식품의약품안전청 공고 제2011-249호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2011. 12. 29.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 공고 제2011- 249호

「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청고시 제2011-76호, 2011. 12. 29)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 「행정절차법」 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2011년 12월 29일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

농약의 잔류허용기준을 신설하여 식품 안전관리를 강화하고, 농약 및 동물용의약품의 시험법을 신설 및 개정하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.

2. 주요 내용

가. 잔류농약 분석법 개정 및 신설

1) 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin) 분석법 개정[안 제 10, 4.1.3.12]

2) 아메톡트라딘(Ametoctradin) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.148]

3) 펜티오피라드(Penthiopyrad) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.149]

4) 피리미설판(Pyrimisulfan) 분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.150]

5) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)분석법 신설[안 제 10, 4.1.4.151]

나. 잔류동물용의약품 시험법 개정 및 신설

1) 노보비오신(Novobiocin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.5]

2) 데코퀴네이트(Decoquinate) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.8]

3) 암프롤리움(Amprolium), 디싸이클라닐(Dicyclanil) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.13]

4) 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.20]

5) 스펙티노마이신(Spectinomycin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.29]

6) 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 나프실린(Nafcillin), 옥사실린(Oxacillin) 시험법 개정[안 제 10, 5.3.32]

7) 폭심(Poxim) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.33]

8) 발네물린(Valnemulin) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.40]

9) 설파구아니딘(Sulfaguanidine) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.93]

10) 로베니딘(Robenidine) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.94]

11) 톨트라주릴(Toltrazuril) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.95]

12) 디아베리딘(Diaveridine) 시험법 신설[안 제 10, 5.3.96]

다. 농산물의 농약잔류허용기준 개정[[별표 4] 중 (21), (29), (32), (35), (38), (63), (66), (73), (85), (112), (131), (132), (133), (151), (163), (164), (168), (170), (183), (188), (190), (196), (206), (207), (212), (213), (218), (224), (227), (239), (242), (249), (254), (255), (291), (302), (325), (333), (335), (338), (356), (357), (358), (370), (371), (380), (394), (395), (403), (408), (409), (410), (417), (419), [별표 5] 중 (11)]

1) 농약 등록, 사용방법 등의 변화에 따른 잔류허용기준 합리화 필요

2) 현행 배추기준을 배추와 엇갈이 배추로 분리에 따른 배추 기준 개정,  에토펜프록스의 호밀, 터부코나졸의 감 기준삭제, 아족시스트로빈의 수삼, 인삼농축액, 홍삼농축액의 기준 국제적 조화

3) 농약에 대한 기준 합리화로 국민의 불안감 해소

라. 농산물의 농약잔류허용기준 신설[[별표 4] 중 (3), (4), (8), (9), (11), (21), (30), (31), (32), (35), (38), (63), (66), (67), (71), (73), (78), (85), (97), (111), (112), (131), (132), (148), (151), (152), (161), (163), (164), (170), (178), (183), (188), (190), (196), (207), (221), (224), (229), (233), (242), (243), (297), (302), (304), (308), (335), (338), (356), (357), (358), (361), (370), (371), (388), (393), (394), (395), (403), (410), (419)]

1) 「농약관리법」에 사용·등록되어 있는 농약에 신규로 추가되는 농산물의 잔류허용기준을 마련하여 관리 적정화 필요

2) 농산물 중 글리포세이트 등 29종에 대한 기준 신설, 인과류에 대한 글리포세이트, 델타메쓰린, 마이클로부타닐, 아미트라즈, 에토펜프록스, 옥시풀루오르펜, 클로르피리포스. 펜발러레이트, 테부페노자이드 기준 신설,  현행 배추기준을 배추와 엇갈이 배추로 분리에 따른 엇갈이배추 기준 신설

3) 농약잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

마. 신규등록된 농약의 잔류허용기준 신설[[별표 4] 중 (425), (426), (427), (428)]

1) 「농약관리법」에 신규로 등록되는 농약들에 대한 잔류허용기준을 마련 필요

2) 플루피오람, 메타조설프론, 설폭사플로르, 이소피라잠에 대한 잔류허용기준 신설

3) 농약잔류허용기준 신설을 통한 국민에게 안전한 식품을 공급

3. 의견제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는  단체 또는 개인은 2013년 1월 19일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전청장(우편번호 : 363-700, 주소 : 충북 청원군 강외면 연제리 643 오송보건의료행정타운 식품의약품안전청, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2418,  팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬·반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 전화번호 및 주소

다. 기타 참고사항

식품의약품안전청 고시 제2011-  호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2011-76호, 2011. 12. 29)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2011년   월   일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

“제 10, 4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin)”을 “제 10, 4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin)”으로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 레피멕틴을 메탄올로 추출하고 플로리실 컬럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아바멕틴(B1a 및 B1b), 밀베멕틴(A3 및 A4) 및 레피멕틴(A3 및 A4) 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh) 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 아미노 프로필 카트리지 : 아민(1g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

(곡류 및 콩류 등 지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 50 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴 층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.)

나) 정제

(1) 플로리실 정제 : 안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 메탄올/에틸아세테이트 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

(2) 아민 카트리지 정제 : 미리 헥산 10 mL로 활성화한 아민 카트리지에 상기 헥산 용액을 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 톨루엔 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고 디클로로메탄 10 mL와 아세톤/디클로로메탄 혼합액(20/80, v/v) 5 mL로 2회 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)을 가하여 최종부피 2mL가 되게 한 후 갈색 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 245 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

2

1

3

4

5

6

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1：아바멕틴 B1b (13.0분),  2：아바멕틴 B1a (17.0분),

3：밀베멕틴 A3 (16.9분),   4 : 레피멕틴 A3 (19.7분),

5 : 밀베멕틴 A4 (22.8분),   6 : 레피멕틴 A4 (25.8분)

라) 정량한계

아바멕틴 B1a (0.02 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A4 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아바멕틴, 밀베멕틴, 레피멕틴을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

※ 레피멕틴은 아래 A 및 B의 이동상(40/60, v/v)을 사용

A : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 물

B : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(90/10)

(3) 이동상 유량 : 0.4 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI negative-ion mode

※ 레피멕틴은 ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 300∼1,000 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
아바멕틴 B1b	8.0	858	857
아바멕틴 B1a	9.8	872	871
밀베멕틴 A3	10.6	528	527
밀베멕틴 A4	13.6	542	541
레피멕틴 A3	6.0	705	728
레피멕틴 A4	6.5	720	743

제 10, 4.1.4.148 부터 4.1.4.151 까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.148 아메톡트라딘(Ametoctradin)

1) 시험법 적용범위

채소류 및 과일류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아메톡트라딘을 메탄올로 추출하고 플로리실 컬럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아메톡트라딘 표준품을 메탄올에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡입여과하고 메탄올 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 약 10 mL가 될 때까지  40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 100 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(40/60, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 292 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아메톡트라딘(6.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아메톡트라딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산-물/0.1%-아세토니트릴(90/10, v/v) 혼합액에서 0.1% 포름산-물/0.1%-아세토니트릴 혼합액(10/90, v/v)으로 10분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
6.6	275	276

4.1.4.149 펜티오피라드(Penthiopyrad)

1) 시험법 적용범위

과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜티오피라드를 아세톤으로 추출하고 다공성규조토 칼럼으로 분배한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소・인 검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜티오피라드 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 다공성규조토 칼럼 : 다공성 규조토를 재충전하여 사용할 수 있는 15 g 용

바) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하 수욕상에서 약 20 mL가 될 때까지 감압농축한다. 이를 다공성규조토 칼럼에 옮겨 충분히 흡수시키고 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)  10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜티오피라드(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜티오피라드를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 260℃

(6) 이온원 온도 : 250℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
9.7	359	177, 152

4.1.4.150 피리미설판(Pyrimisulfan)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리미설판을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리미설판 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2∼3분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합한 후  40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 500 mL 분액깔대기에 옮긴다. 이에 1 N 염산 용액 2 mL를 가하여 산성화 한 후, 포화식염수 40 mL, 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 5 ml를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

(8) Collision energy : 20 ∼ 25

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 m/z 370 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 피리미설판(8.1분)

라) 정량한계

0.005 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피리미설판을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy(V)
8.1	420	370 255	20 25

4.1.4.151 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

1) 시험법 적용범위

과일류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리플루퀴나존을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리플루퀴나존 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 1% 포름산 20 mL를 가하여 산성화한 후 아세토니트릴 80 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL, 헥산 100 mL를 차례로 가한다. 이를 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 물층을 취하여 별도의 분액깔때기에 옮긴다. 이에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 20 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/5, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 받고, 아세톤 10 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 10 mM 인산/아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 250 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 피리플루퀴나존(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리플루퀴나존을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산/아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
7.8	464	465

제 10, 5.3.5 노보비오신(Novobiocin)을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 노보비오신을 메탄올로 추출하고 헥산/메탄올 분배로 지방을 제거한 후 실리카로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 노보비오신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액 (60 : 40 : 0.1, v/v/v)으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 실리카 카트리지(1 g, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g(유(乳)의 경우에는 5 mL)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 무수황산나트륨 30 g과 메탄올 30 mL를 넣은 후 3분간 균질화 한다. 균질화한 시료를 50 mL 원심분리관에 옮기고 8,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리한다. 상등액 15 mL를 정확히 취하여 40℃이하 수욕상에서 건고한다. 잔류물에 메탄올포화헥산 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화메탄올 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 메탄올층을 여분의 농축플라스크로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화메탄올 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 메탄올층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 감압농축 한후 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL에 녹인다. 미리 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL로 활성화 시킨 실리카 카트리지에 추출액을 흡착시키고 추가의 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL를 유출시키고, 고정상 상단이 노출되기 직전에 메탄올 : 아세톤 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL를 용출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 질소농축 하고 잔류물에 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v) 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 20 μL

(바) 검출기 파장 : UV 340 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

축산물 0.02 mg/kg, 유 0.02 mg/L

그림 1. 노보비오신(10.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

9) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(가) 칼럼 : C18(2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액(50 : 50 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) Ionization : ESI(positive)

(바) Capillary temperature : 350℃

(사) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
11.3	612	613

제 10, 5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate)를 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 데코퀴네이트 표준품을 정밀히 달아 클로로포름에 녹여 200 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 이것을 3500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL를 통과시켜 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2번 용출한다. 용출액을  60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 메탄올 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

ⓛ 이동상 A : 20 mM HFBA 수용액

② 이동상 B : 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	55	45
3.0	55	45
5.0	40	60
7.0	5	95
18.0	5	95
18.01	55	45
23	55	45

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 데코퀴네이트(12.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 데코퀴네이트

소 : 0.07 mg/kg, 닭 : 0.09 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 데코퀴네이트의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 데코퀴네이트 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 27 eV

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
데코퀴네이트	418	204, 232, 372

“제 10. 5.3.13 디싸이클라닐(Dicyclanil)”을 “제 10, 5.3.13 암프롤리움(Amprolium), 디싸이클라닐(Dicyclanil)”로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 암프롤리움 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 1000 mg/L 이상이 되게 하고, 디싸이클라닐 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 150 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 추출물을 3500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2회 용출한다. 용출액을 60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 0.5 M HCl을 사용하여 pH 5.0 조절된 증류수 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

ⓛ 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

② 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1:1.8)

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	75	25
3.0	75	25
16.0	65	35
16.5	75	25
21.5	75	25

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 디싸이클라닐(9.2분), 암프롤리움(14.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 암프롤리움

소 : 0.04 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

(2) 디싸이클라닐

양 : 0.05 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 디싸이클라닐 및 암프롤리움의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 디싸이클라닐 및 암프롤리움 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1 : 1.8)

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 15 eV(암프롤리움), 25 eV(디싸이클라닐)

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
암프롤리움	243	94, 122, 150
디싸이클라닐	191	56, 109, 150

제 10, 5.3.20 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin)을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 모넨신과 살리노마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것다

다) 표준원액 : 모넨신, 살리노마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1000 mg/L 이상이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올을 이용해 적당한 농도로 희석한다.

