식품의약품안전청 고시 제2011-32호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2011. 6. 30.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 고시 제2011-32호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

피낭류의 마비성 패독 기준을 신설하고 규격이 동일하거나 비슷한 식품유형을 삭제하며, 식품원료 사용을 위한 인정기준, 인삼․홍삼음료의 원료구비요건, 식품유형의 정의 및 일반시험법을 개정함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

2. 주요 내용

가. 식품원료 사용을 위한 기준 개정[제 2, 2, 2)]

「식품위생법｣ 및 같은 법 시행규칙 개정으로 한시적 기준 및 규격 인정 대상에 식품 원료가 추가됨에 따라 식품원료 사용을 위한 의사결정도 등 기준 정비

나. 피낭류(멍게, 미더덕, 오만둥이 등) 중 마비성패독 기준 신설

[제 2, 5, 9), (1)]

멍게, 미더덕, 오만둥이 등 피낭류 중 마비성패독 기준 신설

다. 추잉껌 등 식품 중 식품첨가물의 규격 개정〔제 5의 1, 18-1, 18-6, 20, 25〕

식품첨가물의 기준 및 규격 개정에 따라 추잉껌의 산화방지제, 과일․채소류음료, 기타음료, 장류, 절임식품 중 보존료 규격 개정

라. 식품유형의 정의 개정〔제 5의 2, 13, 14, 15, 20, 21-1, 29-12〕

빵류, 전두부, 해바라기유, 국수, 발효식초, 천일염의 정의를 현실에 맞게 개정

마. 들기름의 요오드가 규격 개정〔제 5, 14, 5)〕

신품종 들깨 사용에 따라 들기름의 요오드가 규격을 개정

바. 규격이 동일하거나 비슷한 식품유형의 삭제〔제 5의 17, 18-6, 29-13〕

커피 중 볶은커피, 인스턴트커피, 조제커피 및 액상커피, 기타음료 중 추출음료, 밀가루 중 강력밀가루, 중력밀가루 및 박력밀가루 삭제

사. 인삼․홍삼음료의 원료 등의 구비요건 개정〔제 5, 18, 18-5, 2)〕

수삼의 3년근 연근제한을 삭제

아. 용어 및 문구 정비〔제 5의 22, 29-1, 29-3, 29-10, 29-13 및 제 9, 3, 6)〕

(1) 식품유형과 동일한 명칭으로 사용되어 혼동될 우려가 있는 식품종의 명칭 개정

(2) 검체채취 일반원칙 중 검사대상에 대한 규정을 명확하게 개선

자. 일반시험법 개정

(1) 요오드가 시험법의 사용용매 개선〔제 10, 1.1.5.3.3〕

요오드가 시험법에 사용되는 용매에 사염화탄소와 함께 클로로포름을 사용할 수 있도록 개선

(2) 미량영양성분 중 비타민D, 비타민K1, 엽산, 콜린 및 비오틴에 대한 전처리 및 분석 조건 개선[제 10, 1.2.2.7., 1.2.2.8, 1.2.2.13～15 ]

(가) 비타민D 시험법의 적용범위, 분석원리, 표준용액의 조제, 정성시험 및 정량한계를 신설하고 전처리 및 기기분석 조건 개선

(나) 비타민K1 시험법 중 적용범위 및 분석원리 신설하고 전처리 및 계산방법의 개선하며(제1법), 전처리 및 기기분석 조건을 개선한 방법을 신설함(제2법)

(다) 엽산, 콜린 및 비오틴 시험법의 액체크로마토그래프 이용한 시험법 중 분석원리, 표준용액 및 시험용액 조제 등 전처리 조건 및 기기분석 조건을 개선하고, 검출한계를 정량한계로 개정

(3) 데히드로초산, 소르빈산, 안식향산 및 그 염류, 파라옥시안식향산에스테르류 시험법 중 박층크로마토그래피 및 자외선흡수스펙트럼에 의한 시험법 삭제 및 기체크로마토그래피와 액체크로마토그래피에 의한 시험법 개정, 프로피온산 및 그 염류 시험법 개정, 소르빈산, 안식향산 및 그 염류 시험법, 타르색소시험법 중 유용성색소 시험법 삭제 (제 10, 2.1 및 제10, 2.4〕

(4) 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐 동시시험법 신설〔제 10, 2.2〕

(5) 아질산이온 시험법을 일반시험법으로 이관〔제 10, 2.6〕

제 2. 11. 식육․알가공품 중 아질산이온 시험법을 제 10. 2. 식품 중 식품첨가물시험법으로 이관

(6) 곰팡이독소 중 아플라톡신, 푸모니신, 오크라톡신, 데옥시니발레놀, 제랄레논 시험법 개정〔제 10, 6.1〕

(7) 특수용도식품 등 벤조피렌 시험법 적용 범위 개선〔제 10, 7.8〕

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타 :  (1) 신․구조문 대비표 별첨

(2) 행정예고 : ’10.10.29 ～ 11.17,  ’10.12.31 ～ ’11.1.20

(3) 규제심사 : ‘11.5.24

식품의약품안전청 고시 제2011-32호

「식품위생법」제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2011-23호, 2011. 6. 10)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2011년 6월 30일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제 1. 1. 23)을 다음과 같이 한다.

23) “타르색소”란 식용색소녹색제3호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소적색제 2호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소적색제3호, 식용색소적색제40호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소적색제 102호, 식용색소청색제1호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소청색제 2호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소황색제4호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소황색제5호 및 그 알루미늄레이크를 말한다.

제 2, 2, 2)를 다음과 같이 한다.

2) 식품원료 판단기준

(1) 다음의 어느 하나에 해당하는 것은 식품의 제조․가공 또는 조리 시 식품원료로 사용하여서는 아니 된다. 다만, 이미 보건복지부장관 또는 식품의약품안전청장이 인정한 것과 「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정기준」에 따라 인정된 것은 식품의 원료로 사용할 수 있다.

① 식용을 목적으로 채취, 취급, 가공, 제조 또는 관리되지 아니한 것

② 식품원료로서 안전성 및 건전성이 입증되지 아니한 것

③ 기타 식품의약품안전청장이 식용으로 부적절하다고 인정한 것

(2) 위의 (1)에 해당되지 않는 것은 식품원료로서 사용가능 여부를 식품의약품안전청장이 판단한다. 다만, 식품의약품안전청장은 식품원료의 안전성과 관련된 새로운 사실이 발견되거나 제시될 경우 식품의 원료로서 사용가능 여부를 재검토하여 판단할 수 있다.

(3) 원료에 독성이나 부작용이 없고 식욕억제, 약리효과 등을 목적으로 섭취한 것 이외에 국내에서 식용근거가 있는 경우 식품의 “식품에 사용할 수 있는 원료” 또는 “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”로 사용가능한 것으로 판단할 수 있다.

(4) 다음에 해당하는 것들은 “제한적 사용 원료”로 판단할 수 있으며, 사용용도를 특정식품에 제한할 수 있다.

① 향신료, 침출차, 주류 등 특정 식품에만 제한적 사용근거가 있는 것

② 독성이나 부작용 원인 물질을 완전 제거하고 사용해야 하는 것

③ 독성이나 부작용 원인 물질의 잔류기준이 필요한 것

(5) 식품원료 승인을 위한 제출자료

① 승인을 위해 자료를 제출하고자 할 경우에는 아래의 「식품원료 사용을 위한 의사결정도」를 참고할 수 있다.

｢식품원료 사용을 위한 의사결정도｣

㉮ 원재료 : 기원 동·식물 등으로서 가공되지 아니한 것

㉯ 단순추출물 : 원재료를 물리적으로 또는 용매(물, 주정, 이산화탄소)를 사용하여 추출한 것으로 특정한 성분이 제거되거나 분리되지 않은 추출물(착즙포함)

㉰ 식품원료 사용가능 : “식품에 사용할 수 있는 원료” 또는 “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”로 사용 가능함

㉱ 식품원료 사용불가 : 식품원료로 사용이 불가능하나, 「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정기준」(식품위생법시행규칙 제5조 관련)에 따라 식품원료의 한시적 기준 및 규격으로 신청 가능함

② 제출자료는 다음과 같다.

㉮ 원료의 기본특성자료

Ⓐ 원료명 또는 이명

Ⓑ 원재료의 학명, 사용부위

Ⓒ 성분 및 함량, 사진, 자생지 등 원료의 특성을 알 수 있는 자료

Ⓓ 식품에 사용하고자 하는 용도

㉯ 식용근거자료

Ⓐ 국내에서 식품으로 섭취하였음을 입증할 수 있는 자료

㉰ 독성이나 부작용이 있는 경우 제출자료

Ⓐ 독성이나 부작용의 원인물질의 명칭, 분자구조, 특성 등에 관한 자료

Ⓑ 원인물질의 독성작용이나 부작용에 대한 자료

Ⓒ 독성물질의 분석방법 등에 관한 자료

Ⓓ 독성이나 부작용의 원인물질이 완전히 제거되는 경우 이를 입증할 수 있는 자료

Ⓔ 독성이나 부작용의 원인물질에 대한 잔류기준이 설정되어 있는 경우, 규정 및 설정 사유, 최종제품에 대한 함유량 등에 관한 자료

(6) 식품에 사용할 수 있는 원료

“식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록은 [별표 1]과 같다.

(7) 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료

① “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”란 식품 사용에 조건이 있는 식품의 원료를 말한다.

② “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”로 분류된 원료는 명시된  사용 조건을 준수하여 사용하여야 하며, 별도의 사용 조건이 정하여지지 않은 원료는 다음의 사용기준에 따른다.

㉮ “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”로 명시되어 있는 동․식물 등은 가공 전 원재료의 중량을 기준으로 원료배합 시 50% 미만(배합수는 제외한다) 사용하여야 한다.

㉯ “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”에 속하는 원료를 혼합할 경우, 혼합성분의 총량이 제품의 50% 미만(배합수는 제외한다)이어야 한다.

㉰ 다만, 다류, 음료류, 주류 및 향신료 제조 시에는 제품의 구성원료 중 “제한적 사용 원료”에 속하는 식물성원료가 한가지인 경우에는 “원료”로 사용할 수 있다.

③ “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록은 [별표 2]와 같다.

(8) 식품에 사용할 수 없는 원료

① “식품에 사용할 수 없는 원료”란 식품의 제조․가공․조리에 사용할 수 없는 것을 말한다.

② “식품에 사용할 수 없는 원료”의 목록은 [별표 3]과 같다.

제 2, 5, 5) (1) 중 “어류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)”을 “어류의 중금속 기준”으로 한다.

제 2, 5, 5) (2) 중 “연체류 및 패류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)”을 “연체류 및 패류의 중금속 기준”으로 한다.

제 2, 5, 5) (4) 중 “건조 어․패류 및 농산물의 중금속 잠정 기준 적용”을 “건조 어․패류, 연체류 및 농산물의 중금속 기준 적용”으로 한다.

제 2, 5, 9) 중 “마비성패독 기준”을 “패독소 기준”으로 하고, (1)을 다음과 같이 한다.

대 상 식 품	기 준(mg/kg)
패류	0.8 이하
피낭류(멍게, 미더덕, 오만둥이 등)

제 2, 5, 9) 중 (3)을 다음과 같이 신설한다.

(3) 건조 수산물의 패독소 잠정 기준 적용

건조 과정으로 인하여 수분함량이 변화된 경우는 수분함량을 고려하여 적용한다.

제 5, 1, 5) (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 산화방지제(g/kg)：다음에서 정하는 것 이외의 산화방지제가 검출되어서는 아니 된다(추잉껌에 한한다).

부틸히드록시아니졸 디부틸히드록시톨루엔 터셔리부틸히드로퀴논	0.4g/kg 이하(병용할 때에는 디부틸히드록시톨루엔으로서 사용량, 부틸히드록시아니솔으로서 사용량 및 터셔리부틸히드로퀴논으로서 사용량의 합계가 0.4g/kg 이하)

제 5, 1, 6), (3) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 2, 4)의  (1) 중 “구운 것, 익힌 것, 튀긴 것”을 “익힌 것”으로 하고, 6)의 (2) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 5, 6), (2) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 6, 6), (2) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 7, 6), (2) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 8, 6), (2) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 9, 6), (3) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 11, 6), (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 아질산이온

제 10. 일반시험법 2.6 발색제에 따라 시험한다.

제 5, 12, 6), (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 아질산이온

제 10. 일반시험법 2.6 발색제에 따라 시험한다.

제 5, 13, 4), (2) 중 “그대로”를 삭제한다.

제 5, 14, 4), (8) 중 “해바라기유”를 “해바라기유(압착해바라기유 포함)”으로 한다.

제 5, 14, 5) 중 들기름과 추출들깨유의 요오드가 “192∼209”를 “160∼209”로 한다.

제 5, 14, 5) 중 해바라기유를 다음과 같이 한다.

유형 항목	해바라기유
(1) 산가	0.6 이하(압착해바라기유는 4.0 이하)
(2) 요오드가	120～142

제 5, 15, 4), (1) 중 “ 곡분 또는 전분 등을”을 “곡분 또는 전분, 전분질원료, 변성전분 등을”으로 한다.

제 5, 17, 1) 중 “볶은커피, 인스턴트커피”를 “것으로서  볶은커피(커피원두를 볶은 것 또는 이를 분쇄한 것), 인스턴트커피(볶은커피의 가용성추출액을 건조한 것)”으로 한다.

제 5, 17, 4)의 (1) 부터 (4) 까지를 삭제한다.

제 5, 18, 18-1, 5), (7)을 다음과 같이 한다.

(7) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(다만, 농축과즙의 경우 소르빈산, 소르빈산칼륨 및 소르빈산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소르빈산으로서 사용량의 합계가 1.0g/kg 이하이어야 하며, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 0.6g/kg 이하이어야 한다. 또한 가열하지 아니한 제품은 검출되어서는 아니 된다)
소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	1.0 이하(농축과즙에 한하며, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소르빈산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.0g/kg 이하이어야 하고, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 0.6g/kg 이하)

제 5, 18, 18-5, 2), (2) 중 “수삼은 3년근 이상으로서”를 삭제한다.

제 5, 18, 18-6, 4), (2)를 삭제하고, 제 5, 18, 18-6, 5), (8)을 다음과 같이 한다.

(8) 보존료(g/kg)：다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산메틸과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하)
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.1 이하(안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 파라옥시안식향산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하)

제 5, 19, 19-1, 6), (30) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 19, 19-2, 6), (27) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 19, 19-3, 6), (11) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 19, 19-4, 6), (4) 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 20, 5), (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 보존료(g/kg 다만, 간장은 g/L) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다(다만, 메주는 검출되어서는 아니 된다).

소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	1.0 이하(소르빈산으로서, 간장 제외, 청국장은 비건조식품에 한한다)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(간장에 한한다. 파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산메틸과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.25g/kg 이하))
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.25 이하(간장에 한한다. 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 파라옥시안식향산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.25g/kg이하))

제 5, 21, 21-1, 4), (1) 중 “과실술덧(주요)”를 “과실․곡물술덧(주요), 과실주”로 한다.

제 5 중 “22. 드레싱”을 “22. 드레싱류”로, “29-1 땅콩 또는 견과류 가공품”을 “29-1 땅콩 또는 견과류 가공품류”로, “29-3 전분”을 “29-3 전분류”로, “29-10 추출가공식품”을 “29-10 추출가공식품류”로, “29-13 밀가루”를 “29-13 밀가루류”로 한다.

제 5, 25, 5), (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	1.0 이하(소르빈산으로서, 다만, 당절임, 식초절임 제외)
	0.5 이하[소르빈산으로서, 당절임(건조당절임 제외), 식초절임(오이초절임 제외)에 한함]
	0.5 이하(오이초절임에 한함, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소르빈산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(오이초절임에 한함. 소르빈산, 소르빈산칼륨 및 소르빈산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소르빈산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하) )

제 5, 29, 29-7, 6), (1) ⑦ 중 “2.2 인공감미료”를 “2.2.1 삭카린나트륨”으로 한다.

제 5, 29, 29-12, 4), (1) 중 “탈수과정을 거친 염을 말한다.”를 “탈수 또는 건조한 염을 말한다.”로 한다.

제 5, 29, 29-13, 4), (1)의 ① 부터 ③까지를 삭제하고, 5)를 다음과 같이 한다.

5) 규격

구분 항목	밀가루			영양강화 밀가루	기타 밀가루
	1등급	2등급	3등급
(1)성상	고유의 색택을 가진 분말로 이미․이취가 없어야 한다.			고유의 색택을 가진 분말로 이미․이취가 없어야 한다.	고유의 색택을 가진 분말 및 굵은 입자로 이미․이취가 없어야 한다.
(2)수분(%)	15.5 이하
(3)회분(%)	0.6 이하	0.9 이하	1.6 이하	2.0 이하	2.0 이하
(4)사분(%)	0.03 이하
(5)납 (mg/kg)	0.2 이하
(6)카드뮴 (mg/kg)	0.2 이하

제 9. 3. 6) 중 “검사대상으로 하나”를 “하나의 검사대상으로 하고 이와 같은 표시가 없는 것은”으로 한다.

제 10, 1, 1.1, 1.1.5, 1.1.5.3, 1.1.5.3.3, 나, 2) 중 “사염화탄소”를 “사염화탄소 또는 클로로포름”으로 한다.

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.7을 다음과 같이 한다.

1.2.2.7 비타민D

가. 액체크로마토그래피에 의한 정량

1) 시험법 적용범위

영아용 조제식 및 성장기용 조제식 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료를 비누화하여 헥산으로 추출하고 그 추출물을 역상 분배형 칼럼을 이용한 육방전환밸브시스템으로 분리하여 254 nm 파장에서 자외부흡광검출기로 정량하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(UV Detector)

4) 시약 및 시액

가) 증류수 : 크로마토그래프용 혹은 이와 동등한 것

나) 헥산, 메탄올, 에탄올：액체크로마토그래프용 혹은 이와 동등한 것

다) 이동상 : 메탄올 900 mL에 에탄올 100 mL을 혼합한 용액을 830 mL 취하여 물로 1L가 되도록 조제하고 탈기하여 사용한다.(메탄올/에탄올/물 : 74.7/8.3/17(v/v/v))

5) 표준용액의 조제

가) 표준원액 : 비타민 D3 100 mg을 메탄올 100 mL에 녹여 조제한다.(1000 ug/mL)

나) 검량곡선 표준용액 : 표준원액을 각각 10, 50, 100 ng/mL이 되도록 이동상으로 희석하여 조제한다.

