식품의약품안전청 고시 제2011-20호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2011.5.13.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 고시 제2011-20호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

농약의 잔류허용기준을 신설 및 개정하여 식품 안전관리를 강화하고, 식육가공품 및 알가공품의 미생물 규격, 체중조절용 조제식품 중 바실러스세레우스 규격, 식품접객업소에서 자가소비 목적으로 제조하여 사용하는 얼음의 규격을 개정하여 식품업계의 현실 여건을 반영하였으며, 미생물 일반시험법을 신설, 개정하여 검사의 신뢰성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.

2. 주요 내용

가. 농산물의 농약잔류허용기준 신설 및 개정〔안 제 2, 5, 10), (2) 별표 4 및 별표 5〕

(1) 「농약관리법」에 신규로 사용 등록된 농약 27종에 대한 잔류허용기준을 마련하여 농산물에 대한 관리 적정화

(2) 밀감에 대한 에티클로제이트와 인삼에 대한 톨크로포스-메틸의 잔류허용기준 합리화

나. 엔테로박터 사카자키(Enterobacter sakazakii)의 세균명 공동표기[안 제 2, 5, 13) 및 제 10, 3, 3.21)]

2008년 엔테로박터 사카자키(Enterobacter sakazakii)가 크로노박터(Cronobacter spp.) 5개종으로 재분류됨에 따른 세균명 공동표기

다. 식육 또는  알가공품 중 미생물규격의 단서조항 개정[안 제 5, 11, 5), (4), (5)]

(1) 식육가공품 및 알가공품의 명확한 미생물규격 적용을 위해 단서 조항 개정 필요

(2) 개별 유형을 합리적으로 적용할 수 있도록 세균수 및 대장균군에 대한 단서 조항 개정

라. 체중조절용 조제식품 중 바실러스 세레우스 규격 개정[안 제 5, 19-6, 5), (6)]

(1) 전통 장류를 식품원료로 사용하는 체중조절용 조제식품이 출시됨에 따라 원료의 특성을 감안한 바실러스 세레우스의 합리적인 규격 마련이 필요

(2) 체중조절용 조제식품에서 장류를 원료로 사용하는 제품에 대해 바실러스 세레우스 규격을 1 g당 1,000이하로 신설

마. 즉석섭취․편의식품류 중 장염비브리오균 단서조항 개정 [안 제 5, 29-18, 5), (5)]

조리과정을 반드시 거쳐야 섭취할 수 있는 즉석조리식품은 장염비브리오균 규격 적용 제외

바. 식품접객업소에서 사용하는 얼음 규격 개정 [안 제 8, 2, 1), (3)]

(1) 식품제조가공업소에서 생산․판매되는 얼음과 식품접객업소에서 자가 소비 목적으로 제빙기를 이용하여 생산하는 얼음은 제조 공정과 보관 및 취급이 상이하고 현실적인 제어가능성에서 많은 차이를 보이므로 식품접객업소의 현실적인 특성을 반영한 합리적인 규격 마련이 필요

(2) 식품접객업소의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격 중 원료의 구비요건에 식품접객업소에서 사용하는 얼음의 미생물 규격 마련

사. 식품접객업소의 규격 중 “조리기구 등”에 대한 대상 개정 [안 제8, 4, 다), (3)]

(1) 식품접객업소에서 식품의 조리에 사용하는 조리기구 등에 대한 명확한 범위가 미비

(2) 조리기구 중 식기류의 범위를 구체화하여 규격 적용 시 민원인의 혼선 방지

아. 일반시험법 개정

(1) 미생물시험법 개정

(가) 미생물시험의 일반사항 및 확인시험 신설 [안 제 10, 3, 3.1, 3.1.2]

(나) 미생물 배지 신설 [안 제 10, 3, 3.4, 3.4.1, 67), 68)]

황색포도상구균과 캠필로박터 제주니 검출을 위한 배지 신설

(다) 세균발육시험, 살모넬라, 클로스트리디움 퍼프린젠스, 리스테리아 모노사이토제네스, 대장균 O157:H7 시험법 개정 [안 제 10, 3, 3.6, 2), 나), 3.11, 3), 가), 나), 3.14, 3.14.1, 2), 3.15, 1), 3.16, 2)]

(라) 황색포도상구균, 캠필로박터 제주니 시험법 개정 [안 제 10, 3, 3.12, 3.12.1, 2), 3), 3.19, 1)]

3. 기타참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요없음

다. 합의 : 해당사항 없음

라. 기타 :  (1) 신․구조문 대비표 별첨

(2) 행정예고 : ’10.10.29 ～ 11.17,  ’10.12.31 ～ ’11.1.20

(3) 규제심사 : 규제대상 아님

식품의약품안전청 고시 제2011-20호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2011-17호, 2011. 4. 1.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2011년 5월13일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제 2, 5, 13) 중 “엔테로박터 사카자키 (Enterobacter sakazakii)”를 “엔테로박터 사카자키 [Enterobacter sakazakii(Cronobacter spp.)]”로 한다.

제 5, 11, 5), (4) 중 “살균제품에 한하며, 식육가공품은 음성이어야 한다”를 “가열제품 또는 살균제품에 한한다”로 하고, (5) 중 “다만, 살균제품”을 “단, 알가공품 중 살균제품”으로 한다.

제 5, 19-6, 5)의 (6)의 단서조항을 다음과 같이 신설한다.

(6) 바실러스 세레우스 : 1 g당 100 이하(단, 장류를 원료로 사용하는 제품은 1 g당 1,000이하)

제 5, 29-18, 5), (5)의 단서조항을 다음과 같이 한다.

(5) 장염비브리오균 : 음성이어야 한다(즉석섭취식품, 신선편의식품 중 해산물 함유 제품에 한한다)

제 8, 2, 1)의 (3)을 다음과 같이 한다.

(3) 식품접객업소에서 사용하는 얼음은 세균수가 1mL당 1,000이하, 대장균 및 살모넬라가 250mL당 음성이어야 하며, 기타 이화학적 규격은 제 5. 식품별 기준 및 규격 29-17 얼음류의 기준 및 규격에 적합한 것이어야 한다.