마) 0.1% 개미산 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 개미산 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료를 5 g 취하여 50 mL 원심분리 튜브에 넣고 수분을 제거하기 위해 황산나트륨(Na2SO4) 15 g을 첨가한 후, 아세토니트릴을 20 mL 첨가하여 진탕 혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 시료를 5℃, 12,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 시험관으로 옮긴 후, 시료의 방해물질을 제거하기 위해 8 mL n-헥산과 2 mL의 디클로로메탄을 첨가하여 진탕 혼합기로 10분간 혼합한다. 이후 5℃, 5000 G에서 5분간 원심분리 한 후 중간층(아세토니트릴 층)을 수집하여 추출액으로 한다. 미리 아세토니트릴 2 mL로 활성화시킨 실리카 카트리지에 추출액을 넣어 방해물질을 제거하고 용출액은 재수집한다. 아세토니트릴 2 mL를 사용하여 카트리지를 세척한 것까지 수집을 한 후, 질소 농축기를 이용해 40℃에서 완전히 증발시킨다. 잔류물은 아세토니트릴 500 μL로 녹여 멤버레인 필터로 여과한 후  시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산를 함유한 아세토나이트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
10.0	6	94

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Collision energy : 모넨신 : 60 eV, 살리노마이신 : 50 eV

라) 표준품 크로마토그램

그림 1. 살리노마이신(5.7분), 모넨신(6.6분)의 크로마토그램

7) 정량시험

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
모넨신	693	479, 501, 461
살리노마이신	773	413, 531, 431

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 모넨신은 m/z 461, 살리노마이신은 m/z 431 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 모넨신 및 살리노마이신의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 모넨신 정량한계

소 : 0.0029 mg/kg, 돼지 : 0.0016 mg/kg,

닭 : 0.0019 mg/kg, 유 : 0.0018 mg/kg

(2) 살리노마이신 정량한계

소 : 0.0028 mg/kg, 돼지 : 0.0035 mg/kg,

닭 : 0.0020 mg/kg, 알 : 0.0025 mg/kg

제 10, 5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin)을 다음과 같이 한다.

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 스펙티노마이신을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 스펙티노마이신 표준품을 정밀히 달아 20 mM HFBA에 녹여 1000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 20 mM HFBA으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고-HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) 30% NaOH : NaOH 30 g에 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)를 가해 최종 100 mL가 되도록 한다.

사) 5% TCA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 TCA 25g 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

아) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (6CC, 200 mg,) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질기로 균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 5% TCA 20 mL를 가하여 진탕혼합기로 20분간 흔들어 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 12,000 G으로 10분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 여과지를 이용하여 여과한 후 30% NaOH로 pH 8.5로 조정하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 6 mL와 20 mM HFBA 6 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 5분간 진공 감압하여 건조한 후 아세토니트릴 : 20 mM HFBA(4 : 1, v/v) 12 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 0.3 mL까지 농축시킨 후 1 mL 까지 20 mM HFBA로 조정한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터로 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
2.0	15	85
10.0	15	85
10.1	90	10
20.0	90	10

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 23 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 스펙티노마이신(4.9분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 207 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
스펙티노마이신	351	333, 98, 207

나) 정량한계

소 : 0.05 mg/kg, 돼지 : 0.04 mg/kg,

닭 : 0.1 mg/kg, 유 : 0.06 mg/kg, 알 : 0.02 mg/kg

“제 10, 5.3.32 아목시실린(Amoxicillin)”을 “제 10, 5.3.32 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 나프실린(Nafcillin), 옥사실린(Oxacillin)”으로 하고, 다음과 같이 한다.

1) 시험법의 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에 아세토니트릴 : 물 혼합액(유 및 알의 경우 트리클로로초산이 함유된 아세토니트릴)을 가한 후 대상성분을 추출하고 액-액 분배 및 고상추출법으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액 : 아목시실린, 암피실린, 벤질페니실린, 클록사실린, 디클록사실린 및 나프실린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100  mg/L 농도가 되게 한다

나) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 적당한 농도가 되게 희석하여 사용한다.

다) HLB 카트리지 : 500 mg, SPE용

라) 0.1 M 인산수소나트륨용액 : 1L 용량플라스크에 제이인산수소나트륨(Na2HPO4) 14.2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

마) 0.05 mM 인산수소카륨용액 : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축․수산물

균질화한 시료(소고기, 닭고기, 광어) 2 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20 v/v) 10 mL를 넣고 2분간 균질화시킨다. 균질화시킨 시료를 50 mL 원심분리관으로 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20, v/v) 10 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 시료와 합한다. 합친 시료를 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 여분의 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. ★미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유 및 알

균질화한 시료(유(乳) 20 mL, 알 5 g)를 50 mL 원심분리관에 취하고 유는 아세토니트릴 50 mL, 알은 20% 트리클로로초산 0.5 mL이 포함된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한다. 혼합액을 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 용액을 0.1 M 수산화나트륨 용액으로 pH 9.0±0.2로 조절한다. 추가 정제과정은 위의 ★이후 과정을 따른다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18 (2.0 × 150 mm, 3 μm)

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 개미산이 포함된 물

② 이동상 B : 0.1% 개미산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0	98	2
2	98	2
2.1	80	20
8.0	80	20
10	0	100
30	0	100
40	98	2
45	98	2

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy :

물질	Precursor ion(m/z)	Product ions(m/z)	Collision energy (V)
아목시실린	366	349, 114	8
암피실린	350	106, 192	17
벤질페니실린	335	160, 176	11
클록사실린	436	277, 160	15
디클록사실린	470	160, 311	13
나프실린	415	199, 171	14
옥사실린	402	160, 243	13

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물	수산물	유	알
아목시실린	0.005	0.005	0.002	0.001
암피실린	0.005	0.001	0.001	0.001
벤질페니실린	0.001	0.001	0.005	0.001
클록사실린	0.005	0.005	0.005	0.001
디클록사실린	0.001	0.005	0.001	0.001
나프실린	0.001	0.005	0.001	0.001
옥사실린	0.001	0.005	0.001	0.001

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

벤질페니실린 (12.5분), 암피실린 (6.4분), 아목시실린 (6.1분), 옥사실린 (12.7분), 나프실린 (12.8분), 클록사실린 (12.8분), 디클록사실린(13.0분)

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

“제 10, 5.3.33 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin)”을 삭제하고, “제 10, 5.3.33 폭심(Poxim)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 폭심을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 폭심 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% formic acid 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 formic acid 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토나이트릴 20 mL를 가하여 200 G으로 20분간 진탕 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 5000 G으로 5분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 다시 아세토나이트릴 20 mL를 가해 다시 추출한다. 모은 상층액 40 mL를 250 mL 농축플라스크에 넣어  감압 농축한 후 n-헥산 5 mL로 2번 재용해하여 n-헥산 10 mL로 활성화된 실리카 카트리지(6 cc, 500 mg)에 적재한다. 적재가 끝난 카트리지에 디클로로메탄 20 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 농축시킨 후 아세토니트릴 500 μL로 재 용해한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터를 사용하여 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm,   3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	60	40
2.0	10	90
10.0	10	90
10.1	60	40
20.0	60	40

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 3 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 폭심 표준품(6.0분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 129 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 폭심의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
폭심	299	77, 97, 129

나) 정량한계

(1) 폭심

소 :  0.025 mg/kg, 돼지 : 0.025 mg/kg

“제 10, 5.3.40 암프롤리움(Amprolium)”을 삭제하고, “제 10. 5.3.40 발네물린(Valnemulin)”을 다음과 같이 신설한다.

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 발네물린을 메탄올로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량 분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 발네물린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 희석한다

마) 내부표준용액 : 내부표준원액을 메탄올/물 혼합액 (70 : 30, v/v)로 희석하여 10 mg/L가 되게 한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 1% 개미산(formic acid)을 함유한 메탄올 15 mL를 가하여 20분간 진탕추출한다. 추출액을 4,000 G에서 10분간 원리분리한 후 상층액 5 mL를 여분의 15 mL 튜브에 옮기고 50℃이하에서 질소가스로 용매를 날려보낸 후 메탄올/물 혼합액(50 : 50, v/v) 1 mL에 녹인다. 녹인 용액에 헥산 1 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 헥산층은 버리고 남은 용액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 0.1% 개미산(formic acid)이 함유된 아세토니트릴/물 혼합액 (90/10, v/v)

(라) 유속 : 0.25 mL/분

(마) 시료 주입량 : 5 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy(V)
발네물린	565	263, 245	24

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 0.01 mg/kg

그림 1. 발네물린(5.3분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

제 10, 5.3.93 부터 5.3.97 까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

5.3.93 설파구아니딘(Sulfaguanidine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 염기성화시킨 후 설파구아니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 유도체하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 설파구아니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량을 취하여 질소가스로 용매를 날려보낸 후 물 0.1 mL를 가하여 녹인 후 아래의 유도체 과정을 거친다.

마) 50 mM 인산완충용액(pH 3.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 3.0으로 조절한다

바) 유도체시약 : Fluorescamine을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g(유(乳)의 경우 5 mL)을 50 mL 원심분리관에 취하고 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하여 30분간 진탕한 후 10분간 초음파추출한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 50 mL 원심분리관에 취한다. 잔류물에 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 다시 가한 후 위의 과정을 반복하고 분리한 상층액을 합한다. 이 합친 용액을 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 물 0.5 mL에 녹인다. 녹인용액에 헥산 0.5 mL를 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 물층 0.1 mL를 취하여 2 mL 원심분리관으로 옮긴다. 원심분리관에 인산완충용액 0.2 mL과 유도체 시약 0.2 mL을 넣고 충분히 섞은 후 실온에서 30분간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6×150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 메탄올 : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
3	70	30
20	70	30
21	10	90
26	10	90

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(사) 검출기 파장 : 여기파장(405 nm), 측정파장(495 nm)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 소, 돼지 0.03 mg/kg

유 0.002 mg/kg

그림 1. 설파구아니딘 유도체(17.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.94 로베니딘(Robenidine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 로베니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 로베니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 2% 개미산(formic acid)을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하고 20분간 진탕한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 튜브에 취하고 50℃ 수욕상에서 질소가스를 이용하여 용매를 날려보낸다. 잔류물에 2% 개미산을 함유한 70% 메탄올 수용액 0.5 mL에 녹인 후 헥산 0.5 mL을 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 수용액층을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상 : 2% 삼염화초산을 함유한 메탄올 : 물 혼합액(70 : 30, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 312 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.03 mg/kg

그림 1. 로베니딘(6.8분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.95 톨트라주릴(Toltrazuril)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 톨트라주릴 설폰을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 톨트라주릴 설폰 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM 인산완충용액(pH 2.5) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 2.7 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 2.5로 조절한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL를 가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 메탄올 : 물 혼합액 (60 : 40, v/v)에 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	40	60
15	0	100
16	40	60
21	40	60

(라) 유속 : 1 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 255 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 소, 돼지 0.02 mg/kg

닭 0.05 mg/kg

알 0.01 mg/kg

그림 1. 톨트라주릴 설폰(10.2분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.96 디아베리딘(Diaveridine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디아베리딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산/아세토니트릴 분배로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 디아베리딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 50 mM 인산완충용액 (pH 6.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소나트륨 (NaH2PO4) 6 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 수산화나트륨을 가하여 pH 6.0으로 조절한다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 15 mL를 가하가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 4 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 50 mM 인산완충용액 혼합액 pH 6.0  (15 : 85, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 254 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.02 mg/kg

그림 1. 디아베리딘(13.1분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

별표 4, (3) 글리포세이트(Glyphosate) 중 “감 0.2”, “배 0.2”, “사과 0.2”를 각각 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

인과류	0.2

복숭아	0.2

별표 4, (4) 나프로파마이드(Napropamide) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.1

별표 4, (8) 다이아지논(Diazinon) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.1

별표 4, (9) 델타메쓰린(Deltamethrin) 중 “감 0.5”, “배 0.5”, “사과 0.5”를 삭제하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.1

풋콩	0.3

인과류	0.5

별표 4, (21) 디크로보스(Dichlorvos : DDVP) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설 한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (29) 디플루벤주론(Diflubenzuron) 중 “양송이 0.1”을 “양송이 0.3”으로 하고, “느타리버섯 0.1”을 “느타리버섯 1.0”으로 한다.

별표 4, (30) 리누론(Linuron) 중 다음 항목을 신설한다.

풋콩	0.1

별표 4, (31) 마이클로부타닐(Myclobutanil) 중 “감 0.5”, “배 0.5”, “사과 0.5”를 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

인과류	0.5

별표 4, (32) 말라치온(Malathion) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (35) 메소밀 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (38) 메타락실(Metalaxyl) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (63) 세톡시딤(Sethoxydim) 중 “배추 10.0”을 “배추 3.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	10

별표 4, (66) 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin) 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4, (67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

참깨	0.5

엇갈이배추	2.0

별표 4, (71) 아미트라즈(Amitraz) 중 “감 0.2”, “배 0.5”, “사과 0.5”를 각각 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

인과류	0.5

별표 4, (73) 아세페이트(Acephate) 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4, (78) 알라클로르(Alachlor) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

풋콩	0.05

딸기	0.05

무(잎)	0.2

별표 4, (85) 에토펜프록스(Etofenprox) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로, “배추(건조) 7.0”을 “배추(건조) 2.5”로 하고, “감 1.0”, “배 1.0”, “사과 1.0”, “호밀 0.05”를 각각 삭제하며, 다음 항목을 신설한다.