6) 시험용액의 조제

검체가 고체인 경우에는 분쇄기 등으로 잘게 마쇄하여 비타민D를 2 IU(0.05 μg)이상 함유한 검체를 비누화 플라스크에 정밀히 취한다. 고체시료의 경우, 물 3 mL로 충분히 녹인 후, 피로갈롤․에탄올(1→10)용액 40 mL를 가하여 약하게 진탕 혼합한다. 수산화칼륨(9→10) 10 mL를 가하고, 환류냉각관을 부착하여 비등수욕 중에서 30분간 가열하여 비누화한다. 즉시 실온으로 냉각하고 갈색 분액깔대기로 옮긴 후, 헥산 50 mL를 가하여 10분간 강하게 진탕 혼합한다. 침전이 생기면 이것이 가라앉을 때까지 방치하여 헥산층을 250～300 mL 새로운 분액깔대기로 옮긴다. 50 mL 헥산 추출을 2회 더 반복하여 이전의 추출용매와 합하고 1N 수산화칼륨용액 100 mL를 가하여 15초간 강하게 진탕한다. 이를 방치하여 분리하고(헥산층은 투명하지 않아도 된다) 혼탁한 물층을 버린다. 헥산층에 0.5N 수산화칼륨용액 40 mL를 가하여 진탕한 후 물층을 다시 버린다. 헥산층을 세척하여 세척액이 페놀프탈레인시액으로 알칼리의 반응을 나타내지 않을 때까지 수회 세척한다. 세척 시 매회 15초간 격렬하게 진탕한다.  수세한 헥산층을 무수황산나트륨으로 탈수하여 갈색 플라스크로 옮기고 무수황산나트륨을 헥산 10 mL로 2회 세척한 후 탈수한 헥산용매와 합하고 이를 40℃이하에서 감압농축한다. 잔류물에 메탄올 5 mL를 가하여 녹여 이를 멤브레인 필터(PTFE  0.45 um)로 여과하여 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

가) 육방전환밸브를 이용한 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼

(가) 전처리칼럼：Capcellpak MF C8 SG 80(4.6 mm×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 농축칼럼：Capcellpak C18 UG 120V (2.0 mm×35 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(다) 분석칼럼：Capcellpak C18 UG 120V (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 전처리칼럼 이동상：4) 시약 및 시액 중 다) 이동상 참조.

(나) 분석칼럼 이동상：메탄올/에탄올(9:1, v/v) 혼합용액

(3) 유속

(가) 전처리칼럼 이동상：300 μL/min

(나) 분석칼럼 이동상：500 μL/min

(4) 육방전환밸브의 조작

전처리 칼럼에서 비타민D의 피크 용출시간을 그림 1.과 같이 확인하고 농축을 위한 육방전환밸브의 조작시간을 설정한다.

그림 1. 전처리 칼럼에서 2 mg/L 농도의 비타민D 표준용액의 크로마토그램(유속 : 300 uL/min)

(5) 주입량 : 210 uL

(6) 검출기：자외부(UV) 검출기(254nm)

나) 검량선 작성

검량곡선표준용액을 액체크로마토그래프에 210 uL씩 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

라) 정량한계 : 25 ug/kg

8) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

9) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 면적법에 따라 정량한다.

가) 계산방법

비타민D 함량(IU/100 g) =	Y' × K	V	×	100
		S		1000

Y' = 검량곡선에 대입하여 얻은 시험용액의 농도(ug/L)

K = 비타민D3의 무게전환계수 (40 IU/ug)

V = 최종용액의 부피(mL)

S = 시료의 무게(g)

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.8을 다음과 같이 한다.

1.2.2.8 비타민K1

가. 액체크로마토그래피에 의한 정량 [제1법]

1) 시험법 적용범위

영아용 조제식 및 성장기용 조제식 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료에 있는 trans형 비타민K1을 유기용매로 용해하여 추출하고 건고한 추출물을 2차 용매에 녹여 실리카겔 오픈칼럼으로 정제하고 순상칼럼을 이용한 액체크로마토그래피에서 자외부흡광검출기로 정량하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(UV Detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매：메탄올, 디클로로메탄, 이소옥탄, 아세톤 및 이소프로판올(액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것)

나) 컨디셔닝 용액：이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 0.01%가 되게 한다.

다) 용출용매(이동상)：디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 15%, 0.02%가 되게 한다.

라) 암모니아수(36%)

마) 무수황산나트륨

5) 표준용액의 조제

비타민K1 표준품은 trans와 cis 이성체를 함유하므로 각각의 이성체들을 분리하여 전체에 대한 cis형과 trans형의 피크 면적 비를 구한다(불활성형 cis형을 ≤20%정도 함유함). 암소에서 보관한다.

가) 표준원액：비타민K1 표준품을 이소옥탄에 녹여 5 μg/mL가 되게 한다.

나) 표준용액：표준원액을 이소옥탄으로 희석하여 0.7 μg/mL가 되게 한다.

6) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 일정량(비타민K1으로서 3.5 μg함유)을 정확히 취하여 500 mL 분액깔대기에 넣고 암모니아수 4 mL를 가한 후 60초간 흔들어 혼합한다. 여기에 60 mL의 메탄올을 가하고 30초간 혼합한 후 디클로로메탄 100 mL와 이소옥탄 50 mL 혼합액을 가하여 잘 흔들어 추출한다. 층 분리후 하층액을 1,000 mL 마개달린플라스크에 옮긴다. 다시 디클로로메탄 100 mL와 이소옥탄 50 mL 혼합액을 가하여 추출한 후 하층액을 합하고 이 액을 75℃ 이하에서 감압농축한다. 마개달린플라스크를 아세톤 20 mL로 씻고 그 액을 농축시키는 조작을 3회 반복한 후 질소 충전하여 차광한 채로 밀봉한다.

나) 시험용액의 정제

정제 칼럼에 컨디셔닝 용액 20 mL를 주입하고 천천히 용출시켜 그 액을 버린다. 잔류물을 컨디셔닝 용액 10 mL로 녹인 후 칼럼에 통과시켜 비타민K1을 흡착시킨다. 같은 용액으로 5 mL씩 2회에 걸쳐 마개달린플라스크를 씻고, 씻은 액을 칼럼에 넣은 후 컨디셔닝 용액으로 용출하여 그 액을 버린다. 이어 검체의 지방 함량에 따라 양을 달리하여 용출용매를 칼럼에 통과시킨다(검체의 지방함량이 0.72～0.80 g이면 100 mL의 용매를, 0.72 g 이하이면 예비실험을 통해 용출액의 양을 결정한다). 용출액을 250 mL 마개달린플라스크에 받아 75℃ 이하에서 감압농축한다. 이 농축액을 이소옥탄 1～2 mL로 몇 회 나누어 씻어 5 mL로 정용한다.

※ 정제칼럼：60～200 메쉬 실리카 5.0 g(100℃ 오븐에서 하룻밤 동안 활성화시킴)을 정제 칼럼(1.0 cm id×30 cm, 유리 칼럼)에 충전하고 그 위에 무수황산나트륨 2.0 g(100℃ 오븐에서 하룻밤 동안 건조시킴)을 가한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼：5 μm실리카가 충전된 250×4.6 mm id의 순상형 칼럼

(2) 이동상：디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 30%, 0.02%가 되게 한다.

(3) 검출기：자외부(UV)검출기(254nm)

8) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 20 μL씩 주입하여 얻은 표준용액의 피크면적 또는 높이에 대해 구한 검량선을 사용하여 검체 중 비타민K1(C)의 함량을 구한다. 비타민K1의 함량은 각 이성체의 농도의 합으로 계산한다.

※ 옥수수유를 포함하는 조제유류는 cis-비타민K1 피크에 간섭이 발생할 수 있음으로 trans-비타민K1의 함량만 정량이 가능하다.

가) 계산방법

각 비타민K1 이성체의 농도 C(μg/100 g)

＝	Cstd	×	F	×	Hs	×	V	×	100
					Hstd		S

Cstd：표준용액의 농도(μg/mL)

F  ：비타민K1 표준용액에서 각 각의 이성체의 비율

Hs ：검체의 비타민K1 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

Hstd：비타민K1 표준용액 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

V：희석배수

S : 검체 채취량(g)

나. 액체크로마토그래피에 의한 정량 [제 2법]

1) 시험법 적용범위

영아용 조제식 및 성장기용 조제식 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중 지방을 효소적으로 분해하여 지방산으로 침전시킨 후 헥산으로 비타민K1를 추출하여 역상칼럼으로 분리하고 포스트 칼럼으로 환원시켜 형광을 이용하여 정량하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기(FL Detector)

4) 시약 및 시액

가) 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

나) Lipase : Candida rugosa를 기원으로 하는 것으로써 약 1000 unit/mg(Type VII, Sigma L-1754)의 활성이 있는 것 또는 동등한 효소 활성을 가진 것으로써 Pseudomonas와 Rhizopus를 기원으로 하는 것

다) 40% 수산화칼륨용액 : 40 g KOH를 증류수로 녹여 100 mL로 하여 조제한다.

라) 0.8 M 인산완충용액 : 54.0 g KH2PO4를 물 350 mL에 녹여 40% 수산화칼륨용액으로 pH를 7.9～8.0으로 조정하여 증류수로 희석하여 500 mL로 하여 조제한다.

마) 에탄올, 메탄올 : 액체크로마토그래피용 또는 동등한 것

바) 알콜혼합용매 : 에탄올과 메탄올을 95:5의 부피비로 혼합하여 조제한다.

사) 헥산, 디클로로메탄, 이소프로판올 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

아) 염화아연, 무수초산나트륨, 무수탄산칼륨 : 시약 특급 혹은 동등한 것

자) 초산 : Glacial 급

차) 아연분말 : 입자 60 um 이하인 것(Merck 108774 또는 BDH 102964L) 또는 이와 동등한 것으로 개봉 후 즉시 사용한다.

카) 이동상 : 메탄올 900 mL에 디클로로메탄 100 mL을 혼합한 용매에 염화아연 1.37 g과 무수초산나트륨 0.41 g 및 초산 0.30 g을 메탄올 5 mL에 녹여 첨가하고 0.45 um 여지로 여과하고 탈기하여 조제한다.

5) 표준용액 조제

가) 표준원액 : 비타민 K1 100 mg을  100 mL 이소프로판올에 녹여 조제한다.

나) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 2.5 ug/mL이 되도록 조제한다.

다) 검량곡선표준용액 : 표준용액을 각 각 0.25, 0.5, 0.75, 1.0 및 1.25 mL 취하여 메탄올로 100 mL이 되도록 한다.(6.25, 12.5, 18.75, 25.0, 31.25 ng/mL로 조제)

6) 시험용액 조제

※ 시험용액 조제 시 직접적인 태양광에 노출되지 않도록 실험을 진행한다.

가) 분해

고체시료는 1.0 g, 액체시료는 10.0 g을 시험관(200×24mmID)에 정밀하게 취하여 40℃이하의 미지근한 물 15 mL을 취하여 교반기를 이용하여 녹인다. 이 때 액체시료의 경우 미지근한 물 5 mL를 첨가한다. 인산완충용액 5.0 mL을 첨가하여 혼합하고 1.0 g의 lipase분말을 넣고 교반기로 혼합한다. 마개를 막고 고르게 균질화될 수 있도록 30～60초간 진탕하고 37±2℃에서 2시간 분해한다. 분해 시 20분 간격으로 15초간 진탕한다. 분해 후 수욕상에 담구어 냉각하고 10 mL 알콜혼합용액를 첨가하여 혼합한 후 1.0 g의 무수탄산칼륨을 첨가하여 혼합한다.

나) 추출

분해가 완료된 시험관에 30 mL 헥산을 첨가하여 마개를 한 후 10분간 격렬히 진탕하고 냉암소에 보관하여 층이 분리되도록 한다. 층분리가 잘 되지 않을 때에는 약 1000 rpm(200 g)로 10분간 원심분리한다. 헥산 상층액을 1.0 mL 취하여 바이얼로 옮기고 질소농축하여 메탄올 1 mL으로 잔류물을 다시 용해하여 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 분석칼럼 : C18 칼럼으로 carbon loading량이 10% 이상인 것 (4.6mm×250mm, 5㎛)

(2) 포스트 칼럼 : 4.0mmI.D×20mm (WAT084550) 또는 이와 동등한 것 혹은 내경 2.0～4.0 mm 및 길이 30～50 mm 의 액체크로마토그래피 칼럼관에 아연분말을 채워 제작한 것으로 분석칼럼과 형광검출기 사이에 장착한다.

※ 포스트 칼럼 제작 시 빈 공간이 생기지 않도록 주의하여 아연분말을 채우고 장착하기 전 30분간 이동상을 약 1 mL/min의 유속으로 흘려 평형이 이루어지는지 확인하고 장착 후 30～60분 이상 시스템을 안정화하여 분석한다.

(3) 칼럼온도 : 30℃

(4) 이동상 유속 : 0.8 mL/min

(5) 주입량 : 10μL

(6) 형광검출기파장 :

여기파장(λex); 243 nm, 측정파장(λem); 430 nm

나) 검량선 작성

검량곡선표준용액을 액체크로마토그래프에 10 uL씩 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램(포스트 칼럼 : 2.0mmID×35mm 제작하여 사용)

라) 정량한계 :  180 ug/kg

8) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

9) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 면적법에 따라 정량한다.

가) 계산방법

비타민K1 함량(ug/100 g) =	Y' ×	30	×	1	×	100
		V		S		1000

Y' = 검량곡선에 대입하여 얻은 시험용액의 농도(ug/L)

V = 시료특성에 따라 취한 헥산의 부피(mL)

S = 시료의 무게(g)

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.13, 2)의 “0.1 M 인산수소이칼륨용액(pH 8.0～9.0)으로”를 “10 mM 인산완충용액(pH 8.0)으로”으로 하고, “UV 350nm로”를 “분리하고 UV 280 nm에서”로 한다.

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.13, 4)의 “가) 0.1 M 인산수소이칼륨용액(pH 8.0～9.0)：인산수소이칼륨 17.4 g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.”를 “가) 10 mM 인산완충용액(pH 8.0)：10 mM 인산수소이나트륨 용액에 10 mM 인산이수소나트륨 용액을 가하여 pH 8.0로 조정하여 제조한다.”로 하고, 나)의 “0.1 M 인산수소이칼륨용액”을 □0.1N NaOH 수용액”으로 하고, 다)의 “0.1 M 인산수소이칼륨용액으로”를 “이동상 A로”로 하고, 라)의 “octanesulfonic acid sodium salt 1.08g(0.005M), triethylamine 5ml, acetic acid 24ml, MeOH 100ml을 넣은 후 증류수를”을 “Tetrabutyl ammonium bromide 1.6120g (5 mM)을 pH 7.2로 조정한 인산완충용액을”로 한다.

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.13, 5)의 “(1g～5g정도)”을 “(약 2 g)”으로, “0.1 M 인산수소이칼륨용액”을 “10 mM 인산완충용액(pH 8.0)을”으로,  “13,000rpm조건”을 “5,000 rpm 조건”으로 한다.

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.13, 6), 가) 중 (3)의 “메탄올을 5:1로”를 “아세토니트릴을 8:2로”로 하고, (4)의 “0.6 mL/min”를 “1.0 mL/min”로 하고, (5)의 “10μL”를 “20μL”로 하고, (6)의 “350nm”를 “280nm”로 하고, 나) 중 “10 uL씩”을 “20 uL씩”으로 하고, 다)와 라)를 다음과 같이 한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 표준용액(1 ppm)의 크로마토그램

그림 2. 시험용액의 크로마토그램

그림 3. 액체크로마토그래프 PDA 스펙트럼

라) 정량한계 :  1.0 mg/kg

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.14, 4) 중 다)의 “1L에”를 “100 mL에”로 하고, 5)의 “(약 5 g)”을 “(약 2 g)”으로 한다.

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.14, 6), 가), (2) 중 “18 mM 메탄설폰산 수용액 또는 18 mM 황산 수용액”을 “18 mN 황산 수용액 또는 18 mM 메탄설폰산 수용액”으로 하고, 다)와 라)를 다음과 같이 한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 표준용액(2.5 ppm) 및 시험용액의 크로마토그램

라) 정량한계 : 100 mg/kg

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.15, 4)중 다)의“증류수로”를 “0.01 M 인산이수소칼륨용액(pH 4.8)으로”로 하고, 5)의 “강화 표시식품은”을 “첨가된 식품은”으로 한다.

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.15, 6), 가)의 (4)와 (5)를 다음과 같이 한다.

(4) 육방전환밸브의 조작

전처리 칼럼에서 비오틴의 피크 용출시간을 확인하고 농축을 위한 육방전환밸브의 조작시간을 설정한다.

(5) 주입량 : 200 uL

제 10, 1, 1.2, 1.2.2, 1.2.2.15, 6), 나)의 “10 uL씩”을 “200 uL씩”으로 하고, 다)의 그림1 중“액체크로마토그래프에서 표준용액”을 “표준용액”으로 하고, 라)의 “검출한계 : 0.01 mg/kg”을 “정량한계 : 0.1 mg/kg”으로 한다.

제 10, 2.1.1 중 가. 박층크로마토그래피에 의한 정성 및 나. 자외선흡수스펙트럼에 의한 정량을 삭제한다.

제 10, 2.1.1, 다 중 “다. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량”을 “가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량”로 하고 3) 중 다) 및 라)를 삭제한다.

제 10, 2.1.1, 다 중 4) 및 5)를 각각 다음과 같이 한다.

4) 시험용액의 조제

가) 제1법

액체검체：보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 비커에 취하여 10% 수산화나트륨용액 또는 10% 염산으로 중화하고 이를 500 mL～1 L의 둥근바닥플라스크에 옮기고 이에 15% 주석산용액 5 mL, 염화나트륨 약 80 g 및 실리콘수지 한방울을 가한 후, 전량을 물로 150～200 mL로 한다. 이를 수증기 증류기에 연결하여 증류하고 유액은 매분 약 10 mL의 속도로 하여 500 mL를 취한다. 수증기 증류한 유액 일정량(각 보존료 5～10 mg 함유량)을 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10 g, 10% 염산 5 mL를 가하여 에테르 40, 30 및 30 mL씩으로 3회 추출한다. 에테르추출액을 합하여 소량의 물로 씻고 에테르층을 분취한다. 여기에 무수황산나트륨을 넣고 잠시 방치한 다음 쿠데르나다니쉬 농축기에서 에테르를 날려보낸다. 잔류물에 내부표준물질이 1 mL 중에 1.0 mg을 함유하도록 첨가하여 아세톤으로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

고체검체：검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 30～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하여 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

나) 제 2법

(1) 수증기 증류기를 이용

액체검체 : 증류방법은 가) 제1법과 동일하며, 다만 15% 주석산용액은 10 mL를 가하고, 증류액을 받는 수기끝은 1% 수산화나트륨용액 20 mL에 잠기도록 하여 증류한다.

고체검체 : 검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하고 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

(2) 수증기 자동증류기를 이용

액체검체 : 보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 비이커에 취하여 10% 수산화나트륨용액 또는 10% 염산으로 중화하고 이를 500 mL～1 L의 플라스크에 옮기고 이에 15% 주석산용액 10 mL, 염화나트륨 약 80 g 및 실리콘수지 한 방울을 가한 후, 적정량의 물을 추가한다. 이를 수증기 자동증류기에 연결하고 증류액을 받는 수기끝을 1% 수산화나트륨용액 20 mL에 잠기도록 하여 증류하고 유액은 매분 10 mL의 속도로 하여 500 mL를 취하여 시험용액으로 한다.

