 7분 이상 유지한다.

(라) 주입부：splitless mode

(마) 인터페이스 온도：280℃

(바) Solvent delay time：4 min

나) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함)

(가) 칼럼：C18(3.9 × 150 mm) 또는 이와 동등한 것

(나) 검출기：여기(EM) 455nm, 형광(EX)

(다) 이동상：물 및 메탄올

- 메탄올：물(3：7)의 혼합액에서 메탄올：물(7：3)의 혼합액으로 23분간 농도균배한 후 5분 이상 흘려보낸다.

(라) 이동상 유량：0.8 mL/min

(마) Post Reaction Pump 유량：0.5 mL/min(NaOH 0.25 mL/min, OPA 0.25 mL/min) 또는 기타 최적조건

(2) HPLC-UVD

(가) 칼럼：C18(4.6 mm × 250 mm, 5μm) 또는 이와 등등한 것

(나) 검출기：자외부흡광검출기(254 nm)

(다) 이동상：물 및 아세토니트릴

- 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에서 (80/20, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

- 메탄올/물(35/65, v/v)에서 (90/10, v/v)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

※ 이동상의 조건은 상기 두 가지 중 선택하여 사용함

(라) 이동상 유량：1.0 mL/min

(3) LC-MS

(가) 칼럼：C18(100 × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상：A(물 + 0.1% 개미산, 2 mM 아세트산암모늄), B(99% 아세토니트릴 +  0.1% 개미산, 2 mM 아세트산암모늄)

- A/B(90/10, v/v)에서 (10/90, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(다) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(라) 칼럼 온도 : 40℃

(마) 주입량 : 2 μL

(바) 이온화 : ESI positive 또는 negative-ion mode

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

주6) GC-MS 및 LC-MS 상의 머무름시간 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

주7) 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

1	Acrinathrin(ECD)	2	Aldrin(ECD)	3	Allidochlor(MS)
4	Ametryn(NPD)	5	Anilofos(NPD)	6	Asulam(ECD)
7	Atraine(NPD)	8	Azaconazole(NPD)	9	Azinphos-ethyl(FPD)
10	Azinphos-methyl(ECD, NPD)*	11	BHC(ECD)	12	Bifenthrin(ECD)
13	Binapacryl(ECD)	14	Bromacil(ECD)	15	Bromobutide(NPD)
16	Bromophos-methyl(FPD)	17	Bromopropylate(ECD)	18	Bromoxynil(ECD)
19	Bupirimate(NPD)	20	Butafenacil(ECD)	21	Cadusafos(NPD, FPD)
22	Captafol(ECD)	23	Captan(ECD)	24	Carbophenothion(ECD, NPD)
25	Chinomethionat(ECD)	26	Chlordane(ECD)	27	Chlorfenapyr(NPD, FPD)
28	Chloridazon(ECD)	29	Chlorobenzilate(ECD)	30	Chlorothalonil(ECD)
31	Chlorpyrifos(ECD, NPD)	32	Chlorpyrifos-methyl(ECD, NPD)	33	Chlorthal-dimethyl(ECD)
34	Cinmethylin(MS)	35	Clomeprop(ECD)	36	Cyanazine(ECD)
37	Cyanophos(NPD)	38	Cycloate(MS)	39	Cycloprothrin(ECD, NPD)
40	Cyflufenamid(ECD)	41	Cyfluthrin(ECD)*	42	Cyhalothrin(ECD)*
43	Cypermethrin(ECD)*	44	Cyproconazole(NPD)	45	Cyprodinil(NPD)
46	DDT(ECD)	47	Deltamethrin(ECD)*	48	Diallate(MS)
49	Diazinon(ECD, NPD)	50	Dichlofluanid(ECD, NPD)	51	Dichlorvos(NPD, FPD)
52	Dicloran(ECD)	53	Dicofol(ECD)	54	Dicrotophos(FPD)
55	Dieldrin(ECD)	56	Diethofencarb(NPD)	57	Diflufenican(ECD)
58	Diflufenican(ECD)	59	Dimepiperate(ECD, NPD, FPD)	60	Dimethachlor(ECD)
61	Dimethenamid(NPD)	62	Dimethoate(ECD, NPD)	63	Dimethylvinphos(NPD, FPD)
64	Diniconazole(ECD)	65	Diphenamid(NPD)	66	Diphenylamine(NPD)
67	Dithiopyr(ECD)	68	Edifenphos(ECD, NPD)	69	Endosulfan(ECD)
70	Endrin(ECD)	71	EPN(ECD, NPD)	72	Esprocarb(ECD, NPD)
73	Ethion(ECD, NPD)	74	Ethoprophos(ECD, NPD)	75	Etoxazole(NPD)
76	Etrimfos(ECD, NPD)	77	Fenamidone(ECD, NPD)	78	Fenarimol(ECD, NPD)*
79	Fenazaquin(NPD, FPD)*	80	Fenbuconazole(ECD)*	81	Fenitrothion(ECD, NPD)
82	Fenobucarb(NPD)	83	Fenothiocarb(NPD)*	84	Fenoxanil(ECD, NPD)
85	Fenoxycarb(NPD, UVD)	86	Fenpropathrin(ECD, NPD)*	87	Fenthion(ECD, NPD)*
88	Fenvalerate(ECD)*	89	Fipronil(NPD, FPD)	90	Flonicamid(ECD)
91	Fluazinam(ECD)	92	Fludioxonil(NPD)	93	Flumiclorac-pentyl(ECD)
94	Flupyrazofos(NPD, FPD)	95	Flusilazole(NPD)	96	Flusulfamide(ECD)
97	Fluthiacet-methyl(ECD)	98	Flutolanil(ECD)	99	Fluvalinate(ECD)*
100	Folpet(ECD)	101	Fonofos(NPD)	102	Fosthiazate(NPD, FPD)
103	Fthalide(ECD)	104	Furathiocarb(NPD)	105	Heptachlor epoxide(ECD)
106	Heptachlor(ECD)	107	Hexachlorobenzene(ECD)	108	Imazalil(ECD)
109	Indanofan(ECD)	110	Indoxacarb(ECD)	111	Iprobenfos(NPD, FPD)
112	Iprodione(ECD)	113	Iprovalicarb(ECD)	114	Isazofos(NPD)
115	Isazophos(FPD)	116	Isofenphos(NPD)	117	Isofenphos-methyl(NPD)
118	Isoprothiolane(NPD, FPD)	119	Isoxathion(NPD)	120	Kresoxim-methyl(NPD)
121	Lactofen(ECD)	122	Malathion(ECD, NPD)	123	Mecarbam(ECD, NPD)
124	Mefenacet(ECD)	125	Mefenpyr-diethyl(ECD)	126	Mepronil(NPD)
127	Metconazole(NPD)	128	Methidathion(ECD)	129	Methoxychlor(ECD)
130	Metrafenone(ECD)	131	Molinate(NPD)	132	Myclobutanil(ECD, NPD)*
133	Nitrapyrin(ECD)	134	Nitrothal-isopropyl(ECD)	135	Nonachlor(ECD)
136	Nuarimol(ECD)*	137	Ofurace(ECD)	138	Oxadixyl(ECD)
139	Oxydemeton-methyl(FPD)	140	Paclobutrazol(ECD, NPD)*	141	Parathion(ECD, NPD)
142	Parathion-methyl(ECD, NPD)	143	Pebulate(MS)	144	Penconazole(ECD, NPD)
145	Pendimethalin(ECD, NPD)	146	Permethrin(ECD)*	147	Phenthoate(ECD)
148	Phosalone(ECD, NPD)	149	Phosmet(ECD)	150	Phosphamidone(ECD, NPD)
151	Picolinafen(ECD)	152	Picoxystrobin(ECD)	153	Piperophos(NPD, FPD)
154	Pirimicarb(NPD)	155	Pirimiphos-ethyl(NPD)	156	Pirimiphos-methyl(NPD)
157	Probenazole(ECD)	158	Prochloraz(ECD)	159	Procymidone(ECD, NPD)
160	Profenofos(ECD, NPD)	161	Propachlor(MS)	162	Propazine(NPD)
163	Propham(MS)	164	Propisochlor(ECD, NPD)	165	Propyzamide(ECD)
166	Prothiofos(NPD)	167	Pyraclofos(NPD)	168	Pyrazophos(ECD, NPD)
169	Pyridaben(NPD)*	170	Pyridalyl(ECD, NPD, FPD)	171	Pyrifenox(MS)
172	Pyrimidifen(ECD)	173	Pyriminobac-methyl(NPD)	174	Quinalphos(NPD)
175	Quintozene(ECD)	176	Simeconazole(NPD)	177	Sulprofos(FPD)
178	TCMTB(ECD)	179	Tebufenpyrad(NPD)*	180	Tebupirimfos(ECD, NPD, FPD)
181	Tefluthrin(ECD)	182	Terbufos(NPD)*	183	Terbutylazine(ECD, NPD)
184	Tetrachlorvinphos(FPD)	185	Tetradifon(ECD)	186	Thiazopyr(ECD, NPD)
187	Thifluzamide(ECD, NPD)	188	Thiometon(ECD, NPD)	189	Tolclofos-methyl(ECD, NPD)
190	Tolfenpyrad(NPD)	191	Tolylfluanid(ECD, NPD)	192	Tralomethrin(ECD)
193	Triadimefon(ECD, NPD)	194	Triazophos(NPD)	195	Tribuphos(FPD)
196	Triflumizole(ECD, NPD)	197	Triflumuron(ECD)	198	Triticonazole(NPD)
199	Uniconazole(ECD)	200	Vernolate(ECD)	201	Vinclozoline(ECD, NPD)
202	Zoxamide(ECD, NPD)

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(202종)

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(85종)

1	Acetamiprid(UVD)*	2	Aldicarb(FLD)	3	Amisulbrom(UVD)
4	Azafenidin(UVD)	5	Azamethiphos(MS)	6	Azoxystrobin(UVD)
7	Bendiocarb(FLD)	8	Bensulide(MS)	9	Benzoximate(UVD)*
10	Boscalid(UVD)	11	Butocarboxim(FLD)	12	Carbaryl(FLD)
13	Carbofuran(FLD)	14	Chlorantraniliprole(UVD)	15	Chlorimuron-ethyl(UVD)
16	Chlorobenzuron(UVD)	17	Chlorotoluron(UVD)	18	Chromafenozide(UVD)
19	Cinosulfuron(UVD)	20	Clothianidin(UVD)*	21	Cyazofamid(UVD)
22	Cyhalofop-butyl(UVD)	23	Cymoxanil(UVD)	24	Dimethomorph(UVD)
25	Ethaboxam(UVD, 310nm)	26	Ethametsulfuron-methyl(UVD)	27	Ethiofencarb(FLD)
28	Fenhexamid(UVD)	29	Fenpyroximate(UVD)*	30	Ferimzone(UVD)
31	Fluacrypyrim(UVD)	32	Flubendiamide(UVD)	33	Flufenacet(UVD)
34	Flufenoxuron(UVD)	35	Flumioxazine(UVD)	36	Fluquinconazole(UVD)
37	Fluridone(MS)	38	Forchlorfenuron(UVD)	39	Hexaflumuron(UVD)
40	Imazamox(UVD)	41	Imazapic(UVD)	42	Imazaquin(UVD)
43	Imazethapyr(UVD)	44	Imibenconazole(UVD)	45	Isoprocarb(FLD)
46	Isoproturon(UVD)	47	Lufenuron(UVD)	48	Mepanipyrim(NPD, UVD)
49	Metamifop(UVD)	50	Methabenzthiazuron(UVD)	51	Methiocarb(FLD)
52	Methomyl(FLD)*	53	Methoxyfenozide(UVD)	54	Metolcarb(FLD)
55	Nitenpyram(UVD)	56	Novaluron(UVD)	57	Oxamyl(FLD)*
58	Oxaziclomefon(UVD)	59	Pentoxazone(UVD)	60	Phenmedipham(UVD)
61	Promecarb(FLD)	62	Propoxur(FLD)	63	Pyraclostrobin(UVD)
64	Pyrazolate(UVD)	65	Pyribenzoxim(UVD)	66	Pyributicarb(UVD)
67	Pyridate(UVD)	68	Pyrimethanil(UVD)	69	Pyriproxyfen(UVD)
70	Pyroquilon(UVD)	71	Quinoclamine(UVD)	72	Rimsulfuron(UVD)
73	Spirodiclofen(UVD)	74	Tebufenozide(UVD)	75	Teflubenzuron(UVD)
76	Thenychlor(UVD)	77	Thiacloprid(UVD)*	78	Thiamethoxam(UVD)*
79	Thiodicarb(FLD)	80	Tiadinil(UVD)	81	Tribenuron-methyl(UVD)
82	Tricyclazole(NPD, UVD)	83	Trifloxystrobin(ECD, UVD)	84	Trimethacarb(FLD)
85	XMC(MS)

주8) 이 시험법을 이용하여 위의 분석대상 성분중 * 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 정량분석은 아래의 분석법에 따른다.