인과류	1.0

별표 4, (97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen) 중 “감 0.05”, “배 0.05”, “사과 0.05”를 삭제하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

풋마늘	0.05

인과류	0.05

별표 4, (111) 카바릴(Carbaryl) 중 다음 항목을 신설한다.

복숭아	1.0

별표 4, (112) 카벤다짐(Carbendazim) 중 “쌀 0.05”를 “쌀 0.5”로 하고, “참다래(키위) 0.5”를 “참다래(키위) 3.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

유자	3.0

별표 4, (131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos) 중 “감 0.5”, “배 0.5”, “사과 1.0”을 각각 삭제하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

인과류	1.0

엇갈이배추	0.2

별표 4, (132) 클로르피리포스-메틸(Chlorpyrifos-methyl) 중 “배추 0.2”를 “배추 0.07”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.2

별표 4, (133) 터부코나졸(Tebuconazole) 중 “감 1.0”을 삭제한다.

별표 4, (148) 트리풀루라린(Trifluralin) 중 다음 항목을 신설한다.

풋콩	0.05

엇갈이배추	0.05

별표 4, (151) 티오디카브(Thiodicarb) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	3.0

별표 4, (152) 티오벤카브(Thiobencarb) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.2

별표 4, (161) 페녹사프로프-에칠(Fenoxaprop-ethyl) 중 다음 항목을 신설한다.

풋콩	0.05

별표 4, (163) 펜디메타린(Pendimethalin) 중 “배추 0.2”를 “배추 0.07”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

마늘(풋마늘포함)	0.05

엇갈이배추	0.07

별표 4, (164) 펜발러레이트(Fenvalerate) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, “감 1.0”, “배 2.0”, “사과 2.0”을 각각 삭제하며, 다음 항목을 각각 신설한다.

인과류	2.0

엇갈이배추	1.0

별표 4, (168) 펜치온(Fenthion : MPP) 중 “쌀 0.1”을 “쌀 0.5”로 한다.

별표 4, (170) 펜토에이트(Phenthoate : PAP) “배추 0.1”을 “배추 0.03”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

밤	0.05

엇갈이배추	0.1

별표 4, (178) 폭심(Phoxim) 중 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	0.05

별표 4, (183) 풀루아지호프-부틸(Fluazifop-butyl) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (188) 프로파모카브(Propamocarb) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

생강	0.05

엇갈이배추	3.0

별표 4, (190) 프로페노포스(Profenofos) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (196) 피리미포스-메틸(Pirimiphos-methyl) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, “배추(건조) 3.0”을 “배추(건조) 1.0”으로 한다.

별표 4, (207) 테부페노자이드(Tebufenozide) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, “감 0.5”, “배 0.7”, “사과 0.7”을 각각 삭제하며, 다음 항목을 각각 신설한다.

인과류	1.0

엇갈이배추	1.0

별표 4, (212) 플루페녹수론(flufenoxuron) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (213) 피라크로포스(Pyraclofos) 중 “배추 0.1”을 “배추 0.05”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.1

별표 4, (218) 디메토모르프(Dimethomorph) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로, “배추(건조) 7.0”을 “배추(건조) 2.5”로 한다.

별표 4, (221) 디치아논(Dithianon) 중 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	5.0

별표 4, (224) 싸이목사닐(Cymoxanil) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (227) 아세타미프리드(Acetamiprid) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로, “배추(건조) 10.0”을 “배추(건조) 3.0”으로 한다.

별표 4, (239) 후루아지남(Fluazinam) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.05

별표 4, (242) 루페누론(Lufenuron) 중 “배추 0.2”를 “배추 0.07”로 하고 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.2

별표 4, (243) 메타벤즈티아주론(Methabenzthiazuron) 중 “보리 0.1”, “양파 0.1”을 각각 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

풋마늘	0.05

별표 4, (249) 에마멕틴 벤조에이트(Emamectin benzoate) 중 “배추 0.05”를 “배추 0.02”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.05

별표 4, (254) 카보설판(Carbosulfan) 중 “배추 0.3”을 “배추 0.1”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.3

별표 4, (255) 파목사돈(Famoxadone) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 한다.

별표 4, (291) 족사마이드(Zoxamide) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	3.0

별표 4, (297) 테트라코나졸(Tetraconazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

파	5.0

포도	2.0

별표 4, (302) 포세틸-알루미늄(Fosetyl-aluminium) 중 “배추 20.0”을 “배추 7.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	20

별표 4, (304) 프로베나졸(Probenazole) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.07

별표 4, (308) 플루설파마이드(flusulfamide) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.05

별표 4, (325) 시아조파미드(Cyazofamid) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 한다.

별표 4, (333) 테부피림포스(Tebupirimfos) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.01

별표 4, (335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.5

별표 4, (338) 티아크로프리드(Thiacloprid) 중 “배추 0.5”를 “배추 0.2”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.05

풋콩	1.0

별표 4, (356) 에타복삼(Ethaboxam) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (357) 에틸렌비스디치오카바메이트(EBDC[Ethylenebis(dithio-carbamate)s] 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4, (358) 이프로발리카브(Iprovalicarb) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (361) 테플루스린(Tefluthrin) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.1

별표 4, (370) 벤티아발리카브아이소프로필(Benthiavalicarb-isopropyl) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (371) 디니코나졸(Diniconazole) 중 “배추 0.3”을 “배추 0.1”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	0.3

별표 4, (380) 피리다릴(Pyridaryl) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 한다.

별표 4, (388) 시안화 수소(Hydrogen cyanide) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4, (393) 메트알데히드(Metaldehyde) 중 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (394) 비스트리플루론(Bistrifluron) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (395) 플루오피콜라이드(fluopicolide) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	1.0

별표 4, (403) 메타플루미존(Metaflumizone) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	2.0

별표 4, (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 “배추 1.0”을 “배추 0.3”으로 한다.

별표 4, (409) 아미설브롬(Amisulbrom) 중 “배추 2.0”을 “배추 0.7”로 한다.

별표 4, (410) 옥솔린산(Oxolinic acid) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

복숭아	2.0

감귤	0.5

자두	0.1

엇갈이배추	3.0

별표 4, (417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide) 중 “배추 3.0”을 “배추 1.0”으로 한다.

별표 4, (419) 프로헥사디온-칼슘(Prohexadione-calcium) 중 “배추 5.0”을 “배추 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

엇갈이배추	5.0

별표 4 중 (425)부터 (428)까지를 각각 다음과 같이 신설한다.

별표 4, (425) 플루오피람(Fluopyram)

오이	1.0

별표 4, (426) 메타조설푸론(Metazosulfuron)

쌀	0.05

별표 4, (427) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

고추	0.5

배	0.1

사과	0.2

별표 4, (428) 이소피라잠(Isopyrazam)

오이	2.0

참외	0.5

별표 5, (11) 아족시스트로빈(Azoxystrobin) 중 “수삼 0.5”를 “수삼 0.1”로, “인삼농축액 2.0”을 “인삼농축액 0.5”로, “홍삼농축액 2.0”을 “홍삼농축액 0.5”로 한다.

부  칙

제1조(시행일) 이 고시는 고시 후 7일이 경과한 날부터 시행한다.

제2조(농산물의 농약잔류허용기준 적용례) 이 고시 시행 당시 판매중인 식품에도 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정을 적용한다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개 정(안)

제 10. 일반시험법

1 ∼ 3 (생  략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.11 (생  략)

4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin)

1) 시험법 적용범위

가지, 고추, 고춧잎, 녹차추출물, 도라지, 두릅, 딸기, 밀감, 배, 사과, 셀러리, 수박, 시금치,  쑥갓, 오이, 차, 참외, 파, 호박 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 메탄올로 추출한 후 후로리실 칼럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프：자외부흡광검출기 (UV Detector)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실(Florisil)：칼럼크로마토그래프용 후로리실을 130℃에서 6시간 이상 가열한 후 데시케이터에서 식힌다.

라) 아미노프로필(Aminopropyl) 카트리지：아미노프로필(0.5 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

마) 표준원액：아바멕틴 및 밀베멕틴을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L이 되게 한다.

바) 표준용액：표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

사) 기타시약：잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 [채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄기(Cutter mixer)에 넣고 분쇄한 20 g]를 정밀히 달아 균질기(Omni mixer)병에 넣고 메탄올 100 mL를 넣은 후 균질기로 2분간 균질화 한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 잔류물은 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L용량의 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL의 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 섞은 후 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 분배과정을 되풀이 하고 추출된 용액을 합친다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 1g을 충전한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도까지 유출시킨다. 이 칼럼에 위의 디클로로메탄 추출액 10 mL을 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸다. 충전제 표면이 노출되기 직전 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액 (10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 다시 메탄올/에틸아세테이트 혼합액 (0.5/99.5, v/v) 50 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 감압농축 하여 건고하고 잔류물에 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.  미리 아미노프로필 카트리지에 헥산 5 mL를 초당 2～3방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 카트리지에 위의 추출액 10 mL를 가한 후 2 mL/min의 유속으로 흘려보낸다. 카트리지의 필터 표면이 노출되기 직전 톨루엔 3 mL ,디클로로메탄 5 mL로 통과시켜 버리고, 다시 아세톤/디클로로메탄 혼합액 (20/80, v/v) 6 mL로 용출시킨다. 용출액을 40℃ 질소가스로 완전히 날려 보낸 후 아세토니트릴/메탄올/물 혼합액 (52.5/22.5/25, v/v/v) 2 mL 에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18, (150 mm × 3.9 mm, 4 ㎛)

(2) 칼럼온도：40℃

(3) 이동상：아세토니트릴/메탄올/물 (52.5/22.5/25, v/v/v)

(4) 이동상 유량：1.0 mL/min

(5) 검출기파장：UV 246 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램.

1：아바멕틴 B1a (10.9분) 18.8 ng, 2：아바멕틴 B1b (8.1분) 1.2 ng, 3：밀베멕틴 A3 (9.7분) 8.5 ng, 밀베멕틴 A4 (13.2분) 19.5 ng.

라) 정량한계

아바멕틴 B1a (0.003 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.003 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.003 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.003 mg/kg), 아바멕틴 B1a (0.005 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.005 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.005 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.005 mg/kg)

마) 액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼：C18,(150 mm × 2.1 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도：40℃

(3) 이동상：아세토니트릴/물 (70/30, v/v)의 혼합액

(4) 이동상 유량：0.2 mL/min

(5) 이온화：ESI negative-ion mode

(6) 분자량 범위：300～1000

(7)  주입량：10 μL

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온

분석성분	머무름 시간 (min)	분자량	Ion monitored (m/z)
아바멕틴 B1b 아바멕틴 B1a 밀베멕틴 A3 밀베멕틴 A4	8.0 9.8 10.6 13.6	858 872 528 542	857 871 527 541

7) 정성시험

위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 측정조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.

주1) 액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.3.13 ∼ 4.1.4.147 (생  략)

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5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ∼ 5.3.4 (생  략)

5.3.5 노보비오신(Novobiocin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 노보비오신을 메탄올로 추출한 후 헥산으로 지방성분을 제거하여 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：노보비오신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 물 10 mL를 가하여 잘 녹인 다음 물로 표시선까지 채워 100 mg/L의 농도가 되게 한다.

라) 표준용액：표준원액을 물로 적당한 농도가 되도록 희석하여 사용한다.

마) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 메탄올 15 mL와 무수황산나트륨 5 g을 첨가하고 균질기로 2분간 균질화한 후 1시간 진탕한다. 이 액을 10분간 원심분리(3,000 G)하여 상층액을 3 mL 취한 후 헥산 3 mL를 가하고 진탕한다. 헥산층은 버리고 남은 액을 바로 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：10 mM 인산：아세토니트릴(40：60)

(3) 측정파장：340 nm

(4) 칼럼온도：25℃

(5) 유속：1.0 mL/분

(6) 주입량：20 μL

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 노보비오신의 함량을 구한다.

<신  설>

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5.3.6 ∼ 5.3.7 (생  략)

5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에 메탄올 및 클로로포름 혼합액을 넣어 균질기로 균질하게 하고 초음파 추출한 후 메타인산을 넣어 클로로포름으로 추출한다. 후로리실 칼럼을 사용하여 정제한 후 염화칼슘 -메탄올 혼합액으로 용출시켜 형광광도계로 측정한다.

3) 장치

형광광도계

4) 시약 및 시액

가) 유기용매：잔류농약 시험용

나) 용출용 용액：염화칼륨(무수) 10 g을 재증류한 후 메탄올에 녹여 1,000 mL로 하고 24시간 방치한 후 여과하여 사용한다.

다) 5% 메타인산용액：메타인산 50 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다. 이 액은 냉장보관하여 사용한다.