제 8, 4, 다)의 (3) “칼․도마 및 식기류(사용 중인 것은 제외한다)”를 “칼․도마 및 숟가락, 젓가락, 식기, 찬기 등 음식을 먹을 때 사용하거나 담는 것(사용 중인 것은 제외한다)”으로 한다.

제 10, 3, 3.1 일반사항을 신설하고, “3.1 검체채취의 일반사항”을 “3.1.1 검체의 채취”로 한다.

제 10, 3, 3.1, 3.1.2를 다음과 같이 신설한다.

3.1.2 확인시험

1) 균의 확인시험에서 각종 생화학시험은 국제적으로 공인된  kit 또는 장비를 이용할 수 있다.

2) 식중독균 정량검사 시 계수된 집락수가 규격치 이하일 경우 확인시험을 생략할 수 있다.

제 10, 3, 3.4, 3.4.1 중 67) 및 68)를 각각 다음과 같이 신설한다.

67) Baird-Parker RPF한천배지(Baird-Parker RPF Agar)

Tryptone	1 g

Beef Extract	0.5 g

Yeast Extract	0.1 g

Sodium Pyruvate	1 g

Glycine	1.2 g

Lithium Chloride 6H2O	0.5 g

Agar	2 g

위의 성분을 증류수 90 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 RPF Supplement를 첨가한다.

Bovine Fibrinogen	0.375 g

Trypsin Inhibitor	2.5 mg

Rabbit Plasma	2.5 mL

Potassium Tellurite	2.5 mg

위의 성분을 멸균증류수 10 mL에 녹인다.

68) Bolton 배지(Bolton Broth)

Meat Pepton	10 g

Lactalbumin Hydrolysate	5 g

Yeast Extract	5 g

Sodium Chloride	5 g

Haemin	0.01 g

Sodium Pyruvate	0.5 g

Alpha-Ketoglutaric acid	1 g

Sodium Metabisulphite	0.5 g

Sodium Carbonate	0.6 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 7.4로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50mL을 무균적으로 첨가하고 다음의 Supplement를 물과 에탄올을 동량 섞은 용액 10mL에 녹인 후 여과멸균하여 가한다.

Supplement 조성 : Sodium Cefoperazone 20 mg, Trimethoprim 20 mg, Vancomycin 20 mg, Cyclohexamide 50 mg

제 10, 3, 3.6, 2)세균시험에 ‘세균시험은 가온보존시험한 검체 3관에 대해 각각 시험한다’를 신설한다. 제 10, 3, 3.6, 2), 나) “배양한 후 세균증식이 확인된 것을”을 “배양한 후, 3관 중 어느 하나라도 세균증식이 확인되면”으로 한다.

제 10, 3, 3.11, 3), 가) “그람음성 간균임을 확인하고 urease 음성, Lysine decarboxylase 양성 등의 특성을 확인한다.”를 “그람음성 간균, urease 음성, Lysine decarboxylase 양성 등의 특성이 확인되면 살모넬라 양성으로 판정한다.”로 하며, 제 10, 3, 3.11, 3), 나) “Spicer-Edwards등과”를 “균종 확인이 필요한 경우 Spicer-Edwards등과”로 한다.

제 10, 3, 3.12, 3.12.1, 2) “Baird-Parker 한천배지(배지 63)에 접종하여”를 “Baird-Parker 한천배지(배지 63) 또는 Baird-Parker(RPF) 한천배지(배지 67)에 접종하여”로 하며, “검정색 집락은 확인시험을 실시한다.”를 “검정색 집락 또는 Baird-Parker(RPF) 한천배지에서 불투명한 환으로 둘러싸인 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.”로 한다.

제 10, 3, 3.12, 3.12.1, 3)을 다음과 같이 한다.

3) 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지 8)에 옮겨 35∼37℃에서 18∼24시간 배양한 후 그람염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람양성 구균을 확인한 후 coagulase 시험을 실시하며 24시간 이내에 응고유무를 판정한다. Baird-Parker(RPF) 한천배지에서 전형적인 집락으로 확인된 것은 coagulase 시험을 생략할 수 있다. Coagulase 양성으로 확인된 것은 생화학 시험을 실시하여 판정한다.

제 10, 3, 3.14, 3.14.1, 2) “TSC 한천배지(배지 41)에”를 “난황첨가 TSC 한천배지(배지 41)에”로 한다.

제 10, 3, 3.15, 1)을 다음과 같이 한다.

1) 증균배양

우유, 유제품, 가공식품 및 수산물의 검체에 대해서는 증균배지로 Listeria 증균배지(배지 35)를 사용하며, 검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 Listeria 증균배지를 가한 후 30℃에서 48시간 배양한다. 식육 및 가금류의 검체는 1차 증균배지로 UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36)를 사용하며, 검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 UVM-modified Listeria 증균배지를 225 mL 가한 후 30℃에서 24±2시간 배양한 후, 배양액 0.1 mL를 취하여 Fraser Listeria 배지(배지 37) 10 mL에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 2차 증균을 실시한다.

제 10, 3, 3.16, 2) “(0.05 ㎍/L)”를 “(0.05 mg/L)”로 하고, “(2.5 ㎍/mL)”를 “(2.5 mg/L)”로 한다.

제 10, 3, 3.19, 1)을 다음과 같이 한다.

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 supplement A가 첨가된 HUNT 배지(배지 47) 또는 Bolton 배지(배지 68) 100 mL에 넣고 균질화 한 후 35～37℃에서 4～5시간 동안 미호기적(5% O2, 10% CO2, 85% N2)으로 1차 증균하고 42℃에서 24∼48시간 미호기적으로 2차 증균한다. 다만, HUNT 배지를 사용할 경우, 일반식품은 2차 증균시 cefoperazone 용액(0.8 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하고 유제품은 1차 증균시 supplement B, 2차 증균시에는 rifampicin용액(0.125 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하여 배양한다.