4.1.3.2 EPN, 다이아지논(Diazinon), 디메토에이트(Dimethoate), 말라치온(Malathion), 파라치온(Parathion), 페니트로치온(Fenitrothion), 펜치온(Fenthion), 펜토에이트(Penthoate), 메티다치온(Methidathion), 클로르피리포스(Chlorpyrifos), 디크로보스(Dichlorvos), 아진포스메틸(Azinphos-methyl), 오메토에이트(Omethoate), 피리미포스메틸(Pirimiphos-methyl), 클로르펜빈포스(Chlorfenvinphos), 에치온(Ethion), 포사론(Phosalone), 포스메트(Phosmet), 카보페노치온(Carbofenothion)

4.1.3.5 델타메쓰린(Deltamethrin), 바이오레스메스린(Bioresmethrin), 싸이할로쓰린(Cyhalothrin), 싸이플러쓰린(Cyfluthrin), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 트라로메스린(Tralomethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로파스린(Fenpropathrin). 푸르발리네이트(Fluvalinate), 푸르시트리네이트(Flucythrinate) 및 퍼메쓰린(Permethrin)

4.1.3.6 디노테푸란(Dinotefuran), 아세타미프리드(Acetamiprid), 이미다클로프리드(Imidacloprid), 크로치아니딘(Clothianidin), 티아크로프리드(Thiacloprid), 티아메톡삼(Thiamethoxam)

4.1.3.11  펜치온(Fenthion), 포레이트(Phorate) 및 터브포스(Terbufos)

4.1.3.14 벤족시메이트(Benzoximate), 클로펜테진(Clofentezine), 페나자퀸(Fenazaquin), 훼노치오카브(Fenothiocarb), 펜피록시메이트(Fenpyroximate), 헥시치아족스 (Hexythiazox), 피리다벤(Pyridaben) 및 테부펜피라드(Tebufenpyrad)

4.1.3.15  메소밀(Methomyl) 및 옥사밀(Oxamyl)

4.1.3.23 디페노코나졸(Difenoconazole), 페나리몰(Fenarimol), 펜부코나졸(Fenbuconazole), 헥사코나졸(Hexaconazole), 마이클로부타닐(Myclobutanil), 누아리몰 (Nuarimol), 파클로부트라졸(Paclobutrazol)

4.1.4.105 퀴날포스(Quinalphos)

4.1.3.1 “BHC(α, β, γ 및 δ-BHC), DDT(DDD 및 DDE), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin), 디코폴(Dicofol), 캡탄(Captan), 캡타폴(Captafol), 폴펫(Folpet), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon), 엔도설판(α, β-Endosulfan 및 Endosulfan sulfate), 클로로타로닐(Chlorothalonil)” 을“디코폴(Dicofol), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon)"으로 한다.

4.1.3.3 “이소프로카브(Isoprocarb, MIPC), 카바릴(Carbaryl, NAC) 및 카보후란(Carbofuran)”을 “이소프로카브(Isoprocarb, MIPC) 및 카바릴(Carbaryl, NAC)"로 한다.

“4.1.3.30 카보후란(Carbofuran 및 3-Hydroxycarbofuran), 벤푸라카브(Benfuracarb), 카보설판(Carbosulfan) 및 푸라치오카브(Furathiocarb)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 곡류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브를 0.25 N 염산 수용액으로 환류 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 카보후란과 3-수산화카보후란 표준원액을 1:2의 농도 비율이 되도록 아세토니트릴에 녹여 표준 혼합용액을 조제하고 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다. 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 아세토니트릴에 녹여 각각 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

사) 추출용액 : 0.25 N 염산 수용액

아) 여과 보조제 : Hyflo-SuperCel 또는 Celite 545를 전처리 과정 없이 그대로 사용한다.

자) 층 분리 보조제 : sodium lauryl sulfate 4%(w/v) 수용액

차) 검체보정(matrix-matched) 표준용액 : 카보후란/3-수산화카보후란 표준 혼합용액과 검체별 무처리 시료용액을 혼합, 카보후란 기준으로 최종 농도 0.005～0.1 mg/L이 되도록 희석한다. 즉, 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에 녹인 무처리 시료 2배 농축액, 아세토니트릴에 조제한 최종 농도의 10배 농도에 해당하는 표준 혼합용액, 물을 5:1:4(v/v/v)의 비율로 정확히 혼합하여 검체보정 표준용액을 조제하고 LC-MS 검량용으로 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상의 현미는 10 g, 콩류는 5 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 증류플라스크 넣고, 0.25 N 염산 수용액 150 mL를 가하여 가열, 1시간동안 환류 추출한다. 이 과정에서 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 카보후란으로 정량적으로 전환, 추출된다. 플라스크를 신속히 방냉한 후 여분의 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 냉각관 입구로부터 플라스크로 흘려 넣어 냉각관 및 플라스크 입구를 세척하여 환류 추출액과 합친다. 아세톤 20 mL를 가하여 잘 혼합하고(현미 및 대두의 경우 여과보조제 2 g을 추가로 첨가하고 혼합), 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과한다. 플라스크 벽면을 아세톤 5 mL로 씻어 내려 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 가하여 혼합한 후 흡인 여과, 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 염화나트륨 20 g을 첨가하고 완만하게 흔들어 완전히 녹인다. 수용액층을 디클로로메탄 100 mL 및 50 mL로 2회 분배 추출한다(층 분리가 잘 안될 때에는 층분리 보조제 1～5 mL를 첨가하고 가볍게 흔든 후 정치). 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(30/70, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(15/85, v/v)에서 아세토니트릴/물(60/40, v/v)로 15분간 직선적으로 농도 구배조건으로 흘린 후 10분간 아세토니트릴/물(60/40, v/v)을 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1 : 3-수산화카보후란(10.7분), 2 : 카보후란(18.6분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 카보후란, 3-수산화카보후란을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
카보후란	18.6	221	222
3-수산화카보후란	10.7	237	238, 220

“4.1.3.31 피로퀼론(Pyroquilon) 및 트리싸이클라졸(Tricyclazole)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피로퀼론과 트리싸이클라졸을 메탄올로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피로퀼론 및 트리싸이클라졸 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준용액을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 30분간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 균질기 컵 및 잔류물을 메탄올 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL, 물 250 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층을 1 L 용량 분액깔때기에 옮기고 헥산층은 버린다. 수용액층에 포화식염수 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 추출액 10 mL를 가하고 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 내려 버린다.

(1) 피로퀼론 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(15/85, v/v) 40 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v) 10 mL로 용해한다.

(2) 트리사이클라졸 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)  10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 피로퀼론 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸 아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.8 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 피로퀼론 256 nm, 트리사이클라졸 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피로퀼론(12.2분), 2 : 트리사이클라졸(12.1분)

라) 정량한계

피로퀼론 (0.02 mg/kg), 트리사이클라졸 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피로퀼론, 트리사이클라졸을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 피로퀼론-아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸-아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 70 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
피로퀼론	7.4	173	174
트리사이클라졸	7.3	189	190

“4.1.3.32 클로로타로닐(chlorothalonil), 캡탄(captan), 폴펫(folpet) 및 캡타폴(captafol)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴을 아세톤 및 3% 인산용액으로 추출하고 플로리실 컬럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MSD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 25 g)를 정밀히 달아 넣고, 물 20 mL를 넣고 습윤화한다. 아세톤 100 mL와 3% 인산용액 5 mL를 가하여 2분간 균질화한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 넣고 용해하여 분액깔대기에 옮기고 물 450 mL와 포화식염수 50 mL, 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 15 g을 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL으로 재용해하여 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/48.5/1.5, v/v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1(30 mm × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐온도 : 160℃(Chlorotalonil, captan, folpet), 200℃(captafol)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

4

1 : 클로로타로닐(5.8분), 2 : 캡탄(13.5분),

3 : 폴펫(14.4분), 4 : 캡타폴(9.3분)

라) 정량한계

클로로타로닐(0.002 mg/kg), 캡탄, 폴펫, 캡타폴(0.008 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫, 캡타폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1ms(50 mm × 0.25 mm, 032 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 240℃

(5) 주입모드 : split mode(30:1)

(6) 주입량 : 1 μL

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로로타로닐	6.0	266	109, 266
캡탄	10.2	301	79, 149, 301
폴펫	10.6	295	76, 104, 260, 295
캡타폴	12.8	347	79, 151, 347

“4.1.3.33 알드린(Aldrin), BHC(α, β, γ-BHC and δ-BHC), DDT(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE and p,p'-DDD), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin 및 δ-Keto-endrin), 엔도설판(α-Endosulfan, β-Endosulfan, Endosulfan sulfate), 클로르단(cis-Chlordane 및 trans-Chlordane) 및 헵타크로(Heptachlor 및 Heptachlor epoxide)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 견과종실류, 버섯류, 콩류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC,및cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE, p,p'-DDD, α-endosulfan, β-endosulfan, endosulfan sulfate, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor 및 heptachlor epoxide의 농도비는 각각 1, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD 및 endosulfan sulfate의 농도비는 각각 2가 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)로 2분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액 (50/0.3/49.7, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 320℃

(6) 주입모드 : split mode(20:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래피에서 표준품의 크로마토그램

α-BHC(12.1분), β-BHC(12.7분), γ-BHC(12.9분), δ-BHC(13.4분), heptachlor(14.5분), aldrin(15.4분), heptachlor epoxide(16.5분), trans-chlordane(17.3분), α-endosulfan(17.7분), cis-chlordane(17.8분), p,p'-DDE(18.6분), dieldrin(18.7분), endrin(19.5분), β-endosulfan(19.9분), p,p'-DDD(20.2분), o,p'-DDT(20.4분), endosulfan sulfate(21.7분), p,p'-DDT(21.9분), δ-keto-endrin(23.8분)

라) 정량한계

aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide(0.005 mg/kg), p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD, endosulfan sulfate(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 알드린, 디엘드린, 비에치씨, 클로르단, 디디티, 엔도설판, 엔드린, 헵타크로를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.9 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 :	300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50 ∼ 500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
α-BHC	12.1	288	219, 217, 181
β-BHC	12.7	288	219, 217, 181
γ-BHC	12.9	288	219, 217, 181
δ-BHC	13.4	288	219, 217, 181
Heptachlor	14.5	370	272, 100
Aldrin	15.4	362	263, 66
Heptachlor epoxide	16.5	386	353, 81
trans-Chlordane	17.3	406	375, 373
α-Endosulfan	17.7	404	241, 195
cis-Chlordane	17.8	406	375, 373
p,p'-DDE	18.6	316	318, 246
Dieldrin	18.7	378	277, 263, 79
Endrin	19.5	378	345, 317, 263
β-Endosulfan	19.9	404	338, 195
p,p'-DDD(TDE)	20.2	318	237, 235, 165
o,p'-DDT	20.4	352	237, 235, 165
Endosulfan sulfate	21.7	420	274, 272, 229
p,p'-DDT	21.9	352	237, 235, 165
δ-keto-Endrin	23.8	378	317, 67

“4.1.3.34 메톡시페노자이드(methoxyfenozide), 테부페노자이드(tebufenozide) 및 크로마페노자이드(chromafenozide)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣고 혼합한다. 다시 아세톤 100 mL를 넣은 후 2분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하여 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL, 포화식염수 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL로 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴을 40 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산:에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 증류수: 메탄올(33/67, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/메탄올 혼합액(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 225 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메톡시페노자이드(10.4분), 크로마페노자이드(11.2분), 테부페노자이드(13.0분)

다) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 메탄올(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200～500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
메톡시페노자이드	11.6	368	391
크로마페노자이드	13.7	394	417
테부페노자이드	18.3	352	375

“4.1.3.35 훼녹시카브(Fenoxycarb), 피리프록시펜(Pyriproxyfen) 및 메토프렌(Methoprene)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

과일류, 견과종실류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 훼녹시카브, 메토프렌, 피리프록시펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 훼녹시카브, 피리프록시펜 및 메토프렌 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : 훼녹시카브는 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v), 메토프렌 및 피리프록시펜은 아세토니트릴/물 혼합액(90/10, v/v)에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄/헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 메코프렌과 피리프록시펜은 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 150 mL, 훼녹시카브는 에틸아세테이트/헥산 혼합액(15/85, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 각각 아세토니트릴/물 90/10(v/v) 및 65/35(v/v) 혼합액 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래피 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 230 nm(훼녹시카브 및 피리프록시펜), 265 nm(메토프렌)

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피리프록시펜(8.9분), 2 : 훼녹시카브(9.5분), 3 : 메토프렌(11.4분)

라) 정량한계

훼녹시카브(0.04 mg/kg), 피리프록시펜(0.04 mg/kg), 메토프렌(0.04 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 훼녹시카브, 피리프록시펜, 메토프렌을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 아세토니트릴/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 이온화 : ESI positive-ion mode

(6) 주입량 : 5 μL

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
훼녹시카브	6.0	301	302
피리프록시펜	5.4	321	322
메토프렌	4.9	310	279

“4.1.3.36 페노트린(Phenothrin) 및 실라프루오펜(Silafluofen)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

과일류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 페노트린과 실라프루오펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

다) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 페노트린(cis 및 trans 이성질체의 혼합물) 및 실라프루오펜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액(80/20, v/v)에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관 ․ 사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기 상에서 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 가하여 분배 추출하여 아세토니트릴층을 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 헥산포화아세토니트릴 30 mL씩을 다시 가하여 분배 추출과정을 2회 반복한다. 합친 아세토니트릴 추출액을 40℃에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.)