라) 후로리실(Florisil)：60～1,000메쉬의 칼럼크로마토그래프용

마) 기타시약：최순품

바) 표준원액：데코퀴네이트 표준품 20 mg을 정밀히 달아 클로로포름에 녹여 100 mL로 한다.

사) 표준용액：데코퀴네이트 표준원액 50 mL를 취해 클로로포름을 넣어 100 mL로 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 20 g을 달아 황산나트륨(무수) 20 g과 메탄올․클로로포름(4：1)의 혼합액 40 mL를 넣어 균질기로 1분간 균질하게 한 후 원심분리하여 상등액을 취한다. 잔류물에 메탄올․클로로포름(4：1)의 혼합액 적당량으로 위의 조작을 되풀이하여 상등액을 위의 상등액에 합해 메탄올․클로로포름(4：1)의 혼합액을 넣어 100 mL로 한다. 약 10분간 초음파 진탕한 후 약 2,000 rpm에서 원심분리하여 상등액 50 mL를 분액깔때기에 취해 5% 메타인산용액 100 mL를 넣어 가볍게 흔들고 10분간 정치하여 클로로포름층을 취한다. 다시 분액깔때기에 클로로포름 10 mL를 넣어 위의 조작을 되풀이하여 클로로포름층을 취한다. 클로로포름층을 합하고 메탄올 2 mL를 넣어 클로로포름으로 전량을 25 mL로 한다.

나) 정제

안지름 7 mm, 길이 300 mm의 칼럼에 후로리실 4 g을 클로로포름에 현탁시켜 넣고 칼럼의 상단에 소량의 클로로포름이 남을 때까지 흘려보낸다. 이 칼럼에 위의 추출액 25 mL를 넣고 메탄올 10 mL를 넣어 씻은 후 용출용 용액을 넣어 용출액 15 mL를 취해 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 형광광도계의 측정조건

(1) 여기파장：270 nm

(2) 측정파장：360, 380, 400 nm

7) 정량시험

검체 20 g씩을 4개 달아 그중 3개에 데코퀴네이트 표준용액을 각각 0.2, 0.4 및 0.8 mL를 넣고 5) 시험용액의 조제에 따라 조작한 후 형광광도를 측정하여 아래식에 의해 각각의 시험용액의 I치를 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 데코퀴네이트의 함량을 구한다.

I＝I380-(I360＋I400)/2

5.3.9 ∼ 5.3.12 (생  략)

5.3.13 디싸이클라닐(Dicyclanil)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 디싸이클라닐을 아세토니트릴로 추출하여 액체크로마토그래프/자외부흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 디싸이클라닐 표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 하고 냉장보관한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 사용한다.

마) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 5 mL를 가하여 10분간 균질화한 후 10분간 초음파 추출한다. 이 용액을 2,500 G에서 20분간 원심분리한 후 상징액을 취하고 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 가드칼럼 : C8(4.6 × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 분석칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(3) 칼럼온도 : 25℃

(4) 이동상 : 1 mM 초산암모늄/아세토니트릴(85:15)

(5) 유속 : 1.5 mL/분

(6) 주입량 : 10 μL

(7) 측정파장 : 267 nm

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각각의 피크 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 디싸이클라닐의 함량을 구한다.

5.3.14 ∼ 5.3.19 (생  략)

5.3.20 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 균질화하여 여과하고 아세토니트릴포화헥산으로 정제한 후 감압건고한다. 잔류물을 클로로포름에 용해하고 실리카카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/시차굴절계검출기 또는 형광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/시차굴절계검출기 또는 형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액 : 모넨신, 살리노마이신 표준품을 메탄올로 용해해서 1 mg/mL의 농도로 조제한다.

나) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 적당히 희석해서 표준용액으로 한다.

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 10 g을 균질기에 달아 넣고, 아세토니트릴 30 mL를 가해서 5분간 균질화하고 분당 3,000 rpm으로 5분간 원심분리한 후 분액깔때기에 면전 여과하여 옮긴다. 잔류물에 아세토니트릴 30 mL를 가해서 똑같이 조작하고 여액을 합한다. 여액에 아세토니트릴포화헥산 50 mL를 가해 5분간 진탕혼합한 후 정치하고 하층(아세토니트릴층)을 감압농축기로 40℃에서 감압건고한다.

잔류물을 클로로포름 5 mL로 용해해서 SEP-PAK 실리카카트리지에 전량을 통과한 후 소량의 클로로포름으로 용기를 세정해서 세액도 카트리지에 통과시킨다. 클로로포름 8 mL로 카트리지를 세정한 후 클로로포름․메탄올(9：1) 10 mL를 이용해서 50 mL 플라스크에 용출한다. 용출액을 40℃에서 감압건고한 후 잔류물을 메탄올 2.0 mL로 용해하고 0.45 μm의 멤브레인 필터로 여과해서 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 모넨신 및 살리노마이신의 동시분석조건

(가) 칼럼：길이 300 mm, 안지름 4 mm, 전다공성화학결합실리카충전칼럼

(나) 검출기：시차굴절계검출기

(다) 이동상：아세토니트릴․희석인산용액(990 mL의 물에 10 mL의 인산) (85：15)

(라) 유속：1.5 mL/분

(2) 모넨신의 분석조건

(가) 시험용액의 유도체화법

시험용액 0.5 mL에 0.1% 9-안스릴디아조메탄(ADAM) 메탄올용액 0.5 mL 및 0.3% 크라운에테르․메탄올용액 0.1 mL를 가해 실온에 방치해서 60분간 반응시킨다. 반응 후 용액을 제거하고 잔류물을 n-헥산․클로로포름(1：1) 10 mL로 용해하고 SEP-PAK 실리카카트리지에 통과한다. 클로로포름 5 mL로 세정 후 클로로포름․메탄올(9：1) 5 mL로 ADAM-모넨신유도체를 용출하고 용출액을 농축건조하여 잔류물을 메탄올 1 mL로 용해하여 이를 시험용액으로 한다.

(나) 칼럼：길이 250 mm, 안지름 4.6 mm 전다공성화학결합실리카충전칼럼

(다) 검출기：형광검출기

(라) 검출파장：여기파장(Ex) 365 nm, 측정파장(Em) 412 nm

(마) 이동상：메탄올․물(95：5)

(바) 유속：0.8 mL/분

(3) 살리노마이신의 분석조건

(가) 칼럼：길이 250 mm, 안지름 4.6 mm, Altex Ultrashere octyl reverse phase column

(나) 검출기：시차굴절계검출기

(다) 이동상：150 mL의 물에 인산 0.1 mL를 가하고 아세토니트릴 1 L로 채운다.

(라) 유속：2.0 mL/분

7) 정량시험

각각의 표준용액을 측정조건에 따라서 액체크로마토그래피를 행하고 각각의 피크 머무름시간을 측정한다. 이어서 시험용액에 대해서도 똑같게 조작하고 검출한 검체의 피크 머무름시간을 구하고 미리 표준용액에 대해서 피크 높이법에 따라 검량선을 작성하고 이에 따라 모넨신과 살리노마이신의 양을 구한다.

5.3.21 ∼ 5.3.29 (생  략)

5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin)

5.3.29.1 제1법

1) 시험법 적용범위

우유, 산양유 등 유(乳)류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 스펙티노마이신을 추출하고 중합역상칼럼(polymeric reversed-phase column)을 통과시킨 후 electrospray interface에 의해 이온화시킨 다음 질량분석기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액：스펙티노마이신 표준품을 정확히 달아 물에 녹여 100 μg/mL 가 되게 한다.

나) 표준용액：8 mM HFBA(heptafluorobutric acid)로 희석하여 0.125～12.5 μg/mL가 되게 한다.

다) Sep-Pak Vac tC18 카트리지

라) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

검체 5.0 mL에 30% TCA 0.25 mL를 넣고 혼합한 후 2,200 G에서 10분 동안 원심분리한다. 중간층(2.5±0.1 mL)을 주의깊게 취하여 20 mM HFBA 2 mL가 함유된 시험관에 옮긴다. 이 용액을 혼합한 후 미리 메탄올 2.5～3.0 mL, 8 mM HFBA 1.5 mL를 2회 통과시킨 Sep-Pak Vac tC18 카트리지에 적용한다. 이온쌍 추출물을 중력하에서 통과시키고 진공으로 카트리지를 건조시킨다. 메탄올：20 mM HFBA(4：1) 3 mL로 용출시키고 이 용출액을 50℃ 질소하에서 0.5 mL까지 농축시킨다. 물로 1.0 mL로 조정하여 5분동안 초음파처리한 후 0.2 μm 13 mm PVDF 시린지 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：PLRP-S(2.1 X 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：이동상 A：메탄올

이동상 B：물

이동상 C：20 mM HFBA

(3) 유속：0.23 mL/분(이동상 ABC의 혼합비 40：20：40)

나) 질량분석기(Ion trap)측정조건

Sheath gas(질소) flow rate, 86; auxiliary gas flow rate, 43; spray voltage, 5.50 kV; capillary temperature, 250℃; capillary voltage, 23.00 V; tube lens offset, 31.00 V

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 20 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 첨가검체에서 얻은 스펙티노마이신 피크의 면적 또는 높이와 농도에 대한 검량선을 작성한 후 검체 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

5.3.29.2 제2법

1) 시험법 적용범위

계란, 메추리알 등 알(卵)류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 스펙티노마이신을 구연산, 트리클로로초산, 디클로로메탄으로 추출하고 CBA-SPE 칼럼으로 정제, 농축한 후 유도체화하여 액체크로마토그래프/형광검출기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준용액：스펙티노마이신 표준품을 정확히 달아 물에 용해한 후 희석하여 최종 농도가 10 μg/mL 농도가 되게 한다.

나) 표준용액의 유도체화：기기 시스템은 두 개의 액체크로마토그래프 펌프, 자동주입기 그리고 액체크로마토그래프 칼럼 1과 칼럼 2와 연결되는 six-port switching unit 두 개를 갖는 valve-switching unit를 포함한다. 시험조작에서 칼럼 1은 이동상 2와 연결되고 칼럼 2는 이동상 1과 연결된다. 시스템에서 칼럼 후 유도체화는 이동상 3과 이동상 4가 만나서 2.2 m×0.5 mm 반응코일이 깔려있는 70℃의 수욕상에서 칼럼후 산화반응이 이루어진 다음 1.7 m×0.3 mm 반응코일이 깔려있는 25℃수욕상에서 유도체화가 이루어 지도록 한다.

다) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 첨가검체의 준비

음성대조검체 5 g에 스펙티노마이신 10 μg/mL 용액을 첨가하여 0.5 ppm 농도가 되게 한다.

나) 검체의 처리

50 mL 원심분리관에 담은 균질화한 검체 5.0 g에 25 mM 구연산 (pH 4.0) 25 mL과 10% 트리클로로초산용액 1 mL 그리고 10 mL 디클로로메탄을 가하여 교반기에서 20분간 혼합한 후에 4,000 G로 원심분리한다. 상층액을 여과지로 여과후에 1 M 수산화나트륨으로 pH를 6.7로 조정한다. 여과액을 미리 활성화시킨 카르복실산 SPE 칼럼에 약 분당 1 mL의 유속으로 통과시킨다. 이때 SPE 칼럼은 미리 메탄올 3 mL과 25 mM 인산칼륨완충용액(pH 6.7) 5 mL로 흘려주어 활성화시키고 마르지 않도록 주의한다. SPE 칼럼을 통과시킨 후 스펙티노마이신은 50 mM 구연산(pH 2.6) 3.5 mL로 용출시킨다. 용출액은 5 mL 유리관에 모아 10초간 혼합하고 2,500 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 여과하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 분석칼럼

(가) 칼럼1：integral dedicated 가드 칼럼(10 × 4.6 mm) 장착 Spherisorb SCX 칼럼(50 x 4.6 mm, 5 μm; Phase- Separation) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼2：Spherisorb SCX (4.6 × 250 mm, 5 μm; Phase-Separations) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상과 유속

(가) 이동상1：0.1 M 황산나트륨(pH 2.6):아세토니트릴(80:20), 0.80 mL/분

(나) 이동상2：0.15 M 인산칼륨완충용액(pH 3.5):아세토니트릴(80:20), 1.50 mL/분

(다) 이동상3：mL당 10 μL 하이포아염소산 나트륨(sodium hypochlorite)을 함유하는 1 mM 인산칼륨완충용액(pH 7.0), 0.25 mL/분

(라) 이동상4：0.5 M 붕산나트륨(pH 10.2), 0.75 mL/분

(마) 이동상5：3.0 mM OPA와 14 mM 2-머캅토에탄올을 함유하는 0.3 M 붕산나트륨(pH 10.2), 0.6 mL/분

(3) 측정파장：여기파장 362 nm, 형광파장 435 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 50 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 첨가검체에서 얻은 스펙티노마이신 피크의 면적 또는 높이와 농도에 대한 검량선을 작성한 후 검체 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

5.3.30 ∼ 5.3.31 (생  략)

5.3.32 아목시실린(Amoxicillin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

본 정량법은 칼럼전 유도체화법을 이용한다. 검체 중의 아목시실린을 물로 추출한 후 트리클로로초산(trichloroacetic acid)으로 불순물을 침전시키고 에테르로 다시 추출한 다음 유도체화하여 형광검출기로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 표준용액：아목시실린 표준품을 정확히 달아 물에 용해한 후 희석하여 최종 농도가 10 μg/mL 농도가 되도록 한 다음 아래의 방법으로 유도체화하여 아목시실린의 머무름 시간을 확인한다.