고체검체 : 검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 검체 10～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하고 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(30m×0.32mm×0.25um) 또는 이와 동등한 것

(5%-phenyl- methylpolysiloxane)

(2) 검출기 : FID(불꽃이온화 검출기)

(3) 주입부 온도 : 210～230℃

(4) 검출기 온도 : 230～250℃

(5) 칼럼오븐온도 : 140～200℃

(6) 캐리어 가스 및 유량 : N2, 1.0 mL/min(split)

제 10, 2.1.1 중 “라. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량”을 “나. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량”으로 하고, 4) 및 5)의 가)를 각각 다음과 같이 한다.

4) 시험용액의 조제

가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량시험 4) 시험용액의 조제에 따라 수증기 증류한 유액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기 : 자외부흡광검출기(UV Detector), 217 nm

(2) 칼럼：Capcell pak MF-C8(4.5μm, 4.6 ×150mm) 또는 이와 동등한 것

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% TBA-OH(0.1% 인산) 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	75	25
2.5	75	25
7.0	65	35
12.0	60	40
15.0	70	30

(4) 이동상유량：1 mL/분

(5) 주입량 : 10 μL

제 10, 2.1.2, 가, 3) 중 다)를 다음과 같이 한다.

다) 프로피온산표준용액：프로피온산 0.1 g을 정밀히 달아 아세톤에 녹이고 100 mL로 한 액을  표준원액으로 한다. 프로피온산표준원액 1 mL 및 내부표준용액 1 mL를 취하고 아세톤으로 희석하여 10 mL로 한다.(사용시 조제)

프로피온산 1 mL = 100 μg C3H6O2

제 10, 2.1.2, 가, 4) 중 나)를 다음과 같이 한다.

나) 제2법

2.1.1 데히드로초산, 소르빈산, 안식향산 및 그 염류, 파라옥시안식향산에스테르류 가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량시험 4) 시험용액의 조제 나) 제 2법에 따라 얻어진 수증기 증류한 유액 또는 2.1.2 프로피온산 및 그 염류 가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량 4) 시험용액의 조제 가) 제1법에 따라 얻어진 수증기 증류한 유액 100 mL를 정확히 취하여 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10g, 인산 1 mL 및 내부표준용액 1 mL를 가하여 에테르 50 mL 씩으로 2회 추출하여 에테르층을 모은 뒤, 무수황산나트륨을 사용하여 수분을 제거하고 농축한 후, 아세톤을 가하여 최종 부피가 10 mL가 되도록 하여 시험용액으로 한다.

제 10, 2.1.3을 삭제한다.

제 10, 2, 2.2.2를 다음과 같이 신설한다.

2.2.2 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐 동시분석법

1) 분석원리

식품 중의 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐을 물로 추출후 여과하거나 반투막을 이용하여 투석한 후, 투석외액을 아세설팜칼륨과 삭카린나트륨은 역상계 및 강음이온교환형 카트리지, 아스파탐은 강양이온교환형 카트리지로 각각 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 정제용 카트리지

(1) 역상계 카트리지：Sep-pak C18 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

(2) 강음이온교환형 카트리지：Sep-pak QMA 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

(3) 강양이온교환형 카트리지：Bond Elut SCX 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

3) 시약 및 시액

가) 투석내액：염화나트륨 100 g 및 85% 인산 11.8g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

나) 투석외액：85% 인산 11.8g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

다) 0.1M TPA-Br용액：TPA-Br(Tetrapropylammonium bromide) 2.66 g을 물에 녹여 100 mL로 한다.

라) 혼합표준용액：삭카린나트륨을 120℃에서 4시간 건조시킨 후, 아세설팜칼륨 및 아스파탐은 그대로, 각각 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

마) 카레스(Carrez)침전제 : 제1액 15%페로시안화칼륨용액, 제2액 30%황산아연용액

4) 시험용액의 조제

가) 제1법

(1) 액상검체

검체 약 5 g을 취하고 물을 가해 50 mL로 하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 탄산가스가 있는 경우에는 10분간 초음파 처리하여 탄산가스를 제거하며 알코올을 함유한 경우는 70°의 수욕상에서 15분간 가온하여 알코올을 증발시켜 검체를 취한다.

(2) 고체 또는 반고체검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

(3) 단백질 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한다. 이 액에 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 흔들어 섞은 다음 다시 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 2분간 흔들어 섞는다. 발생한 거품은 초음파 처리하여 제거한 후 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

(4) 지방 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 분액깔때기에 옮겨 디에틸에테르 50 mL를 가한 다음 흔들어 정치하고 물층을 취한다. 이 조작을 2회 반복하여 지방성분을 제거한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

다만, 상기 (1)～(4)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 나) 제2법의 (2) 정제에 따라 시험한다.

나) 제2법

(1) 투석

액체검체는 10～20 g을 취하고, 고체 또는 반고체검체는 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 10～20 g 취한 다음 투석내액 약 20 mL를 가하여 혼합한다. 이 혼합액을 투석용 튜브(분자량 12,000～14,000, 미리 수세한 다음에 사용한다)에 넣고 튜브의 끝을 밀봉한다. 미리 투석외액 약 150 mL를 넣은 눈금이 있는 용기에 튜브를 넣고 투석외액을 가하여 전량을 약 200 mL로 한다. 때때로 흔들어 주면서 실온에서 15～48시간 방치하여 투석한 후 투석용 튜브를 제거하고 투석외액을 가해 200 mL로 하여 투석액으로 한다.

(2) 정제

(가) 아세설팜칼륨 및 삭카린나트륨

투석액 20 mL를 25 mL 메스플라스크에 넣고 0.1M TPA-Br용액 2 mL를 가한 다음 물을 가하여 25 mL로 한다. 이 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.5% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3N 염산 약 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

(나) 아스파탐

투석액 5 mL를 강양이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL를 사용하여 세척한 후 15% 염화나트륨용액 : 메탄올(50:50) 혼합액 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기 :자외부흡광검출기(UV), 210 nm

(2) 칼럼：Nova-Pak C18 또는 이와 동등한 것

(3) 칼럼온도 : 25～40℃의 일정온도

(4) 이동상：10% TPA-OH(Tetrapropylammonium hydroxide) 20.3 mL를 메탄올：물(20：80)의 혼합액 약 900 mL에 녹이고 인산으로 pH를 4.0으로 조정한 다음 메탄올：물(20：80) 혼합액으로 전량을 1,000 mL로 한다.

(5) 이동상유량：1.0 mL/min

(6) 주입량 : 10～20 μL

6) 정성시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐의 피크는 어느 측정조건에서도 혼합표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐의 함량을 산출한다.

제 10, 2.4.2를 삭제한다.

제 10, 2, 2.6을 다음과 같이 신설한다.

2.6 발색제

식육 또는 알가공품, 어육가공품 등 식품에 적용한다.

2.6.1 아질산이온

가. 디아조화법에 의한 정량

1) 분석원리

설파닐아미드를 산성조건에서 아질산이온에 의해 디아조화한 다음, N-(1-나프틸) 에틸렌디아민과의 결합에 의해 생성된 아조색소의 자홍색을 분광광도계로 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 분석광도계

3) 시약 및 시액

가) 초산암모늄완충액 : 초산암모늄 100 g을 물 약 900 mL에 녹이고, 10% 암모니아수로 pH 9.0으로 맞춘 다음 물을 넣어 1,000 mL로 한다.

나) 설파닐아미드용액 : 설파닐아미드 0.5 g을 염산(1＋1) 100 mL에 가온하여 녹인다.

다) 나프틸에틸렌디아민용액 : N-(1-나프틸) 에틸렌디아민염산염 0.12 g을 물 100 mL에 녹이고, 불순물이 있으면 여과한다. 이 용액은 갈색병에 보관한다.

라) 아질산표준용액 : 아질산나트륨(NaNO2최순품)을 황산데시케이터에서 24시간 건조한 후 그 0.150 g을 정밀히 달아 물에 녹여 1,000 mL로 하여 표준원액으로 한다. 표준원액 10 mL에 물을 넣어 100 mL로 하고, 그 액 2 mL에 물을 넣어 100 mL로 하여 표준용액으로 한다(쓸 때 만든다).

아질산표준용액 1 mL ＝ 0.2 μg NO—2

4) 시험용액의 조제

가) 식육가공품 및 어육가공품

세절한 검체 10 g을 정밀히 달아 약 80℃의 더운물을 적당량 넣고 고르게 섞는다. 이를 200 mL의 메스플라스크에 정량적으로 옮기고, 용기는 더운물로 여러번 씻어 플라스크에 넣는다. 이 때 플라스크 중의 액량은 약 150 mL로 한다.

★ 여기에 0.5 N 수산화나트륨용액 10 mL를 넣어 잘 흔들어 섞고 다시 12% 황산아연용액 10 mL를 넣어 잘 흔들어 섞은 후 80℃의 수욕중에서 가끔 흔들어 섞으면서 20분간 가열한다. 다음 찬물에 담그어 실온이 될 때까지 식힌 후 초산암모늄완충액 20 mL와 물을 넣어 200 mL로 한다. 내용물을 잘 혼화하여 10분간 방치한 후 여과(건조여지 사용)하여 최초의 여액 약 20 mL는 버리고 맑은 여액을 공전삼각플라스크에 받아 시험용액으로 한다. 따로 검체 대신에 물 10 mL를 사용하여 ★ 이하와 동일하게 조작한 액을 공시험용액으로 한다.

나) 알가공품

가)와 동일하게 조작하며 다만 0.5N 수산화나트륨용액 20 mL 및 12% 황산아연용액 20 mL를 사용한다.

5) 시험조작

시험용액 및 공시험용액 각 20 mL에 설파닐아미드용액 1 mL를 넣어 섞는다. 다시 나프틸에틸렌디아민용액 1 mL와 물을 넣어 25 mL로 하고 잘 섞어 발색시켜 20분간 방치한 후, 물 20 mL로 동일하게 조작한 것을 대조액으로 하여 파장 540 nm에서 흡광도 Aa, Ab를 측정한다. 시험용액이 착색되어 있을 때에는 시험용액 20 mL에 염산(1＋1) 1 mL와 물을 넣어 25 mL로 한 것을, 물을 대조액으로 하여 흡광도 Ac를 측정한다. 흡광도의 차 Aa—Ab 또는 Aa—(Ab＋Ac)를 구하여 미리 작성한 검량선에서 시험용액 20 mL 중의 아질산이온량 A(μg)를 구하고 다음 식에 따라 검체 중의 아질산이온의 농도를 산출한다.

아질산이온(g/kg) ＝[eqn: rm {A} over {S}]×[eqn: {1} over {100}]

S : 검체의 채취량(g)

검량선의 작성∶아질산이온표준용액 2, 5, 10, 15 및 20mL를 25mL의 메스플라스크에 취하고 각각의 물을 넣어 약 20 mL로 한다. 여기에 설파닐아미드용액 1 mL 씩을 넣어 섞고, 다시 나프틸에틸렌디아민 용액 1 mL씩을 넣고 물을 넣어 25 mL로 하여 잘 섞는다. 물 20 mL로 동일하게 조작한 것을 대조액으로 하여 20분후에 파장 540 nm에서 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.

제 10, 6.1.1.2, 3), 나) 중 “면역친화성칼럼(Immunoaffinity column) AflaTestTM(VICAM) 또는 이와 동등한 것”을 “아플라톡신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)”으로 한다.

제 10, 6.1.4, 3), ② 중 “면역친화성칼럼(Immunoaffinity column) Fumoni Test 또는 이와 동등한 것”을 “푸모니신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)”으로 한다.

제 10, 6.1.5, 3), 나)를 다음과 같이 한다.

나) 정제용 칼럼 : 오크라톡신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)

제 10, 6.1.6, 3), 나) 중 “데옥시니발레놀용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)”을 “데옥시니발레놀용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)”으로 한다.

제 10, 6.1.7, 3) 나) 중 “제랄레논용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)”을 “제랄레논용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)”으로 한다.

제 10, 6, 6.3.1, 1) 중 “패류, 패류통조림, 패류염장품, 건조가공품”을 “패류, 피낭류, 패류 및 피낭류 통조림, 패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품에 적용한다.”로 한다

제 10, 6, 6.3.1, 5), 가) 중 “패육”을 “육”으로 한다.

제 10, 6, 6.3.1 5), 나) 중 (1)을 다음과 같이 한다

(1) 패류, 피낭류

물로 패류 및 피낭류의 외부를 깨끗이 씻은 후 껍데기를 제거하고 칼로 육을 취한다(단, 패류의 경우 껍데기를 열고 내부의 모래나 이물질을 제거하기 위해 물로 씻은 후 칼로 패육을 취한다). 이때 가열하거나 약품을 사용해서는 아니 된다. 육 100～150 g의 시료를 표준체(20 mesh)에 얹어 5분 동안 물을 뺀 후 균질기로 균질화한다.

제 10, 6, 6.3.1 5), 나), (2) 중 “패류통조림”을 “패류 및 피낭류 통조림”으로 한다

제 10, 6, 6.3.1 5), 나), (3) 중 “패류 염장품, 건조가공품”을 “패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품”으로 한다

제 10, 6, 6.3.1 5), 다), (1) 중 “패류, 패류통조림”을 “패류, 피낭류, 패류 및 피낭류 통조림”으로, “추출액을 70℃ 항온조에서 5분간 중탕하고”를 “혼합액을 5분간 끓이고”로 한다

제 10, 6, 6.3.1 5), 다), (2) 중 “패류 염장품, 건조가공품”을 “패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품”으로, “증류수 100mL로 칼럼을”를 “물 100mL로 칼럼을”로 한다

제 10, 7.8.3 중 “수산물 및 그 가공품”을 “수산물 및 그 가공품, 훈제식육가공품 및 특수용도식품”으로 한다.

제 10, 7.8.3, 1) 중 “수산물 및 그 가공품”을 “수산물 및 그 가공품, 훈제식육가공품 및 특수용도식품”으로 한다.

제 10, 7.8.3, 6), 가) 중 “(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min”을 “(3) 이동상 : 아세토니트릴과 물의 혼합액 (8:2)”로 한다.

제 10, 7.8.3, 6), 가) 중 “(4) 이동상”을 “(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min”로 한다.

제 10, 7.8.3, 6), 가), 중 “(5) 검출기파장”을 “(5) 검출기파장 : 여기파장 294㎚, 형광파장 404㎚”로 한다.

제 10, 8.2.2, 5) 중 다)를 다음과 같이 한다.

다) 염산(HCl) : 1 N, 4 N, 6 N

제 10, 8.2.2, 5) 중 라)를 삭제하고 “마) 1N 암모니아수：암모니아수(28%) 65 mL를 증류수로 희석하여 1,000 mL로 한다.”를 “라) 암모니아수(NH4OH) : 1N 암모니아수”로 하며, 바)를 마)로 한다.

제 10, 8.2.2, 6) 중 나)를 다음과 같이 한다.

나) 검체 100 g(단, 소스류 200 g, 2종 이상이 혼합된 식품 300 g, 밤 500 g, 생버섯 500 g, 곡류 500 g, 두류 500 g 등 시료에 혼입된 광물질의 양에 따라 결정)을 증류수 적당량에 넣고 표면에 붙은 광물질이 분리되도록 5분간 초음파 처리한다. 단, 어패류 분말 등이 포함된 경우 검체를 둥근바닥플라스크에 취하고 적당량의 6 N 염산 을 넣은 후 100～120℃에서 2～3시간 환류냉각처리를 할 수 있다. 이 경우 냉각시킨 후 적당량의 증류수를 가하여 희석시킨다.

제 10, 8.2.2, 6) 중 아) 및 자)를 다음과 같이 한다.

아) 1 N 염산 2 mL를 가하고 10 분간 방치한다. 단, 6N 염산을 처리 한 경우 이 과정을 생략한다(광물질의 함량이 많은 감자의 경우 4 N 염산 5 mL 이상을 사용할 수 있다).

자) 1 N 암모니아수 2 mL를 가하여 혼합하고 10분간 방치한다. 단, 6N 염산을 처리 한 경우 이 과정을 생략한다.

제 10, 8.2.2, 8), 다) 중 “150～250℃ 부근에서”를 “150～250℃에서”로 한다.

제 10, 8.2.2, 8) 중 라)를 다음과 같이 한다.

라) TL 비가 0.1이상인 것은 방사선 조사된 것으로, 0.1 미만인 것은 방사선 조사되지 않은 것으로 판정한다.

부  칙

제1조(시행일) 이 고시는 2011년 7월 8일부터 시행한다. 다만, 제 2. 5. 9). (1)의 개정규정은 2011년 10월 1일부터 시행하고, 제 5. 14. 4) 중 해바라기유 및 고올레산해바라기유에 대한 개정규정, 제 5. 17. 4), 제 5. 18-6. 4) 및 제 5. 29-13. 4)에 대한 개정규정은 각각 2012년 1월 1일부터 시행한다.

제2조(재검토기한) 「훈령ㆍ예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정」(대통령훈령 제248호)에 따라 이 고시 발령 후의 법령이나 현실여건의 변화 등을 검토하여 이 고시를 폐지하거나 개정 등의 조치를 하여야 하는 기한은 2014년 6월 27일까지로 한다.

제3조(경과조치) 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정을 적용한다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개 정 안

제 1. 총칙

1. 일반원칙

1)～ 22) (생  략)

23) “타르색소”라 함은 타르색소의 알루미늄레이크를 포함한 것을 말한다.

2. ～ 3. (생  략)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. (생  략)

2. (생  략)

1) (생  략)

2) 식품원료 판단기준

(1) 다음에 해당하는 것들은 식품의 제조․가공 또는 조리 시 식품원료로 사용하여서는 아니∨된다. 다만, 이미 보건복지부장관 또는 식품의약품안전청장이 인정한 것은 식품의 원료로 사용할 수 있다.

① ∼ ③ (생  략)

(2) 위의 (1)에 해당되지 않는 것은 식품원료로서 사용가능 여부를 식품의약품안전청장이 판단한다. 다만, 안전성과 관련된 새로운 사실이 발견되거나 제시될 경우 재검토하여 식품의 원료로서 사용가능 여부를 판단할 수 있다.

(3) 원료에 독성이나 부작용이 없고 식욕억제, 약리효과 등을 목적으로 섭취한 것 외의 식용근거가 있는 경우 “식품에 사용할 수 있는 원료” 또는 “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”로 사용가능한 것으로 판단할 수 있다.

(4) (생  략)

(5) (생  략)

① (생  략)

｢식품원료 사용을 위한 의사결정도」

구분	내 용
A	식용근거가 있고, 알려진 독성이나 부작용 물질이 없는 원재료
B	식용근거가 있고, 독성이나 부작용 물질이 있으나, 외국에 독성이나 부작용 원인물질에 대한 잔류기준이 설정되어 있는 원재료
C	식용근거가 있고, 독성이나 부작용 물질이 있으나, 원인물질이 완전히 제거되는 원재료
D	식용근거가 있는 추출물
E	식용근거가 없는 추출물
F	기타원료
G	원료사용불가
H	식품첨가물로 검토

㉮ (생  략)

㉯ 추출물：식품으로 사용가능한 원재료를 물리적으로 또는 용매(물, 주정, 이산화탄소)를 사용하여 추출한 것

※ 단순추출물(조추출물) : 특정한 성분이 제거되거나 분리되지 않은 추출물(착즙포함)

<신  설>

<신  설>

⑤ 제출자료는 다음의 요건으로 판단할 수 있다.