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 4 mL에 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(65/35(v/v)에서 95/5(v/v)로 30분간 직선적으로 농도구배한다.

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1, 2 : 페노트린(cis 및 trans; 15.0분, 15.4분), 3 : 실라프루오펜(21.2분)

라) 정량한계

페노트린(0.02 mg/kg), 실라프루오펜(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페노트린, 실라프루오펜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(75/25, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
페노트린	13.6(cis), 14.3(trans)	350	351

나) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린 및 실라프루오펜)

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 50℃에서 2분간 유지하고 20℃/min 비율로 240℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한 후, 3℃/min 비율로 280℃까지 온도를 상승시킨다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 검체 조제 : 아세토니트릴에 녹인 최종 검체용액 0.8 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 헥산 1 mL에 재용해한다.

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
페노트린	18.1 (cis), 18.3 (trans)	350	183, 123
실라프루오펜	24.2	408	286, 179

“4.1.3.37 아크리나쓰린(Acrinathrin), 비펜스린(Bifenthrin), 싸이클로프로스린(Cycloprothrin), 테플루스린(Tefluthrin) 및 할펜프록스(Halfenprox)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 콩류, 서류, 견과종실류, 곡류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스, 테플루스린을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

다) 액체크로마토그래프(HPLC-UVD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린(부분입체이성질체의 혼합물), 할펜프록스 및 테플루스린 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스, 테플루스린 농도비가 2.5:2.5:10:10:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관⦁사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액 (25/75, v/v) 50 mL로 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm , 0.5 μm)  또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 싸이클로프로스린), 220℃(테플루스린)

(4) 오븐 온도 : 220℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스), 240℃(싸이클로프로스린), 160℃(테플루스린)

(5) 검출기온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체/액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

5

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 싸이클로프로스린(15.9분), 2 : 아크리나쓰린(17.9분)

3 : 테플루쓰린(18.6분), 4 : 비펜스린(22.8분), 5 : 할펜프록스(24.2분)

라) 정량한계

아크리나쓰린(0.005 mg/kg), 비펜스린(0.005 mg/kg), 싸이클로프로스린(0.02mg/kg), 할펜프록스(0.02 mg/kg), 테플루스린(0.002 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체/액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기상의 측정 조건(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 테플루스린)

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 50℃에서 2분간 유지, 180℃까지 20℃/분 속도로 직선적 승온, 2분간 유지한 후 280℃까지 5℃/분 속도로 직선적 승온한다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아크리나쓰린	27.0	541	181, 208, 289
비펜스린	24.5	422	181, 166
할펜프록스	30.0	476	263, 265, 183
테플루스린	13.5	418	177, 197

나) 액체크로마토그래프-질량분석기상의 조건(싸이클로프로스린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 20 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltae : 100 V

(7) 검체 조제 : 헥산에 녹인 최종 검체용액 2 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 2 mL로 재용해한다.

“4.1.3.38 비페닐(Biphenyl), 모노리누론(Monolinuron), 노나클로르(Nonachlor), 옥시카르복신 (Oxycarboxin)및 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl), 디클로사이메트(Diclocymet),  이소자디펜에틸(Isoxadifen-ethyl), 이소자플루톨(Isoxaflutole) 및 메토미노스트로빈(Metominostrobin)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하여 활성탄/아미노프로필 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 비페닐, 디클로사이메트, 이소자디펜에틸, 메토미노스트로빈, 노나클로르 및 테트라클로빈포스의 농도비가 1:1:1:2:1:2가 되도록 표준원액을 혼합하여 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 활성탄/아미노프로필 카트리지 : 활성탄(0.5 g)과 아미노프로필(0.5 g)이 2층으로 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g, 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가하여 혼합하여 2시간 동안 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 2분간 고속 마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출하고 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 미리 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액 (75/25, v/v) 2 mL에 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴 층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL로 재용해한다.

나) 정제

활성탄/아미노프로필 카트리지에 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL를 고정상 상단에 에 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 15 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한다. 검체별 최종 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 아세톤 10 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 메탄올 10 mL로 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

5

6

7

8

그림. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 비페닐(9.9분), 2, 3. 디클로사이메트(diclocymet, 17.5, 17.8분), 4, 5. 노나클로르(18.2, 19.3분), 6, 7. 메토미노스트로빈(18.3, 18.7분), 8. 이소자디펜에틸(19.7분),

1

2

3

4

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 옥시카르복신(5.5분), 2. 모노리누론(11.7분), 3. 이소자플루톨(13.1분),

4. 클로퀸토셋멕실(18.9분)

바) 정량한계

비페닐(0.025 mg/kg), 클로퀸토셋멕실(0.02 mg/kg), 디클로사이메트(0.025 mg/kg), 이소자디펜에틸(0.025 mg/kg), 이소자플루톨(0.02 mg/kg), 메토미노스트로빈(0.05 mg/kg), 모노리누론(0.02 mg/kg), 노나클로르(0.025 mg/kg), 옥시카르복신(0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체/액체 크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 80℃에서 2분간 정치하고 280℃까지 10℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
비페닐	9.9	154	154, 153
디클로사이메트	17.5, 17.8	312	277, 221, 173
노나클로르	18.2, 19.3	440	409, 411, 407
메토미노스트로빈	18.3, 18.7	284	191, 238, 196
이소자디펜에틸	19.7	295	295, 294, 204

나) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액을 35/65(v/v)에서 2분간 정치 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
옥시카르복신	5.5	267	268
모노리누론	11.7	214	215
이소자플루톨	13.1	359	360, 251
클로퀸토셋멕실	18.9	335	336, 238

“4.1.3.39 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 사이클아니리드(Cyclanilide), 디클로슐람(Diclosulam), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac), 이옥시닐(Ioxynil), 이소카바미드(Isocarbamid), 레나실(Lenacil), 메펜피르(Mefenpyr), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid) 및 트랄콕시딤(Tralkoxydim)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 실리카겔 카트리지 : 실리카겔(0.5 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g. 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류 등 건조 검체는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가한 후 2시간 동안 방치), 0.01 M 염산수용액 20 mL와 아세토니트릴 100 mL를 가하여 20분간 진탕(300 rpm)하여 추출한 후 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 여액 중 수분에 충분히 포화되도록 염화나트륨 50 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 12 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. 즉, C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 추출액 10 mL를 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 20 mL(클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락 분석 시에는 5 mL)를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL로 재용해한다.

나) 정제

(1) 클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액 (20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 12 mL를 유출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 5 mL를 가하여 용해한다.

(2) 클로퀸토셋 및 메펜피르

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 용출액과 합치고 여기에 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 20 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

(3) 클로란슐람메틸 등 나머지 농약

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL과 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로퀸토셋(5.4분),          2. 메펜피르(17.2분)

3

1

2

3

4

5

6

7

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 플루멧슐람(2.5분),           2. 플로라슐람(3.3분),

3. 이소카바미드(5.2분),         4. 클로란슐람메틸(8.2분),

5. 디클로슐람(8.7분),           6. 레나실(12.4분),

7. 트랄콕시딤(13.5분)

3

1

2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로프로프(5.0분), 2. 플루미클로락(10.1분), 3.클로메프로프에시드(11.4분)

1

2

3

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 초산나프탈렌(4.6분),  2. 이옥시닐(9.9분), 3. 사이클아니리드(11.3분)

바) 정량한계

클로메프로프에시드(0.05 mg/kg), 클로프로프(0.05 mg/kg), 클로퀸토셋(0.05 mg/kg), 클로란슐람메틸(0.05 mg/kg), 사이클아니리드(0.05 mg/kg), 디클로슐람(0.05 mg/kg), 플로라슐람(0.05 mg/kg), 플루멧슐람(0.05 mg/kg), 플루미클로락(0.05 mg/kg), 이옥시닐(0.05 mg/kg), 이소카바미드(0.05 mg/kg), 레나실(0.05 mg/kg), 메펜피르(0.05 mg/kg), 초산나프탈렌(0.05 mg/kg), 트랄콕시딤(0.05 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(35/65, v/v)에서 2분간 유지한 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode 및 negative-ion mode

(7) Cone voltage : 30～50 V(이온화 방식 및 농약별로 최적화한 값을 사용한다.)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	ESI mode	이온(m/z)
플루멧슐람	2.5	325	Positive	326
플로라슐람	3.3	359	Positive	360
초산나프탈렌	4.6	186	Negative	141, 185
클로프로프	5.0	200	Negative	127, 129
이소카바미드	5.2	185	Positive	186
클로퀸토셋	5.4	237	Positive	238, 240
클로란슐람메틸	8.1	429	Positive	430, 398
디클로슐람	8.7	405	Positive	406
이옥시닐	9.9	371	Negative	370
플루미클로락	10.1	353	Negative	294, 352, 296
사이클아니리드	11.3	273	Negative	272, 228
클로메프로프에시드	11.4	248	Negative	247, 175
레나실	12.4	234	Positive	153
트랄콕시딤	13.5	329	Positive	284, 330
메펜피르	17.2	316	Positive	327, 329

4.1.4.9 “클로르프로팜(Chlorpropham)”을 삭제하고, “클로르프로팜(Chlorpropham)"을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 콩류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로르프로팜을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로르프로팜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L 가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을130℃에서 하룻밤 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 1시간 동안 진탕 추출(180 rpm 이상)한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 메탄올에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 200 μL를 첨가하고 35℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 증류수 50 mL과 헥산 100 mL로 차례로 씻어  포화식염수 50 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층은 별도의 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 35℃ 이하에서 감압농축하여 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출'로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 35℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래피 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 240 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 클로르프로팜(11.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로르프로팜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로르프로팜	4.2	213	214

4.1.4.43 “도딘(Dodine)”을 삭제하고, “도딘(Dodine)"을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 도딘을 아세토니트릴로 추출하고 포스트컬럼 유도체 반응장치 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD) 및 포스트컬럼 유도체 반응장치를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 도딘 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 과염소산나트륨(sodium perchlorate) 용액 : 14.1 g의 과염소산나트륨, 400 mg의 수산화나트륨 및 1.8 mL의 락트산(lactic acid, DL racemate)을 물에 함께 녹여 1 L로 한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(과일류 및 채소류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 3분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 100 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 물을 가하여 총 부피를 240 mL로 조절, 혼합한 후 이 중 120 mL(시료 10 g 해당량)를 취해 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 에틸아세테이트 100 mL로 씻어 내리고 10% 염화나트륨 수용액 100 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 에틸아세테이트층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 메탄올 2 mL로 재용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/과염소산나트륨수용액 혼합액(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 여기파장(Ex) 395 nm, 형광파장(Em) 500 nm

(6) 주입량 : 20 μL

(7) 포스트컬럼 유도체 반응액

1차 펌프 이송액 : 0.5 M 수산화나트륨 수용액 0.2 mL/min

2차 펌프 이송액 : 0.3% ninhydrin 수용액 0.1 mL/min

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

도딘(12.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 도딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(50 mm × 3.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산 암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
도딘	3.2	287	288

4.1.4.59 “에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)”을 삭제하고, “에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)”를 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 에마멕틴 벤조에이트를 아세톤으로 추출하고 에틸아세테이트로 분배, 추출한 후 트리에칠아민과 trifluoroacetic anhydride로 유도체화하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 에마멕틴 벤조에이트 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2~3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 분액깔때기에 미리 포화식염수 50 mL를 넣고 잔류물을 물 50 mL로 용해하고 다시 에틸아세테이트 100 mL로 용해하여 합친 후, 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받고 수용액층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 분배 추출하여 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL로 재용해하고 그 중 1 mL를 취하여 2 mL 바이알에 담아 질소 가스로 농축한다. 잔류물을 0.5 M 트리에칠아민 0.5 mL를 가하여 용해한 후 0.5 M trifluoroacetic anhydride 0.5 mL를 가하여 볼텍스 믹서로 약 30초간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 메탄올/물(97/3, v/v)

(4) 이동상 유량 : 1 mL/min

(5) 칼럼 온도 : 35℃

(6) 검출파장 : 여기파장(Ex) 365 nm, 형광파장(Em) 470 nm

(7) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에마멕틴 벤조에이트(Emamectin) (15.8분)

라) 정량한계

0.004 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 에마멕틴 벤조에이트를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물 (50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～1,000 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
에마멕틴	1.2	886	887