나) 표준용액의 유도체화：50 mL 원심분리관에 위에서 조제한 표준용액 200 μL와 pH 2.0 완충용액 3 mL, 7% 포름알데히드 1.5 mL, 물 10 mL를 가한 후 진탕하여 혼합하고 95℃ 항온수조에서 140분간 반응시킨 다음 얼음에 5분간 방치하여 냉각 후 염화메틸렌(methylene chloride)과 메탄올이 95：5의 비율로 혼합된 용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕한 다음 3,500 rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 버리고 하층을 액체크로마토그래프에 주입한다.

다) pH 2.0 완충용액：염화칼륨 375 mg과 1.0 N 염산 1.3 mL를 가한 후 물로 100 mL가 되게 한다.

라) 7% 포름알데히드：37% 포름알데히드를 희석하여 조제

마) 기타 시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 검체의 준비

아목시실린을 검사할 균질화한 검체 15 g을 50 mL 원심분리관에 담는다. 이때 미리 준비한 아목시실린이 잔류하지 않는 검체도 동일하게 원심분리관 2개에 담는다. 이 중 1개의 원심분리관에는 10 μg/mL 농도의 아목시실린 표준용액을 15 μL 가하고(이 검체는 0.010 ppm 농도의 첨가검체이다.) 나머지 1개의 검체는 음성대조구로 하여 아래의 방법에 따라 각각의 검체를 처리한다.

나) 검체의 처리

물 20 mL를 시험관에 가하고 3분간 강하게 진탕하여 3,500 rpm에서 30분간 원심분리한 후 상층액을 다른 50 mL 원심분리관에 담는다. 1.5 g의 트리클로로초산(trichloroacetic acid)을 두 원심분리관에 가한 후 1분간 강하게 진탕하고 얼음에서 5～10분간 냉각하여 3,500 rpm에서 10분간 원심분리한 다음 상층액을 다른 50 mL 원심분리관에 모은다. 상층액을 모은 원심분리관에 에테르 15 mL를 가하고 20초간 강하게 진탕한 후 3,500 rpm에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 버리고 20% 트리클로로초산 1 mL, pH 2.0 완충용액 3 mL, 7% 포름알데히드 1.5 mL를 차례로 가하여 유리구슬 5～6개를 넣고 강하게 진탕한 후 95℃ 항온수조에서 140분간 반응시킨다. 이때 시험관의 마개를 열어 에테르가 휘발되어 완전히 제거되도록 한 후 마개를 느슨하게 닫는다. 이 작업은 후드에서 실시한다. 반응이 끝난 시험관을 얼음에서 5분간 냉각하고 에테르 15 mL를 가한 후 2분간 매우 약하게 혼합한 다음 3,500 rpm에서 10분간 원심분리 한다. 유리주사기를 이용하여 하층액(물층)을 제거한 후 60℃의 수조에서 질소로 에테르를 완전히 제거시키고 염화메틸렌과 메탄올이 95：5의 비율로 혼합된 용액 2 mL를 가해 용해한 다음 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：μ-Polasil(waters사, 300×3.9 mm, 10 μm) 또는 이와 동등한 것.

(2) 이동상：염화메틸렌：메탄올(95：5)

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：여기파장 362 nm, 형광파장 435 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 50 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 첨가검체에서 얻은 아목시실린 피크의 면적 또는 높이와 농도에 대한 검량선을 작성한 후 검체 중 아목시실린의 함량을 구한다.

5.3.33 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

5.3.34 ∼ 5.3.39 (생  략)

5.3.40 암프롤리움(Amprolium)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

[별표 1] ∼ [별표 3] (생  략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 글리포세이트(Glyphosate)

(생  략)

감	0.2

배	0.2

사과	0.2

<신  설>

<신  설>

(4) 나프로파마이드(Napropamide)

(생  략)

<신  설>

(5) ∼ (7) (생  략)

(8) 다이아지논(Diazinon)

(생  략)

<신  설>

(9) 델타메쓰린(Deltamethrin)

(생  략)

감	0.5

배	0.5

사과	0.5

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(10) ∼ (20) (생  략)

(21) 디크로보스(Dichlorvos : DDVP)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(21) ∼ (28) (생  략)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(생  략)

양송이	0.1

느타리버섯	0.1

(30) 리누론(Linuron)

(생  략)

<신  설>

(31) 마이클로부타닐(Myclobutanil)

(생  략)

감	0.5

배	0.5

사과	0.5

<신  설>

(32) 말라치온(Malathion)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(33) ∼ (34) (생  략)

(35) 메소밀(Methomyl)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(36) ∼ (37) (생  략)

(38) 메타락실(Metalaxyl)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(39) ∼ (62) (생  략)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(생  략)

배추	10.0,

<신  설>

(64) ∼ (65) (생  략)

(66) 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin)

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

(67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(68) ∼ (70) (생  략)

(71) 아미트라즈(Amitraz)

(생  략)

감	0.2

배	0.5

사과	0.5

<신  설>

(72) (생  략)

(73) 아세페이트(Acephate)

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

(74) ∼ (77) (생  략)

(78) 알라클로르(Alachlor)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(79) ∼ (84) (생  략)

(85) 에토펜프록스(Etofenprox)

(생  략)

감	1.0

배	1.0

배추	2.0

배추(건조)	7.0

사과	1.0

호밀	0.05

<신  설>

(86) ∼ (96) (생  략)

(97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen)

(생  략)

감	0.05

배	0.05

사과	0.05

<신  설>

<신  설>

(98) ∼ (110) (생  략)

(111) 카바릴(Carbaryl)

(생  략)

<신  설>

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(생  략)

쌀	0.05

참다래(키위)	0.5

<신  설>

(113) ∼ (130) (생  략)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(생  략)

감	0.5

배	0.5

사과	1.0

<신  설>

<신  설>

(132) 클로르피리포스-메틸(Chlorpyrifos-methyl)

(생  략)

배추	0.2

<신  설>

(133) 터부코나졸(Tebuconazole)

(생  략)

감	1.0

(134) ∼ (147) (생  략)

(148) 트리풀루라린(Trifluralin)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(149) ∼ (150) (생  략)

(151) 티오디카브(Thiodicarb)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

(152) 티오벤카브(Thiobencarb)

(생  략)

<신  설>

(153) ∼ (160) (생  략)

(161)페녹사프로프-에칠(Fenoxaprop-ethyl)

(생  략)

<신  설>

(162) (생  략)

(163) 펜디메타린(Pendimethalin)

(생  략)

배추	0.2

마늘	0.2

<신  설>

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(생  략)

감	1.0

배	2.0

배추	1.0

사과	2.0

<신  설>

<신  설>

(165) ∼ (167) (생  략)

(168) 펜치온(Fenthion : MPP)

(생  략)

쌀	0.1

(169) (생  략)

(170) 펜토에이트(Phenthoate : PAP)

(생  략)

배추	0.1

<신  설>

<신  설>

(171) ∼ (177) (생  략)

(178) 폭심(Phoxim)

(생  략)

<신  설>

(179) ∼ (182) (생  략)

(183) 풀루아지호프-부틸(Fluazifop-butyl)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(184) ∼ (187) (생  략)

(188) 프로파모카브(Propamocarb)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

<신  설>

(189) (생  략)

(190) 프로페노포스(Profenofos)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(191) ∼ (195) (생  략)

(196) 피리미포스-메틸(Pirimiphos-methyl)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(197) ∼ (205) (생  략)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(생  략)

배추	0.5

배추(건조)	3.0

(207) 테부페노자이드(Tebufenozide)

(생  략)

감	0.5

배	0.7

배추	1.0

사과	0.7

<신  설>

<신  설>

(208) ∼ (211) (생  략)

(212) 플루페녹수론(Flufenoxuron)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(213) 피라크로포스(Pyraclofos)

(생  략)

배추	0.1

<신  설>

(214) ∼ (217) (생  략)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(생  략)

배추	2.0

배추(건조)	7.0

(219) ∼ (220) (생  략)

(221) 디치아논(Dithianon)

(생  략)

<신  설>

(222) ∼ (223) (생  략)

(224) 싸이목사닐(Cymoxanil)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(225) ∼ (226) (생  략)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(생  략)

배추	3.0

배추(건조)	10.0

(228) ∼ (238) (생  략)

(239) 후루아지남(Fluazinam)

(생  략)

<신  설>

(240) ∼ (241) (생  략)

(242) 루페누론(Lufenuron)

(생  략)

배추	0.2

<신  설>

(243) 메타벤즈티아주론(Methabenzthiazuron)

(생  략)

보리	0.1

양파	0.1

<신  설>

(244) ∼ (248) (생  략)

(249) 에마멕틴 벤조에이트

(Emamectin benzoate)

(생  략)

배추	0.05

<신  설>

(250) ∼ (253) (생  략)

(254) 카보설판(Carbosulfan)

(생  략)

배추	0.3

<신  설>

(255) 파목사돈(Famoxadone)

(생  략)

배추	1.0

(256) ∼ (290) (생  략)

(291) 족사마이드(Zoxamide)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

(292) ∼ (296) (생  략)

(297) 테트라코나졸(Tetraconazole)

(생  략)

<신  설>

<신  설>

(298) ∼ (301) (생  략)

(302) 포세틸-알루미늄(Fosetyl-aluminium)

(생  략)

배추	20.0

<신  설>

(303) (생  략)

(304) 프로베나졸(Probenazole)

(생  략)

<신  설>

(305) ∼ (307) (생  략)

(308) 플루설파마이드(Flusulfamide)

(생  략)

<신  설>

(309) ∼ (324) (생  략)

(325) 시아조파미드(Cyazofamid)

(생  략)

배추	2.0

(326) ∼ (332) (생  략)

(333) 테부피림포스(Tebupirimfos)

(생  략)

<신  설>

(334) (생  략)

(335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

(336) ∼ (337) (생  략)

(338) 티아클로프리드(Thiacloprid)

(생  략)

배추	0.5

<신  설>

<신  설>

(339) ∼ (355) (생  략)

(356) 에타복삼(Ethaboxam)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(357) 에틸렌비스디치오카바메이트

(EBDC[Ethylenebis(dithio-carbamate)s])

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

(358) 이프로발리카브(Iprovalicarb)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(359) ∼ (360) (생  략)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(생  략)

<신  설>

(362) ∼ (369) (생  략)

(370) 벤티아발리카브아이소프로필

(Benthiavalicarb-isopropyl)

(생  략)

배추	1.0

<신  설>

(371) 디니코나졸(Diniconazole)

(생  략)

배추	0.3

<신  설>

(372) ∼ (379) (생  략)

(380) 피리다릴(Pyridaryl)

(생  략)

배추	2.0

(381) ∼ (387) (생  략)

(388) 시안화 수소(Hydrogen cyanide)

(생  략)

<신  설>

(389) ∼ (392) (생  략)

(393) 메트알데히드(Metaldehyde)

(생  략)

<신  설>

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(생  략)

배추	1.0

<신  설>

(395) 플루오피콜라이드(Fluopicolide)

(생  략)

배추	1.0

<신  설>

(396) ∼ (402) (생  략)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(생  략)

배추	2.0

<신  설>

(404) ∼ (407) (생  략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생  략)

배추	1.0

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(생  략)

배추	2.0

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(생  략)

배추	3.0

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(411) ∼ (416) (생  략)

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(생  략)

배추	3.0

(418) (생  략)

(419) 프로헥사디온-칼슘

(Prohexadione-Calcium)

(생  략)

배추	5.0

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (10) (생  략)

(11) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(생  략)

수삼	0.5

인삼농축액	2.0

홍삼농축액	2.0

(12) ∼ (67) (생  략)

[별표 6] ∼[별표 7] (생  략)

제 10. 일반시험법

1 ∼ 3 (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 ∼ 4.1.3.11 (현행과 같음)

4.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin)

1) 시험법 적용범위

곡류, 콩류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 레피멕틴을 메탄올로 추출하고 플로리실 컬럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아바멕틴(B1a 및 B1b), 밀베멕틴(A3 및 A4) 및 레피멕틴(A3 및 A4) 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래피용 플로리실(60∼100 mesh) 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.