제 10, 3, 3.21 “엔테로박터 사카자키 (Enterobacter sakazakii)”를 “엔테로박터 사카자키 [Enterobacter sakazakii(Cronobacter spp.)]”로 한다.

제 10, 4, 4.1.3.19 중 1)을 다음과 같이 한다

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 견과종실류, 두류, 채소류에 적용한다.

제 10, 4, 4.1.3.19, 2) 중 “측정한다”를 “분석한다”로 한다.

제 10, 4, 4.1.3.19 중 3) 및 4)을 각각 다음과 같이 한다

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 각각 농약의 표준품을 메탄올에 녹여 500 ㎍/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

제 10, 4, 4.1.3.19, 6) 중 가)를 다음과 같이 한다.

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(250 mm ×  4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상은 A 및 B 용액의 농도 구배조건에 따라 사용한다.

이동상 A : 0.2 M 과염소산나트륨 용액(pH 2)

이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A	B
0	98	2
2	98	2
6	50	50
10	98	2
20	98	2

(3) 이동상 유량 : 0.8 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 디쿼트 313 nm, 파라쿼트 257 nm

(6) 주입량 : 10 μL

제 10, 4, 4.1.3.19 중 7)을 삭제하고 8)을 다음과 같이 한다.

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

제 10, 4.1.3.20을 다음과 같이 한다.

4.1.3.20 벤설탑(bensultap), 칼탑(cartap) 및 티오싸이크람(thiocyclam)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 견과종실류, 과실류, 채소류, 버섯류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 벤설탑, 칼탑 및 티오싸이크람을 2% 시스테인 용액, 3% 염화니켈 용액 및 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신으로 전환시켜 헥산 및 에틸아세테이트로 액-액 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD, 황용 간섭필터, 파장 394 nm)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 옥살산수소 네레이스톡신(nereistoxin hydrogen oxalate) 표준품을 메탄올에 녹여 네레이스톡신(nereistoxin)으로써 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 0.1 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 μg/mL가 되게 한 후 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 단, 벤설탑은 환산계수 2.9[벤설탑의 분자량(432)/네레이스톡신 분자량(149)], 칼탑은 환산계수 1.6[칼탑의 분자량(237)/네레이스톡신 분자량(149)], 티오싸이크람은 환산계수 1.2[티오싸이크람의 분자량(181)/네레이스톡신 분자량(149)]을 곱하여 환산한다.

마) 2% 시스테인(cysteine) 용액 : 무수염산시스테인  (L-cysteine-HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산 용액 950 mL에 녹인 후 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 pH 4로 맞춘 다음 0.02 N 염산용액을 첨가하여 1,000 mL가 되게 한다.

바) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액 : 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 25 g(곡류는 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 25 g)을 정밀히 달아 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 넣고 2% 시스테인 용액 150 mL를 넣은 후 30분간 진탕 추출한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액 120 mL를 별도의 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 취한다. 여기에 3% 염화니켈 용액과 진한 암모니아수를 각각 4 mL씩 첨가한 다음 5분간 진탕한 후 70℃ 수욕상에서 1시간 동안 진탕 반응시킨다. 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 다음 10 N 황산 용액을 첨가하면서 pH 5로 맞춘 후 헥산 50 mL를 가하여 진탕한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 버린 다음 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하면서 pH 9로 맞춘다. 여기에 염화나트륨 12 g과 에틸아세테이트 100 mL를 가한 후 진탕하고, 다시 7600 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 다음 상등액(에틸아세테이트 층) 80 mL를 감압농축플라스크에 취하여 40 ℃ 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 메탄올 2 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 230℃

(4) 오븐 온도 : 100℃

(5) 검출기 온도 : 250℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.025, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

머무름 시간(분)

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 네레이스톡신(4.9분)

라) 정량한계

0.03 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 네레이스톡신을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 230℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10 ℃/min의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 2 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼200 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
8.9	149	149, 70, 103

(주. 분자량은 티오설탑이 전환된 네레이스톡신의 분자량임)

제 10, 4.1.4.140 이소티아닐(Isotianil)을 다음과 같이 신설한다.

4.1.4.140 이소티아닐(Isotianil)

1) 시험법 적용범위

곡류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이소티아닐을 아세토니트릴로 추출한 후 후로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소・인 검출기(GC-NPD, Gas Chromatograph - Nitrogen Phosphorus Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph-Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 이소티아닐 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤으로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5,  1.0, 2.0 mg/L가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 2% 디에틸렌글리콜(Diethylene glycol) 용액 : 디에틸렌글리콜 2 mL를 아세톤에 녹여 100 mL가 되게 한다.

바) 5 % 염화나트륨(Sodium chloride) 용액 : 염화나트륨 50 g을 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

사) 후로리실 카트리지 : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(1 g, 6 cc)를 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 정치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화하고 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 30℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔대기에 옮긴다. 이에 5% 염화나트륨 용액 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합한다. 여기에 2% 디에틸렌글리콜 0.2 mL를 첨가한 후, 30℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 2 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린 후 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이어서 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 2 mL를 고정상 상단에 가하여 15 mL 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL로 유출시켜 상기 시험관에 받는다. 이 유출액을 30℃ 이하 수욕상에서 질소 농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)을 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-17(30 m × 0.53 mm, 1 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 220℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

이소티아닐

↓

머무름 시간(분)

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

이소티아닐(8.8분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 이소티아닐을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 120℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 20℃/min의 비율로 220℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 260℃

(6) 이온원 온도 : 250℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼300 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
16.9	298	180, 91, 117

별표 4 (26) 디페노코나졸(Difenoconazole)  중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎          7.0

별표 4 (68) 싸이할로쓰린(Cyhalothrin)  중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎          3.0

별표 4 (112) 카벤다짐(Carbendazim)  중 다음 항목을 신설한다.

쑥갓            10

별표 4 (125) 클로로타로닐(Chlorothalonil)  중 다음 항목을 각각 신설한다.

복분자          1.0

풋마늘          1.0

별표 4 (141) 트리아디메놀(Triadimenol)  중 다음 항목을 신설한다.