4.1.4.75 “아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl)”을 삭제하고, “아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아시벤졸라-에스-메칠을 메탄올로 추출하고 염산을 이용하여 디클로르메탄으로 산-염기 분배, 추출한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아시벤졸라-에스-메칠 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 물 16 mL와 1N 수산화나트륨 용액 4 mL를 가하여 60℃의 항온조(60 rpm)에서 1시간 동안 반응하여 공기 중에서 상온까지 식힌 후 메탄올 100 mL, 염화칼슘 2 g을 가하여 1시간 동안 진탕추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 20 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 메탄올을 이용하여 150 mL로 맞춘다. 이 중 60 mL를 취하여 분액깔때기에 옮겨 포화식염수 50 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 버리는 과정을 2회 반복한다. 수용액 층에 1 N 염산 20 mL, 디클로르메탄 100 mL를 가하여 진탕한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 잔류물을 아세토니트릴 4 mL를 가하여 최종부피가 2 mL가 되게하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴/0.1% 아세트산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아시벤졸라-에스-메칠(acibenzolar acid) (9.3분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아시벤졸라-에스-메칠을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴)/0.1% 아세트산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아시벤졸라산	3.8	180	181

“4.1.4.148 펜헥사미드(Fenhexamid)”를 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜헥사미드를 아세톤으로 추출하고 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜헥사미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 1시간동안 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 분액깔때기에 미리 포화식염수 50 mL를 넣고 잔류물을 물 50 mL로 용해하고 다시 에틸아세테이트 100 mL로 용해하여 합친 후, 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받고 수용액층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 분배 추출하여 받아 40℃ 이하에서 감압농축한다. 잔류물을 물 50 mL로 헹구고 다시 디클로르메탄 100 mL로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화 식염수 50 mL를 가하여 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 5 mL로 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 35 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 3 g을 차례로 충진한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 0.1% 아세트산 함유 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하고 농축잔사를 약 1 mL로 헹구어 합쳐 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(1/9, v/v) 혼합액 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(3:17, v/v) 혼합액 100 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL를 가하여 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(55/45, v/v(배추)), 아세토니트릴/물(53:47, v/v(사과, 감귤)), 아세토니트릴/물(52/48, v/v(고추))

(4) 이동상 유량 : 1 mL/min

(5) 칼럼 온도 : 35℃

(6) 검출파장 : 205 nm

(7) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

펜헥사미드(11.0분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜헥사미드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
펜헥사미드	3.7	301	302

“4.1.4.149 프로클로라즈(Prochloraz)”를 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 프로클로라즈 및 프로클로라즈 대사체를 아세토니트릴로 추출하고 pyridine hydrochloride를 가하여 2,4,6-TCP로 전환하여 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 프로클로라즈 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 30분간 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물을 물 100 mL과 디클로르메탄 50 mL으로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로르메탄 50 mL에 재용해한 용액 중 1 mL를 취하여 40 mL의 바이알에 담아 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 질소건고한다. 여기에 pridine hydrochloride 5 g를 넣고 밀봉한 다음 바이알을 220℃(silicon oil bath)에서 1시간동안 가열한 후 실온으로 냉각시키고 0.2M 염산 20 mL를 가하여 용해하여 분액깔때기에 옮겨 물 100 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 분리될 때까지 정치한다. 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 여기에 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 아세톤 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 mm × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 5.0 mL/min

(3) 주입부 온도 : 300℃

(4) 오븐 온도 : 110℃

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 :  splitless mode

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

프로클로라즈(2,4,6-TCP) (8.2분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 프로클로라즈를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 5분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 3분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 270℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 80～500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
2,4,6-TCP	11.9	197	196

“4.1.4.150 싸이프로디닐(Cyprodinil)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 싸이프로디닐을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 싸이프로디닐 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라)  표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(채소류 및 과일류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL이 들어 있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 2분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층은 여분의 250 mL 용량의 분액여두에 옮기고 헥산층은 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 다시 분배 추출하고 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다.이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18 칼럼(25 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 270 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

싸이프로디닐(8.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 싸이프로디닐을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(30 mm × 2.1 mm, 1.9 μm)

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 96 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
싸이프로디닐	2.7	225	226

“4.1.4.151 나프로파마이드(Napropamide)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 견과종실류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 나프로파마이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 나프로파마이드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 40 mesh를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(콩류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세톤을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL가 들어있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 다시 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 40 cm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시키고 이를 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

나프로파마이드(8.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 나프로파마이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(300 mm × 3.0 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 44 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
나프로파마이드	1.9	271	272

“4.1.4.152 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피콕시스트로빈을 아세톤으로 추출한 후 플로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 피콕시스트로빈 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh)을130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화하고 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔대기에 옮긴다. 이에 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합친다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 후로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(95/5, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

※ 추가 정제(고추 등 추가 정제가 필요한 검체)

상기 ‘나) 정제’로부터 얻은 시험용액을 미리 헥산 10 mL로 활성화한 NH2 카트리지(2 g, 12 mL)에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 헥산/에틸아세테이트(90/10, v/v) 혼합액 12 mL를 가하여 유출시켜 버린 후, 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 12 mL로 유출시켜 감압농출플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 5분 이상 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

피콕시스트로빈(28.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피콕시스트로빈을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.8 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 3분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
17.54	367.32	145, 335

“4.1.4.153 플루트리아폴(Flutriafol)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루트리아폴을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루트리아폴 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g. 채소류, 과일류 및 종실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡인여과하고 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 500 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 약 1 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 20 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고, 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 아세톤을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루트리아폴(19.3분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 플루트라아폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그라프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 µL

(8) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
17.1	301	219, 123

제 10. 일반시험법 중 “5.3.63 락토파민(Ractopamine)” 을 “5.3.63 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol)”로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중 베타-아고니스트 분해효소제를 사용하여 조직에서 분해한 후 에틸아세테이트로 추출하고 베타-아고니스트 전용 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 락토파민, 클렌부테롤 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 락토파민 D3(Ractopamine D3), 클렌부테롤 D9(Clenbuterol D9) 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 락토파민-D3는 100 ng/mL, 클렌부테롤-D9은 40 ng/mL로 한다.

사) 분해효소제 : β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/arylsulfatase)

아) 0.2 M 초산암모늄완충용액(pH 5.2) : 초산암모늄 1.54 g을 100 mL 메스플라스크에 취하여 물로 녹여 표시선까지 채우고 초산을 넣어 pH 5.2로 한다.

자) 베타 아고니스트 전용 카트리지 : MIP(Molecular Imprinted Polymer) 카트리지(25 mg, 10 mL) 또는 이와 동등한 것

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고, 0.2 M 초산 암모늄완충용액(pH 5.2) 10 mL, 포화염화나트륨 2 mL, 분해효소제 100 μL를 가하여 37℃에서 12시간 반응시킨다. 반응 후 5 M 수산화나트륨용액을 사용하여 pH 12로 조정한 뒤, 이 용액에 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 진탕하고 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취한다. 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 추출을 한번 더 반복하여 상층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물을 20 mL 메탄올 포화 헥산으로 재용해 하여 분액여과에 옮긴 뒤 20 mL 헥산 포화 메탄올을 첨가하여 3분간 흔들어준다. 하층액을 무수황산나트륨에 통과시켜 모은 뒤, 이 과정을 한번 반복한 뒤, 하층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물은 0.025 M 초산암모늄용액 2 mL로 재용해한다. 미리 메탄올 1 mL, 물 1 mL와 0.025 M 초산암모늄용액 1 mL로 활성화시킨 MIP 카트리지(Molecular imprinted polymer, 25 ㎎, 10 mL)에 추출액을 흡착시킨다. 메탄올 1 mL로 카트리지를 세척한 후 메탄올 : 초산(9 : 1) 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 2 mL 이동상A에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 초산 암모늄(pH 4.3) : 아세토니트릴(95 : 5, v/v)

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
1	100	0
2	100	0
6	10	90
8	0	100
10	0	100
11	100	0
15	100	0

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) Collision energy

물질	Precursor Ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
락토파민	302	107, 284
락토파민 D3	305	107, 124
클렌부테롤	277	203, 259
클렌부테롤 D9	286	204, 268

나) 표준품 크로마토그램

Ractopamine

Ractopamine D3

Clenbuterol

Clenbuterol D9

그림 1. 락토파민(6.70분), 락토파민 D3(6.69분), 클렌부테롤(7.04분), 클렌부테롤 D9(7.03분)

다) 정량한계

(1) 락토파민 : 0.5 μg/kg

(2) 클렌부테롤 : 0.2 μg/kg

7) 정량시험

표준용액을 농도별로 시험관에 취하고 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고 질소농축한 후 이동상 2 mL에 녹인 용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특정이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 내부표준물질 락토파민 D3의 m/z 107 이온에 대한 락토파민 m/z 284 이온, 클렌부테롤 D9의 204 m/z 이온에 대한 클렌부테롤 m/z 203 이온의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 락토파민과 클렌부테롤의 함량을 구한다.

5.3.87 락토파민(Ractopamine)을 삭제한다.

별표 4 (1) 이민옥타딘(Iminoctadine) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

별표 4 (26) 디페노코나졸(Difenoconazolle) 중 다음 항목을 신설한다.

양파	0.05

별표 4 (29) 디플루벤주론(Diflubenzuron) 중 다음 항목을 신설한다.

참외	1.0

별표 4 (38) 메타락실(Metalaxyl) 중 다음 항목을 신설한다.

마늘(풋마늘포함)	0.05

별표 4 (50) 베나락실(Benalaxyl) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

토마토	2.0

참외	1.0

별표 4 (149) 트리프루미졸(Triflumizole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘	0.05

풋마늘	1.0

별표 4 (200) 헥사코나졸(Hexaconazole) 중 “마늘(풋마늘포함) 0.05”를 “마늘(풋마늘포함) 0.5”로 한다.

별표 4 (206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr) 중 “오이 0.1”을 “오이 0.5”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

참나물	20

별표 4 (209) 테프루벤주론(Teflubenzuron) 중 “엇갈이배추 0.2”를 “엇갈이배추 1.0”으로 하고, “딸기 0.2”를 “딸기 1.0”으로 한다.

별표 4 (214) 피리다벤(Pyridaben) 중 다음 항목을 신설한다.

복숭아	1.0

별표 4 (218) 디메토모르프(Dimethomorph) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기	2.0

별표 4 (224) 싸이목사닐(Cymoxanil) 중 다음 항목을 신설한다.

시금치	2.0

별표 4 (225) 싸이프로디닐(Cyprodinil) 중 다음 항목을 신설한다.

감	1.0

별표 4 (227) 아세타미프리드(Acetamiprid) 중 다음 항목을 신설한다.

비름나물	10

별표 4 (237) 피메트로진(Pymetrozine) 중 다음 항목을 신설한다.

보리	0.05

별표 4 (246)스피노사드(Spinosad) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기	1.0

별표 4 (248) 아바멕틴(Abamectin) 중 다음 항목을 신설한다.

토마토	0.01

별표 4 (290) 인독사카브(Indoxacarb) 중 다음 항목을 신설한다.

참나물	10

별표 4 (321) 디노테푸란(Dinotefuran) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	1.0

별표 4 (324) 비페나제이트(Bifenazate) 중 “감귤 0.1”을 “감귤 1.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	3.0

오이	0.5

별표 4 (335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

보리	1.0

복분자	1.0

별표 4 (337) 티아메톡삼(Thiamethoxam) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

보리	0.4

상추	15

별표 4 (349) 노발루론(Novaluron) 중 다음 항목을 신설한다.

참나물	10

별표 4 (361) 테플루스린(Tefluthrin) 중 다음 항목을 신설한다.

수박	0.05

별표 4 (380) 피리다릴(Pyridalyl) 중 다음 항목을 신설한다.

참나물	20

별표 4 (391) 만디프로파미드(Mandipropamid) 중 다음 항목을 신설한다.

시금치	25

별표 4 (403) 메타플루미존(Metaflumizone) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기	2.0

별표 4 (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 다음 항목을 신설한다.

멜론	0.2

별표 4 (409) 아미설브롬(Amisulbrom) 중 다음 항목을 신설한다.

브로콜리	2.0

별표 4 (416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

호박	0.7

호박잎	7.0

딸기	1.0

별표 4 (417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide) 중 다음 항목을 신설한다.