제출자료	A, D	B, C	E	F
㉮ 원료의 기본특성자료	√	√	√	√
㉯ 식용근거자료	√	√		√
㉰ 독성이나 부작용 원인물질에 관한 자료		√
㉱ 독성시험자료			√	√

㉮ (생  략)

Ⓐ ∼ Ⓓ (생  략)

Ⓔ 추출물 또는 기타원료의 경우, 제조방법에 관한 구체적인 자료(사용된 용매, 효소, 미생물 등)

㉯ (생  략)

Ⓐ 30년 이상 식용하였음을 입증할 수 있는 자료

Ⓑ 외국에서 생산․판매되고 있는 제품일 경우 3개국 이상에서 판매되고 있음을 입증할 수 있는 자료[제조사, 판매실적, 판매기간, 견본제품, 제품설명서, 표시사항 또는 해당 국가에서 발행한 판매증명서(해당국가 내에서 판매․소비되고 있음이 명시된 것) 등]

㉰ 독성이나 부작용의 원인물질에 관한 자료

Ⓐ ∼ Ⓓ (생  략)

Ⓔ 독성이나 부작용의 원인물질에 대한 외국의 잔류기준이 설정되어 있는 경우, 해당국가의 규정 및 설정 사유, 최종제품에 대한 함유량 등에 관한 자료

㉱ 독성시험자료

Ⓐ 공인기관(GLP 기관 등)의 단회투여독성시험, 반복투여독성시험(3개월 이상), 유전독성시험자료 등

※ 원료의 특성상 6개월 반복투여독성시험, 면역독성시험, 발암성시험, 국소독성시험 등이 필요할 수 있음

(6) (생  략)

(7) (생  략)

① (생 략)

② (생 략)

㉮ “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”로 명시되어 있는 동․식물 등은 원료배합시의 기준으로 50% 미만(배합수는 제외한다) 사용하여야 한다.

㉯ ∼  ㉰ (생  략)

㉱ “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 배합비율은 가공전의 원재료를 기준으로 한 것이며, 농축물이나 추출물의 경우에는 가공 전 원재료의 중량을 기준으로 판단한다.

③ (생  략)

(8) (생  략)

3. ～ 4. (생  략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 4) (생  략)

5) 중금속 기준

(1) 어류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

① ～ ③ (생  략)

(2) 연체류 및 패류의 중금속 잔류허용기준(생물로 기준할 때)

① ～ ③ (생  략)

(3) (생  략)

(4) 건조 어․패류 및 농산물의 중금속 잠정 기준 적용

(5) ～ (6) (생  략)

6) ～ 8) (생  략)

9) 마비성패독 기준

(1) 마비성 패독

대상식품	기준
패류 및 그 가공품	80 μg/100 g 이하
<신 설>

(2) (생  략)

(3) <신  설 >

10) ～ 16) (생  략)

6. (생  략)

제 3. ～ 제 4. (생  략)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (4) (생  략)

(5) (생  략)

부틸히드록시아니졸 디부틸히드록시톨루엔 터셔리부틸히드로퀴논	0.75 이하(병용할 때에는 부틸히드록시아니졸, 디부틸히드록시톨루엔 및 터셔리부틸히드로퀴논으로서의 사용량의 합계가 0.75 이하)

(6) ～ (11) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (2) (생  략)

(3) 허용외 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(4) ～ (9) (생  략)

2. 빵 또는 떡류

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 빵류

밀가루 또는 기타 곡분을 주원료로 하여 이에 식품 또는 식품첨가물을 가하여 발효시키거나 발효하지 아니하고 반죽한 것 또는 이를 구운 것, 익힌 것, 튀긴 것으로서 식빵, 케이크, 카스텔라, 도넛, 피자, 파이, 핫도그 등을 말한다.

(2) ～ (3) (생  략)

5) (생  략)

6) 시험방법

(1) (생  략)

(2) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(3) ～ (5) (생  략)

3. ～ 4. (생  략)

5. 설탕

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) (생  략)

(2) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(3) ～ (4) (생  략)

6. 포도당

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) (생  략)

(2) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(3) ～ (4) (생  략)

7. 과당

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) (생  략)

(2) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(3) ～ (4) (생  략)

8. 엿류

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) (생  략)

(2) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(3) (생  략)

9. 당시럽류

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (2) (생  략)

(3) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

10. (생  략)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) 아질산이온

① 디아조화법

㉮ 시약

Ⓐ 초산암모늄완충액

초산암모늄 100 g을 물 약 900 mL에 녹이고, 10% 암모니아수로 pH 9.1로 맞춘 다음 물을 넣어 1,000 mL로 한다.

Ⓑ 설파닐아미드용액

설파닐아미드 0.5 g을 염산(1＋1) 100 mL에 가온하여 녹인다.

Ⓒ 나프틸에틸렌디아민용액

N-(1-나프틸) 에틸렌디아민염산염 0.12 g을 물 100 mL에 녹이고, 불순물이 있으면 여과한다.

Ⓓ 아질산표준용액

아질산나트륨(NaNO2최순품)을 황산데시케이터에서 24시간 건조한 후 그 0.150 g을 정밀히 달아 멸균수에 녹여 1,000 mL로 하여 표준원액으로 한다. 표준원액 10 mL에 물을 넣어 100 mL로 하고, 그 액 2 mL에 물을 넣어 100 mL로 하여 표준용액으로 한다(쓸 때 만든다).

아질산표준용액 1 mL ＝ 0.2 μg NO—2

㉯ 시험용액의 조제

세절한 검체 10 g을 정밀히 달아 약 80℃의 물을 적당량 넣고 고르게 섞는다. 이를 200 mL의 메스플라스크에 정량적으로 옮기고, 용기는 더운물로 여러번 씻어 플라스크에 넣는다. 이 때 플라스크 중의 액량은 약 150 mL로 한다.

★ 여기에 0.5 N 수산화나트륨용액 10 mL를 넣어 잘 흔들어 섞고 다시 12% 황산아연용액 10 mL를 넣어 잘 흔들어 섞은 후 80℃의 수욕중에서 가끔 흔들어 섞으면서 20분간 가열한다. 다음 찬물에 담그어 실온이 될 때까지 식힌 후 초산암모늄완충액 20 mL와 물을 넣어 200 mL로 한다. 내용물을 잘 혼화하여 10분간 방치한 후 여과(건조여지 사용)하여 최초의 여액 약 20 mL는 버리고 맑은 여액을 공전삼각플라스크에 받아 시험용액으로 한다. 따로 검체 대신에 물 10 mL를 사용하여 ★ 이하와 동일하게 조작한 액을 공시험용액으로 한다.

㉰ 시험방법

시험용액 및 공시험용액 20 mL에 설파닐아미드용액 1 mL를 넣어 섞는다. 다시 나프칠에틸렌디아민용액 1 mL와 물을 넣어 25 mL로 하고 잘 섞어 발색시켜 20분간 방치한 후, 물 20 mL로 동일하게 조작한 것을 대조액으로 하여 파장 540 nm에서 흡광도 Aa, Ab를 측정한다. 시험용액이 착색되어 있을 때에는 시험용액 20 mL에 염산(1＋1) 1 mL와 물을 넣어 25 mL로 한 것을, 물을 대조액으로 하여 흡광도 Ac를 측정한다. 흡광도의 차 Aa—Ab 또는 Aa—(Ab＋Ac)를 구하여 미리 작성한 검량선에서 시험용액 20 mL 중의 아질산이온량 A(μg)를 구하고 다음 식에 따라 검체 중의 아질산이온의 농도를 산출한다.

아질산이온(g/kg) ＝[eqn: rm { A} over { S}]×[eqn: { 1} over { 100}]

S : 검체의 채취량(g)

검량선의 작성∶아질산이온표준용액 2, 5, 10, 15 및 20 mL를 25mL의 메스플라스크에 취하고 각각의 물을 넣어 약 20 mL로 한다. 여기에 설파닐아미드용액 1 mL 씩을 넣어 섞고, 다시 나프칠에틸렌디아민용액 1 mL씩을 넣고 물을 넣어 25 mL로 하여 잘 섞는다. 물 20 mL로 동일하게 조작한 것을 대조액으로 하여 20분후에 파장 540 nm에서 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.

(2) ～ (8) (생  략)

12. 어육가공품

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) 아질산이온

11. 식육 또는 알가공품 6) 시험방법 (1) 아질산이온에 따라 시험한다.

(2) ～ (5) (생  략)

13. 두부류 또는 묵류

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) (생  략)

(2) 전두부

대두(대두분 포함, 100%, 단 식염제외)를 미세화하여 얻은 전두유액에 응고제를 가하여 그대로 응고시킨 것을 말한다.

(3) ～ (5) (생  략)

5) ～ 6) (생  략)

14. 식용유지류

1) ～3) (생  략)

4) 식품유형

(1) ～ (7) (생  략)

(8) 해바라기유

해바라기의 씨로부터 채취한 원유를 식용에 적합하도록 처리한 것으로 해바라기유, 고올레산해바라기유를 말한다.

(9) ～ (20) (생  략)

5) 규격

콩기름～ 미강유 (생  략)

유형 항목	참기름	추출 참깨유	들기름	추출 들깨유
(1) 산가	(생 략)
(2) 요오드가	(생 략)		192∼209	192∼209
(3) ～ (5)	(생 략)

홍화유 ～ 고올레산홍화유 (생  략)

유형 항목	해바라기유	고올레산 해바라기유
(1) 산가	0.6 이하	(생 략)
(2) 생 략	(생 략)	(생 략)

목화씨기름 ～ 기타식용유지 (생  략)

15. 면류

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 국수

곡분 또는 전분 등을 주원료로 하여 제조한 것을 말한다.

(2) ～ (6) (생  략)

5) ～ 6) (생  략)

16. (생  략)

17. 커피

1) 정의

커피라 함은 커피원두를 가공한 것이거나 또는 이에 식품 또는 식품첨가물을 가한 볶은커피, 인스턴트커피, 조제커피, 액상커피를 말한다.

2) ～3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 볶은커피

커피원두를 볶은 것 또는 이를 분쇄한 것을 말한다.

(2) 인스턴트커피

볶은커피의 가용성추출액을 건조한 것을 말한다.

(3) 조제커피

볶은커피 또는 인스턴트커피에 식품 또는 식품첨가물을 혼합한 것을 말한다.

(4) 액상커피

볶은커피의 추출액 또는 농축액이나 인스턴트커피를 물에 용해한 것 또는 이에 당류, 유성분, 비유크림 등을 혼합한 것을 말한다.

5) ～ 6) (생  략)

18. 음료류

18-1 과일․채소류음료

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (6) (생  략)

(7) (생  략)

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(안식향산으로서, 다만, 가열하지 아니한 제품은 검출되어서는 아니된다)
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.1 이하(파라옥시안식향산으로서, 다만, 가열하지 아니한 제품은 검출되어서는 아니된다)
소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	1.0 이하(소르빈산으로서, 다만, 농축과즙에 한한다)

6) (생  략)

18-2 ～ 18-4 (생  략)

18-5 인삼․홍삼음료

1) (생  략)

2) 원료 등의 구비요건

(1) (생  략)

(2) 수삼은 3년근 이상으로서 춘미삼, 삼피, 인삼박은 사용할 수 없으며 병든삼인 경우에는 병든 부분을 제거하고 사용할 수 있다.

3) ～ 6) (생  략)

18-6 기타음료

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) (생  략)

(2) 추출음료

식물성원료를 먹는물로 가공하여 액상으로 만든 것이거나 이에 식품 또는 식품첨가물을 가한 것을 말한다.

(3) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (7) (생  략)

(8) (생  략)

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(안식향산으로서)
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.1 이하(파라옥시안식향산으로서)

19. 특수용도식품

19-1 영아용 조제식

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (29) (생  략)

(30) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(31) ～ (36) (생  략)

19-2 성장기용 조제식

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (26) (생  략)

(27) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(28) ～ (32) (생  략)

19-3 영․유아용 곡류조제식

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (10) (생  략)

(11) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(12) ～ (15) (생  략)

19-4 기타 영․유아식

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ～ (3) (생  략)

(4) 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

(5) ～ (10) (생  략)

19-5 ～ 19-7 (생  략)

20. 장류

1) ～4) (생  략)

5) 규격

(1) ～(4) (생  략)

(5) (생  략)

(생 략)	(생 략)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(안식향산으로서, 간장에 한한다)
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.25 이하(파라옥시안식향산으로서, 간장에 한한다)

6) (생  략)

21. 조미식품

21-1 식초

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 발효식초

과실술덧(주요), 과실착즙액, 곡물주, 곡물당화액, 주정 또는 당류 등을 원료로 하여 초산발효한 액과 이에 과실착즙액 또는 곡물당화액을 혼합․숙성한 것을 말한다. 이 중 감을 초산발효한 액을 감식초라 한다.

(2) ～ (3) (생  략)

22. 드레싱

23～24. (생  략)

25. 절임식품

1) ～4) (생  략)

5) 규격

(1)～(4) (생  략)

(5) (생  략)

소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	(생 략)
	0.5 이하[소르빈산으로서, 당절임(건조당절임 제외), 식초절임에 한함]
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(안식향산으로서, 오이초절임에 한함)

6) (생  략)

26. ～ 28. (생  략)

29. 기타식품류

29-1 땅콩 또는 견과류 가공품

29-2 (생  략)

29-3 전분

29-4～ 29-6 (생  략)

29-7 벌꿀류

1) ～ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) 벌꿀

① ～ ⑥ (생  략)

⑦ 인공감미료

제 10. 일반시험법 2.2 인공감미료에 따라 시험한다.

⑧ (생  략)

(2) (생  략)

29-8 ～ 29-9 (생  략)

29-10 추출가공식품

29-11 (생  략)

29-12 식염

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 천일염

염전에서 해수를 자연 증발시켜 얻은 염화나트륨이 주성분인 결정체와 이를 분쇄, 세척, 탈수과정을 거친 염을 말한다.

(2) ～ (6) (생  략)

5) ～ 6) (생  략)

29-13 밀가루

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 밀가루

① 강력 밀가루 : 경질밀을 주원료로 사용하여 제조한 밀가루를 말한다.

② 중력 밀가루 : 경질밀과 연질밀 원료를 사용하여 제조한 밀가루를 말한다.

③ 박력 밀가루 : 연질밀을 주원료로 사용하여 제조한 밀가루를 말한다.

(2) ～ (3) (생  략)

5) 규격

구분 항목	밀가루(강력, 중력, 박력)			영양강화 밀가루	기타 밀가루
	1등급	2등급	3등급
(1)성상	(생 략)			(생 략)	(생 략)
(2) ～ (6) (생 략)	(생 략)			(생 략)	(생 략)

6) (생  략)

제 6. ～ 제 8. (생  략)

제 9. 검체의 채취 및 취급방법

1.～ 2 (생  략)

3. 검체채취의 일반원칙

1)～ 5) (생  략)

6) 일반적으로 검체는 제조번호, 제조년월일, 유통기한이 동일한 것을 검사대상으로 하나, 품종, 식품유형, 제조회사, 기호, 수출국, 수출년월일, 도착년월일, 적재선, 수송차량, 화차, 포장형태 및 외관 등의 상태를 잘 파악하여 그 식품의 특성 및 검사목적을 고려하여 채취하도록 한다.

7) ～ 10) (생  략)

4. ～ 6. (생  략)

제 10. 일반시험법

1. 식품성분시험법

1.1. 일반성분시험법

1.1.1. ～ 1.1.4. (생  략)

1.1.5. 지질

1.1.5.1. ～ 1.1.5.2. (생  략)

1.1.5.3. 화학적 시험

1.1.5.3.1. ～ 1.1.5.3.2. (생  략)

1.1.5.3.3. 요오드가

가. (생  략)

나. 위이스법

1) (생  략)

2) 시험조작

검체의 요오드를 감안하여 적당량의 검체를 250 mL의 마개달린 삼각플라스크에 취하고 사염화탄소 15～20 mL를 가하고 일염화요오드시액 25 mL를 피펫으로 일정한 속도로 적가한다. 다음에 암소에 30분간(요오드가가 100이상의 것은 1시간) 방치한 다음 1 N 요오드화칼륨액 20 mL 및 물 100 mL를 가하여 흔들어 섞은 다음 유리한 요오드를 0.1 N 티오황산나트륨액으로 적정한다(지시약 전분시액1 mL). 같은 방법으로 공시험을 한다. 계산은 하누스법에 따라 한다.

1.1.5.3.4. ～ 1.1.5.3.5.(생  략)

1.1.5.4. ～ 1.1.5.6. (생  략)

1.1.6. (생  략)

1.2 미량영양성분시험법

1.2.1 (생  략)

1.2.2 비타민류

1.2.2.1 ～ 1.2.2.6 (생  략)

1.2.2.7 비타민D

가. 액체크로마토그래피에 의한 정량

1) 장치

액체크로마토그래프 : 자외부검출기를 사용한다.

2) 시약 및 시액

가) 무알데히드에탄올：에탄올(특급) 1 L에 50% 수산화칼륨용액 5 mL 및 아연분말 5 g을 가하여 약 2시간 환류 후 증류한다. 다만, 처음 및 마지막 증류액 각각 10%는 버린다.

나) 벤젠, 아세토니트릴 및 헥산：특급품을 증류하여 사용한다.

다) 메탄올：액체크로마토그래프용

라) 비타민D 표준용액의 조제：비타민D2 또는 D3가 1 mL중 4 IU(0.1 μg) 함유하도록 무알데히드에탄올로 녹인다.

3) 시험용액의 조제

검체가 고체인 경우에는 분쇄기 등으로 잘게 마쇄하여 비타민D 2 IU(0.05 μg)이상 함유한 검체를 비누화 플라스크에 정밀히 취하여 피로갈롤․에탄올(1→10)용액 40 mL를 가하여 약하게 진탕혼합한다. 수산화칼륨(9→10) 10 mL를 가하고, 환류냉각관을 부착하여 비등수욕중에서 30분간 가열하여 비누화한다. 즉시 냉각하여 실온으로 되면 벤젠 100 mL를 가하여 15초간 강하게 진탕혼합한다. 침전이 생기면 이것이 가라앉을 때까지 방치한다. 다음에 250～300 mL 분액여두로 옮기고, 비누화용 플라스크의 침전물은 남겨둔다(침전물을 씻어서 옮기지 말것). 분액여두에 1N 수산화칼륨 100 mL를 가하여 15초간 강하게 진탕혼합한다. 방치하여 분리하고(벤젠층은 투명하지 않아도 된다) 혼탁한 물층을 버린다. 벤젠층에 0.5N 수산화칼륨 40 mL를 가하여 진탕혼합한 후 벤젠층을 적어도 물 40 mL씩 4회 매회 15초간 격렬하게 진탕혼합하여 세척한다. 세척액이 페놀프탈레인시액으로 알칼리의 반응을 나타내지 않을 때까지 세척한다. 분액여두를 수분간 방치하여 최후의 물 한방울까지 분리하여 물층을 제거한다. 이 벤젠용액 80 mL를 플라스크에 취하여 40℃이하에서 용매를 감압농축한다. 잔류물에 벤젠 5 mL를 가하여 녹이고 이 액 4.5 mL를 10 mL의 공전시험관에 취하여 같은 방법으로 감압농축한다. 잔류물에 아세토니트릴․메탄올(1：1) 500 μL를 정확하게 가하여 녹이고 이를 시험용액으로 한다.

4) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 제1단계(분취용) 액체크로마토그래프

(가) 칼럼：역상칼럼(내경 7.5 mm, 길이 300 mm)

(나) 이동상：아세토니트릴：메탄올(1：1)

(다) 유속：2 mL/분

(라) 검출기：자외부(UV) 검출기(254nm)

(2) 제2단계(분석용) 액체크로마토그래프

(가) 칼럼：순상형 칼럼(내경 4.6 mm, 길이 250 mm)

(나) 이동상：0.4% 이소프로판올․헥산용액

(다) 유속：1.6 mL/분

(라) 검출기：자외부(UV) 검출기(254nm)

5) 정량시험

가) 제1단계(분취용) 액체크로마토그래프

시험용액 200 μL를 정확히 취해 제1단계 액체크로마토그래프에 주입하여 분획포집기로 비타민D 획분을 분취한다(비타민D 표준용액의 크로마토그램으로 비타민D가 검출기에 도달하는 시간을 측정하여 피크가 검출기에 도달하는 전후 30초 동안 분액을 받을 수 있도록 예비실험으로 분석조건을 준비한다).

나) 제2단계(분석용) 액체크로마토그래프

제1단계에서 얻은 비타민D 획분의 용매를 감압농축하여 잔류물에 0.4% 이소프로판올․헥산 200 μL를 정확히 가하여 녹인다. 이 용액 100 μL를 정확히 취하여 제2단계 액체크로마토그래프에 주입하여 얻어진 크로마토그램에 나타난 비타민D의 피크의 높이 또는 면적을 측정한다.

다) 비타민D 표준용액에 대한 조작

별도로 비타민D 표준용액 1 mL에 대하여 상기의 시험용액의 조제 및 시험조작 제1단계, 제2단계의 조작에 따라 실행한 후 비타민D의 피크의 높이 또는 면적을 측정한다.

라) 계산방법

검체 100 g중의 비타민D(IU) ＝	Psa	×	S	× 100
	Pst		검체채취량(g)

S Pst Psa	：비타민D 표준용액의 농도(IU/mL) ：비타민D 표준용액의 피크의 높이 또는 면적 ：검체에 대한 피크의 높이 또는 면적

1.2.2.8 비타민K1

가. 액체크로마토그래피에 의한 정량

1) 장치

액체크로마토그래프 : 자외부검출기를 사용한다.

2) 시약 및 시액

가) 용매：메탄올, 디클로로메탄, 이소옥탄, 아세톤 및 이소프로판올(액체크로마토그래프용)

나) Conditioning 용액：이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 0.01%가 되게 한다.

다) 용출용매(이동상)：디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 15%, 0.02%가 되게 한다.

라) 암모니아수(36%)

마) 무수황산나트륨

바) 표준용액의 조제

비타민K1 표준품은 trans와 cis 이성체를 함유하므로 각각의 이성체들을 분리하여 전체에 대한 cis형과 trans형의 피크 면적 비를 구한다(불활성형 cis형을 ≤20%정도 함유함). 암소에서 보관한다.

(1) 표준원액：비타민K1 표준품을 이소옥탄에 녹여 5 μg/mL가 되게 한다.

(2) 표준용액：표준원액을 이소옥탄으로 희석하여 0.7 μg/mL가 되게 한다.

3) 시험용액의 조제

가) 검체의 비누화와 추출

검체 일정량(비타민K1으로서 3.5 μg함유)을 정확히 취하여 500 mL 분액여두에 넣고 암모니아수 4 mL를 가한 후 60초간 흔들어 혼합한다. 여기에 60 mL의 메탄올을 가하고 30초간 혼합한 후 디클로로메탄 100 mL와 이소옥탄 50 mL 혼합액을 가하여 잘 흔들어 추출한다. 층 분리후 하층액을 1,000 mL 공전플라스크에 옮긴다. 다시 디클로로메탄 100 mL와 이소옥탄 50 mL 혼합액을 가하여 추출한 후 하층액을 합하고 이 액을 75℃ 이하에서 감압농축한다. 공전플라스크를 아세톤 20 mL로 씻고 그 액을 농축시키는 조작을 3회 반복한 후 질소 충전하여 차광한 채로 밀봉한다.

나) 시험용액의 정제

정제 칼럼에 conditioning 용액 20 mL를 주입하고 천천히 용출시켜 그 액을 버린다. 잔류물을 conditioning 용액 10 mL로 녹인 후 칼럼에 통과시켜 비타민K1을 흡착시킨다. 같은 용액으로 5 mL씩 2회에 걸쳐 공전플라스크를 씻고, 씻은 액을 칼럼에 넣은 후 conditioning 용액으로 용출하여 그 액을 버린다.  이어 검체의 지방 함량에 따라 양을 달리하여 용출용매를 칼럼에 통과시킨다(검체의 지방함량이 0.72～0.80 g이면 100 mL의 용매를, 0.72 g 이하이면 예비실험을 통해 용출액의 양을 결정한다). 용출액을 250 mL 공전플라스크에 받아 75℃ 이하에서 감압농축한다. 이 농축액을 이소옥탄 1～2 mL로 몇 회 나누어 씻어 5 mL로 정용한다.

－ 정제칼럼：60～200 메쉬 실리카 5.0 g(100℃ 칼럼오븐에서 하룻밤 동안 활성화시킴)을 정제 칼럼(1.0 cm id×30 cm, 유리 칼럼)에 충전하고 그 위에 무수황산나트륨 2.0 g(100℃ 칼럼오븐에서 하룻밤 동안 활성화시킴)을 가한다.

4) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼：5 μm실리카가 충전된 250×4.6 mm id의 순상형 칼럼

(2) 이동상：디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 30%, 0.02%가 되게 한다.

(3) 검출기：자외부(UV)검출기(254nm)

5) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 20 μL씩 주입하여 얻은 표준용액의 피크면적 또는 높이에 대해 구한 검량선을 사용하여 검체중 비타민K1(C)의 함량을 구한다. 비타민K1의 함량은 각 이성체의 농도의 합으로 계산하며 옥수수유를 포함하는 조제유류는 trans-비타민K1만을 계산한다.

가) 계산방법

C(μg/100 g)＝Cstd × F ×[eqn: rm {H_s } over {H_std} TIMES {V} over {S} TIMES 100]

Cstd：표준용액의 농도(μg/mL)

F：비타민K1 표준용액에서 각각의 이성체의 비율

Hs ：검체의 비타민K1 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

Hstd：비타민K1 표준용액 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

V  ：희석배수

S   ：검체 채취량(g)

<신  설>

1.2.2.9 ～ 1.2.212 (생  략)

1.2.2.13 엽산

1) (생  략)

2) 분석원리

곡물 및 식품에 함유된 엽산을  0.1 M 인산수소이칼륨용액(pH 8.0～9.0)으로 추출하고, 역상 분배형 칼럼을 이용하여 액체크로마토그라프에서 UV 350nm로 측정한다.

3) (생  략)

4) 시약 및 시액

가) 0.1 M 인산수소이칼륨용액(pH 8.0～9.0)：인산수소이칼륨 17.4 g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.

나) 표준원액 : 엽산 표준품(99.9%)를 0.1 M 인산수소이칼륨용액에 녹여 1000 mg/L이 되도록 조제한다.(4℃이하 암소 보관)

다) 표준용액 : 표준원액을 0.1 M 인산수소이칼륨용액으로 희석하여 10 mg/L로 조제한다.(사용 시 제조)

라) 이동상 A : octanesulfonic acid sodium salt 1.08g(0.005M), triethylamine 5ml, acetic acid 24ml, MeOH 100ml을 넣은 후 증류수를 가하여 1 L가 되게 한 뒤 0.22㎛ 필터로 여과하여 조제한다.

마) ～ 바) (생  략)

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체(1g～5g정도)를 50 mL 갈색 플라스크에 정확히 칭량하고, 0.1 M 인산수소이칼륨용액 첨가하여 50 mL로 정용하여 10분간 초음파 추출한 후 원심분리관으로 옮겨 20분간 shaker에서 격렬하게 흔들어 준 다음, 13,000rpm조건에서 10분간 원심분리를 실시하고, 상징액을 0.22㎛의 membrane filter로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 고속액체크로마토그래프의 측정조건

(1) ～ (2) (생  략)

(3) 이동상(Isocratic elution)

이동상 A: 메탄올을 5:1로 혼합하여 사용한다.

(4) 이동상 유속 : 0.6 mL/min

(5) 주입량 : 10μL

(6) 검출기파장 : 350nm

나) 검량선 작성

검량곡선표준용액을 액체크로마토그래프에 10 uL씩 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 2. 액체크로마토그래프 PDA 스펙트럼

<신  설>

라) 검출한계 :  0.01 mg/kg

7) ～ 8) (생  략)

1.2.2.14 콜린

1) ～ 3) (생  략)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생  략)

다) 표준원액 : 표준물질(순도 99% 이상)를 증류수에 녹여 콜린으로써 1000 mg/L이 되도록 조제한다.(주석산수소콜린 243 mg을 증류수 1L에 녹여 조제한다.)

라) ～ 바) (생  략)

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체(약 5 g)을 50mL 갈색 플라스크에 정확히 칭량하고, 증류수를 첨가하여 50 mL로 정용하고 10분간 초음파 추출한 후 원심분리관으로 옮겨 10분간 shaker에서 격렬하게 흔들어 준 다음, 4℃에서 15,000rpm으로 10분간 원심분리한 후 중간층을 취하여 0.45㎛의 membrane filter로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 고속액체크로마토그래프의 측정조건

(1) (생  략)

(2) 이동상(Isocratic elution)

18 mM 메탄설폰산 수용액 또는 18 mM 황산 수용액

(3) ～ (6) (생  략)

나) (생  략)

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 이온크로마토그래프에서 표준용액의 크로마토그램

라) 검출한계 : 0.05 mg/kg

7) ～ 8) (생  략)

1.2.2.15 비오틴

1) ～ 3) (생  략)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생  략)

다) 표준용액 : 표준원액을 증류수로 희석하여 10 mg/L로 조제한다.(사용 시 제조)

라) ～ 마) (생  략)

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체(약 5 g)을 50mL 갈색 플라스크에 정확히 칭량하고, 0.01 M 인산이수소칼륨용액을 첨가하여 50 mL로 정용하고 30분간 초음파 추출한 후 원심분리관으로 옮겨 10분간 shaker에서 격렬하게 흔들어 준 다음, 영아용 및 성장기용 조제식은 0℃에서 14,000rpm으로 90분간 원심분리한 후 중간층을 취하여 0.22㎛의 membrane filter로 여과한 후 시험용액으로 사용하고 비오틴 강화 표시식품은 0℃에서 9,000rpm으로 30분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 검량곡선표준용액 농도범위에 맞도록 0.01 M 인산이수소칼륨용액으로 희석하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 고속액체크로마토그래프의 측정조건

(1) ～ (3) (생  략)

(4) 육방전환밸브의 조작

(가) 전처리：0～8.3 min

(나) 농축：8.3～9.3 min

(다) 분석：9.3～30 min

(5) 주입량 :

영아용 및 성장기용 조제식 : 200 uL

비오틴 강화표시 식품 : 100 uL

(6) (생  략)

나) 검량선 작성

검량곡선표준용액을 액체크로마토그래프에 10 uL씩 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

라) 검출한계 : 0.01 mg/kg

7) ～ 8) (생  략)

2. 식품 중 식품첨가물시험법

2.1 보존료

(생  략)

2.1.1 데히드로초산, 소르빈산, 안식향산 및 그 염류, 파라옥시안식향산에스테르류

가. 박층크로마토그래피에 의한 정성

나. 자외선흡수스펙트럼에 의한 정량

다. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

1) ～ 2) (생  략)

3) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생  략)

다) 고정상담체：크로모솔브 W(60～80메쉬)

라) 칼럼충전제：고정상담체에 Ⓐ 디에틸렌글리콜석시네이트폴리에스텔(DEGS)을 2～5% 및 인산을 1% 입힌다(Coating). Ⓑ 네오펜틸글리콜석시네이트폴리에스텔(NPGS)을 10% 및 인산을 1% 입힌다.

4) 시험용액의 조제

나. 자외선흡수스펙트럼에 의한 정량시험 4) 시험용액의 조제에 따라 수증기 증류한 유액 일정량(각 보존료 5～10 mg 함유량)을 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10 g, 10% 염산 5 mL를 가하여 에테르 40, 30 및 30 mL씩으로 3회 추출한다. 에테르추출액을 합하여 소량의 물로 씻고 에테르층을 분취한다. 여기에 무수황산나트륨을 넣고 잠시 방치한 다음 쿠데르나다니쉬 농축기에서 에테르를 날려보낸다. 잔류물에 내부표준물질이 1 mL 중에 1.0 mg을 함유하도록 첨가하여 아세톤으로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : 길이 1～2 m, 안지름 3～4 mm, 스테인리스관

< 신  설 >

(2) 주입부 온도 : 210～230℃

(3) 검출기 온도 : 230～250℃

(4) 칼럼오븐온도 : 140～200℃

(5) 캐리어가스 및 유량 : N2 60 mL/min

6) ～ 7) (생  략)

라. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

1) ～ 3) (생  략)

4) 시험용액의 조제

나. 자외선흡수스펙트럼에 의한 정량시험 4) 시험용액의 조제에 따라 수증기 증류한 유액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) (생  략)

(2) 칼럼：역상계 C8 또는 C18 (5μm, 4.6 ×150mm)

(3) 이동상：A - 0.1% TBA-OH(0.1% 인산) 용액

B - 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	75	25
2.5	75	25
7.0	65	35
12.0	60	40
15.0	70	30

(4) ～(5) (생  략)

나) ～ 다) (생  략)

6) ～ 7) (생  략)

2.1.2 프로피온산 및 그 염류

가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

1) ～ 2) (생  략)

3) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생  략)

다) 프로피온산표준용액：피로피온산 0.1 g을 정밀히 달아 아세톤에 녹이고 100 mL로 한 액을  표준원액으로 한다. 프로피온산표준원액 1 mL 및 내부표준용액 1 mL를 취하고 아세톤으로 희석하여 10 mL로 한다(사용시 조제. 다만, 시험용액의 조제 나) 제2법을 적용할 때에는 아세톤으로 희석한다).

프로피온산 1 mL = 100 μg C3H6O2

4) 시험용액의 조제

가) (생  략)

나) 제2법

2.1.1 데히드로초산, 소르빈산, 안식향산 및 그 염류, 파라옥시안식향산에스테르류 나. 자외선흡수스펙트럼에 의한 정량시험 4) 시험용액의 조제 나) 제2법에 따라 얻어진 수증기 증류한 유액 또는 2.1.2 프로피온산 및 그 염류 가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량 4) 시험용액의 조제 가) 제1법에 따라 얻어진 수증기 증류한 유액 100 mL를 정확히 취하여 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10g, 인산 1 mL 및 내부표준용액 1 mL를 가하여 에테르 50 mL 씩으로 2회 추출하여 에테르층을 모은 뒤, 무수황산나트륨을 사용하여 수분을 제거하고 농축한 후, 아세톤을 가하여 최종 부피가 10 mL가 되도록 하여 시험용액으로 한다.

5) ～ 7) (생  략)

2.1.3 소르빈산, 안식향산 및 그 염류

가. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

1) 분석원리

식품 중의 소르빈산, 안식향산 및 그 염류를 물로 추출하고 C18 SPE 카트리지로 정제한 후, 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 액체크로마토그래프 : 자외부흡광검출기를 사용한다.

3) 시약 및 시액

가) 이동상 메탄올：50 mM 인산완충액(pH 5.0)[40：60]

나)표준용액：소르빈산, 안식향산 20 mg을 메탄올에 녹여 250 mL로 한다. 사용할 때 이 액을 적당량 취하여 메탄올로 희석한다.

다) 0.005M CTA용액

25% Cetyltrimethylammonium chloride 용액을 희석하여 조제한다.

4) 시험용액의 조제

검체 5 g을 취하여 물로 25 mL가 되게 희석한 후 이 액 5 mL를 취해 1 N 염산 0.5 mL와 0.005 M CTA용액 0.5 mL를 가하여 섞어준 후 메탄올 10 mL, 물 10 mL, 0.005 M CTA용액 10 mL로 차례로 흘려 씻어준 Sep-Pak C18 카트리지에 시험용액을 2 mL/분의 속도로 가한다. 이어서 물 10 mL로 카트리지를 씻고 메탄올 10 mL로 용출시켜 전량을 메탄올로 10 mL가 되게 한다. 이 액을 0.45 μm의 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기 : 자외부흡광검출기(UV Detector), 230 nm

(2) 칼럼：Capcell PAK C18 MG 또는 이와 동등한 것

(3) 이동상：메탄올：50 mM 인산완충액(pH 5.0)[40：60]

(4) 이동상유량：0.8～1.2 mL/분

(5) 주입량 : 10～20 μL

(6) 감도 : 0.05 AUFS

6) 정성시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 다음 식에 따라 검체중의 각 보존료의 함량을 산출한다.

보존료(g/kg) ＝ 각 표준용액의 농도(mg/kg) ×	PA	×	50	×	1
	PS		SA		1,000

PS PA SA	: 표준용액의 높이 또는 면적 : 시험용액의 높이 또는 면적 : 검체의 채취량(g)

2.2 인공감미료

(생  략)

2.2.1 (생  략)

< 신  설>

2.3 (생  략)

2.4 착색료

2.4.1 타르색소(산성색소)

2.4.2 유용성색소(유용성타르색소 포함)

1) 분석원리

식품 중의 유용성색소를 추출한 후, 용매추출 등을 통하여 정제하고 농축한 다음 여지크로마토그래피, 박층크로마토그래피로 정성분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 실리카겔 박층

2.1 보존료 2.1.1 데히드로초산, 소르빈산, 안식향산 및 그 염류, 파라옥시안식향산에스테르류 가. 박층크로마토그래피에 의한 정성 2) 장치 (1) 박층의 제조에 따른다.