취나물          3.0

별표 4 (149) 트리프루미졸(Triflumizole)  중 다음 항목을 신설한다.

돌나물          7.0

별표 4 (206) 클로르훼나피르(Chlorfenapyr) 중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎          7.0

별표 4 (209) 테플루벤주론(Teflubenzuron) 중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎          5.0

별표 4 (220) 디에토펜카브(Diethofencarb)  중 다음 항목을 신설한다.

쑥갓            30

별표 4 (227) 아세타미프리드(Acetamiprid)  중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎          10

별표 4 (228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin) 중 다음 항목을 신설한다.

근대            50

별표 4 (242) 루페누론(Lufenuron)  중 다음 항목을 각각 신설한다.

양배추          0.2

파슬리          2.0

별표 4 (246) 스피노사드(Spinosad)  중 다음 항목을 신설한다.

포도            0.5

별표 4 (249) 에마멕틴벤조에이트(Emamectinbenzoate) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

양배추           0.1

파슬리           0.1

별표 4 (290) 인독사카브(Indoxacarb)  중 다음 항목을 각각 신설한다.

쑥갓            20

파슬리          7.0

별표 4 (297) 테트라코나졸(Tetraconazole)  중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎          15

별표 4 (323) 보스칼리드(Boscalid)  중 다음 항목을 신설한다.

돌나물          30

별표 4 (332) 크로치아니딘(Clothianidin)  중 다음 항목을 신설한다.

호박잎          1.0

별표 4 (337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)  중 다음 항목을 각각 신설한다.

들깻잎          10

호박            0.3

호박잎          3.0

별표 4 (338) 티아크로프리드(Thiacloprid)  중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎          20

별표 4 (345) 피라크로스트로빈(Pyraclostrobin)  중 다음 항목을 신설한다.

부추            10

별표 4 (352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide)  중 다음 항목을 각각 신설한다.

쑥갓            10

파슬리          5.0

별표 4 (380) 피리다릴(Pyridalyl)  중 다음 항목을 신설한다.

쑥갓            20

별표 4 (390) 시메코나졸(Simeconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

자두            0.2

별표 4 (396) 에티클로제이트(Ethychlozate) 중 밀감의 “0.05”를 “1.0”로 한다.

별표 4 (403) 메타플루미존(Metaflumizone) 중 다음 항목을 신설한다.

밀감            1.0

별표 4 (410) 옥솔린산(Oxolinic acid) 중 다음 항목을 신설한다.

부추            10

별표 4 (415) 크로마페노자이드(Chromafenozide) 중 다음 항목을 신설한다.

밀감            2.0

별표 5 (13) 톨크로포스-메틸(Tolclofos-methyl) 중 수삼의 “0.3”을 “1.0”으로, 건삼의 “0.5”를 “2.0”으로, 홍삼의 “0.5”를 “2.0”으로, 인삼농축액의 “1.0”을 “3.0”으로, 홍삼농축액의 “1.0”을 “3.0”으로 한다.

부  칙(2011.5.13.)

제1조(시행일) 이 고시는 2011년 5월 19일부터 시행한다.

제2조(재검토기한) 「훈령ㆍ예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정」(대통령훈령 제248호)에 따라 이 고시 발령 후의 법령이나 현실여건의 변화 등을 검토하여 이 고시를 폐지하거나 개정 등의 조치를 하여야 하는 기한은 2014년 5월 12일까지로 한다.

제3조(경과조치) 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정을 적용한다.

현   행

개   정  안

제 1. 총칙

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ～ 4. (생략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 12) (생략)

13) 6개월 미만의 영․유아가 섭취할 수 있도록 제조․판매하는 식품에서는 엔테로박터 사카자키(Enterobacter sakazakii), 대장균군, 타르색소가 검출되어서는 아니되며 세균수는 g당 20,000 이하(액상제품은 100 이하)이어야 한다.

14) ～ 17) (생략)

6. (생략)

제 3. ～ 제 4. (생략)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 10. (생략)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 4) (생략)

5) 규격

(1) ～ (3) (생략)

(4) 대장균군 : 1 g당 10 이하(살균제품에 한하며, 식육가공품은 음성이어야 한다)

(5) 세균수 : 음성(멸균제품에 한한다. 다만, 살균제품은 1 g당 10,000 이하)

12. ～ 18. (생략)

19. 특수용도식품

19-1 ～ 19-5 (생략)

19-6 체중조절용 조제식품

1) ～ 4) (생략)

5) 규격

(1) ～ (5) (생략)

(6) 바실러스 세레우스 : 1 g당 100 이하 < 단서신설 >

6) (생략)

19-7 (생략)

20. ～ 28. (생략)

29. 기타식품류

29-1 ～ 29-17 (생략)

29-18 즉석섭취·편의식품류

1) ～ 4) (생략)

5) 규격

(1) ～ (4) (생략)

(5) 장염비브리오균 : 음성이어야 한다(해산물 함유 제품에 한한다).

(6) (생략)

6) (생략)

29-19 ～ 29-29 (생략)

제 6. ～ 제 7. (생략)

제 8. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. (생략)

2. 원료 기준

1) 원료의 구비요건

(1) ～ (2) (생략)

(3) 사용하는 얼음은 제 5. 식품별 기준 및 규격 29-17 얼음류의 기준 및 규격에 적합한 것이어야 한다.

(4) (생략)

2) (생략)

3. (생략)

4. 규격

가)～나) (생략)

다) 조리기구 등

(1) ～ (2) (생략)

(3) 칼․도마 및 식기류(사용 중인 것은 제외한다)

① ～ ② (생략)

5. (생략)

제 9. (생략)

제 10. 일반시험법

1. ～ 2. (생략)

3. 미생물시험법

<신 설>

3.1 검체채취의 일반사항

1) ∼ 5) (생략)

<신 설>

<신 설>

<신 설>

3.2 ∼ 3.3 (생략)

3.4. 배지 및 시액

3.4.1 배지

1) ∼ 66) (생략)

<신 설>

3.4.2 시액 (생략)

3.5 (생략)

3.6 세균발육시험

1) (생략)

2) 세균시험

<신 설>

가) (생략)

나) 시험법

시험용액을 1 mL씩 5개의 티오글리콜린산염 배지(배지 13)에 접종하여 35∼37℃에서 48±3시간 배양한 후 세균증식이 확인된 것을 세균발육 양성으로 한다.