옥수수	0.05

별표 4 (423) 피콕시스트로빈(Pycoxystrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감	1.0

오이	1.0

별표 4 (427) 이미시아포스(Imicyafos) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마(건조포함)	0.05

멜론	0.05

토마토	0.05

별표 7 중 (111) ∼ (116)까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

별표 7, (111) 메벤다졸(Mebendazole)

돼지근육	0.06

돼지지방	0.06

돼지간	0.4

돼지신장	0.06

말근육	0.06

말지방	0.06

말간	0.4

말신장	0.06

가금근육	0.06

가금지방	0.06

가금간	0.4

가금신장	0.06

별표 7, (112) 니트록시닐(Nitroxinil)

소근육	0.4

소지방	0.2

소간	0.02

소신장	0.4

양근육	0.4

양지방	0.2

양간	0.02

양신장	0.4

별표 7, (113) 클로술론(Clorsulon)

소근육	0.035

소간	0.1

소신장	0.2

별표 7, (114) 톨페나믹산(Tolfenamic acid)

소근육	0.05

소간	0.4

소신장	0.1

돼지근육	0.05

돼지간	0.4

돼지신장	0.1

유	0.05

별표 7, (115) 툴라스로마이신(Tulathriomycin)

소근육	0.1

소지방	0.1

소간	3.0

소신장	3.0

돼지근육	0.1

돼지지방	0.1

돼지간	3.0

돼지신장	3.0

별표 7, (116) 시미아졸(Cymiazole)

벌꿀	1.0

부  칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시 후 7일이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(농약 및 동물용의약품 잔류허용기준 적용례) 이 고시 시행 당시 판매중인 식품에도 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다

신∙구조문 대비표

현  행

개  정 안

제 1. 총칙. 1. 일반원칙

<신  설>

제 10. 일반시험법

1 ∼ 4.1.2.1 (생  략)

4.1.2.2 다종농약다성분 분석법(Multi class pesticide multiresidue methods)-제2법

1) ∼ 4) 가) (생  략)

나) 일회용 카트리지：후로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

4) 다) ∼ 6) 나) (2) (생  략)

<신  설>

7) ∼ 8) (생  략)

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(154종)

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(68종)

주7)  (생  략)

4.1.2.3 ∼ 4.1.3 (생  략)

4.1.3.1 BHC(α, β, γ 및 δ-BHC), DDT(DDD 및 DDE), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin), 디코폴(Dicofol), 캡탄(Captan), 캡타폴(Captafol), 폴펫(Folpet), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon), 엔도설판(α, β-Endosulfan 및 Endosulfan sulfate), 클로로타로닐(Chlorothalonil)

4.1.3.3 이소프로카브(Isoprocarb, MIPC), 카바릴(Carbaryl, NAC) 및 카보후란

<신  설>

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<신  설>

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4..1.3.2 ∼ 4.1.3.30 (생  략)

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4.1.4 ∼ 4.1.4.8 (생  략)

4.1.4.9 클로르프로팜(Chlorpropham)

<신  설>

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<신  설>

<신  설>

4.1.4.10 ∼ 4.1.4.42 (생  략)

4.1.4.43 도딘(Dodine)

<신  설>

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<신  설>

<신  설>

4.1.4.44 ∼ 4.1.4.58 (생  략)

4.1.4.59 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

<신  설>

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<신  설>

<신  설>

<신  설>

4.1.4.60 ∼ 4.1.4.74 (생  략)

4.1.4.75 아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl)

<신  설>

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4.1.4.76 ∼ 4.1.4.147 (현행과 같음)

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<신  설>

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.62 (생  략)

5.3.63 클렌부테롤(Clenbuterol)

<신  설>

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<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

5.3.64 ∼ 5.3.86 (생  략)

5.3.87 락토파민(Ractopamine)

5.3.88 ∼ 5.3.92 (생  략)

[별표 1] ∼ [별표 3] (생  략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이민옥타딘(Iminoctadine)

(생  략)

<신  설>

(2) ∼ (25) (생  략)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(생  략)

<신  설>

(27) ∼ (28) (생  략)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(생  략)

<신  설>

(30) ∼ (37) (생  략)

(38) 메타락실(Metalaxyl)

(생  략)

<신  설>

(39) ∼ (49) (생  략)

(50) 베나락실(Benalaxyl)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(51) ∼ (148) (생  략)

(149) 트리프루미졸(Triflumizole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(150) ∼ (199) (생  략)

(200) 헥사코나졸(Hexaconazole)

(생  략)

마늘(풋마늘포함)	0.05

(201) ∼ (205) (생  략)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(생  략)

오이	0.1

<신  설>

(207) ∼ (208) (생  략)

(209) 테프루벤주론(Teflubenzuron)

(생  략)

엇갈이배추	0.2

딸기	0.2

(210) ∼ (213) (생  략)

(214) 피리다벤(Pyridaben)

(생  략)

<신  설>

(215) ∼ (217) (생  략)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(생  략)

<신  설>

(219) ∼ (223) (생  략)

(224) 싸이목사닐(Cymoxanil)

(생  략)

<신  설>

(225) 싸이프로디닐(Cyprodinil)

(생  략)

<신  설>

(226) (생  략)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(생  략)

<신  설>

(228) ∼ (236) (생  략)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(생  략)

<신  설>

(238) ∼ (245) (생  략)

(246) 스피노사드(Spinosad)

(생  략)

<신  설>

(247) (생  략)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(생  략)

<신  설>

(249) ∼ (289) (생  략)

(290) 인독사카브(Indoxacarb)

(생  략)

<신  설>

(291) ∼ (320) (생  략)

(321) 디노테푸란(Dinotefuran)

(생  략)

<신  설>

(322) ∼ (323) (생  략)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(생  략)

감귤	0.1

<신  설>

<신  설>

(325) ∼ (334) (생  략)

(335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(336) (생  략)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(338) ∼ (348) (생  략)

(349) 노발루론(Novaluron)

(생  략)

<신  설>

(350) ∼ (360) (생  략)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(생  략)

<신  설>

(362) ∼ (279) (생  략)

(380) 피리다릴(Pyridalyl)

(생  략)

<신  설>

(381) ∼ (390) (생  략)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

(생  략)

<신  설>

(392) ∼ (402) (생  략)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(생  략)

<신  설>

(404) ∼ (407) (생  략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생  략)

<신  설>

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(생  략)

<신  설>

(410) ∼ (415) (생  략)

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(생  략)

<신  설>

(418) ∼ (422) (생  략)

(423) 피콕시스트로빈(Pycoxystrobin)

(생  략)

<신  설>

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(424) ∼ (426) (생  략)

(427) 이미시아포스(Imicyafos)

(생  략)

<신  설>

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[별표5] ∼ [별표6] (생  략)

(1) ∼ (110) (생  략)

<신  설>

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<신  설>

<신  설>

(현행과 같음)

31) 식품 중 잔류 농약 및 동물용의약품 시험법의 경우 정량한계 미만을 불검출로 처리한다.

(현행과 같음)

1 ∼ 4.1.2.1 (현행과 같음)

(현행과 같음)

1) ∼ 4) 가) (현행과 같음)

나) 일회용 카트리지：플로리실(500 mg) 및 아미노-프로필(1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지

4) 다) ∼ 6) 나 (2) (현행과 같음)

(3) LC-MS

(가) 칼럼：C18(100 × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상：A(물 + 0.1% 개미산, 2 mM 아세트산암모늄), B(99% 아세토니트릴 +  0.1% 개미산, 2 mM 아세트산암모늄)

- A/B(90/10, v/v)에서 (10/90, v/v)의 혼합액으로 20분간 농도균배한 후 10분이상 흘려보낸다.

(다) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(라) 칼럼 온도 : 40℃

(마) 주입량 : 2 μL

(바) 이온화 : ESI positive 또는 negative-ion mode

7) ∼ 8) (현행과 같음)

9) 이 시험법의 분석 대상농약 및 검출기

가) 기체크로마토그래프 분석 대상(202종)

나) 액체크로마토그래프 분석 대상(85종)

주7) (현행과 같음)

4.1.2.3 ∼ 4.1.3 (현행과 같음)

4.1.3.1 디코폴(Dicofol), 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate), 테트라디폰(Tetradifon)

4.1.3.3 이소프로카브(Isoprocarb, MIPC) 및 카바릴(Carbaryl, NAC)

4.1.3.30 카보후란(Carbofuran 및 3-Hydroxycarbofuran), 벤푸라카브(Benfuracarb), 카보설판(Carbosulfan) 및 푸라치오카브(Furathiocarb)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 곡류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브를 0.25 N 염산 수용액으로 환류 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 카보후란, 3-수산화카보후란, 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 카보후란과 3-수산화카보후란 표준원액을 1:2의 농도 비율이 되도록 아세토니트릴에 녹여 표준 혼합용액을 조제하고 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다. 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

사) 추출용액 : 0.25 N 염산 수용액

아) 여과 보조제 : Hyflo-SuperCel 또는 Celite 545를 전처리 과정 없이 그대로 사용한다.

자) 층 분리 보조제 : sodium lauryl sulfate 4%(w/v) 수용액

차) 검체보정(matrix-matched) 표준용액 : 카보후란/3-수산화카보후란 표준 혼합용액과 검체별 무처리 시료용액을 혼합, 카보후란 기준으로 최종 농도 0.005～0.1 mg/L이 되도록 희석한다. 즉, 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v)에 녹인 무처리 시료 2배 농축액, 아세토니트릴에 조제한 최종 농도의 10배 농도에 해당하는 표준 혼합용액, 물을 5:1:4(v/v/v)의 비율로 정확히 혼합하여 검체보정 표준용액을 조제하고 LC/MS 검량용으로 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상의 현미는 10 g, 콩류는 5 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 증류플라스크 넣고, 0.25 N 염산 수용액 150 mL를 가하여 가열, 1시간동안 환류 추출한다. 이 과정에서 벤푸라카브, 카보설판 및 푸라치오카브는 카보후란으로 정량적으로 전환, 추출된다. 플라스크를 신속히 방냉한 후 여분의 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 냉각관 입구로부터 플라스크로 흘려 넣어 냉각관 및 플라스크 입구를 세척하여 환류 추출액과 합친다. 아세톤 20 mL를 가하여 잘 혼합하고(현미 및 대두의 경우 여과보조제 2 g을 추가로 첨가하고 혼합), 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과한다. 플라스크 벽면을 아세톤 5 mL로 씻어 내려 0.25 N 염산 수용액 50 mL를 가하여 혼합한 후 흡인 여과, 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 염화나트륨 20 g을 첨가하고 완만하게 흔들어 완전히 녹인다. 수용액층을 디클로로메탄 100 mL 및 50 mL로 2회 분배 추출한다(층 분리가 잘 안될 때에는 층분리 보조제 1～5 mL를 첨가하고 가볍게 흔든 후 정치). 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(30/70, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(15/85, v/v)에서 아세토니트릴/물(60/40, v/v)로 15분간 직선적으로 농도 구배조건으로 흘린 후 10분간 아세토니트릴/물(60/40, v/v)을 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1 : 3-수산화카보후란(10.7분),

2 : 카보후란(18.6분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 카보후란, 3-수산화카보후란을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
카보후란	18.6	221	222
3-수산화카보후란	10.7	237	238, 220

4..1.3.2 ∼ 4.1.3.30 (현행과 같음)

4.1.3.31 피로퀼론(Pyroquilon) 및 트리싸이클라졸(Tricyclazole)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피로퀼론과 트리싸이클라졸을 메탄올로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피로퀼론 및 트리싸이클라졸 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 30분간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 균질기 컵 및 잔류물을 메탄올 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 20 mL, 물 250 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층을 1 L 용량 분액깔때기에 옮기고 헥산층은 버린다. 수용액층에 포화식염수 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 추출액 10 mL를 가하고 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 칼럼 벽면을 씻어 내려 버린다.

(1) 피로퀼론 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(15/85, v/v) 40 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v) 10 mL로 용해한다.

(2) 트리사이클라졸 : 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(40/60, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v)  10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 피로퀼론 아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸 아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.8 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 피로퀼론 256 nm, 트리사이클라졸 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피로퀼론(12.2분), 2 : 트리사이클라졸(12.1분)

라) 정량한계

피로퀼론 (0.02 mg/kg), 트리사이클라졸 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피로퀼론, 트리사이클라졸을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 피로퀼론-아세토니트릴/물 혼합액(30/70, v/v), 트리사이클라졸-아세토니트릴/물 혼합액(25/75, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 70 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
피로퀼론	7.4	173	174
트리사이클라졸	7.3	189	190

4.1.3.32 클로로타로닐(chlorothalonil), 캡탄(captan), 폴펫(folpet) 및 캡타폴(captafol)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫 및 캡타폴을 아세톤 및 3% 인산용액으로 추출하고 플로리실 컬럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MSD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫, 캡타폴 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 25 g)를 정밀히 달아 넣고, 물 20 mL를 넣고 습윤화한다. 아세톤 100 mL와 3% 인산용액 5 mL를 가하여 2분간 균질화한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 넣고 용해하여 분액깔대기에 옮기고 물 450 mL와 포화식염수 50 mL, 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 15 g을 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL으로 재용해하여 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴을 40 mL를 분액깔대기에 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 디클로로메탄/헥산/아세토니트릴 혼합액(50/48.5/1.5, v/v/v) 150 mL로 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1(30 mm × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐온도 : 160℃(Chlorotalonil, captan, folpet), 200℃(captafol)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

4

1 : 클로로타로닐(5.8분),

2 : 캡탄(13.5분),

3 : 폴펫(14.4분),

4 : 캡타폴(9.3분)

라) 정량한계

클로로타로닐(0.002 mg/kg), 캡탄, 폴펫, 캡타폴(0.008 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로로타로닐, 캡탄, 폴펫, 캡타폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-1ms(50 mm × 0.25 mm, 032 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 240℃

(5) 주입모드 : split mode(30:1)