나) 여지(거름종이) : 여지크로마토그래피용

다) 전개조

3) 시약 및 시액

가) 전개용매

(1) 여지크로마토그래피

(가) 메탄올：초산：물(16：1：3)

(나) 아세톤：물(7：3)

(2) 박층크로마토그래피

(가) 키실렌

(나) 1,1,2-트리클로로에탄

(다) n-헥산：클로로포름(6：4)

(라) 초산이소아밀：n-헥산(15：100)

4) 시험용액의 조제

가) 수분이 많은 검체

검체 5～20 g(착색의 정도에 따라 채취량을 증감한다)에 약 5배량의 60v/v% 에탄올을 가하여 흔들어 섞으면서 30～60분간 방치하고 상징액은 분액깔때기에 취한다.

검체가 아직 착색이 되어 있을 때에는 점차적으로 에탄올의 농도를 높여 상징액이 착색되지 않을 때까지 앞의 조작을 되풀이 한다. 상징액은 앞의 상징액에 합치고 여기에 같은 양의 물 및 석유에테르 100 mL를 가하여 추출하고 잠시 방치한 다음 석유에테르층을 분취하여 시험용액으로 한다.

나) 수분이 적은 검체

검체 5～10 g(착색의 정도에 따라 채취량을 증감한다)을 200 mL의 플라스크에 취하고 석유에테르 100 mL를 가하여 때때로 흔들면서 방치한 다음 색소를 추출하고 이 액을 여과하여 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 용제에 의한 분리법

시험용액 30 mL를 분액깔때기에 취하고 같은 양의 N,N-디메틸포름아마이드를 가하여 추출한 다음 방치한다. 아래층의 N,N-디메틸포름아마이드용액을 분취하여 석유에테르 10 mL씩으로 3회 씻고 석유에테르를 버린다. 다음 물 30 mL를 가하여 혼합하고 잠시 방치하여 식힌 다음 클로로포름 10 mL를 가하여 흔들어 섞고 잠시 방치할 때, 클로로포름층이 착색되지 않으면 불검출로 하고, 착색되면 유용성색소의 존재가 추정되므로 다음의 나) 여지크로마토그래피 또는 다) 박층크로마토그래피에 의한 방법으로 시험한다.

나) 여지크로마토그래피

가)항에서 얻어진 클로로포름용액을 물로 씻은 다음 무수황산나트륨으로 탈수하고 저온에서 농축(약 0.1%의 농도)하여 시험용액으로 하고 크로마토그래피용 여과지(5%유동파라핀․석유에테르 중에 30분간 담근 다음 바람에 말린 것 400×60 mm) 및 다음의 전개용매를 이용하여 이하 위의 2.4.1 타르색소 가. 모사염색법에 의한 분리․정성법 6) 시험조작 가) 여지크로마토그래피에 따라 시험한다.

다) 박층크로마토그래피

나)항의 시험용액으로 실리카겔 박층(100℃에서 60분간 가열하여 활성화시킨 것) 및 3) 시약 및 시액 가)전개용매 (2) 박층크로마토그래피의 전개용매를 이용하여 2.4.1 타르색소 가. 모사염색법에 의한 분리․정성법 6) 시험조작 나) 박층크로마토그래피에 따라 시험한다.

2.5 (생  략)

<신  설>

3.～5. (생  략)

6. 식품 중 자연독소시험법

6.1 곰팡이독소

6.1.1 아플라톡신(B1, B2, G1 및 G2)

6.1.1.1 (생  략)

6.1.1.2 (생  략)

1) ～ 2) (생  략)

3) 장치

가) (생  략)

나) 정제용 칼럼 : 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column) AflaTest TM(VICAM) 또는 이와 동등한 것

다) ～ 라) (생  략)

4) ～ 8) (생  략)

6.1.2 ～ 6.1.3 (생  략)

6.1.4 푸모니신(Fumonisin)

(1) ～ (2) (생  략)

(3) 장치

① (생  략)

② 정제용 칼럼 : 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column) Fumoni Test 또는 이와 동등한 것

③ ～ ④ (생  략)

(4) ～ (7) (생  략)

6.1.5 오크라톡신 A(Ocratoxin A)

1) ～ 2) (생  략)

3) 장치

가) (생  략)

나) 오크라톡신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)

다) ～ 마) (생  략)

4) ～ 8) (생  략)

6.1.6 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

1) ～ 2) (생  략)

3) 장치

가) (생  략)

나) 정제용 칼럼 : 데옥시니발레놀용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)

다) (생  략)

4) ～ 7) (생  략)

6.1.7 제랄레논(Zearalenone)

1) ～ 2) (생  략)

3) 장치

가) (생  략)

나) 정제용 칼럼 : 제랄레논용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)

다) ～ 라) (생  략)

4) ～ 7) (생  략)

6.2 (생  략)

6.3 패독

6.3.1 마비성 패독

1) 시험법 적용범위

패류, 패류통조림, 패류염장품, 건조가공품

2) ～ 4) (생  략)

5) 시험용액의 조제

가) 검체의 채취

검체는 폴리에틸렌 용기에 넣고 10℃ 이하로 유지하여 신속하게 운반한다. 단, 껍데기를 제거한 패육이 200 g 이상이 되도록 채취하여야 한다.

나) 검체의 조제

(1) 패류

물로 패류의 외부를 깨끗이 씻은 후 껍데기를 제거하고, 내부의 모래나 이물질을 제거하기 위해 물로 씻은 후 칼로 패육을 취한다. 이때 가열하거나 약품을 사용해서는 아니 된다. 패육 100～150 g의 시료를 표준체(20 mesh)에 얹어 5분 동안 물을 뺀 후 균질기로 균질화한다.

(2) 패류통조림

(3) 패류염장품, 건조가공품

다) 추출

(1) 패류, 패류통조림

(생  략)

추출액을 70℃ 항온조에서 5분간 중탕하고 실온에서 방냉한 후 pH가 2.0～4.0(4.5를 넘어서는 안된다)이 되도록 다시 조정하고 물을 가하여 200 mL이 되게 한다. 비커에 옮긴 후 교반하고 상층부가 투명해질 때까지 정치하여 상층액을 시험원액으로 한다.

(2) 패류 염장품, 건조가공품

(생  략)

증류수 100 mL로 칼럼을 세척한 후 1% 초산함유 20% 에탄올용액 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 감압 농축시키고 잔류물을 0.01 N 염산 10 mL에 녹여  시험원액으로 한다.

6) ～ 7) (생  략)

6.3.2 (생  략)

6.4 (생  략)

7. 식품 중 유해물질시험법

7.1～ 7.7 (생  략)

7.8 벤조피렌

7.8.1 ～ 7.8.2 (생  략)

7.8.3 수산물 및 그 가공품 중 벤조피렌

1) 시험법 적용범위

수산물 및 그 가공품에 한한다.

2) ～ 5) (생  략)

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) ～ (2) (생  략)

(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(4) 이동상

시간(분)	아세토니트릴(%)	물(%)
0	80	20
20	100	0
25	100	0
27	80	20
40	80	20

(5) 검출기파장

시간(분)	여기파장(㎚)	방출파장(㎚)
0-15	254	390
15-26	260	420
26-40	293	498

나) ～ 라) (생  략)

7) ～ 8) (생  략)

7.9 (생  략)

8. 식품표시 관련 시험법

8.1 (생  략)

8.2. 방사선 조사식품 확인시험

8.2.1 (생  략)

8.2.2 열발광법 (Thermoluminescence, TL)

1) ～ 4) (생  략)

5) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생  략)

다) 1N 염산：염산 95 mL를 증류수로 희석하여 1,000 mL로 한다.

라) 4N 염산：염산 380 mL를 증류수로 희석하여 1,000 mL로 한다.

마) 1N 암모니아수：암모니아수(28%) 65 mL를 증류수로 희석하여 1,000 mL로 한다.

바) (생  략)

6) 검체조제 : 광물질(silicate minerals)의 분리

가)  (생  략)

나) 검체 100g(단, 소스류 200g, 2종 이상이 혼합된 식품 300g, 밤 500g, 생버섯 500g, 곡류 500g, 두류 500g 등 시료에 혼입된 광물질의 양에 따라 결정)을 증류수 적당량에 넣고 표면에 붙은 광물질이 분리되도록 5분간 초음파 처리한다.

<신  설>

다) ～ 사) (생  략)

아) 1 N 염산 2 mL를 가하고 10 분간 방치한다. (광물질의 함량이 많은 감자의 경우 4 N 염산 5 mL이상을 사용할 수 있다.)

자) 1 N 암모니아수 2 mL를 가하여 혼합하고 10분간 방치한다.

차) ～ 카) (생  략)

7) 시험조작 (생  략)

8) 판정

가) ～ 나) (생  략)

다) 방사선 조사된 검체는 150～250℃ 부근에서 최대 강도를 보이는 글로우곡선을 나타낸다.

라) TL 비가 0.1이상인 것은 방사선 조사된 것으로, 0.1 이하인 것은 방사선 조사되지 않은 것으로 판정한다.

(생  략)

8.2.3 ∼ 8.2.4 (생  략)

8.3 (생  략)

9. (생  략)

제 11. ∼ 제 12. (생  략)

제 1. 총칙

1. 일반원칙

1) ～ 22) (현행과 같음)

23) “타르색소”란 식용색소녹색제3호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소적색제2호및 그 알루미늄레이크, 식용색소적색제3호, 식용색소적색제40호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소적색제102호, 식용색소청색제1호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소청색제2호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소황색제4호 및 그 알루미늄레이크, 식용색소황색제5호 및 그 알루미늄레이크를 말한다.

2. ～ 3. (현행과 같음)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. (현행과 같음)

2. (현행과 같음)

1) (현행과 같음)

2) 식품원료 판단기준

(1) 다음의 어느 하나에 해당하는 것은--------------------

------------------------

------------------------

------------------------

인정한 것과 「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정기준」에 따라 인정된 것은 ------------.

① ∼ ③ (현행과 같음)

(2) ------------------------ ---------------------------------------------다만, 식품의약품안전청장은 식품원료의 안전성과 관련된 새로운 사실이 발견되거나 제시될 경우 식품의 원료로서 사용가능 여부를 재검토하여 판단할 수 있다.

(3) ------------------------ ----------------------------------------- 이외에 국내에서 식용근거가 ---------- ------------------------------------------------------------.

(4) (현행과 같음)

(5) (현행과 같음)

① (현행과 같음)

｢식품원료 사용을 위한 의사결정도｣

㉮ (현행과 같음)

㉯ 단순추출물 : 원재료를 물리적으로 또는 용매(물, 주정, 이산화탄소)를 사용하여 추출한 것으로 특정한 성분이 제거되거나 분리되지 않은 추출물(착즙포함)

㉰ 식품원료 사용가능 : “식품에 사용할 수 있는 원료” 또는 “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”로 사용 가능함

㉱ 식품원료 사용불가 : 식품원료로 사용이 불가능하나,「식품등의 한시적 기준 및 규격 인정기준」(식품위생법시행규칙 제5조 관련)에 따라 식품원료의 한시적 기준 및 규격으로 신청 가능함

② ------- 다음과 같다

㉮ (현행과 같음)

Ⓐ ∼ Ⓓ (현행과 같음)

<삭  제>

㉯ (현행과 같음)

Ⓐ 국내에서 식품으로 섭취하였음을 입증할 수 있는 자료

<삭  제>

㉰ -------- 부작용이 있는 경우 제출자료

Ⓐ ∼ Ⓓ (현행과 같음)

Ⓔ 독성이나 부작용의 원인물질에 대한 잔류기준이 설정되어 있는 경우, 규정 및 설정 사유, 최종제품에 대한 함유량 등에 관한 자료

<삭  제>

(6) (현행과 같음)

(7) (현행과 같음)

① (현행과 같음)

② (현행과 같음)

㉮ ---------------------- ------------------------ ----------- 가공 전 원재료의 중량을 기준으로 원료배합 시 -------------------.

㉯ ∼  ㉰ (현행과 같음)

<삭  제>

③ (현행과 같음)

(8) (현행과 같음)

3. ～ 4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 중금속 기준

(1) 어류의 중금속 기준

① ～ ③ (현행과 같음)

(2) 연체류 및 패류의 중금속 기준

① ～ ③ (현행과 같음)

(3) (현행과 같음)

(4) 건조 어․패류, 연체류 및 농산물의 중금속 기준 적용

(5) ～ (6) (현행과 같음)

6) ～ 8) (현행과 같음)

9) 패독소 기준

(1) 마비성 패독

대상식품	기준 (mg/kg)
패류	0.8 이하
피낭류(멍게, 미더덕, 오만둥이 등)

(2) (현행과 같음)

(3) 건조 수산물의 패독소 잠정 기준 적용

건조 과정으로 인하여 수분함량이 변화된 경우는 수분함량을 고려하여 적용한다.

10) ～ 16) (현행과 같음)

6. (현행과 같음)

제 3. ～ 제 4. (현행과 같음)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (4) (생  략)

(5) (현행과 같음)

(현행과 같음)	0.4g/kg 이하(병용할 때에는 디부틸히드록시톨루엔으로서 사용량, 부틸히드록시아니솔으로서 사용량 및 터셔리부틸히드로퀴논으로서 사용량의 합계가 0.4g/kg 이하)

(6) ～ (11) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 허용외 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(4) ～ (9) (현행과 같음)

2. 빵 또는 떡류

1) ～ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 빵류

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

익힌 것----------------------

---------------------------

----------

(2) ～ (3) (현행과 같음)

5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) (현행과 같음)

(2) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(3) ～ (5) (현행과 같음)

3. ～ 4. (현행과 같음)

5. 설탕

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) (현행과 같음)

(2) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(3) ～ (4) (현행과 같음)

6. 포도당

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) (현행과 같음)

(2) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(3) ～ (4) (현행과 같음)

7. 과당

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) (현행과 같음)

(2) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(3) ～ (4) (현행과 같음)

8. 엿류

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) (현행과 같음)

(2) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(3) (현행과 같음)

9. 당시럽류

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

10. (현행과 같음)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) 아질산이온

제 10. 일반시험법 2.6 발색제에 따라 시험한다.

(2) ～ (8) (현행과 같음)

12. 어육가공품

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) 아질산이온

제 10. 일반시험법 2.6 발색제에 따라 시험한다.

(2) ～ (5) (현행과 같음)

13. 두부류 또는 묵류

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) (현행과 같음)

(2) 전두부

---------------------------

---------------------------

----------가하여 응고시킨----

-----------

(3) ～ (5) (현행과 같음)

5) ～ 6) (현행과 같음)

14. 식용유지류

1) ～3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) ～ (7) (현행과 같음)

(8) 해바라기유

--------------------------  --------------------------

해바라기유(압착해바라기유 포함), ---------

(9) ～ (20) (현행과 같음)

5) 규격

콩기름～ 미강유 (현행과 같음)

유형 항목	참기름	추출 참깨유	들기름	추출 들깨유
(1) 산가	(현행과 같음)
(2) 요오드가	(현행과 같음)		160∼209	160∼209
(3) ～ (5)	(현행과 같음)

홍화유 ～ 고올레산홍화유 (현행과 같음)

유형 항목	해바라기유	고올레산 해바라기유
(1) 산가	.0.6이하 (압착해바라기유는 4.0 이하)	(현행과 같음)
(2)(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)

목화씨기름 ～ 기타식용유지 (현행과 같음)

15. 면류

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) 국수

곡분 또는 전분, 전분질원료, 변성전분 등을 ----------------.

(2) ～ (6) (현행과 같음)

5) ～ 6) (현행과 같음)

16. (현행과 같음)

17. 커피

1) 정의

--------------------------

----------------------------

-------- 것으로서 볶은커피(커피원두를 볶은 것 또는 이를 분쇄한 것), 인스턴트커피(볶은커피의 가용성추출액을 건조한 것),----------

2) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

< 삭  제 >

< 삭  제 >

< 삭  제 >

< 삭  제 >

5) ～ 6) (현행과 같음)

18. 음료류

18-1 과일․채소류음료

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (6) (현행과 같음)

(7) (현행과 같음)

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(다만, 농축과즙의 경우 소르빈산, 소르빈산칼륨 및 소르빈산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소르빈산으로서 사용량의 합계가 1.0g/kg 이하이어야 하며, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 0.6g/kg 이하이어야 한다. 또한 가열하지 아니한 제품은 검출되어서는 아니 된다)
< 삭 제 >	< 삭 제 >
소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	1.0 이하(농축과즙에 한하며, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소르빈산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.0g/kg 이하이어야 하고, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 0.6g/kg 이하)

6) (현행과 같음)

18-2 ～ 18-4 (현행과 같음)

18-5 인삼․홍삼음료

1) (현행과 같음)

2) 원료 등의 구비요건

(1) (현행과 같음)

(2) 춘미삼, ----------------- -----------------------------------------------------------------.

3) ～ 6) (현행과 같음)

18-6 기타음료

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) (현행과 같음)

<삭  제>

(2) (현행 (3)과 같음)

5) 규격

(1) ～ (7) (현행과 같음)

(8) (현행과 같음)

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산메틸과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하)
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.1 이하(안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 파라옥시안식향산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.1g/kg 이하)

19. 특수용도식품

19-1 영아용 조제식

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (29) (현행과 같음)

(30) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(31) ～ (36) (현행과 같음)

19-2 성장기용 조제식

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (26) (현행과 같음)

(27) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(28) ～ (32) (현행과 같음)

19-3 영․유아용 곡류조제식

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (10) (현행과 같음)

(11) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(12) ～ (15) (현행과 같음)

19-4 기타 영․유아식

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

(5) ～ (10) (현행과 같음)

19-5 ～ 19-7 (현행과 같음)

20. 장류

1) ～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～(4) (현행과 같음)

(5) (현행과 같음)

(현행과 같음)	(현행과 같음)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(간장에 한한다. 파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산메틸과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.25g/kg 이하))
파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.25 이하(간장에 한한다. 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 파라옥시안식향산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 0.6g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.25g/kg이하))

6) (현행과 같음)

21. 조미식품

21-1 식초

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) 발효식초

과실․곡물술덧(주요), 과실주,----

----------------------------

----------------------------

----------------------------

----------------------------

----------------------------

---

(2) ～ (3) (현행과 같음)

22. 드레싱류

23～ 24. (현행과 같음)

25. 절임식품

1) ～4) (현행과 같음)

5) 규격

(1)～(4) (현행과 같음)

(5) (현행과 같음)

소르빈산 소르빈산칼륨 소르빈산칼슘	(현행과 같음)
	0.5 이하[소르빈산으로서, 당절임(건조당절임 제외), 식초절임(오이초절임 제외)에 한함]
	0.5 이하(오이초절임에 한함, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 및 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소르빈산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(오이초절임에 한함. 소르빈산, 소르빈산칼륨 및 소르빈산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소르빈산으로서 사용량의 합계가 1.5g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소르빈산으로서의 사용량은 0.5g/kg 이하) )

6) (현행과 같음)

26. ～ 28. (현행과 같음)

29. 기타식품류

29-1 땅콩 또는 견과류 가공품류

29-2 (현행과 같음)

29-3 전분류

29-4 ～ 29-6 (현행과 같음)

29-7 벌꿀류

1) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) 벌꿀

① ～ ⑥ (현행과 같음)

⑦ 인공감미료

---------- 2.2.1 삭카린나트륨에 -----------

⑧ (현행과 같음)

(2) (현행과 같음)

29-8 ～ 29-9 (현행과 같음)

29-10 추출가공식품류

29-11. (현행과 같음)

29-12 식염

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) 천일염

---------------------------

--------------------------

---------탈수 또는 건조한 염을 말한다.