3.7 ∼ 3.10 (생략)

3.11 살모넬라(Salmonella spp.)

1) ∼ 2) (생략)

3) 확인시험

가) 생화학적 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지 8)에 옮겨 35∼37℃에서 18∼24시간 배양한 후, TSI 사면배지(배지32)의 사면과 고층부에 접종하고 35∼37℃에서 18∼24시간 배양하여 생물학적 성상을 검사한다. 살모넬라는 유당, 서당 비분해(사면부 적색), 가스생성(균열확인) 양성인 균에 대하여 그람음성 간균임을 확인하고 urease 음성, Lysine decarboxylase 양성 등의 특성을 확인한다.

나) 응집시험

Spicer-Edwards등과 같은 H 혼합혈청과 O 혼합혈청을 사용하여 응집반응을 확인한다.

3.12 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

3.12.1 정성시험

1) (생략)

2) 분리배양

증균 배양액을 난황첨가 만니톨 식염한천배지(배지 14) 또는 Baird-Parker 한천배지(배지 63)에 접종하여 35∼37℃에서 18∼24시간 배양한다. 배양결과 난황첨가만니톨 식염한천배지에서 황색불투명 집락을 나타내고 주변에 혼탁한 백색환이 있는 집락 또는 Baird-Parker 한천배지에서 투명한 띠로 둘러싸인 광택이 있는 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.

3) 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지 8)에 옮겨 35∼37℃에서 18∼24시간 배양한 후 그람염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람양성 구균을 확인한다. 포도상의 배열을 갖는 그람양성구균이 확인된 것은 coagulase 시험을 실시한다. 토끼혈장(신선혈장은 5%, 건조혈장의 용액은 10%)을 가한 생리식염수를 멸균한 시험관에 0.5∼1 mL 씩 무균적으로 분주한다. 여기에 분리배지상의 집락에서 직접 또는 보통한천배지에서 순수배양시킨 균 1 백금이를 접종하여 35∼37℃에서 배양한다. 배양 후 3, 6, 24시간의 각 시간에 응고유무를 판정하여 어느 시간 후에도 응고 또는 섬유소(fibrin)가 석출된 것은 모두 coagulase 양성으로 하며 이상과 같이 확인된 것은 황색포도상구균 양성으로 판정한다. 시험에 있어서는 coagulase 양성균 및 균주접종의 음성대조군을 둔다.

3.12.2 (생략)

3.13 (생략)

3.14 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

3.14.1 정성시험법

1) (생략)

2) 분리배양

카나마이신을 200 μg/mL의 농도로 가한 난황첨가 Clostridium perfringens 한천배지(배지 27) 또는 TSC 한천배지(배지 41)에 증균배양액을 접종하여 35∼37℃에서 18∼24시간 혐기배양 한 결과 Clostridium perfringens 한천배지에서 직경 2mm 정도의 약간 돌기된 유황색 주변에 불투명한 백색환이 있는 집락 또는 TSC 한천배지에서 불투명한 환을 가지는 황회색 집락은 확인시험을 실시한다.

3.14.2 (생략)

3.15 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)

1) 증균배양

우유, 유제품, 가공식품 및 수산물의 검체에 대해서는 증균배지로 Listeria 증균배지(배지 35)를 사용하고, 식육 및 가금류의 검체는 1차 증균배지로 UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36)를 사용한다.

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 Listeria 증균배지(배지 35) 또는 UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36)를 가한 후 30℃에서 24±2시간 배양한다. 식육 및 가금류 등의 검체는 배양액 0.1 mL를 취하여 Fraser Listeria 배지(배지 37) 10 mL에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 2차 증균을 실시한다.

2) ∼ 3) (생략)

3.16 대장균 O157:H7 (Escherichia coli O157:H7)

1) (생략)

2) 분리배양

증균배양액을  cefixime(0.05 ㎍/L) 및 potassium tellurite(2.5 ㎍/mL)가 첨가된 MacConkey sorbitol 한천배지(배지 43)에 접종하여 35∼37℃에서 18시간 배양한다. Sorbitol을 분해하지 않는 무색집락을 취하여 EMB 한천배지(배지 6)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양하고, 녹색의 금속성 광택이 확인된 집락은 확인시험을 실시한다.

3) ∼ 4) (생략)

3.17 ∼ 3.18 (생략)

3.19 캠필로박터 제주니

(Campylobacter jejuni)

1) 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 supplement A가 첨가된 HUNT 배지(배지 47) 100 mL에 넣고 균질화한 후 35∼37℃에서 4～5시간 동안 미호기적(5% O2, 10% CO2, 85% N2)으로 1차 증균한다. 1차 증균후 cefoperazone 용액(0.8 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하고 42℃에서 24∼48시간 미호기적으로 2차 증균한다. 다만, 유제품의 경우에는 1차 증균시 supplement B를 사용하고, 2차 증균시에는 rifampicin용액(0.125 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하여 배양한다.

2) ∼ 3) (생략)

3.20 (생략)

3.21 엔테로박터 사카자키(Enterobacter sakazakii)

1) ∼ 3) (생략)

3.22 ∼ 3.25 (생략)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 식품일반

4.1.1 ~ 4.1.2 (생  략)

4.1.3 다성분 분석법(multiresidue methods)

4.1.3.1 ~ 4.1.3.18 (생  략)

4.1.3.19 디쿼트(Diquat), 파라쿼트  (Paraquat)

1) 시험법 적용범위

감자, 기타채소류, 기타콩류, 면실,  밀, 보리, 수수, 쌀, 양파, 옥수수, 완두콩 그리고 해바라기씨 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 염산용액으로 추출한 후 실리카 칼럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프∶자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

4) 시약

가) 용매：잔류농약시험용 및 액체크로마토그래프용

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 물 및 액체크로마토그래프용

다) 기타시약：특급

라) 표준원액：각각 농약의 표준품을 메탄올에 녹여 100 mL/kg으로 조제하여 표준원액으로 사용한다.