(6) 주입량 : 1 μL

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로로타로닐	6.0	266	109, 266
캡탄	10.2	301	79, 149, 301
폴펫	10.6	295	76, 104, 260, 295
캡타폴	12.8	347	79, 151, 347

4.1.3.33 알드린(Aldrin), BHC(α, β, γ-BHC and δ-BHC), DDT(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE and p,p'-DDD), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin 및 δ-Keto-endrin), 엔도설판(α-Endosulfan, β-Endosulfan, Endosulfan sulfate), 클로르단(cis-Chlordane 및 trans-Chlordane) 및 헵타크로(Heptachlor 및 Heptachlor epoxide)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 견과종실류, 버섯류, 콩류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC,및cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE, p,p'-DDD, α-endosulfan, β-endosulfan, endosulfan sulfate, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor 및 heptachlor epoxide의 농도비는 각각 1, p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD 및 endosulfan sulfate의 농도비는 각각 2가 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)로 2분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액 (50/0.3/49.7, v/v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 320℃

(6) 주입모드 : split mode(20:1)

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래피에서 표준품의 크로마토그램

α-BHC(12.1분), β-BHC(12.7분), γ-BHC(12.9분), δ-BHC(13.4분), heptachlor(14.5분), aldrin(15.4분), heptachlor epoxide(16.5분), trans-chlordane(17.3분), α-endosulfan(17.7분), cis-chlordane(17.8분), p,p'-DDE(18.6분), dieldrin(18.7분), endrin(19.5분), β-endosulfan(19.9분), p,p'-DDD(20.2분), o,p'-DDT(20.4분), endosulfan sulfate(21.7분), p,p'-DDT(21.9분), δ-keto-endrin(23.8분)

라) 정량한계

aldrin, dieldrin, α-BHC, β-BHC, γ-BHC, δ-BHC, cis-chlordane, trans-chlordane, p,p'-DDE, α-endosulfan, β-endosulfan, endrin, δ-keto-endrin, heptachlor, heptachlor epoxide(0.005 mg/kg), p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDD, endosulfan sulfate(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 알드린, 디엘드린, 비에치씨, 클로르단, 디디티, 엔도설판, 엔드린, 헵타크로를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.9 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 220℃까지 10℃/min 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/min의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 :	300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50 ∼ 500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
α-BHC	12.1	288	219, 217, 181
β-BHC	12.7	288	219, 217, 181
γ-BHC	12.9	288	219, 217, 181
δ-BHC	13.4	288	219, 217, 181
Heptachlor	14.5	370	272, 100
Aldrin	15.4	362	263, 66
Heptachlor epoxide	16.5	386	353, 81
trans-Chlordane	17.3	406	375, 373
α-Endosulfan	17.7	404	241, 195
cis-Chlordane	17.8	406	375, 373
p,p'-DDE	18.6	316	318, 246
Dieldrin	18.7	378	277, 263, 79
Endrin	19.5	378	345, 317, 263
β-Endosulfan	19.9	404	338, 195
p,p'-DDD(TDE)	20.2	318	237, 235, 165
o,p'-DDT	20.4	352	237, 235, 165
Endosulfan sulfate	21.7	420	274, 272, 229
p,p'-DDT	21.9	352	237, 235, 165
δ-keto-Endrin	23.8	378	317, 67

4.1.3.34 메톡시페노자이드(methoxyfenozide), 테부페노자이드(tebufenozide) 및 크로마페노자이드(chromafenozide)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과시킨 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣고 혼합한다. 다시 아세톤 100 mL를 넣은 후 2분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔대기로 흡인여과하여 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL, 포화식염수 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL로 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔대기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴을 40 mL를 가하여 5분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산:에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 10 mL를 가하여 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(85/15, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 헥산/에틸아세테이트 혼합액(70/30, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 증류수: 메탄올(33/67, v/v) 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/메탄올 혼합액(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 225 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

메톡시페노자이드(10.4분), 크로마페노자이드(11.2분), 테부페노자이드(13.0분)

다) 정량한계

0.04 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 메톡시페노자이드, 크로마페노자이드, 테부페노자이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물/0.1% 포름산 함유 메탄올(33/67, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 200～500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
메톡시페노자이드	11.6	368	391
크로마페노자이드	13.7	394	417
테부페노자이드	18.3	352	375

4.1.3.35 훼녹시카브(Fenoxycarb), 피리프록시펜(Pyriproxyfen) 및 메토프렌(Methoprene)

1) 시험법 적용범위

과일류, 견과종실류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 훼녹시카브, 메토프렌, 피리프록시펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 훼녹시카브, 피리프록시펜 및 메토프렌 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되도록 한다.

라) 표준용액 : 훼녹시카브는 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v), 메토프렌 및 피리프록시펜은 아세토니트릴/물 혼합액(90/10, v/v)에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 데시게이터에서 보관․사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 40 mesh를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 고속균질기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄/헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 메코프렌과 피리프록시펜은 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 150 mL, 훼녹시카브는 에틸아세테이트/헥산 혼합액(15/85, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후, 각각 아세토니트릴/물 90/10(v/v) 및 65/35(v/v) 혼합액 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래피 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 230 nm(훼녹시카브 및 피리프록시펜), 265 nm(메토프렌)

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 피리프록시펜(8.9분),

2 : 훼녹시카브(9.5분),

3 : 메토프렌(11.4분)

라) 정량한계

훼녹시카브(0.04 mg/kg), 피리프록시펜(0.04 mg/kg), 메토프렌(0.04 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 훼녹시카브, 피리프록시펜, 메토프렌을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 아세토니트릴/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(65/35, v/v, 훼녹시카브), (85/15, v/v, 피리프록시펜), (95/5, v/v, 메토프렌)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 이온화 : ESI positive-ion mode

(6) 주입량 : 5 μL

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온(m/z)
훼녹시카브	6.0	301	302
피리프록시펜	5.4	321	322
메토프렌	4.9	310	279

4.1.3.36 페노트린(Phenothrin) 및 실라프루오펜(Silafluofen)

1) 시험법 적용범위

과일류, 곡류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 페노트린과 실라프루오펜을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

다) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 페노트린(cis 및 trans 이성질체의 혼합물) 및 실라프루오펜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/물 혼합액(80/20, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관 ․ 사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체의 경우 물 20 mL를 첨가하고 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 2분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기 상에서 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 1분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 가하여 분배 추출하여 아세토니트릴층을 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 헥산포화아세토니트릴 30 mL씩을 다시 가하여 분배 추출과정을 2회 반복한다. 합친 아세토니트릴 추출액을 40℃에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.)

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액(25/75, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 4 mL에 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(65/35(v/v)에서 95/5(v/v)로 30분간 직선적으로 농도구배한다.

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 226 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1, 2 : 페노트린(cis 및 trans; 15.0분, 15.4분), 3 : 실라프루오펜(21.2분)

라) 정량한계

페노트린(0.02 mg/kg), 실라프루오펜(0.01 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 페노트린, 실라프루오펜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(75/25, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 45 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
페노트린	13.6(cis), 14.3(trans)	350	351

나) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건(페노트린 및 실라프루오펜)

(1) 칼럼 : DB-5ms(300 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 50℃에서 2분간 유지하고 20℃/min 비율로 240℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한 후, 3℃/min 비율로 280℃까지 온도를 상승시킨다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 검체 조제 : 아세토니트릴에 녹인 최종 검체용액 0.8 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 헥산 1 mL에 재용해한다.

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
페노트린	18.1 (cis), 18.3 (trans)	350	183, 123
실라프루오펜	24.2	408	286, 179

4.1.3.37 아크리나쓰린(Acrinathrin), 비펜스린(Bifenthrin), 싸이클로프로스린(Cycloprothrin), 테플루스린(Tefluthrin) 및 할펜프록스(Halfenprox)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 콩류, 서류, 견과종실류, 곡류, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스, 테플루스린을 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

다) 액체크로마토그래프(HPLC-UVD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린(부분입체이성질체의 혼합물), 할펜프록스 및 테플루스린 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 아크리나쓰린, 비펜스린, 싸이클로프로스린, 할펜프록스 및테플루스린의 농도비가 2.5:2.5:10:10:1이 되도록 표준원액을 혼합하고 헥산에	녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관⦁사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 세절혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 2분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 증류수 450 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 25 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 고정상 상단에 가하여 헥산 5 mL로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄/헥산 혼합액 (25/75, v/v) 50 mL로 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄/아세토니트릴/헥산 혼합액(50/0.35/49.65, v/v/v) 50 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 헥산 10 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm , 0.5 μm)  또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 10 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 싸이클로프로스린), 220℃(테플루스린)

(4) 오븐 온도 : 220℃(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스), 240℃(싸이클로프로스린), 160℃(테플루스린)

(5) 검출기온도 : 300℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체/액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

5

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1 : 싸이클로프로스린(15.9분),

2 : 아크리나쓰린(17.9분)

3 : 테플루쓰린(18.6분),

4 : 비펜스린(22.8분),

5 : 할펜프록스(24.2분)

라) 정량한계

아크리나쓰린(0.005 mg/kg), 비펜스린(0.005 mg/kg), 싸이클로프로스린(0.02mg/kg), 할펜프록스(0.02 mg/kg), 테플루스린(0.002 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체/액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기상의 측정 조건(아크리나쓰린, 비펜스린, 할펜프록스 및 테플루스린)

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 2 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 50℃에서 2분간 유지, 180℃까지 20℃/분 속도로 직선적 승온, 2분간 유지한 후 280℃까지 5℃/분 속도로 직선적 승온한다.

(5) 인터페이스 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아크리나쓰린	27.0	541	181, 208, 289
비펜스린	24.5	422	181, 166
할펜프록스	30.0	476	263, 265, 183
테플루스린	13.5	418	177, 197

나) 액체크로마토그래프-질량분석기상의 조건(싸이클로프로스린)

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 20 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltae : 100 V

(7) 검체 조제 : 헥산에 녹인 최종 검체용액 2 mL를 질소 기류 하에서 증발, 건고한 후 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 2 mL로 재용해한다.

4.1.3.38 비페닐(Biphenyl), 모노리누론(Monolinuron), 노나클로르(Nonachlor), 옥시카르복신 (Oxycarboxin)및 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl), 디클로사이메트(Diclocymet),  이소자디펜에틸(Isoxadifen-ethyl), 이소자플루톨(Isoxaflutole) 및 메토미노스트로빈(Metominostrobin)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하여 활성탄/아미노프로필 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 비페닐, 디클로사이메트, 이소자디펜에틸, 메토미노스트로빈, 노나클로르 및 테트라클로빈포스의 농도비가 1:1:1:2:1:2가 되도록 표준원액을 혼합하여 아세톤에 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 활성탄/아미노프로필 카트리지 : 활성탄(0.5 g)과 아미노프로필(0.5 g)이 2층으로 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g, 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가하여 혼합하여 2시간 동안 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 2분간 고속 마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출하고 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 미리 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액 (75/25, v/v) 2 mL에 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴 층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL로 재용해한다.)

나) 정제

활성탄/아미노프로필 카트리지에 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 2 mL를 고정상 상단에 에 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴/톨루엔 혼합액(75/25, v/v) 15 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한다. 검체별 최종 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 아세톤 10 mL로 용해하고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 메탄올 10 mL로 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

1

2

3

4

5

6

7

8

그림. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 비페닐(9.9분),

2, 3. 디클로사이메트(diclocymet, 17.5, 17.8분), 4, 5. 노나클로르(18.2, 19.3분),

6, 7. 메토미노스트로빈(18.3, 18.7분),

8. 이소자디펜에틸(19.7분),

1

2

3

4

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 옥시카르복신(5.5분),

2. 모노리누론(11.7분),

3. 이소자플루톨(13.1분),

4. 클로퀸토셋멕실(18.9분)

바) 정량한계

비페닐(0.025 mg/kg), 클로퀸토셋멕실(0.02 mg/kg), 디클로사이메트(0.025 mg/kg), 이소자디펜에틸(0.025 mg/kg), 이소자플루톨(0.02 mg/kg), 메토미노스트로빈(0.05 mg/kg), 모노리누론(0.02 mg/kg), 노나클로르(0.025 mg/kg), 옥시카르복신(0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체/액체 크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(300 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도 : 80℃에서 2분간 정치하고 280℃까지 10℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
비페닐	9.9	154	154, 153
디클로사이메트	17.5, 17.8	312	277, 221, 173
노나클로르	18.2, 19.3	440	409, 411, 407
메토미노스트로빈	18.3, 18.7	284	191, 238, 196
이소자디펜에틸	19.7	295	295, 294, 204

나) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액을 35/65(v/v)에서 2분간 정치 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
옥시카르복신	5.5	267	268
모노리누론	11.7	214	215
이소자플루톨	13.1	359	360, 251
클로퀸토셋멕실	18.9	335	336, 238

4.1.3.39 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 사이클아니리드(Cyclanilide), 디클로슐람(Diclosulam), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac), 이옥시닐(Ioxynil), 이소카바미드(Isocarbamid), 레나실(Lenacil), 메펜피르(Mefenpyr), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid) 및 트랄콕시딤(Tralkoxydim)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 콩류, 견과종실류, 과일류, 채소류, 버섯류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 적당한 녹도로 각각 혼합, 희석한다.