바) 아미노 프로필 카트리지 : 아민(1g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체(곡류 및 콩류는 약 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과한 후 20 g, 채소류 및 과실류는 약 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 30 g)를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 등 건조검체는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고, 잔류물을 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화식염수 50 mL 및 물 450 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

(곡류 및 콩류 등 지방성 검체의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 50 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴 층을 40℃ 이하에서 감압농축하고 디클로로메탄 10 mL에 재용해한다.)

나) 정제

(1) 플로리실 정제 : 안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 충진한 후 디클로로메탄 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(10/90, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 버리고 다시 메탄올/에틸아세테이트 혼합액(0.5/99.5, v/v) 50 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 용해한다.

(2) 아민 카트리지 정제 : 미리 헥산 10 mL로 활성화한 아민 카트리지에 상기 헥산 용액을 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 톨루엔 5 mL를 가하여 유출시켜 버리고 디클로로메탄 10 mL와 아세톤/디클로로메탄 혼합액(20/80, v/v) 5 mL로 2회 유출시켜 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)을 가하여 최종부피 2mL가 되게 한 후 갈색 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 245 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

2

1

3

4

5

6

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

1：아바멕틴 B1b (13.0분),

2：아바멕틴 B1a (17.0분),

3：밀베멕틴 A3 (16.9분),

4 : 레피멕틴 A3 (19.7분),

5 : 밀베멕틴 A4 (22.8분),

6 : 레피멕틴 A4 (25.8분)

라) 정량한계

아바멕틴 B1a (0.02 mg/kg), 아바멕틴 B1b (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 밀베멕틴 A4 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A3 (0.02 mg/kg), 레피멕틴 A4 (0.02 mg/kg)

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아바멕틴, 밀베멕틴, 레피멕틴을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

※ 레피멕틴은 아래 A 및 B의 이동상(40/60, v/v)을 사용

A : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 물

B : 5 mM 포름산암모늄과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴/물(90/10)

(3) 이동상 유량 : 0.4 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI negative-ion mode

※ 레피멕틴은 ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 300∼1,000 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
아바멕틴 B1b	8.0	858	857
아바멕틴 B1a	9.8	872	871
밀베멕틴 A3	10.6	528	527
밀베멕틴 A4	13.6	542	541
레피멕틴 A3	6.0	705	728
레피멕틴 A4	6.5	720	743

4.1.3.13 ∼ 4.1.4.147 (현행과 같음)

4.1.4.148 아메톡트라딘(Ametoctradin)

1) 시험법 적용범위

채소류 및 과일류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 아메톡트라딘을 메탄올로 추출하고 플로리실 컬럼으로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 아메톡트라딘 표준품을 메탄올에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 플로리실(Florisil) : 칼럼크로마토그래프용 플로리실(60∼100mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관·사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 메탄올 100 mL를 가하여 혼합추출분쇄기로 2∼3분간 균질화하여 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한다. 추출물을 흡입여과하고 메탄올 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합하여 약 10 mL가 될 때까지  40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 100 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 차례로 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리칼럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2cm 높이로 차례로 충진한 후 헥산 50 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 100 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(40/60, v/v) 100 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종 부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 물/아세토니트릴 혼합액(30/70, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 검출파장 : 292 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

아메톡트라딘(6.9분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아메톡트라딘을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산-물/0.1%-아세토니트릴(90/10, v/v) 혼합액에서 0.1% 포름산-물/0.1%-아세토니트릴 혼합액(10/90, v/v)으로 10분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 30℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
6.6	275	276

4.1.4.149 펜티오피라드(Penthiopyrad)

1) 시험법 적용범위

과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 펜티오피라드를 아세톤으로 추출하고 다공성규조토 칼럼으로 분배한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소・인 검출기(GC-NPD)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 펜티오피라드 표준품을 아세톤에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 다공성규조토 칼럼 : 다공성 규조토를 재충전하여 사용할 수 있는 15 g 용

바) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

사) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 25 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 아세톤 100 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세톤 40 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하 수욕상에서 약 20 mL가 될 때까지 감압농축한다. 이를 다공성규조토 칼럼에 옮겨 충분히 흡수시키고 헥산 100 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 취하고 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)  10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 아세톤을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : N2, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : splitless mode

(7) 주입량 : 1 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜티오피라드(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜티오피라드를 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 30℃/min의 비율로 270℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 260℃

(6) 이온원 온도 : 250℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼500 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
9.7	359	177, 152

4.1.4.150 피리미설판(Pyrimisulfan)

1) 시험법 적용범위

곡류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리미설판을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리미설판 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2∼3분간 균질화하고 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 아세토니트릴 30 mL로 씻어 내려 앞의 여액과 합한 후  40℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 500 mL 분액깔대기에 옮긴다. 이에 1 N 염산 용액 2 mL를 가하여 산성화 한 후, 포화식염수 40 mL, 디클로로메탄 100 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 10 mL를 가하여 버리고, 아세톤/헥산 혼합액(10/90, v/v) 5 ml를 가하여 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(30/70, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하고 잔류물에 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 아세트산-물/0.1% 아세트산-아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) Cone voltage : 30 V

(8) Collision energy : 20 ∼ 25

(9) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 m/z 370 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램        피리미설판(8.1분)

라) 정량한계

0.005 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피리미설판을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)	Collision energy (V)
8.1	420	370 255	20 25

4.1.4.151 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

1) 시험법 적용범위

과일류 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 피리플루퀴나존을 아세토니트릴로 추출하고 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)를 사용한다.

나) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 피리플루퀴나존 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

마) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 분쇄하여 균질화한 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 1% 포름산 20 mL를 가하여 산성화한 후 아세토니트릴 80 mL를 가하여 2∼3분간 균질화한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과하고 아세토니트릴 30 mL로 잔사 및 용기를 씻어 상기 여액과 합하여 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화식염수 50 mL, 물 400 mL, 헥산 100 mL를 차례로 가한다. 이를 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 물층을 취하여 별도의 분액깔때기에 옮긴다. 이에 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 재용해한다.

나) 정제

실리카 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘가) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 20 mL를 가하여 유출시켜 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트/디클로로메탄 혼합액(5/5, v/v) 10 mL를 가하여 유출시켜 받고, 아세톤 10 mL로 유출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세토니트릴/10 mM 인산 혼합액(40/60, v/v)을 가하여 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 10 mM 인산/아세토니트릴 혼합액(60/40, v/v)

(3) 이동상 유량 : 1 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 250 nm

(6) 주입량 : 20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 피리플루퀴나존(10.4분)

라) 정량한계

0.02 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리플루퀴나존을 확인한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(150 mm × 2 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1% 포름산/아세토니트릴 혼합액(70/30, v/v)

(3) 이동상 유량 : 0.3 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

(6) 이온화 : ESI positive-ion mode

(7) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
7.8	464	465

(현행과 같음)

5.1 ∼ 5.3.4 (현행과 같음)

5.3.5 노보비오신(Novobiocin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 노보비오신을 메탄올로 추출하고 헥산/메탄올 분배로 지방을 제거한 후 실리카로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 노보비오신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액 (60 : 40 : 0.1, v/v/v)으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 실리카 카트리지(1 g, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

검체 5 g(유(乳)의 경우에는 5 mL)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 무수황산나트륨 30 g과 메탄올 30 mL를 넣은 후 3분간 균질화 한다. 균질화한 시료를 50 mL 원심분리관에 옮기고 8,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리한다. 상등액 15 mL를 정확히 취하여 40℃이하 수욕상에서 건고한다. 잔류물에 메탄올포화헥산 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화메탄올 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 메탄올층을 여분의 농축플라스크로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화메탄올 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 메탄올층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 감압농축 한후 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL에 녹인다. 미리 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL로 활성화 시킨 실리카 카트리지에 추출액을 흡착시키고 추가의 아세톤 : 디클로로메탄 혼합액(10 : 90, v/v) 5 mL를 유출시키고, 고정상 상단이 노출되기 직전에 메탄올 : 아세톤 혼합액(10 : 90, v/v) 10 mL를 용출시켜 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하의 수욕상에서 질소농축 하고 잔류물에 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v) 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액(60 : 40 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 20 μL

(바) 검출기 파장 : UV 340 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

축산물 0.02 mg/kg, 유 0.02 mg/L

그림 1. 노보비오신(10.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

9) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(가) 칼럼 : C18(2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 물 : 개미산 혼합액(50 : 50 : 0.1, v/v/v)

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) Ionization : ESI(positive)

(바) Capillary temperature : 350℃

(사) Cone voltage : 50 V

표 1. 액체크로마토그래프․질량분석기 분석을 위한 이온

머무름 시간 (분)	분자량	Ion monitored (m/z)
11.3	612	613

5.3.6 ∼ 5.3.7 (현행과 같음)

5.3.8 데코퀴네이트(Decoquinate)

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 데코퀴네이트 표준품을 정밀히 달아 클로로포름에 녹여 200 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 이것을 3500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL를 통과시켜 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2번 용출한다. 용출액을  60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 메탄올 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

ⓛ 이동상 A : 20 mM HFBA 수용액

② 이동상 B : 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	55	45
3.0	55	45
5.0	40	60
7.0	5	95
18.0	5	95
18.01	55	45
23	55	45

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 데코퀴네이트(12.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 데코퀴네이트

소 : 0.07 mg/kg, 닭 : 0.09 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 데코퀴네이트의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 데코퀴네이트 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 27 eV

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
데코퀴네이트	418	204, 232, 372

5.3.9 ∼ 5.3.12 (현행과 같음)

5.3.13 암프롤리움(Amprolium), 디싸이클라닐(Dicyclanil)

1) 시험법 적용범위

축산물(유, 알은 제외)에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴로 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 암프롤리움 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 1000 mg/L 이상이 되게 하고, 디싸이클라닐 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 150 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 물로 희석․혼합하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고 - HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료 10 g을 취하여 아세토니트릴 10 mL를 가하여 진탕혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 추출물을 3500 G에서 15분간 원심분리 한 후 아세토니트릴 상층액 10 mL를 취하고, 여기에 증류수 1 mL를 가한 뒤 60℃에서 질소농축기를 이용하여 1 mL가 될 때까지 건조시킨 후 남은 1 mL의 용액에 증류수 4 mL를 가하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 4 mL와 증류수 4 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 진공 감압하여 건조한 후 메탄올 5 mL로 2회 용출한다. 용출액을 60℃에서 질소농축한 후 잔류물은 0.5 M HCl을 사용하여 pH 5.0 조절된 증류수 500 µL에 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

ⓛ 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

② 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1:1.8)

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	75	25
3.0	75	25
16.0	65	35
16.5	75	25
21.5	75	25

(4) 유속 : 1.0 mL/min

(5) 주입량 : 20 μL

(6) UV 검출기 파장 : 262 nm

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 디싸이클라닐(9.2분), 암프롤리움(14.5분)의 크로마토그램

다) 정량한계

(1) 암프롤리움

소 : 0.04 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

(2) 디싸이클라닐

양 : 0.05 mg/kg, 닭 : 0.06 mg/kg

7) 정량시험

표준용액 및 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 피크 머무름 시간을 비교하여 디싸이클라닐 및 암프롤리움의 피크 면적으로 검량선을 작성하고 시험용액 중 디싸이클라닐 및 암프롤리움 함량을 구한다.

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기로 분석하였을 때 시험용액 중 표준물질의 m/z 값은 표준용액 중 표준물질의 m/z 값과 일치하여야 한다.

가) 액체크로마토그래프/질량분석기의 측정조건

(1) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(2) 이동상 B : 메탄올 : 아세토니트릴(1 : 1.8)

(3) 이온화 방법 : ESI(positive)

(4) Capillary temperature : 350℃

(5) Collision energy : 15 eV(암프롤리움), 25 eV(디싸이클라닐)

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
암프롤리움	243	94, 122, 150
디싸이클라닐	191	56, 109, 150

5.3.14 ∼ 5.3.19 (현행과 같음)

5.3.20 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 모넨신과 살리노마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것다

다) 표준원액 : 모넨신, 살리노마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1000 mg/L 이상이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올을 이용해 적당한 농도로 희석한다.