마) 표준용액：표준원액을 이동상을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) (생  략)

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기：자외부흡광검출기(257nm)

(2) 칼럼：Zorbax-Si(4.6 mm×25 cm)

(3) 이동상：아세토니트릴, 메탄올 및 98 mm Sodium perchlorate 용액(4：3：3)의 혼합용액

(4) ~ (6)  <신  설>

나) (생 략)

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.3.20 벤설탑(Bensultap), 칼탑(Cartap) 및 티오싸이크람(Thiocyclam)

1) 시험법 적용범위

감, 감자, 고추, 고춧잎, 무(뿌리), 밀감, 밤, 기타농삼물, 들깻잎, 배추, 사과, 생강, 쌀, 수박, 양배추, 옥수수, 참다래(키위), 토마토, 파, 포도, 호프 등 식품에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 염산용액으로 추출한 후 액액분배하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프：불꽃광도검출기(FPD：황용간섭필터) 또는 질소․인 검출기    (NPD)

<신  설>

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약시험용

나) 물：증류수 또는 이와 동등한 물

다) 기타시약：특급

라) 표준원액：벤설탑, 칼탑 및 티오싸이크람 표준품을 메탄올에 녹여 100㎎/L로 조제하여 표준원액으로 한다.

마) 표준용액：벤설탑, 칼탑 및 티오싸이크람 표준용액 적당량을 취하여 0.02N 염산용액에 희석하고 5) 시험용액의 조제 가) 추출 (2) 이후의 방법에 따라 실험한 후 메탄올로 희석하여 적당한 농도(약 0.1～2ppm)로 만들어 사용한다. 다만, Nereistoxin hydrogen oxalate를 표준원액으로 할 경우 이를 메탄올에 희석하여 적당한 농도(0.1～2ppm)로 만들어 사용하고 칼탑은 환산계수 1.14를, 벤설탑은 1.80을, 티오싸이크람은 1.13을 곱하여 각각의 농약으로 환산한다.

<신  설>

<신  설>

5) 시험용액의 조제

가) 추출

(1) 검체를 잘게 썰거나 갈은 후 50 g을 달아 0.02N 염산용액 150 mL를 넣고 5분간 균질화한 후 여과보조제를 깔고 감압 여과한다. 잔사에 다시 0.02N 염산용액 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 여액을 합쳐 분액깔때기에 넣는다.

(2) 2% 염화니켈용액 5 mL 및 암모니아수 20 mL를 넣고 10분간 흔들어 섞는다. 이에 디클로로메탄 100 mL를 넣고 1분간 심하게 흔들어 섞고 정치후 층을 분리하고 디클로로메탄층을 무수황산나트륨으로 탈수하여 농축기용 플라스크에 옮긴다. 물층에 다시 디클로로메탄 100 mL씩을 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 30℃이하의 수욕에서 약 2 mL 정도로 농축하고 다시 실온에서 자연건고하고 잔류물을 메탄올로 일정량으로 녹여 시험용액으로 한다(위의 과정으로 정제가 불충분할 경우 아래의 정제과정을 거친다).

나) 정제

추출액인 디클로로메탄올 약 100 mL로 농축하여 분액깔때기로 옮기고 0.02N 염산 50 mL씩으로 2회 5분간 추출하고 물층을 모은다. 이에 암모니아수 5 mL를 넣고 다시 디클로로메탄 100 mL씩으로 2회 추출한 후 디클로로메탄층을 모아 무수황산나트륨으로 탈수한 후 30℃이하의 수욕에서 약 2 mL정도로 농축하고 다시 실온에서 자연건고한 후 잔류물을 메탄올 일정량으로 녹여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 캐필라리칼럼：0.2～0.32 또는 0.53 mm의 안지름을 가지는 30 m의 모세관 유리 칼럼에 PEG-20 m, DC-200 또는 이와 동등한 고정액상을 화학 결합시키거나 Cross-link 코팅한 것

(2) 시험용액 주입부 및 검출기의 온도：250℃, 280℃

(3) 칼럼온도：100～200℃사이에서 승온조건을 적절히 조절한다.

(4) 가스 및 유량：질소, 수소 및 공기를 적절히 조절한다.

<신  설>

<신  설>

<신  설>

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

<신  설>

<신  설>

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

4.1.3.21 ～ 4.1.3.28 (생략)

4.1.4 단성분 분석법(individual residue methods)

4.1.4.1 ～ 4.1.4.139 (생  략)

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

4.2 ～ 4.3 (생  략)

5. ～ 9. (생  략)

제 1. 총칙

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ～ 4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 12) (현행과 같음)

13) ------------------------  --------------------------------------엔테로박터 사카자키[Enterobacter sakazakii(Cronobacter spp.)], ------------------------

------------------------------  ------------------------.

14) ～ 17) (현행과 같음)

6. (현행과 같음)

제 3. ～ 제 4. (현행과 같음)

제 5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 10. (현행과 같음)

11. 식육 또는 알가공품

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 대장균군 : -------------(가열제품 또는 살균제품에 한한다.)

(5) 세균수 : ------------------

---단, 알가공품 중 살균제품은 1 g당 10,000 이하)

12. ～ 18. (현행과 같음)

19. 특수용도식품

19-1 ～ 19-5 (현행과 같음)

19-6 체중조절용 조제식품

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (5) (현행과 같음)

(6) 바실러스 세레우스 : 1 g당 100 이하(단, 장류를 원료로 사용하는 제품은 1 g당 1,000 이하)

6) (현행과 같음)

19-7 (현행과 같음)

20. ～ 28. (현행과 같음)

29. 기타식품류

29-1 ～ 29-17 (현행과 같음)

29-18 즉석섭취·편의식품류

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (4) (현행과 같음)

(5) ------------ : ---------(즉석섭취식품, 신선편의식품 중 해산물 함유 제품에 한한다).