(2) ～ (6) (현행과 같음)

5) ～ 6) (현행과 같음)

29-13 밀가루류

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) 밀가루

< 삭  제 >

< 삭  제 >

< 삭  제 >

(2) ～ (3) (현행과 같음)

5) 규격

구분 항목	밀가루			영양강화 밀가루	기타 밀가루
	1등급	2등급	3등급
(1)성상	(현행과 같음)			(현행과 같음)	(현행과 같음)
(2) ～ (6) (생 략)	(현행과 같음)			(현행과 같음)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

제 6. ～ 제 8. (현행과 같음)

제 9. 검체의 채취 및 취급방법

1.～ 2 (현행과 같음)

3. 검체채취의 일반원칙

1)～ 5) (현행과 같음)

6) -------------------------

-------------------------

하나의 검사대상으로 하고 이와 같은 표시가 없는 것은 ------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------.

7) ～ 10) (현행과 같음)

4. ～ 6. (현행과 같음)

제 10. 일반시험법

1. 식품성분시험법

1.1. 일반성분시험법

1.1.1. ～ 1.1.4. (현행과 같음)

1.1.5. 지질

1.1.5.1. ～ 1.1.5.2. (현행과 같음)

1.1.5.3. 화학적 시험

1.1.5.3.1. ～ 1.1.5.3.2. (현행과 같음)

1.1.5.3.3. 요오드가

가. (현행과 같음)

나. 위이스법

1) (현행과 같음)

2) 시험조작

-------------------------- ---------------------------------------------사염화탄소  또는 클로로포름 ---------------- ---------------. ------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

------------.

1.1.5.3.4. ～ 1.1.5.3.5.(현행과 같음)

1.1.5.4. ～ 1.1.5.6. (현행과 같음)

1.1.6. (현행과 같음)

1.2 미량영양성분시험법

1.2.1 (현행과 같음)

1.2.2 비타민류

1.2.2.1 ～ 1.2.2.6 (현행과 같음)

1.2.2.7 비타민D

가. 액체크로마토그래피에 의한 정량

1) 시험법 적용범위

영아용 조제식 및 성장기용 조제식 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료를 비누화하여 헥산으로 추출하고 그 추출물을 역상 분배형 칼럼을 이용한 육방전환밸브시스템으로 분리하여 254 nm 파장에서 자외부흡광검출기로 정량하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(UV Detector)

4) 시약 및 시액

가) 증류수 : 크로마토그래프용 혹은 이와 동등한 것

나) 헥산, 메탄올, 에탄올：액체크로마토그래프용 혹은 이와 동등한 것

다) 이동상 : 메탄올 900 mL에 에탄올 100 mL을 혼합한 용액을 830 mL 취하여 물로 1L가 되도록 조제하고 탈기하여 사용한다.(메탄올/에탄올/물 : 74.7/8.3/17 (v/v/v))

5) 표준용액의 조제

가) 표준원액 : 비타민 D3 100 mg을 메탄올 100 mL에 녹여 조제한다.(1000 ug/mL)

나) 검량곡선 표준용액 : 표준원액을 각각 10, 50, 100 ng/mL이 되도록 이동상으로 희석하여 조제한다.

6) 시험용액의 조제

검체가 고체인 경우에는 분쇄기 등으로 잘게 마쇄하여 비타민D를 2 IU(0.05 μg)이상 함유한 검체를 비누화 플라스크에 정밀히 취한다. 고체시료의 경우, 물 3 mL로 충분히 녹인 후, 피로갈롤․에탄올(1→10)용액 40 mL를 가하여 약하게 진탕 혼합한다. 수산화칼륨(9→10) 10 mL를 가하고, 환류냉각관을 부착하여 비등수욕 중에서 30분간 가열하여 비누화한다. 즉시 실온으로 냉각하고 갈색 분액깔대기로 옮긴 후, 헥산 50 mL를 가하여 10분간 강하게 진탕 혼합한다. 침전이 생기면 이것이 가라앉을 때까지 방치하여 헥산층을 250～300 mL 새로운 분액깔대기로 옮긴다. 50 mL 헥산 추출을 2회 더 반복하여 이전의 추출용매와 합하고 1N 수산화칼륨용액 100 mL를 가하여 15초간 강하게 진탕한다. 이를 방치하여 분리하고(헥산층은 투명하지 않아도 된다) 혼탁한 물층을 버린다. 헥산층에 0.5N 수산화칼륨용액 40 mL를 가하여 진탕한 후 물층을 다시 버린다. 헥산층을 세척하여 세척액이 페놀프탈레인시액으로 알칼리의 반응을 나타내지 않을 때까지 수회 세척한다. 세척 시 매회 15초간 격렬하게 진탕한다.  수세한 헥산층을 무수황산나트륨으로 탈수하여 갈색 플라스크로 옮기고 무수황산나트륨을 헥산 10 mL로 2회 세척한 후 탈수한 헥산용매와 합하고 이를 40℃이하에서 감압농축한다. 잔류물에 메탄올 5 mL를 가하여 녹여 이를 멤브레인 필터(PTFE  0.45 um)로 여과하여 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

가) 육방전환밸브를 이용한 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼

(가) 전처리칼럼：Capcellpak MF C8 SG 80(4.6 mm×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 농축칼럼：Capcellpak C18 UG 120V (2.0 mm×35 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(다) 분석칼럼：Capcellpak C18 UG 120V (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 전처리칼럼 이동상：4) 시약 및 시액 중 다) 이동상 참조.

(나) 분석칼럼 이동상：메탄올/에탄올(9:1, v/v) 혼합용액

(3) 유속

(가) 전처리칼럼 이동상：300 μL/min

(나) 분석칼럼 이동상：500 μL/min

(4) 육방전환밸브의 조작

전처리 칼럼에서 비타민D의 피크 용출시간을 그림 1.과 같이 확인하고 농축을 위한 육방전환밸브의 조작시간을 설정한다.

그림 1. 전처리 칼럼에서 2 mg/L 농도의 비타민D 표준용액의 크로마토그램(유속 : 300 uL/min)

(5) 주입량 : 210 uL

(6) 검출기：자외부(UV) 검출기(254nm)

나) 검량선 작성

검량곡선표준용액을 액체크로마토그래프에 210 uL씩 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

라) 정량한계 : 25 ug/kg

8) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

9) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 면적법에 따라 정량한다.

가) 계산방법

비타민D 함량(IU/100 g) =	Y' × K	V	×	100
		S		1000

Y' = 검량곡선에 대입하여 얻은 시험용액의 농도(ug/L)

K = 비타민D3의 무게전환계수 (40 IU/ug)

V = 최종용액의 부피(mL)

S = 시료의 무게(g)

1.2.2.8 비타민K1

가. 액체크로마토그래피에 의한 정량 [제1법]

1) 시험법 적용범위

영아용 조제식 및 성장기용 조제식 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료에 있는 trans형 비타민K1을 유기용매로 용해하여 추출하고 건고한 추출물을 2차 용매에 녹여 실리카겔 오픈칼럼으로 정제하고 순상칼럼을 이용한 액체크로마토그래피에서 자외부흡광검출기로 정량하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(UV Detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매：메탄올, 디클로로메탄, 이소옥탄, 아세톤 및 이소프로판올(액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것)

나) 컨디셔닝 용액：이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 0.01%가 되게 한다.

다) 용출용매(이동상)：디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 15%, 0.02%가 되게 한다.

라) 암모니아수(36%)

마) 무수황산나트륨

5) 표준용액의 조제

비타민K1 표준품은 trans와 cis 이성체를 함유하므로 각각의 이성체들을 분리하여 전체에 대한 cis형과 trans형의 피크 면적 비를 구한다(불활성형 cis형을 ≤20%정도 함유함). 암소에서 보관한다.

가) 표준원액：비타민K1 표준품을 이소옥탄에 녹여 5 μg/mL가 되게 한다.

나) 표준용액：표준원액을 이소옥탄으로 희석하여 0.7 μg/mL가 되게 한다.

6) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 일정량(비타민K1으로서 3.5 μg함유)을 정확히 취하여 500 mL 분액깔대기에 넣고 암모니아수 4 mL를 가한 후 60초간 흔들어 혼합한다. 여기에 60 mL의 메탄올을 가하고 30초간 혼합한 후 디클로로메탄 100 mL와 이소옥탄 50 mL 혼합액을 가하여 잘 흔들어 추출한다. 층 분리후 하층액을 1,000 mL 마개달린플라스크에 옮긴다. 다시 디클로로메탄 100 mL와 이소옥탄 50 mL 혼합액을 가하여 추출한 후 하층액을 합하고 이 액을 75℃ 이하에서 감압농축한다. 마개달린플라스크를 아세톤 20 mL로 씻고 그 액을 농축시키는 조작을 3회 반복한 후 질소 충전하여 차광한 채로 밀봉한다.

나) 시험용액의 정제

정제 칼럼에 컨디셔닝 용액 20 mL를 주입하고 천천히 용출시켜 그 액을 버린다. 잔류물을 컨디셔닝 용액 10 mL로 녹인 후 칼럼에 통과시켜 비타민K1을 흡착시킨다. 같은 용액으로 5 mL씩 2회에 걸쳐 마개달린플라스크를 씻고, 씻은 액을 칼럼에 넣은 후 컨디셔닝 용액으로 용출하여 그 액을 버린다. 이어 검체의 지방 함량에 따라 양을 달리하여 용출용매를 칼럼에 통과시킨다(검체의 지방함량이 0.72～0.80 g이면 100 mL의 용매를, 0.72 g 이하이면 예비실험을 통해 용출액의 양을 결정한다). 용출액을 250 mL 마개달린플라스크에 받아 75℃ 이하에서 감압농축한다. 이 농축액을 이소옥탄 1～2 mL로 몇 회 나누어 씻어 5 mL로 정용한다.

※ 정제칼럼：60～200 메쉬 실리카 5.0 g(100℃ 오븐에서 하룻밤 동안 활성화시킴)을 정제 칼럼(1.0 cm id×30 cm, 유리 칼럼)에 충전하고 그 위에 무수황산나트륨 2.0 g(100℃ 오븐에서 하룻밤 동안 건조시킴)을 가한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼：5 μm실리카가 충전된 250×4.6 mm id의 순상형 칼럼

(2) 이동상：디클로로메탄과 이소프로판올을 이소옥탄에 녹여 각각 30%, 0.02%가 되게 한다.

(3) 검출기：자외부(UV)검출기(254nm)

8) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 20 μL씩 주입하여 얻은 표준용액의 피크면적 또는 높이에 대해 구한 검량선을 사용하여 검체 중 비타민K1(C)의 함량을 구한다. 비타민K1의 함량은 각 이성체의 농도의 합으로 계산한다.

※ 옥수수유를 포함하는 조제유류는 cis-비타민K1 피크에 간섭이 발생할 수 있음으로 trans-비타민K1의 함량만 정량이 가능하다.

가) 계산방법

각 비타민K1 이성체의 농도 C(μg/100 g)

＝	Cstd	×	F	×	Hs	×	V	×	100
					Hstd		S

Cstd：표준용액의 농도(μg/mL)

F：비타민K1 표준용액에서 각 각의 이성체의 비율

Hs ：검체의 비타민K1 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

Hstd：비타민K1 표준용액 각각의 이성체의 피크 면적 또는 높이

V：희석배수

S : 검체 채취량(g)

나. 액체크로마토그래피에 의한 정량 [제2법]

1) 시험법 적용범위

영아용 조제식 및 성장기용 조제식 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료 중 지방을 효소적으로 분해하여 지방산을 침전시킨 후 헥산으로 비타민K1를 추출하여 역상칼럼에서 분리하고 포스트 칼럼으로 환원시켜 형광을 이용하여 정량하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/형광검출기(FL Detector)

4) 시약 및 시액

가) 증류수 : 3차 증류수로 18 MΩ 이상인 것

나) Lipase : Candida rugosa를 기원으로 하는 것으로써 약 1000 unit/mg(Type VII, Sigma L-1754)의 활성이 있는 것 또는 동등한 효소 활성을 가진 것으로써 Pseudomonas와 Rhizopus를 기원으로 하는 것

다) 40% 수산화칼륨용액 : 40 g KOH를 증류수로 녹여 100 mL로 하여 조제한다.

라) 0.8 M 인산완충용액 : 54.0 g KH2PO4를 물 350 mL에 녹여 40% 수산화칼륨용액으로 pH를 7.9～8.0으로 조정하여 증류수로 희석하여 500 mL로 하여 조제한다.

마) 에탄올, 메탄올 : 액체크로마토그래피용 또는 동등한 것

바) 알콜혼합용매 : 에탄올과 메탄올을 95:5의 부피비로 혼합하여 조제한다.

사) 헥산, 디클로로메탄, 이소프로판올 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

아) 염화아연, 무수초산나트륨, 무수탄산칼륨 : 시약 특급 혹은 이와 동등한 것

자) 초산 : Glacial 급

차) 아연분말 : 입자 60 um 이하인 것(Merck 108774 또는 BDH 102964L) 또는 이와 동등한 것으로 개봉 후 즉시 사용한다.

카) 이동상 : 메탄올 900 mL에 디클로로메탄 100 mL을 혼합한 용매에 염화아연 1.37 g과 무수초산나트륨 0.41 g 및 초산 0.30 g을 메탄올 5 mL에 녹여 첨가하고 0.45 um 여지로 여과하고 탈기하여 조제한다.

5) 표준용액 조제

가) 표준원액 : 비타민K1 100 mg을  100 mL 이소프로판올에 녹여 조제한다.

나) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 2.5 ug/mL이 되도록 조제한다.

다) 검량곡선표준용액 : 표준용액을 각 각 0.25, 0.5, 0.75, 1.0 및 1.25 mL 취하여 메탄올로 100 mL이 되도록 한다.(6.25, 12.5, 18.75, 25.0, 31.25 ng/mL로 조제)

6) 시험용액 조제

※ 시험용액 조제 시 직접적인 태양광에 노출되지 않도록 실험을 진행한다.

가) 분해

고체시료는 1.0 g, 액체시료는 10.0 g을 시험관(200×24mmID)에 정밀하게 취하여 40℃이하의 미지근한 물 15 mL을 취하여 교반기를 이용하여 녹인다. 이 때 액체시료의 경우 미지근한 물 5 mL를 첨가한다. 인산완충용액 5.0 mL을 첨가하여 혼합하고 1.0 g의 lipase분말을 넣고 교반기로 혼합한다. 마개를 막고 고르게 균질화될 수 있도록 30～60초간 진탕하고 37±2℃에서 2시간 분해한다. 분해 시 20분 간격으로 15초간 진탕한다. 분해 후 수욕상에 담구어 냉각하고 10 mL 알콜혼합용액를 첨가하여 혼합한 후 1.0 g의 무수탄산칼륨을 첨가하여 혼합한다.

나) 추출

분해가 완료된 시험관에 30 mL 헥산을 첨가하여 마개를 한 후 10분간 격렬히 진탕하고 냉암소에 보관하여 층이 분리되도록 한다. 층분리가 잘 되지 않을 때에는 약 1000 rpm(200 g)로 10분간 원심분리한다. 헥산 상층액을 1.0mL 취하여 바이얼로 옮기고 질소농축하여 메탄올 1 mL로 잔류물을 다시 용해하여 시험용액으로 한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 분석칼럼 : C18 칼럼으로 carbon loading량이 10% 이상인 것 (4.6mm×250mm, 5㎛)

(2) 포스트 칼럼 : 4.0mmI.D×20mm (WAT084550) 또는 이와 동등한 것 혹은 내경 2.0～4.0 mm 및 길이 30～50 mm 의 액체크로마토그래피 칼럼관에 아연분말을 채워 제작한 것으로 분석칼럼과 형광검출기 사이에 장착한다.

※ 포스트 칼럼 제작 시 빈 공간이 생기지 않도록 주의하여 아연분말을 채우고 장착하기 전 30분간 이동상을 약 1 mL/min의 유속으로 흘려 평형이 이루어지는지 확인하고 장착 후 30～60분 이상 시스템을 안정화하여 분석한다.

(3) 칼럼온도 : 30℃

(4) 이동상 유속 : 0.8 mL/min

(5) 주입량 : 10μL

(6) 형광검출기파장 : 여기파장(λex); 243 nm, 측정파장(λem); 430 nm

나) 검량선 작성

검량곡선표준용액을 액체크로마토그래프에 10 uL씩 각각 주입하여 얻어진 크로마토그램 상의 각 피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램(포스트 칼럼 : 2.0mmID×35mm 제작하여 사용)

라) 정량한계 :  180 ug/kg

8) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

9) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 면적법에 따라 정량한다.

가) 계산방법

비타민K1 함량(ug/100 g) =	Y' ×	30	×	1	×	100
		V		S		1000

Y' = 검량곡선에 대입하여 얻은 시험용액의 농도(ug/L)

V = 시료특성에 따라 취한 헥산의 부피(mL)

S = 시료의 무게(g)

1.2.2.9 ～ 1.2.2.12 (현행과 같음)

1.2.2.13 엽산

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

--------------------------- 10 mM 인산완충용액(pH 8.0)으로 -------------------------------- 분리하고 UV 280 nm에서 -------.

3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) 10 mM 인산완충용액(pH 8.0)：10 mM 인산수소이나트륨 용액에 10 mM 인산이수소나트륨 용액을 가하여 pH 8.0로 조정하여 제조한다.

나) ------ : ------------ ----- 0.1 N NaOH 수용액 ------------------------- ---------------

다) ------- : -------- 이동상 A로 -------------------- ------------------------

-------

라) -------- : Tetrabutyl ammonium bromide 1.6120g (5 mM)을 pH 7.2로 조정한 인산완충용액을 ---------------

-------------------------

-------------------------

----

마) ～ 바) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

------------(약 2 g)------- -------------------------------- 10 mM 인산완충용액(pH 8.0)을 ---------------------- ----------------------------5,000 rpm 조건--------------- ---------------------------------------------------------------------------------.

6) 시험조작

가) 고속액체크로마토그래프의 측정조건

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 이동상(Isocratic elution)

------- : 아세토니트릴을 8:2로 --------------.