마) 0.1% 개미산 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 개미산 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 시료를 5 g 취하여 50 mL 원심분리 튜브에 넣고 수분을 제거하기 위해 황산나트륨(Na2SO4) 15 g을 첨가한 후, 아세토니트릴을 20 mL 첨가하여 진탕 혼합기로 30분간 흔들어 추출한다. 시료를 5℃, 12,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 시험관으로 옮긴 후, 시료의 방해물질을 제거하기 위해 8 mL n-헥산과 2 mL의 디클로로메탄을 첨가하여 진탕 혼합기로 10분간 혼합한다. 이후 5℃, 5000 G에서 5분간 원심분리 한 후 중간층(아세토니트릴 층)을 수집하여 추출액으로 한다. 미리 아세토니트릴 2 mL로 활성화시킨 실리카 카트리지에 추출액을 넣어 방해물질을 제거하고 용출액은 재수집한다. 아세토니트릴 2 mL를 사용하여 카트리지를 세척한 것까지 수집을 한 후, 질소 농축기를 이용해 40℃에서 완전히 증발시킨다. 잔류물은 아세토니트릴 500 μL로 녹여 멤버레인 필터로 여과한 후  시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 30℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산를 함유한 아세토나이트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
10.0	6	94

(4) 유속 : 0.2 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Collision energy : 모넨신 : 60 eV, 살리노마이신 : 50 eV

라) 표준품 크로마토그램

그림 1. 살리노마이신(5.7분), 모넨신(6.6분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 모넨신은 m/z 461, 살리노마이신은 m/z 431 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 모넨신 및 살리노마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
모넨신	693	479, 501, 461
살리노마이신	773	413, 531, 431

나) 정량한계

(1) 모넨신 정량한계

소 : 0.0029 mg/kg, 돼지 : 0.0016 mg/kg,

닭 : 0.0019 mg/kg, 유 : 0.0018 mg/kg

(2) 살리노마이신 정량한계

소 : 0.0028 mg/kg, 돼지 : 0.0035 mg/kg,

닭 : 0.0020 mg/kg, 알 : 0.0025 mg/kg

5.3.21 ∼ 5.3.29 (현행과 같음)

5.3.29 스펙티노마이신(Spectinomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 정량법의 원리

검체 중 스펙티노마이신을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 스펙티노마이신 표준품을 정밀히 달아 20 mM HFBA에 녹여 1000 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 20 mM HFBA으로 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM HFBA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 HFBA 표준품 2.14 mL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다(참고-HFBA 분자량: 214.04 g/mol).

바) 30% NaOH : NaOH 30 g에 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)를 가해 최종 100 mL가 되도록 한다.

사) 5% TCA : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 TCA 25g 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

아) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (6CC, 200 mg,) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질기로 균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 5% TCA 20 mL를 가하여 진탕혼합기로 20분간 흔들어 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 12,000 G으로 10분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 여과지를 이용하여 여과한 후 30% NaOH로 pH 8.5로 조정하여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 6 mL와 20 mM HFBA 6 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 추출액을 흡착시키고 5분간 진공 감압하여 건조한 후 아세토니트릴 : 20 mM HFBA(4 : 1, v/v) 12 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 0.3 mL까지 농축시킨 후 1 mL 까지 20 mM HFBA로 조정한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터로 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25 ℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM HFBA 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
2.0	15	85
10.0	15	85
10.1	90	10
20.0	90	10

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 23 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 스펙티노마이신(4.9분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 207 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 스펙티노마이신의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
스펙티노마이신	351	333, 98, 207

나) 정량한계

소 : 0.05 mg/kg, 돼지 : 0.04 mg/kg,

닭 : 0.1 mg/kg, 유 : 0.06 mg/kg, 알 : 0.02 mg/kg

5.3.30 ∼ 5.3.31 (생  략)

5.3.32 아목시실린 (amoxicillin), 암피실린 (ampicillin), 벤질페니실린(benzylpenicillin), 클록사실린 (cloxacillin), 디클록사실린 (dicloxacillin), 나프실린 (nafcillin), 옥사실린 (oxacillin) 시험법

1) 시험법의 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에 아세토니트릴 : 물 혼합액(유 및 알의 경우 트리클로로초산이 함유된 아세토니트릴)을 가한 후 대상성분을 추출하고 액-액 분배 및 고상추출법으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 표준원액 : 아목시실린, 암피실린, 벤질페니실린, 클록사실린, 디클록사실린 및 나프실린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100  mg/L 농도가 되게 한다

나) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 적당한 농도가 되게 희석하여 사용한다.

다) HLB 카트리지 : 500 mg, SPE용

라) 0.1 M 인산수소나트륨용액 : 1L 용량플라스크에 제이인산수소나트륨(Na2HPO4) 14.2 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

마) 0.05 mM 인산수소카륨용액 : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨(KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 축․수산물

균질화한 시료(소고기, 닭고기, 광어) 2 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20 v/v) 10 mL를 넣고 2분간 균질화시킨다. 균질화시킨 시료를 50 mL 원심분리관으로 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(80 : 20, v/v) 10 mL로 잔사 및 용기를 씻어 내려 앞서의 시료와 합한다. 합친 시료를 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 여분의 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 5,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. ★미리 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 0.05 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 5 mL로 활성화를 시킨 HLB 카트리지에 시료추출액을 흡착시키고, 0.05 M 인산수소나트륨용액 5 mL 용액으로 세척한 후 카트리지를 건고시킨다. 카트리지에 0.05 M 인산이수소칼륨용액(KH2PO4) : 아세토니트릴(50 : 50, v/v) 5 mL로 대상성분을 용출시키고 50℃ 이하의 수욕상에서 질소가스를 이용하여 아세토니트릴을 날려보낸다. 남은 용액을 물로 희석하여 최종부피를 5 mL로 맞추고 0.2 μm 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유 및 알

균질화한 시료(유(乳) 20 mL, 알 5 g)를 50 mL 원심분리관에 취하고 유는 아세토니트릴 50 mL, 알은 20% 트리클로로초산 0.5 mL이 포함된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한다. 혼합액을 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리하고 상층액을 감압농축플라스크에 넣은 후 50℃ 이하의 수욕상에서 4 mL의 잔사가 남을때까지 감압농축한다. 농축액을 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 6 mL로 플라스크를 세척하여 앞서의 용액과 합한다. 원심분리관에 헥산 10 mL을 넣고 5분간 진탕한 후 9,000 G, 4℃에서 10분간 원심분리를 하여 헥산층을 버린다. 원심분리관에 다시 헥산 10 mL를 가한 후 위의 과정을 한번 더 반복한다. 남은 용액을 농축플라스크에 옮기고 50℃ 이하의 수욕상에서 2.5 mL의 잔사가 남을 정도로 농축하고 0.1 M 인산수소나트륨용액(Na2HPO4) 2.5 mL과 합한다. 용액을 0.1 M 수산화나트륨 용액으로 pH 9.0±0.2로 조절한다. 추가 정제과정은 위의 ★이후 과정을 따른다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18 (2.0 × 150 mm, 3 μm)

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 0.1% 개미산이 포함된 물

② 이동상 B : 0.1% 개미산이 포함된 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0	98	2
2	98	2
2.1	80	20
8.0	80	20
10	0	100
30	0	100
40	98	2
45	98	2

(라) 유속 : 0.2 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy :

물질	Precursor ion(m/z)	Product ions(m/z)	Collision energy (V)
아목시실린	366	349, 114	8
암피실린	350	106, 192	17
벤질페니실린	335	160, 176	11
클록사실린	436	277, 160	15
디클록사실린	470	160, 311	13
나프실린	415	199, 171	14
옥사실린	402	160, 243	13

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계

물질	정량한계(mg/kg 또는 mg/L)
	축산물	수산물	유	알
아목시실린	0.005	0.005	0.002	0.001
암피실린	0.005	0.001	0.001	0.001
벤질페니실린	0.001	0.001	0.005	0.001
클록사실린	0.005	0.005	0.005	0.001
디클록사실린	0.001	0.005	0.001	0.001
나프실린	0.001	0.005	0.001	0.001
옥사실린	0.001	0.005	0.001	0.001

그림 1. 액체크로마토그래프/질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

벤질페니실린 (12.5분), 암피실린 (6.4분), 아목시실린 (6.1분), 옥사실린 (12.7분), 나프실린 (12.8분), 클록사실린 (12.8분), 디클록사실린(13.0분)

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

<삭  제>

5.3.97 폭심(Poxim)

1) 시험법 적용범위

축산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 폭심을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 폭심 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.

라) 표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석․혼합하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% formic acid 용액 : 3차 증류수(또는 이와 동등한 것)에 formic acid 500 µL 첨가 한 후, 최종 500 mL가 되도록 3차 증류수로 채운다.

바) Silica 카트리지(6cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토나이트릴 20 mL를 가하여 200 G으로 20분간 진탕 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 5000 G으로 5분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 다시 아세토나이트릴 20 mL를 가해 다시 추출한다. 모은 상층액 40 mL를 250 mL 농축플라스크에 넣어  감압 농축한 후 n-헥산 5 mL로 2번 재용해하여 n-헥산 10 mL로 활성화된 실리카 카트리지(6 cc, 500 mg)에 적재한다. 적재가 끝난 카트리지에 디클로로메탄 20 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 농축시킨 후 아세토니트릴 500 μL로 재 용해한다. 이 시료용액을 멤브레인 필터를 사용하여 여과한 후 2 mL 갈색 바이알에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm,   3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	60	40
2.0	10	90
10.0	10	90
10.1	60	40
20.0	60	40

(4) 유속 : 0.3 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision energy : 3 eV

다) 표준품 크로마토그램

그림 1. 폭심 표준품(6.0분)의 크로마토그램

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, m/z 129 이온의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 폭심의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion (m/z)	Fragment ion (m/z)
폭심	299	77, 97, 129

나) 정량한계

(1) 폭심

소 :  0.025 mg/kg, 돼지 : 0.025 mg/kg

5.3.34 ∼ 5.3.39 (생  략)

<삭  제>

5.3.40 발네물린(Valnemulin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 발네물린을 메탄올로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량 분석기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 발네물린 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 희석한다

마) 내부표준용액 : 내부표준원액을 메탄올/물 혼합액 (70 : 30, v/v)로 희석하여 10 mg/L가 되게 한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 1% 개미산(formic acid)을 함유한 메탄올 15 mL를 가하여 20분간 진탕추출한다. 추출액을 4,000 G에서 10분간 원리분리한 후 상층액 5 mL를 여분의 15 mL 튜브에 옮기고 50℃이하에서 질소가스로 용매를 날려보낸 후 메탄올/물 혼합액(50 : 50, v/v) 1 mL에 녹인다. 녹인 용액에 헥산 1 mL를 가하여 1분간 진탕한 후 헥산층은 버리고 남은 용액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 0.1% 개미산(formic acid)이 함유된 아세토니트릴/물 혼합액 (90/10, v/v)

(라) 유속 : 0.25 mL/분

(마) 시료 주입량 : 5 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy (V)
발네물린	565	263, 245	24

나) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 0.01 mg/kg

그림 1. 발네물린(5.3분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하였을 때 Precursor ion 및 Fragment ion이 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 각 화합물의 특이이온을 확인하고 각각의 크로마토그램으로부터 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.93 설파구아니딘(Sulfaguanidine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 염기성화시킨 후 설파구아니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 유도체하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 설파구아니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 일정량을 취하여 질소가스로 용매를 날려보낸 후 물 0.1 mL를 가하여 녹인 후 아래의 유도체 과정을 거친다.

마) 50 mM 인산완충용액(pH 3.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 6.8 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 3.0으로 조절한다

바) 유도체시약 : Fluorescamine을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g(유(乳)의 경우 5 mL)을 50 mL 원심분리관에 취하고 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하여 30분간 진탕한 후 10분간 초음파추출한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 50 mL 원심분리관에 취한다. 잔류물에 1% 암모니아를 함유한 아세토니트릴 10 mL를 다시 가한 후 위의 과정을 반복하고 분리한 상층액을 합한다. 이 합친 용액을 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 물 0.5 mL에 녹인다. 녹인용액에 헥산 0.5 mL를 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 물층 0.1 mL를 취하여 2 mL 원심분리관으로 옮긴다. 원심분리관에 인산완충용액 0.2 mL과 유도체 시약 0.2 mL을 넣고 충분히 섞은 후 실온에서 30분간 반응시켜 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6×150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 메탄올 : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 20 mM 인산완충용액 pH 7.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	80	20
3	70	30
20	70	30
21	10	90
26	10	90

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 주입량 : 10 μL

(사) 검출기 파장 : 여기파장(405 nm), 측정파장(495 nm)

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 소, 돼지 0.03 mg/kg

유 0.002 mg/kg

그림 1. 설파구아니딘 유도체(17.5분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.94 로베니딘(Robenidine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 산성화시킨 후 로베니딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 로베니딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 물로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 2% 개미산(formic acid)을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 가하고 20분간 진탕한다. 이 용액을 4,000 G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 여분의 튜브에 취하고 50℃ 수욕상에서 질소가스를 이용하여 용매를 날려보낸다. 잔류물에 2% 개미산을 함유한 70% 메탄올 수용액 0.5 mL에 녹인 후 헥산 0.5 mL을 가하여 진탕한 후 헥산층은 버리고 수용액층을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상 : 2% 삼염화초산을 함유한 메탄올 : 물 혼합액(70 : 30, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 312 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.03 mg/kg

그림 1. 로베니딘(6.8분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.95 톨트라주릴(Toltrazuril)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 톨트라주릴 설폰을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 톨트라주릴 설폰 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 20 mM 인산완충용액(pH 2.5) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소칼륨 (KH2PO4) 2.7 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 진한 인산으로 pH 2.5로 조절한다

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL를 가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 메탄올 : 물 혼합액 (60 : 40, v/v)에 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 30℃

(다) 이동상

① 이동상 A : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(10 : 90, v/v)

② 이동상 B : 메탄올 : 20 mM KH2PO4, pH 2.5 혼합액(90 : 10, v/v)

시간(분)	A(%)	B(%)
0	40	60
15	0	100
16	40	60
21	40	60

(라) 유속 : 1 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 255 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 :

소, 돼지 0.02 mg/kg

닭 0.05 mg/kg

알 0.01 mg/kg

그림 1. 톨트라주릴 설폰(10.2분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

5.3.96 디아베리딘(Diaveridine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 디아베리딘을 아세토니트릴로 추출하고 헥산/아세토니트릴 분배로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외흡광검출기

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 및 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 디아베리딘 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도로 희석한다.