(6) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

29-19 ～ 29-29 (현행과 같음)

제 6. ～ 제 7. (현행과 같음)

제 8. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. (현행과 같음)

2. 원료 기준

1) 원료의 구비요건

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 식품접객업소에서 사용하는 얼음은 세균수가 1mL당 1,000이하, 대장균 및 살모넬라가 250 mL당 음성이어야 하며, 기타 이화학적 규격은 제 5. 식품별 기준 및 규격 29-17 얼음류의 기준 및 규격에 적합한 것이어야 한다.

(4) (현행과 같음)

2) (현행과 같음)

3. (현행과 같음)

4. 규격

가)～나) (현행과 같음)

다) 조리기구 등

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) -----------숟가락, 젓가락, 식기, 찬기 등 음식을 먹을 때 사용하거나 담는 것(--------

--------- )

① ～ ② (현행과 같음)

5. (현행과 같음)

제 9. (현행과 같음)

제 10. 일반시험법

1. ～ 2. (현행과 같음)

3. 미생물시험법

3.1 일반사항

3.1.1 검체의 채취

1) ∼ 5) (현행과 같음)

3.1.2 확인시험

1) 균의 확인시험에서 각종 생화학시험은 국제적으로 공인된  kit 또는 장비를 이용할 수 있다.

2) 식중독균 정량검사 시 계수된 집락수가 규격치 이하일 경우 확인시험을 생략할 수 있다.

3.2 ∼ 3.3 (현행과 같음)

3.4. 배지 및 시액

3.4.1 배지

1) ∼ 66) (현행과 같음)

67) Baird-Parker RPF한천배지(Baird-Parker RPF Agar)

Tryptone	1 g

Beef Extract	0.5 g

Yeast Extract	0.1 g

Sodium Pyruvate	1 g

Glycine	1.2 g

Lithium Chloride 6H2O	0.5 g

Agar	2 g

위의 성분을 증류수 90 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 RPF Supplement를 첨가한다.

Bovine Fibrinogen	0.375 g

Trypsin Inhibitor	2.5 mg

Rabbit Plasma	2.5 mL

Potassium Tellurite	2.5 mg

위의 성분을 멸균증류수 10 mL에 녹인다.

68) Bolton 배지(Bolton Broth)

Meat Pepton	10 g

Lactalbumin Hydrolysate	5 g

Yeast Extract	5 g

Sodium Chloride	5 g

Haemin	0.01 g

Sodium Pyruvate	0.5 g

Alpha-Ketoglutaric acid	1 g

Sodium Metabisulphite	0.5 g

Sodium Carbonate	0.6 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 7.4로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50mL을 무균적으로 첨가하고 다음의 Supplement를 물과 에탄올을 동량 섞은 용액 10mL에 녹인 후 여과멸균하여 가한다.

Supplement 조성 : Sodium Cefoperazone 20 mg, Trimethoprim 20 mg, Vancomycin 20 mg, Cyclohexamide 50 mg

3.4.2 시액 (현행과 같음)

3.5 (현행과 같음)

3.6 세균발육시험

1) (현행과 같음)

2) 세균시험

세균시험은 가온보존시험한 검체 3관에 대해 각각 시험한다

가) (현행과 같음)

나) 시험법

--------------------------

--------------------------

--------------------- 배양한 후, 3관 중 어느 하나라도 세균증식이 확인되면 -------.

3.7 ∼ 3.10 (현행과 같음)

3.11 살모넬라(Salmonella spp.)

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 확인시험

가) 생화학적 확인시험

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

-------------------그람음성 간균, urease 음성, Lysine decarboxylase 양성 등의 특성이 확인되면 살모넬라 양성으로 판정한다.

나) 응집시험

균종 확인이 필요한 경우 Spicer-Edwards등과---------

-------------------.

3.12 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

3.12.1 정성시험

1) (현행과 같음)

2) 분리배양

--------------------------

--------------------------

Baird-Parker 한천배지(배지 63) 또는 Baird-Parker(RPF) 한천배지(배지 67)에 접종하여 ------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

---- 검정색 집락 또는 Baird-Parker(RPF) 한천배지에서 불투명한 환으로 둘러싸인 검정색 집락은 확인시험을 실시한다.

3) 확인시험

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

확인한 후 coagulase 시험을 실시하며 24시간 이내에 응고유무를 판정한다. Baird-Parker(RPF) 한천배지에서 전형적인 집락으로 확인된 것은 coagulase 시험을 생략할 수 있다. Coagulase 양성으로 확인된 것은 생화학 시험을 실시하여 판정한다.

3.12.2 (현행과 같음)

3.13 (현행과 같음)

3.14 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

3.14.1 정성시험법

1) (현행과 같음)

2) 분리배양

--------------------------

--------------------------

--------------------------

-- 난황첨가 TSC 한천배지(배지 41)에 ------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

-----.

3.14.2 (현행과 같음)

3.15 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)

1) 증균배양

--------------------------

--------------------------

----------------------- 사용하며, 검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 Listeria 증균배지를 가한 후 30℃에서 48시간 배양한다. 식육 및 가금류의 검체는 1차 증균배지로 UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36)를 사용하며, 검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 UVM-modified Listeria 증균배지를 225 mL 가한 후 30℃에서 24±2시간 배양한 후, ---------

--------------------------

--------------------------

------.

2) ∼ 3) (현행과 같음)

3.16 대장균 O157:H7 (Escherichia coli O157:H7)

1) (현행과 같음)

2) 분리배양

-----------------(0.05 mg/L) ----------------- (2.5 mg/L)

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

-------------.

3) ∼ 4) (현행과 같음)

3.17 ∼ 3.18 (현행과 같음)

3.19 캠필로박터 제주니

(Campylobacter jejuni)

1) 증균배양

---------------------------

---------------- HUNT 배지(배지 47) 또는 Bolton 배지(배지 68) -------------------------

-----------------------------

------------ 증균하고 42℃에서 24∼48시간 미호기적으로 2차 증균한다. 다만, HUNT 배지를 사용할 경우, 일반식품은 2차 증균시 cefoperazone 용액(0.8 g/100 mL) 0.4 mL를 첨가하고 유제품은 1차 증균시 supplement B, ---------------------------

---------------------------

-----.