마) C18 카트리지 : C18(1 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 실리카겔 카트리지 : 실리카겔(0.5 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류는 약 1 kg을 분쇄기에 넣고 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 검체 50 g. 채소류, 과일류는 약 1 kg을 세절기나 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 50 g, 차는 분말 검체 10 g)를 정밀히 달아 500 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(곡류, 콩류, 종실류 및 견과류 등 건조 검체는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 가한 후 2시간 동안 방치), 0.01 M 염산수용액 20 mL와 아세토니트릴 100 mL를 가하여 20분간 진탕(300 rpm)하여 추출한 후 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 여액 중 수분에 충분히 포화되도록 염화나트륨 50 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 12 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL로 재용해한다.

(지방성 검체의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. 즉, C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 추출액 10 mL를 가하여 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 20 mL(클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락 분석 시에는 5 mL)를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 2 mL에 재용해한다.

나) 정제

(1) 클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액 (20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 버리고 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 12 mL를 유출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 5 mL를 가하여 용해한다.

(2) 클로퀸토셋 및 메펜피르

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 용출액과 합치고 여기에 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 20 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

(3) 클로란슐람메틸 등 나머지 농약

실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 가하고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/트리에틸아민/헥산 혼합액(20/0.5/80, v/v/v) 10 mL과 아세톤/메탄올 혼합액(50/50, v/v) 10 mL를 유출시켜 앞의 유출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 가하여 용해한다.

다) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

라) 표준품의 크로마토그램

1

2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로퀸토셋(5.4분),

2. 메펜피르(17.2분)

3

1

2

3

4

5

6

7

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 플루멧슐람(2.5분),

2. 플로라슐람(3.3분),

3. 이소카바미드(5.2분),

4. 클로란슐람메틸(8.2분),

5. 디클로슐람(8.7분)

6. 레나실(12.4분),

7. 트랄콕시딤(13.5분)

3

1

2

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 클로프로프(5.0분),

2. 플루미클로락(10.1분),

3.클로메프로프에시드(11.4분)

1

2

3

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

1. 초산나프탈렌(4.6분),

2. 이옥시닐(9.9분),

3. 사이클아니리드(11.3분)

바) 정량한계

클로메프로프에시드(0.05 mg/kg), 클로프로프(0.05 mg/kg), 클로퀸토셋(0.05 mg/kg), 클로란슐람메틸(0.05 mg/kg), 사이클아니리드(0.05 mg/kg), 디클로슐람(0.05 mg/kg), 플로라슐람(0.05 mg/kg), 플루멧슐람(0.05 mg/kg), 플루미클로락(0.05 mg/kg), 이옥시닐(0.05 mg/kg), 이소카바미드(0.05 mg/kg), 레나실(0.05 mg/kg), 메펜피르(0.05 mg/kg), 초산나프탈렌(0.05 mg/kg), 트랄콕시딤(0.05 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올/5 mM 아세트산암모늄수용액 혼합액(35/65, v/v)에서 2분간 유지한 후 55/45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도구배한 후 재차 95/5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도구배한 후 10분간 유지한다.

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode 및 negative-ion mode

(7) Cone voltage : 30～50 V(이온화 방식 및 농약별로 최적화한 값을 사용한다.)

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	ESI mode	이온(m/z)
플루멧슐람	2.5	325	Positive	326
플로라슐람	3.3	359	Positive	360
초산나프탈렌	4.6	186	Negative	141, 185
클로프로프	5.0	200	Negative	127, 129
이소카바미드	5.2	185	Positive	186
클로퀸토셋	5.4	237	Positive	238, 240
클로란슐람메틸	8.1	429	Positive	430, 398
디클로슐람	8.7	405	Positive	406
이옥시닐	9.9	371	Negative	370
플루미클로락	10.1	353	Negative	294, 352, 296
사이클아니리드	11.3	273	Negative	272, 228
클로메프로프에시드	11.4	248	Negative	247, 175
레나실	12.4	234	Positive	153
트랄콕시딤	13.5	329	Positive	284, 330
메펜피르	17.2	316	Positive	327, 329

4.1.4 ∼ 4.1.4.8 (현행과 같음)

<삭  제>

4.1.4.9 클로르프로팜(Chlorpropham)

1) 시험법 적용범위

채소류, 과일류, 서류, 곡류, 콩류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 클로르프로팜을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 클로르프로팜 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L 가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을130℃에서 하룻밤 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고(곡류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 1시간 동안 진탕 추출(180 rpm 이상)한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 메탄올에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 200 μL를 첨가하고 35℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 증류수 50 mL과 헥산 100 mL로 차례로 씻어  포화식염수 50 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액층은 별도의 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 35℃ 이하에서 감압농축하여 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출'로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 35℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래피 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 240 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

클로르프로팜(11.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로르프로팜을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
클로르프로팜	4.2	213	214

4.1.4.10 ∼ 4.1.4.42 (현행과 같음)

<삭  제>

4.1.4.43 도딘(Dodine)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 도딘을 아세토니트릴로 추출하고 포스트컬럼 유도체 반응장치 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD) 및 포스트컬럼 유도체 반응장치를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 도딘 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 과염소산나트륨(sodium perchlorate) 용액 : 14.1 g의 과염소산나트륨, 400 mg의 수산화나트륨 및 1.8 mL의 락트산(lactic acid, DL racemate)을 물에 함께 녹여 1 L로 한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(과일류 및 채소류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 20 g)를 정밀히 달고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 3분간 고속마쇄(10,000 rpm 이상)하여 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v) 100 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액에 물을 가하여 총 부피를 240 mL로 조절, 혼합한 후 이 중 120 mL(시료 10 g 해당량)를 취해 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 에틸아세테이트 100 mL로 씻어 내리고 10% 염화나트륨 수용액 100 mL를 가한 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 에틸아세테이트층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 메탄올 2 mL로 재용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/과염소산나트륨수용액 혼합액(65/35, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 여기파장(Ex) 395 nm, 형광파장(Em) 500 nm

(6) 주입량 : 20 μL

(7) 포스트컬럼 유도체 반응액

1차 펌프 이송액 : 0.5 M 수산화나트륨 수용액 0.2 mL/min

2차 펌프 이송액 : 0.3% ninhydrin 수용액 0.1 mL/min

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

도딘(12.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 도딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(50 mm × 3.0 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/0.1 mM 아세트산 암모늄 수용액(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 50 V

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
도딘	3.2	287	288

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

4.1.4.44 ∼ 4.1.4.58 (현행과 같음)

<삭  제>

4.1.4.59 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 에마멕틴 벤조에이트를 아세톤으로 추출하고 에틸아세테이트로 분배, 추출한 후 트리에칠아민과 trifluoroacetic anhydride로 유도체화하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 에마멕틴 벤조에이트 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 분액깔때기에 미리 포화식염수 50 mL를 넣고 잔류물을 물 50 mL로 용해하고 다시 에틸아세테이트 100 mL로 용해하여 합친 후, 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받고 수용액층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 분배 추출하여 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL로 재용해하고 그 중 1 mL를 취하여 2 mL 바이알에 담아 질소 가스로 농축한다. 잔류물을 0.5 M 트리에칠아민 0.5 mL를 가하여 용해한 후 0.5 M trifluoroacetic anhydride 0.5 mL를 가하여 볼텍스 믹서로 약 30초간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 메탄올/물(97/3, v/v)

(4) 이동상 유량 : 1 mL/min

(5) 칼럼 온도 : 35℃

(6) 검출파장 : 여기파장(Ex) 365 nm, 형광파장(Em) 470 nm

(7) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

에마멕틴 벤조에이트(Emamectin) (15.8분)

라) 정량한계

0.004 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 에마멕틴 벤조에이트를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴)/0.1% 포름산 함유 물(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～1,000 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
에마멕틴	1.2	886	887

4.1.4.60 ∼ 4.1.4.74 (현행과 같음)

<삭  제>

4.1.4.75 아시벤졸라-에스-메칠(Acibenzolar-S-methyl)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아시벤졸라-에스-메칠을 메탄올로 추출하고 염산을 이용하여 디클로르메탄으로 산-염기 분배, 추출한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아시벤졸라-에스-메칠 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 물 16 mL와 1N 수산화나트륨 4 mL를 가하여 60℃의 항온조(60 rpm)에서 1시간 동안 반응하여 공기 중에서 상온까지 식힌 후 메탄올 100 mL, 염화칼슘 2 g을 가하여 1시간 동안 진탕추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 20 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 메탄올을 이용하여 150 mL로 맞춘다. 이 중 60 mL를 취하여 분액깔때기에 옮겨 포화식염수 50 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 2분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 버리는 과정을 2회 반복한다. 수용액 층에 1 N 염산 20 mL, 디클로르메탄 100 mL를 가하여 진탕한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 잔류물을 아세토니트릴 4 mL를 가하여 최종 부피가 2 mL가 되게하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴/0.1% 아세트산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출기 파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아시벤졸라-에스-메칠(acibenzolar acid) (9.3분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아시벤졸라-에스-메칠을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산 함유 아세토니트릴/0.1% 아세트산 함유 물(20/80, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아시벤졸라산	3.8	180	181

4.1.4.76 ∼ 4.1.4.147 (현행과 같음)

4.1.4.148 펜헥사미드(Fenhexamid)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜헥사미드를 아세톤으로 추출하고 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜헥사미드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 1시간동안 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 이를 40℃ 이하에서 감압농축한다. 분액깔때기에 미리 포화식염수 50 mL를 넣고 잔류물을 물 50 mL로 용해하고 다시 에틸아세테이트 100 mL로 용해하여 합친 후, 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받고 수용액층에 다시 에틸아세테이트 50 mL를 가하여 분배 추출하여 받아 40℃ 이하에서 감압농축한다. 잔류물을 물 50 mL로 헹구고 다시 디클로르메탄 100 mL로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화 식염수 50 mL를 가하여 약 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 5 mL로 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 35 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 3 g을 차례로 충진한 후 0.1% 아세트산 함유 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 0.1% 아세트산 함유 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하고 농축잔사를 약 1 mL로 헹구어 합쳐 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(1/9, v/v) 혼합액 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트/0.1% 아세트산 함유 헥산(3:17, v/v) 혼합액 100 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축한 후 아세토니트릴 5 mL를 가하여 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물(55/45, v/v(배추)), 아세토니트릴/물(53:47, v/v(사과, 감귤)), 아세토니트릴/물(52/48, v/v(고추))

(4) 이동상 유량 : 1 mL/min

(5) 칼럼 온도 : 35℃

(6) 검출파장 : 205 nm

(7) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

펜헥사미드(11.0분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜헥사미드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18 칼럼(150 mm × 2.1 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(55/45, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 50～500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
펜헥사미드	3.7	302	301

4.1.4.149 프로클로라즈(Prochloraz)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 종실류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 프로클로라즈 및 프로클로라즈 대사체를 아세토니트릴로 추출하고 pyridine hydrochloride를 가하여 2,4,6-TCP로 전환하여 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 프로클로라즈 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 30분간 진탕 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합치고 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 잔류물을 물 100 mL과 디클로르메탄 50 mL으로 용해하여 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로르메탄 50 mL에 재용해한 용액 중 1 mL를 취하여 40 mL의 바이알에 담아 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 질소건고한다. 여기에 pridine hydrochloride 5 g를 넣고 밀봉한 다음 바이알을 220℃(silicon oil bath)에서 1시간동안 가열한 후 실온으로 냉각시키고 0.2M 염산 mL를 가하여 용해하여 분액깔때기에 옮겨 물 100 mL, 디클로르메탄 50 mL를 가하여 1분간 심하게 흔들어 층이 분리될 때까지 정치한다. 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 여기에 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 가하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 아세톤 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 mm × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 5.0 mL/min

(3) 주입부 온도 : 300℃

(4) 오븐 온도 : 110℃(2min)

(5) 검출기 온도 : 300℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

프로클로라즈(2,4,6-TCP) (8.2분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 프로클로라즈를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 mm × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 5분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 3분 이상 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 270℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 80～700 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
2,4,6-TCP	11.9	197	196

4.1.4.150 싸이프로디닐(Cyprodinil)

1) 시험법 적용범위

곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 싸이프로디닐을 아세토니트릴로 추출하고 실리카겔 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 싸이프로디닐 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라)  표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카겔 : 칼럼크로마토그래피용 실리카겔(70～230 mesh)를 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(채소류 및 과일류 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각 플라스크에 넣고 아세토니트릴 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 잔류물을 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합쳐 40℃이하에서 감압농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL이 들어 있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 2분 이상 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 하부 수용액 층은 여분의 250 mL 용량의 분액여두에 옮기고 헥산층은 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액층에 헥산 50 mL를 가하여 다시 분배 추출하고 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 실리카겔 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(5/95, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액 (15/85, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다.이 유출액을 40℃ 이하에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18 칼럼(25 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 270 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