마) 50 mM 인산완충용액 (pH 6.0) : 1 L 용량플라스크에 인산이수소나트륨 (NaH2PO4) 6 g을 넣고 물에 녹여 표시선까지 채운 후 수산화나트륨을 가하여 pH 6.0으로 조절한다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 15 mL를 가하가하여 20분간 진탕 추출한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 아세토니트릴층을 125 mL 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 다시 가하여 위의 과정을 반복 후 앞서의 분리액과 합한다. 이 용액을 40℃ 수욕상에서 농축건고하고 잔류물에 아세토니트릴포화헥산으로 10 mL를 가하여 녹이고 100 mL 분액여두로 옮긴다. 분액여두에 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하고 1분간 진탕한 후 아세토니트릴층을 50 mL 튜브로 옮기고 분액여두에 다시 헥산포화아세토니트릴 10 mL을 가하여 위의 과정을 반복한다. 아세토니트릴층을 앞서의 용액과 합하여 40℃ 수욕상에서 질소가스로 용매를 날려보내고 아세토니트릴 : 물 혼합액(50 : 50, v/v) 0.5 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm, 4 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 40℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴 : 50 mM 인산완충용액 혼합액 pH 6.0  (15 : 85, v/v)

(라) 유속 : 1.0 mL/min

(마) 시료 주입량 : 10 μL

(바) 검출기 파장 : UV 254 nm

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 정량한계 : 닭고기 0.02 mg/kg

그림 1. 디아베리딘(13.1분)의 크로마토그램

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

[별표 1] ∼ [별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 글리포세이트(Glyphosate)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	0.2

복숭아	0.2

(4) 나프로파마이드(Napropamide)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.1

(5) ∼ (7) (현행과 같음)

(8) 다이아지논(Diazinon)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.1

(9) 델타메쓰린(Deltamethrin)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

대두	0.1

풋콩	0.3

인과류	0.5

(10) ∼ (20) (현행과 같음)

(21) 디크로보스(Dichlorvos : DDVP)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(21) ∼ (28) (현행과 같음)

(29) 디플루벤주론(Diflubenzuron)

(현행과 같음)

양송이	0.3

느타리버섯	1.0

(30) 리누론(Linuron)

(현행과 같음)

풋콩	0.1

(31) 마이클로부타닐(Myclobutanil)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	0.5

(32) 말라치온(Malathion)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(33) ∼ (34) (현행과 같음)

(35) 메소밀(Methomyl)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(36) ∼ (37) (현행과 같음)

(38) 메타락실(Metalaxyl)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(39) ∼ (62) (현행과 같음)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(현행과 같음)

배추	3.0,

엇갈이배추	10

(64) ∼ (65) (현행과 같음)

(66) 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin)

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(67) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

(현행과 같음)

참깨	0.5

엇갈이배추	2.0

(68) ∼ (70) (현행과 같음)

(71) 아미트라즈(Amitraz)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	0.5

(72) (현행과 같음)

(73) 아세페이트(Acephate)

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(74) ∼ (77) (현행과 같음)

(78) 알라클로르(Alachlor)

(현행과 같음)

풋콩	0.05

딸기	0.05

무(잎)	0.2

(79) ∼ (84) (현행과 같음)

(85) 에토펜프록스(Etofenprox)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

배추	0.7

배추(건조)	2.5

<삭  제>

<삭  제>

인과류	1.0

(86) ∼ (96) (현행과 같음)

(97) 옥시플루오르펜(Oxyfluorfen)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

풋마늘	0.05

인과류	0.05

(98) ∼ (110) (현행과 같음)

(111) 카바릴(Carbaryl)

(현행과 같음)

복숭아	1.0

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(현행과 같음)

쌀	0.5

참다래(키위)	3.0

유자	3.0

(113) ∼ (130) (현행과 같음)

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

인과류	1.0

엇갈이배추	0.2

(132) 클로르피리포스-메틸(Chlorpyrifos-methyl)

(현행과 같음)

배추	0.07

엇갈이배추	0.2

(133) 터부코나졸(Tebuconazole)

(현행과 같음)

<삭  제>

(134) ∼ (147) (현행과 같음)

(148) 트리풀루라린(Trifluralin)

(현행과 같음)

풋콩	0.05

엇갈이배추	0.05

(149) ∼ (150) (현행과 같음)

(151) 티오디카브(Thiodicarb)

(현행과 같음)

배추	1.0

엇갈이배추	3.0

(152) 티오벤카브(Thiobencarb)

(현행과 같음)

엇갈이배추 0.2

(153) ∼ (160) (현행과 같음)

(161)페녹사프로프-에칠(Fenoxaprop-ethyl)

(현행과 같음)

풋콩	0.05

(162) (현행과 같음)

(163) 펜디메타린(Pendimethalin)

(현행과 같음)

배추	0.07

마늘(풋마늘포함)0.05

엇갈이배추	0.07

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

배추	0.3

<삭  제>

인과류	2.0

엇갈이배추	1.0

(165) ∼ (167) (현행과 같음)

(168) 펜치온(Fenthion : MPP)

(현행과 같음)

쌀	0.5

(169) (현행과 같음)

(170) 펜토에이트(Phenthoate : PAP)

(현행과 같음)

배추	0.03

밤	0.05

엇갈이배추	0.1

(171) ∼ (177) (현행과 같음)

(178) 폭심(Phoxim)

(현행과 같음)

풋마늘	0.05

(179) ∼ (182) (현행과 같음)

(183) 풀루아지호프-부틸(Fluazifop-butyl)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(184) ∼ (187) (현행과 같음)

(188)프로파모카브(Propamocarb)

(현행과 같음)

배추	1.0

생강	0.05

엇갈이배추	3.0

(189) (현행과 같음)

(190) 프로페노포스(Profenofos)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(191) ∼ (195) (현행과 같음)

(196) 피리미포스-메틸(Pirimiphos-methyl)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(197) ∼ (205) (현행과 같음)

(206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr)

(현행과 같음)

배추	0.2

배추(건조)	1.0

(207) 테부페노자이드(Tebufenozide)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

배추	0.3

<삭  제>

인과류	1.0

엇갈이배추	1.0

(208) ∼ (211) (현행과 같음)

(212) 플루페녹수론(Flufenoxuron)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(213) 피라크로포스(Pyraclofos)

(현행과 같음)

배추	0.05

엇갈이배추	0.1

(214) ∼ (217) (현행과 같음)

(218) 디메토모르프(Dimethomorph)

(현행과 같음)

배추	0.7

배추(건조)	2.5

(219) ∼ (220) (현행과 같음)

(221) 디치아논(Dithianon)

(현행과 같음)

풋마늘	5.0

(222) ∼ (223) (현행과 같음)

(224) 싸이목사닐(Cymoxanil)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(225) ∼ (226) (현행과 같음)

(227) 아세타미프리드(Acetamiprid)

(현행과 같음)

배추	1.0

배추(건조)	3.0

(228) ∼ (238) (현행과 같음)

(239) 후루아지남(Fluazinam)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.05

(240) ∼ (241) (현행과 같음)

(242) 루페누론(Lufenuron)

(현행과 같음)

배추	0.07

엇갈이배추	0.2

(243) 메타벤즈티아주론(Methabenzthiazuron)

(현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

풋마늘	0.05

(244) ∼ (248) (현행과 같음)

(249) 에마멕틴 벤조에이트

(Emamectin benzoate)

(현행과 같음)

배추	0.02

엇갈이배추	0.05

(250) ∼ (253) (현행과 같음)

(254) 카보설판(Carbosulfan)

(현행과 같음)

배추	0.1

엇갈이배추	0.3

(255) 파목사돈(Famoxadone)

(현행과 같음)

배추	0.3

(256) ∼ (290) (현행과 같음)

(291) 족사마이드(Zoxamide)

(현행과 같음)

배추	1.0

엇갈이배추	3.0

(292) ∼ (296) (현행과 같음)

(297) 테트라코나졸(Tetraconazole)

(현행과 같음)

파	5.0

포도	2.0

(298) ∼ (301) (현행과 같음)

(302) 포세틸-알루미늄(Fosetyl-aluminium)

(현행과 같음)

배추	7.0

엇갈이배추	20

(303) (현행과 같음)

(304) 프로베나졸(Probenazole)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.07

(305) ∼ (307) (현행과 같음)

(308) 플루설파마이드(Flusulfamide)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.05

(309) ∼ (324) (현행과 같음)

(325) 시아조파미드(Cyazofamid)

(현행과 같음)

배추	0.7

(326) ∼ (332) (현행과 같음)

(333) 테부피림포스(Tebupirimfos)

(현행과 같음)

엇갈이배추 0.01

(334) (현행과 같음)

(335) 트리프록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

(336) ∼ (337) (현행과 같음)

(338) 티아클로프리드(Thiacloprid)

(현행과 같음)

배추	0.2

대두	0.05

풋콩	1.0

(339) ∼ (355) (현행과 같음)

(356) 에타복삼(Ethaboxam)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(357) 에틸렌비스디치오카바메이트

(EBDC[Ethylenebis(dithio-carbamate)s])

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(358) 이프로발리카브(Iprovalicarb)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(359) ∼ (360) (현행과 같음)

(361) 테플루스린(Tefluthrin)

(현행과 같음)

엇갈이배추	0.1

(362) ∼ (369) (현행과 같음)

(370) 벤티아발리카브아이소프로필

(Benthiavalicarb-isopropyl)

(현행과 같음)

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

(371) 디니코나졸(Diniconazole)

(현행과 같음)

배추	0.1

엇갈이배추	0.3

(372) ∼ (379) (현행과 같음)

(380) 피리다릴(Pyridaryl)

(현행과 같음)

배추	0.7

(381) ∼ (387) (현행과 같음)

(388) 시안화 수소(Hydrogen cyanide)

(현행과 같음)

엇갈이배추	5.0

(389) ∼ (392) (현행과 같음)

(393) 메트알데히드(Metaldehyde)

(현행과 같음)

엇갈이배추	1.0

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(현행과 같음)

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

(395) 플루오피콜라이드(Fluopicolide)

(현행과 같음)

배추	0.3

엇갈이배추	1.0

(396) ∼ (402) (현행과 같음)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(404) ∼ (407) (현행과 같음)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

배추	0.3

(409) 아미설브롬(Amisulbrom)

(현행과 같음)

배추	0.7

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(현행과 같음)

배추	1.0

복숭아	2.0

감귤	0.5

자두	0.1

엇갈이배추	3.0

(411) ∼ (416) (현행과 같음)

(417) 플루벤디아마이드(Flubendiamide)

(현행과 같음)

배추	1.0

(418) (현행과 같음)

(419) 프로헥사디온-칼슘

(Prohexadione-Calcium)

(현행과 같음)

배추	2.0

엇갈이배추	5.0

(425) 플루오피람(Fluopyram)

오이	1.0

(426) 메타조설푸론(Metazosulfuron)

쌀	0.05

(427) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

고추	0.5

배	0.1

사과	0.2

(428) 이소피라잠(Isopyrazam)

오이	2.0

참외	0.5

[별표 5] 인삼의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (10) (현행과 같음)

(11) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(현행과 같음)

수삼	0.1

인삼농축액	0.5

홍삼농축액	0.5

(12) ∼ (67) (현행과 같음)

[별표 6] ∼[별표 7] (현행과 같음)