(4) ------- : 1.0 mL/min

(5) ----- : 20μL

(6) -------- : 280nm

나) 검량선 작성

------------------------ ------- 20 uL씩 ------------

---------------------------

-----------

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 표준용액(1 ppm)의 크로마토그램

그림 2. 시험용액의 크로마토그램

그림 3. 액체크로마토그래프 PDA 스펙트럼

라) 정량한계 :  1.0 mg/kg

7) ～ 8) (현행과 같음)

1.2.2.14 콜린

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) ------- : -------------- ------------------------------------------------------------------------------------ 100 mL에  --------

라) ～ 바) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

----------(약 2 g)-------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

6) 시험조작

가) 고속액체크로마토그래프의 측정조건

(1) (현행과 같음)

(2) 이동상(Isocratic elution)

18 mN 황산 수용액 또는 18 mM 메탄설폰산 수용액

(3) ～ (6) (현행과 같음)

나) (현행과 같음)

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 표준용액(2.5 ppm) 및 시험용액의 크로마토그램

라) 정량한계 : 100 mg/kg

7) ～ 8) (현행과 같음)

1.2.2.15 비오틴

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) ------- : -------- 0.01 M 인산이수소칼륨용액(pH 4.8)으로 ----------------------

라) ～ 마) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

------------------------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 첨가된 식품은-------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

6) 시험조작

가) 고속액체크로마토그래프의 측정조건

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 육방전환밸브의 조작

전처리 칼럼에서 비오틴의 피크 용출시간을 확인하고 농축을 위한 육방전환밸브의 조작시간을 설정한다.

(5) 주입량 : 200 uL

(6) (현행과 같음)

나) 검량선 작성

------------------------ ----- 200 uL씩 ------------ --------------------------------------.

다) 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

그림 1. 표준용액 및 시험용액의 크로마토그램

라) 정량한계 : 0.1 mg/kg

7) ～ 8) (현행과 같음)

2. 식품 중 식품첨가물시험법

2.1 보존료

(현행과 같음)

2.1.1 데히드로초산, 소르빈산, 안식향산 및 그 염류, 파라옥시안식향산에스테르류

< 삭  제 >

< 삭  제 >

가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

<삭  제>

<삭  제>

4) 시험용액의 조제

가) 제1법

액체검체：보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 비커에 취하여 10% 수산화나트륨용액 또는 10% 염산으로 중화하고 이를 500 mL～1 L의 둥근바닥플라스크에 옮기고 이에 15% 주석산용액 5 mL, 염화나트륨 약 80 g 및 실리콘수지 한방울을 가한 후, 전량을 물로 150～200 mL로 한다. 이를 수증기 증류기에 연결하여 증류하고 유액은 매분 약 10 mL의 속도로 하여 500 mL를 취한다. 수증기 증류한 유액 일정량(각 보존료 5～10 mg 함유량)을 분액깔때기에 넣고 염화나트륨 10 g, 10% 염산 5 mL를 가하여 에테르 40, 30 및 30 mL씩으로 3회 추출한다. 에테르추출액을 합하여 소량의 물로 씻고 에테르층을 분취한다. 여기에 무수황산나트륨을 넣고 잠시 방치한 다음 쿠데르나다니쉬 농축기에서 에테르를 날려보낸다. 잔류물에 내부표준물질이 1 mL 중에 1.0 mg을 함유하도록 첨가하여 아세톤으로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

고체검체：검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 30～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하여 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

나) 제2법

(1) 수증기 증류기를 이용

액체검체 : 증류방법은 가) 제1법과 동일하며, 다만 15% 주석산용액은 10 mL를 가하고, 증류액을 받는 수기끝은 1% 수산화나트륨용액 20 mL에 잠기도록 하여 증류한다.

고체검체 : 검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하고 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

(2) 수증기 자동증류기를 이용

액체검체 : 보존료의 함량에 따라 검체 30～100 g을 비이커에 취하여 10% 수산화나트륨용액 또는 10% 염산으로 중화하고 이를 500 mL～1 L의 플라스크에 옮기고 이에 15% 주석산용액 10 mL, 염화나트륨 약 80 g 및 실리콘수지 한 방울을 가한 후, 적정량의 물을 추가한다. 이를 수증기 자동증류기에 연결하고 증류액을 받는 수기끝을 1% 수산화나트륨용액 20 mL에 잠기도록 하여 증류하고 유액은 매분 10 mL의 속도로 하여 500 mL를 취하여 시험용액으로 한다.

고체검체 : 검체를 잘게 썰거나 갈아서 보존료의 함량에 따라 검체 10～100 g을 취하여 물 50～100 mL를 가하고 잘 섞은 후 이하 액체검체와 동일하게 처리하여 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : HP-5(30m×0.32mm×0.25um) 또는 이와 동등한 것

(5%-phenyl- methylpolysiloxane)

(2) 검출기 : FID(불꽃이온화 검출기)

(3) (현행 (2)와 같음)

(4) (현행 (3)와 같음)

(5) (현행 (4)와 같음)

(6) ----------------- : N2, 1.0 mL/min(split)

6) ～ 7) (현행과 같음)

나. 액체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 시험용액의 조제

가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량시험 4) 시험용액의 조제에 따라 수증기 증류한 유액을 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) (현행과 같음)

(2) 칼럼：Capcell pak MF-C8(4.5μm, 4.6 ×150mm) 또는 이와 동등한 것

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% TBA-OH(0.1% 인산) 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	75	25
2.5	75	25
7.0	65	35
12.0	60	40
15.0	70	30

(4) ～ (5) (현행과 같음)

나) ～ 다) (현행과 같음)

6) ～ 7) (현행과 같음)

2.1.2 프로피온산 및 그 염류

가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) --------------:프로피온산---

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

-------------.(사용 시 조제)

-------------------------

4) 시험용액의 조제

가) (현행과 같음)

나) 제2법

---------------------------

---------------------------

--- 가. 기체크로마토그래피에 의한 정성 및 정량시험----------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

--------------------

5) ～ 7) (현행과 같음)

<삭  제>

2.2 인공감미료

(현행과 같음)

2.2.1 (현행과 같음)

2.2.2 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐 동시분석법

1) 분석원리

식품 중의 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐을 물로 추출후 여과하거나 반투막을 이용하여 투석한 후, 투석외액을 아세설팜칼륨과 삭카린나트륨은 역상계 및 강음이온교환형 카트리지, 아스파탐은 강양이온교환형 카트리지로 각각 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 정제용 카트리지

(1) 역상계 카트리지：Sep-pak C18 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

(2) 강음이온교환형 카트리지：Sep-pak QMA 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

(3) 강양이온교환형 카트리지：Bond Elut SCX 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

3) 시약 및 시액

가) 투석내액：염화나트륨 100 g 및 85% 인산 11.8g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

나) 투석외액：85% 인산 11.8g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

다) 0.1M TPA-Br용액：TPA-Br(Tetrapropylammonium bromide) 2.66 g을 물에 녹여 100 mL로 한다.

라) 혼합표준용액：삭카린나트륨을 120℃에서 4시간 건조시킨 후, 아세설팜칼륨 및 아스파탐은 그대로, 각각 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

마) 카레스(Carrez)침전제 : 제1액 15%페로시안화칼륨용액,

제2액 30%황산아연용액

4) 시험용액의 조제

가) 제1법

(1) 액상검체

검체 약 5 g을 취하고 물을 가해 50 mL로 하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 탄산가스가 있는 경우에는 10분간 초음파 처리하여 탄산가스를 제거하며 알코올을 함유한 경우는 70°의 수욕상에서 15분간 가온하여 알코올을 증발시켜 검체를 취한다.

(2) 고체 또는 반고체검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

(3) 단백질 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한다. 이 액에 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 흔들어 섞은 다음 다시 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 2분간 흔들어 섞는다. 발생한 거품은 초음파 처리하여 제거한 후 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

(4) 지방 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 분액깔때기에 옮겨 디에틸에테르 50 mL를 가한 다음 흔들어 정치하고 물층을 취한다. 이 조작을 2회 반복하여 지방성분을 제거한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

다만, 상기 (1)～(4)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 나) 제2법의 (2) 정제에 따라 시험한다.

나) 제2법

(1) 투석

액체검체는 10～20 g을 취하고, 고체 또는 반고체검체는 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 10～20 g 취한 다음 투석내액 약 20 mL를 가하여 혼합한다. 이 혼합액을 투석용 튜브(분자량 12,000～14,000, 미리 수세한 다음에 사용한다)에 넣고 튜브의 끝을 밀봉한다. 미리 투석외액 약 150 mL를 넣은 눈금이 있는 용기에 튜브를 넣고 투석외액을 가하여 전량을 약 200 mL로 한다. 때때로 흔들어 주면서 실온에서 15～48시간 방치하여 투석한 후 투석용 튜브를 제거하고 투석외액을 가해 200 mL로 하여 투석액으로 한다.

(2) 정제

(가) 아세설팜칼륨 및 삭카린나트륨

투석액 20 mL를 25 mL 메스플라스크에 넣고 0.1M TPA-Br용액 2 mL를 가한 다음 물을 가하여 25 mL로 한다. 이 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.5% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3N 염산 약 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

(나) 아스파탐

투석액 5 mL를 강양이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL를 사용하여 세척한 후 15% 염화나트륨용액 : 메탄올(50:50) 혼합액 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

5) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기 :자외부흡광검출기(UV), 210 nm

(2) 칼럼：Nova-Pak C18 또는 이와 동등한 것

(3) 칼럼온도 : 25～40℃의 일정온도

(4) 이동상：10% TPA-OH(Tetrapropyl

ammonium hydroxide) 20.3 mL를 메탄올：물(20：80)의 혼합액 약 900 mL에 녹이고 인산으로 pH를 4.0으로 조정한 다음 메탄올：물(20：80) 혼합액으로 전량을 1,000 mL로 한다.

(5) 이동상유량：1.0 mL/min

(6) 주입량 : 10～20 μL

6) 정성시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐의 피크는 어느 측정조건에서도 혼합표준용액과 시험용액의 머무름시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 아세설팜칼륨, 삭카린나트륨 및 아스파탐의 함량을 산출한다.

2.3 (현행과 같음)

2.4 착색료

2.4.1 타르색소(산성색소)

< 삭  제 >

2.5 (현행과 같음)

2.6 발색제

식육 또는 알가공품, 어육가공품 등 식품에 적용한다.

2.6.1 아질산이온

가. 디아조화법에 의한 정량

1) 분석원리

설파닐아미드를 산성조건에서 아질산이온에 의해 디아조화한 다음, N-(1-나프틸) 에틸렌디아민과의 결합에 의해 생성된 아조색소의 자홍색을 분광광도계로 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 분석광도계

3) 시약 및 시액

가) 초산암모늄완충액 : 초산암모늄 100 g을 물 약 900 mL에 녹이고, 10% 암모니아수로 pH 9.0으로 맞춘 다음 물을 넣어 1,000 mL로 한다.

나) 설파닐아미드용액 : 설파닐아미드 0.5 g을 염산(1＋1) 100 mL에 가온하여 녹인다.

다) 나프틸에틸렌디아민용액 : N-(1-나프틸) 에틸렌디아민염산염 0.12 g을 물 100 mL에 녹이고, 불순물이 있으면 여과한다. 이 용액은 갈색병에 보관한다.

라) 아질산표준용액 : 아질산나트륨(NaNO2최순품)을 황산데시케이터에서 24시간 건조한 후 그 0.150 g을 정밀히 달아 물에 녹여 1,000 mL로 하여 표준원액으로 한다. 표준원액 10 mL에 물을 넣어 100 mL로 하고, 그 액 2 mL에 물을 넣어 100 mL로 하여 표준용액으로 한다(쓸 때 만든다).

아질산표준용액 1 mL ＝ 0.2 μg NO—2

4) 시험용액의 조제

가) 식육가공품 및 어육가공품

세절한 검체 10 g을 정밀히 달아 약 80℃의 더운물을 적당량 넣고 고르게 섞는다. 이를 200 mL의 메스플라스크에 정량적으로 옮기고, 용기는 더운물로 여러번 씻어 플라스크에 넣는다. 이 때 플라스크 중의 액량은 약 150 mL로 한다.

★ 여기에 0.5 N 수산화나트륨용액 10 mL를 넣어 잘 흔들어 섞고 다시 12% 황산아연용액 10 mL를 넣어 잘 흔들어 섞은 후 80℃의 수욕중에서 가끔 흔들어 섞으면서 20분간 가열한다. 다음 찬물에 담그어 실온이 될 때까지 식힌 후 초산암모늄완충액 20 mL와 물을 넣어 200 mL로 한다. 내용물을 잘 혼화하여 10분간 방치한 후 여과(건조여지 사용)하여 최초의 여액 약 20 mL는 버리고 맑은 여액을 공전삼각플라스크에 받아 시험용액으로 한다. 따로 검체 대신에 물 10 mL를 사용하여 ★ 이하와 동일하게 조작한 액을 공시험용액으로 한다.

나) 알가공품

가)와 동일하게 조작하며 다만 0.5N 수산화나트륨용액 20 mL 및 12% 황산아연용액 20 mL를 사용한다.

5) 시험조작

시험용액 및 공시험용액 각 20 mL에 설파닐아미드용액 1 mL를 넣어 섞는다. 다시 나프틸에틸렌디아민용액 1 mL와 물을 넣어 25 mL로 하고 잘 섞어 발색시켜 20분간 방치한 후, 물 20 mL로 동일하게 조작한 것을 대조액으로 하여 파장 540 nm에서 흡광도 Aa, Ab를 측정한다. 시험용액이 착색되어 있을 때에는 시험용액 20 mL에 염산(1＋1) 1 mL와 물을 넣어 25 mL로 한 것을, 물을 대조액으로 하여 흡광도 Ac를 측정한다. 흡광도의 차 Aa—Ab 또는 Aa—(Ab＋Ac)를 구하여 미리 작성한 검량선에서 시험용액 20 mL 중의 아질산이온량 A(μg)를 구하고 다음 식에 따라 검체 중의 아질산이온의 농도를 산출한다.

아질산이온(g/kg) ＝[eqn: rm {A} over {S}]×[eqn: {1} over {100}]

S : 검체의 채취량(g)

검량선의 작성∶아질산이온표준용액 2, 5, 10, 15 및 20mL를 25mL의 메스플라스크에 취하고 각각의 물을 넣어 약 20 mL로 한다. 여기에 설파닐아미드용액 1 mL 씩을 넣어 섞고, 다시 나프틸에틸렌디아민 용액 1 mL씩을 넣고 물을 넣어 25 mL로 하여 잘 섞는다. 물 20 mL로 동일하게 조작한 것을 대조액으로 하여 20분후에 파장 540 nm에서 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.

3.～ 5. (현행과 같음)

6. 식품중 자연독소시험법

6.1 곰팡이독소

6.1.1 아플라톡신(B1, B2, G1 및 G2)

6.1.1.1 (현행과 같음)

6.1.1.2 (현행과 같음)

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 장치

가) (현행과 같음)

나) 정제용 칼럼 : 아플라톡신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)

다) ～ 라) (현행과 같음)

4) ～ 8) (현행과 같음)

6.1.2 ～ 6.1.3 (현행과 같음)

6.1.4 푸모니신(Fumonisin)

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 장치

① (현행과 같음)

② 정제용 칼럼 : 푸모니신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)

③ ～ ④ (현행과 같음)

(4) ～ (7) (현행과 같음)

6.1.5 오크라톡신 A(Ocratoxin A)

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 장치

가) (현행과 같음)

나) 정제용 칼럼 : 오크라톡신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성 등이 검증된 것)

다) ～ 마) (현행과 같음)

4) ～ 8) (현행과 같음)

6.1.6 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 장치

가) (현행과 같음)

나) 정제용 칼럼 : 데옥시니발레놀용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성이 검증된 것)

다) (현행과 같음)

4) ～ 7) (현행과 같음)

6.1.7 제랄레논(Zearalenone)

1) ～ 2) (현행과 같음)

3) 장치

가) (현행과 같음)

나) 정제용 칼럼 : 제랄레논용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)(회수율 및 재현성이 검증된 것)

다) ～ 라) (현행과 같음)

4) ～ 7) (현행과 같음)

6.2 (현행과 같음)

6.3 패독

6.3.1 마비성 패독

1) 시험법 적용범위

패류, 피낭류, 패류 및 피낭류 통조림, 패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품에 적용한다.

2) ～ 4) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

가) 검체의 채취

----------------------------

---------------------------

------------------------육이

---------------------------

---.

나) 검체의 조제

(1) 패류, 피낭류

----패류 및 피낭류의 외부를 깨끗이 씻은 후 껍데기를 제거하고 칼로 육을 취한다.(단, 패류의 경우 껍데기를 열고 내부의 모래나 이물질을 제거하기 위해 물로 씻은 후 칼로 패육을 취한다.)--------

-- 육 ----------------------

---------------------------

---------

(2) 패류 및 피낭류 통조림

(3) 패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품

다) 추출

(1) 패류, 피낭류, 패류 및 피낭류 통조림

(현행과 같음)

혼합액을 5분간 끓이고 --------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

------.

(2) 패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품

(현행과 같음)

물 100 mL로 칼럼을 ---------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

--------------.

6) ～ 7) (현행과 같음)

6.3.2 (현행과 같음)

6.4 (현행과 같음)

7. 식품 중 유해물질시험법

7.1～ 7.7 (현행과 같음)

7.8 벤조피렌

7.8.1 ～ 7.8.2 (현행과 같음)

7.8.3 수산물 및 그 가공품, 훈제식육가공품 및 특수용도식품 중 벤조피렌

1) 시험법 적용범위

수산물 및 그 가공품, 훈제식육가공품 및 특수용도식품에-------.

2) ～ 5) (현행과 같음)

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 이동상 : 아세토니트릴과 물의 혼합액 (8:2)

(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(5) 검출기파장 : 여기파장 294㎚, 형광파장 404㎚

나) ～ 라) (현행과 같음)

7) ～ 8) (현행과 같음)

7.9 (현행과 같음)

8. 식품표시 관련 시험법

8.1 (현행과 같음)

8.2. 방사선 조사식품 확인시험

8.2.1 (현행과 같음)

8.2.2 열발광법 (Thermoluminescence, TL)

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) 염산(HCl) : 1 N, 4 N, 6 N

<삭  제>

라) 암모니아수(NH4OH) : 1N 암모니아수

마) (현행 바)와 같음)

6) 검체조제 : 광물질(silicate minerals)의 분리

가)  (현행과 같음)

나) ---------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

----------------------------

단, 어패류 분말 등이 포함된 경우 검체를 둥근바닥플라스크에 취하고 적당량의 6 N 염산 을 넣은 후 100～120℃에서 2～3시간 환류냉각처리를 할 수 있다. 이 경우 냉각시킨 후 적당량의 증류수를 가하여 희석시킨다.

다) ～ 사) (현행과 같음)

아) -------------------------

---------------- 단, 6N 염산을 처리 한 경우 이 과정을 생략한다(광물질의 함량이 많은 감자의 경우 4 N 염산 5 mL 이상을 사용할 수 있다).

자) --------------------------

-------------------------

단, 6N 염산을 처리 한 경우 이 과정을 생략한다.

차) ～ 카) (현행과 같음)

7) 시험조작 (현행과 같음)

8) 판정

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) ------------150～250℃에서 -------------------------------------

라) -------------------------

------- 0.1 미만-----------

-----------------------------

----.

(현행과 같음)

8.2.3 ∼ 8.2.4 (현행과 같음)

8.3 ∼ 9.7 (현행과 같음)

9. (현행과 같음)

제 11. ∼ 제 12. (현행과 같음)