싸이프로디닐(8.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 싸이프로디닐을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(30 mm × 2.1 mm, 1.9 μm)

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(50/50, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 96 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
싸이프로디닐	2.7	225	226

4.1.4.151 나프로파마이드(Napropamide)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 서류, 견과종실류, 콩류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 나프로파마이드를 아세톤으로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 나프로파마이드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을  130℃에서 6시간 이상 가열하여 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(콩류는 약 1 kg을 분쇄기로 분쇄하여 표준체 40 mesh를 통과한 분말상 검체 25 g, 채소류 및 과일류는 약 1 kg을 혼합기에 넣고 분쇄한 검체 25 g)를 정밀히 달아 250 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(콩류 등 건조 검체는 물 25 mL를 넣은 후 혼합하여 30분간 방치), 아세톤 100 mL를 가하여 진탕기(180 rpm 이상)로 1시간 이상 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친 후 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세톤을 날려 보낸다. 잔류물을 물 50 mL와 헥산 100 mL로 차례로 씻어 포화식염수 50 mL가 들어있는 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 헥산층을 15 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 다시 헥산 50 mL를 가하여 분배 추출하여 앞의 추출액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 헥산 5 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 40 cm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충진한 후 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 5 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버리고 에틸아세테이트/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시키고 이를 40℃ 이하에서 감압농축하여 아세토니트릴 5 mL로 용해한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)

(2) 이동상 : 아세토니트릴/물 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 35℃

(5) 검출파장 : 235 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

나프로파마이드(8.2분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 나프로파마이드를 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : C18(300 mm × 3.0 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/0.1% 포름산 함유 물(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 3 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 44 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
나프로파마이드	1.9	271	272

4.1.4.152 피콕시스트로빈(Picoxystrobin)

1) 시험법 적용범위

과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피콕시스트로빈을 아세톤으로 추출한 후 플로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 피콕시스트로빈 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 식혀 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화하고 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 40℃ 이하 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔대기에 옮긴다. 이에 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 헥산층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합친다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 후로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충진한 후 헥산 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산/에틸아세테이트 혼합액(95/5, v/v) 150 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

※ 추가 정제(고추 등 추가 정제가 필요한 검체)

상기 ‘나) 정제’로부터 얻은 시험용액을 미리 헥산 10 mL로 활성화한 NH2 카트리지(2 g, 12 mL)에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 헥산/에틸아세테이트(90/10, v/v) 혼합액 12 mL를 가하여 유출시켜 버린 후, 다시 헥산/에틸아세테이트 혼합액(80/20, v/v) 12 mL로 유출시켜 감압농출플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 헥산 2 mL를 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/min의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 280℃까지 상승시켜 5분 이상 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

피콕시스트로빈(28.8분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피콕시스트로빈을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 0.8 mL/min

(3) 주입부 온도 : 250℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 3분간 유지하고 20℃/min의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/min의 비율로 300℃까지 상승시켜 3분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

(8) 분자량 범위 : 50∼400 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
17.54	367.32	145, 335

특성이온

4.1.4.153 플루트리아폴(Flutriafol)

1) 시험법의 적용범위

곡류, 과일류, 채소류, 콩류, 서류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 플루트리아폴을 아세토니트릴로 추출하고 플로리실 칼럼으로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소·인검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 플루트리아폴 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 μm를 통과한 후 20 g. 채소류, 과일류 및 종실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡인여과하고 아세톤 50 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합한다. 이를 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 500 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 약 1 cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 20 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고, 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 아세톤을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

플루트리아폴(19.3분)

라) 정량한계

0.01 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 플루트라아폴을 확인한다.

가) 기체크로마토그라프-질량분석기의 측정 조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량：He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐온도： 100℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 주입모드：splitless mode

(7) 주입량 : 1 µL

(8) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
17.1	301	219, 123

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.62 (현행과 같음)

<삭  제>

5.3.63. 락토파민(Ractopamine), 클렌부테롤(Clenbuterol) 시험법

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중 베타-아고니스트 분해효소제를 사용하여 조직에서 분해한 후 에틸아세테이트로 추출하고 베타-아고니스트 전용 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 락토파민, 클렌부테롤 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 내부 표준물질 표준원액 : 락토파민 D3(Ractopamine D3), 클렌부테롤 D9(Clenbuterol D9) 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

바) 내부 표준물질 용액 : 내부 표준물질 표준원액을 메탄올로 희석하여 락토파민-D3는 100 ng/mL, 클렌부테롤-D9은 40 ng/mL로 한다.

사) 분해효소제 : β-글루쿠로니다제/아릴설파타제(β-glucuronidase/arylsulfatase)

아) 0.2 M 초산암모늄완충용액(pH 5.2) : 초산암모늄 1.54 g을 100 mL 메스플라스크에 취하여 물로 녹여 표시선까지 채우고 초산을 넣어 pH 5.2로 한다.

자) 베타 아고니스트 전용 카트리지 : MIP(Molecular Imprinted Polymer) 카트리지(25 mg, 10 mL) 또는 이와 동등한 것

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고, 0.2 M 초산 암모늄완충용액(pH 5.2) 10 mL, 포화염화나트륨 2 mL, 분해효소제 100 μL를 가하여 37℃에서 12시간 반응시킨다. 반응 후 5 M 수산화나트륨용액을 사용하여 pH 12로 조정한 뒤, 이 용액에 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 진탕하고 6,000 G에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취한다. 에틸아세테이트 10 mL를 가하여 추출을 한번 더 반복하여 상층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물을 20 mL 메탄올 포화 헥산으로 재용해 하여 분액여과에 옮긴 뒤 20 mL 헥산 포화 메탄올을 첨가하여 3분간 흔들어준다. 하층액을 무수황산나트륨에 통과시켜 모은 뒤, 이 과정을 한번 반복한 뒤, 하층액을 모아 55℃ 수욕 상에서 감압농축한다. 잔류물은 0.025 M 초산암모늄용액 2 mL로 재용해한다. 미리 메탄올 1 mL, 물 1 mL와 0.025 M 초산암모늄용액 1 mL로 활성화시킨 MIP 카트리지(Molecular imprinted polymer, 25 ㎎, 10 mL)에 추출액을 흡착시킨다. 메탄올 1 mL로 카트리지를 세척한 후 메탄올 : 초산(9 : 1) 5 mL로 용출한다. 용출액은 50℃에서 질소농축하고 잔류물은 2 mL 이동상A에 녹인 후 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 초산 암모늄(pH 4.3) : 아세토니트릴(95 : 5, v/v)

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

min	A(%)	B(%)
1	100	0
2	100	0
6	10	90
8	0	100
10	0	100
11	100	0
15	100	0

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : Ar(아르곤)

(4) Collision energy

물질	Precursor Ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
락토파민	302	107, 284
락토파민 D3	305	107, 124
클렌부테롤	277	203, 259
클렌부테롤 D9	286	204, 268

나) 표준품 크로마토그램

Ractopamine

Ractopamine D3

Clenbuterol

Clenbuterol D9

그림 1. 락토파민(6.70분), 락토파민 D3(6.69분), 클렌부테롤(7.04분), 클렌부테롤 D9(7.03분)

다) 정량한계

(1) 락토파민 : 0.5 μg/kg

(2) 클렌부테롤 : 0.2 μg/kg

7) 정량시험

표준용액을 농도별로 시험관에 취하고 각각 내부표준용액 100 μL를 넣고 질소농축한 후 이동상 2 mL에 녹인 용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특정이온을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 내부표준물질 락토파민 D3의 m/z 107 이온에 대한 락토파민 m/z 284 이온, 클렌부테롤 D9의 204 m/z 이온에 대한 클렌부테롤 m/z 203 이온의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 락토파민과 클렌부테롤의 함량을 구한다.

5.3.64 ∼ 5.3.86 (생  략)

<삭  제>

5.3.88 ∼ 5.3.92 (현행과 같음)

[별표 1] ∼ [별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이민옥타딘(Iminoctadine)

(현행과 같음)

양파	0.05

(2) ∼ (25) (현행과 같음)

(26) 디페노코나졸(Difenoconazole)

(현행과 같음)

양파	0.05

(27) ∼ (28) (현행과 같음)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(현행과 같음)

참외	1.0

(30) ∼ (37) (현행과 같음)

(38) 메타락실(Metalaxyl)

(현행과 같음)

마늘(풋마늘포함)	0.05

(39) ∼ (49) (현행과 같음)

(50) 베나락실(Benalaxyl)

(현행과 같음)

토마토	2.0

참외	1.0

(51) ∼ (148) (현행과 같음)

(149) 트리프루미졸(Triflumizole)

(현행과 같음)

마늘	0.05

풋마늘	1.0

(150) ∼ (199) (현행과 같음)

(200) 헥사코나졸(Hexaconazole)

(현행과 같음)

마늘(풋마늘포함)	0.5

(201) ∼ (205) (현행과 같음)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(현행과 같음)

오이	0.5

참나물	20

(207) ∼ (208) (현행과 같음)

(209) 테프루벤주론(Teflubenzuron)

(현행과 같음)

엇갈이배추	1.0

딸기	1.0

(210) ∼ (213) (현행과 같음)

(214) 피리다벤(Pyridaben)

(현행과 같음)

복숭아	1.0

(215) ∼ (217) (현행과 같음)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(현행과 같음)

딸기	2.0

(219) ∼ (223) (현행과 같음)

(224) 싸이목사닐(Cymoxanil)

(현행과 같음)

시금치	2.0

(225) 싸이프로디닐(Cyprodinil)

(현행과 같음)

감	1.0

(226) (현행과 같음)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(현행과 같음)

비름나물	10

(228) ∼ (236) (현행과 같음)

(237) 피메트로진(Pymetrozine)

(현행과 같음)

보리	0.05

(238) ∼ (245) (현행과 같음)

(246) 스피노사드(Spinosad)

(현행과 같음)

딸기	1.0

(247) (현행과 같음)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(현행과 같음)

토마토	0.01

(249) ∼ (289) (현행과 같음)

(290) 인독사카브(Indoxacarb)

(현행과 같음)

참나물	10

(291) ∼ (320) (현행과 같음)

(321) 디노테푸란(Dinotefuran)

(현행과 같음)

멜론	1.0

(322) ∼ (323) (현행과 같음)

(324) 비페나제이트(Bifenazate)

(현행과 같음)

감귤	1.0

고추	3.0

오이	0.5

(325) ∼ (334) (현행과 같음)

(335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(현행과 같음)

보리	1.0

복분자	1.0

(336) (현행과 같음)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(현행과 같음)

보리	0.4

상추	15

(338) ∼ (348) (현행과 같음)

(349) 노발루론(Novaluron)

(현행과 같음)

참나물	10

(350) ∼ (360) (현행과 같음)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(현행과 같음)

수박	0.05

(362) ∼ (279) (현행과 같음)

(380) 피리다릴(Pyridalyl)

(현행과 같음)

참나물	20

(381) ∼ (390) (현행과 같음)

(391) 만디프로파미드(Mandipropamid)

(현행과 같음)

시금치	25

(392) ∼ (402) (현행과 같음)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(현행과 같음)

딸기	2.0

(404) ∼ (407) (현행과 같)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

멜론	0.2

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(현행과 같음)

브로콜리	2.0

(410) ∼ (415) (현행과 같음)

(416) 클로란트라닐리프롤(Chlorantraniliprole)

(현행과 같음)

호박	0.7

호박잎	7.0

딸기	1.0

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(현행과 같음)

옥수수	0.05

(418) ∼ (422) (현행과 같음)

(423) 피콕시스트로빈(Pycoxystrobin)

(현행과 같음)

감	1.0

오이	1.0

(424) ∼ (426) (현행과 같음)

(427) 이미시아포스(Imicyafos)

(현행과 같음)

마(건조포함)	0.05

멜론	0.05

토마토	0.05

[별표5] ∼ [별표6] (현행과 같음)

(1) ∼ (110) (현행과 같음)

(111) 메벤다졸(Mebendazole)

돼지근육	0.06

돼지지방	0.06

돼지간	0.4

돼지신장	0.06

말근육	0.06

말지방	0.06

말간	0.4

말신장	0.06

가금근육	0.06

가금지방	0.06

가금간	0.4

가금신장	0.06

(112) 니트록시닐(Nitroxinil)

소근육	0.4

소지방	0.2

소간	0.02

소신장	0.4

양근육	0.4

양지방	0.2

양간	0.02

양신장	0.4

(113) 클로술론(Clorsulon)

소근육	0.035

소간	0.1

소신장	0.2

(114) 톨페나믹산(Tolfenamic acid)

소근육	0.05

소간	0.4

소신장	0.1

돼지근육	0.05

돼지간	0.4

돼지신장	0.1

유	0.05

(115) 툴라스로마이신(Tulathriomycin)

소근육	0.1

소지방	0.1

소간	3.0

소신장	3.0

돼지근육	0.1

돼지지방	0.1

돼지간	3.0

돼지신장	3.0

(116) 시미아졸(Cymiazole)

벌꿀	1.0