2) ∼ 3) (현행과 같음)

3.20 (현행과 같음)

3.21 엔테로박터 사카자키[Enterobacter  sakazakii(Cronobacter spp.)]

1) ∼ 3) (현행과 같음)

3.22 ∼ 3.25 (현행과 같음)

4. 식품 중 잔류농약 분석법

4.1 식품일반

4.1.1 ~ 4.1.2 (현행과 같음)

4.1.3 다성분 분석법(multiresidue methods)

4.1.3.1 ~ 4.1.3.18 (현행과 같음)

4.1.3.19 디쿼트(Diquat), 파라쿼트(Paraquat)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 견과종실류, 두류, 채소류에 적용한다.

2) 분석원리

-------------------------

-------------------------

----------------분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(UV Detector)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

<삭  제>

다) 표준원액 : 각각 농약의 표준품을 메탄올에 녹여 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) (현행과 같음)

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

<삭  제>

(1) 칼럼 : C18(250 mm ×  4.6 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상은 A 및 B 용액의 농도 구배조건에 따라 사용한다.

이동상 A : 0.2 M 과염소산나트륨 용액(pH 2)

이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A	B
0	98	2
2	98	2
6	50	50
10	98	2
20	98	2

(3) 이동상 유량 : 0.8 mL/min

(4) 칼럼 온도 : 40℃

(5) 검출파장 : 디쿼트 313 nm, 파라쿼트 257 nm

(6) 주입량 : 10 μL

나) (현행과 같음)

<삭  제>

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

4.1.3.20 벤설탑(bensultap), 칼탑(cartap) 및 티오싸이크람(thiocyclam)

1) 시험법 적용범위

곡류, 서류, 견과종실류, 과실류, 채소류, 버섯류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 벤설탑, 칼탑 및 티오싸이크람을 2% 시스테인 용액, 3% 염화니켈 용액 및 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신으로 전환시켜 헥산 및 에틸아세테이트로 액-액 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD, 황용 간섭필터, 파장 394 nm)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

<삭  제>

다) 표준원액 : 옥살산수소 네레이스톡신(nereistoxin hydrogen oxalate) 표준품을 메탄올에 녹여네레이스톡신(nereistoxin)으로써 500 μg/mL가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 0.1 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 μg/mL가 되게 한 후 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 단, 벤설탑은 환산계수 2.9[벤설탑의 분자량(432)/네레이스톡신 분자량(149)], 칼탑은 환산계수 1.6[칼탑의 분자량(237)/네레이스톡신 분자량(149)], 티오싸이크람은 환산계수 1.2[티오싸이크람의 분자량(181)/네레이스톡신 분자량(149)]을 곱하여 환산한다.

마) 2% 시스테인(cysteine) 용액 : 무수염산시스테인  (L-cysteine-HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산 용액 950 mL에 녹인 후 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하여 pH 4로 맞춘 다음 0.02 N 염산용액을 첨가하여 1,000 mL가 되게 한다.

바) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액 : 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 잘 혼합하고 분쇄하여 25 g(곡류는 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 25 g)을 정밀히 달아 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 넣고 2% 시스테인 용액 150 mL를 넣은 후 30분간 진탕 추출한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액 120 mL를 별도의 250 mL 폴리프로필렌 원심분리기용 튜브에 취한다. 여기에 3% 염화니켈 용액과 진한 암모니아수를 각각 4 mL씩 첨가한 다음 5분간 진탕한 후 70℃ 수욕상에서 1시간 동안 진탕 반응시킨다. 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 다음 10 N 황산 용액을 첨가하면서 pH 5로 맞춘 후 헥산 50 mL를 가하여 진탕한다. 이를 9900 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 버린 다음 10 N 수산화나트륨 용액을 첨가하면서 pH 9로 맞춘다. 여기에 염화나트륨 12 g과 에틸아세테이트 100 mL를 가한 후 진탕하고, 다시 7600 G, 4℃에서 10분간 원심분리한 다음 상등액(에틸아세테이트 층) 80 mL를 감압농축플라스크에 취하여 40℃ 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 메탄올 2 mL로 용해하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 230℃

(4) 오븐 온도 : 100℃

(5) 검출기 온도 : 250℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.025, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

머무름 시간(분)

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 네레이스톡신(4.9분)

라) 정량한계

0.03 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 네레이스톡신을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 230℃

(4) 오븐 온도 : 70℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/min의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

(6) 이온원 온도 : 230℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 2 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼200 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
8.9	149	149, 70, 103

(주. 분자량은 티오설탑이 전환된 네레이스톡신의 분자량임)

4.1.3.21 ～ 4.1.3.28 (현행과 같음)

4.1.4 단성분 분석법(individual residue methods)

4.1.4.1 ～ 4.1.4.139 (현행과 같음)

4.1.4.140 이소티아닐(Isotianil)

1) 시험법 적용범위

곡류에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 이소티아닐을 아세토니트릴로 추출한 후 후로리실로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 기체크로마토그래프-질소・인 검출기(GC-NPD, Gas Chromatograph - Nitrogen Phosphorus Detector)를 사용한다.

나) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS, Gas Chromatograph-Mass Spectrometer)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 이소티아닐 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세톤으로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) 2% 디에틸렌글리콜(Diethylene glycol) 용액 : 디에틸렌글리콜 2 mL를 아세톤에 녹여 100 mL가 되게 한다.

바) 5 % 염화나트륨(Sodium chloride) 용액 : 염화나트륨 50 g을 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

사) 후로리실 카트리지 : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(1 g, 6 cc)를 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 1 kg을 혼합하고 분쇄하여 표준체 420 ㎛를 통과시킨 후 20 g을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고, 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 정치한다. 다시 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 3분간 균질화하고 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL 감압농축플라스크에 받는다. 이 여액을 30℃ 이하의 수욕상에서 약 10 mL가 될 때까지 감압농축하고 분액깔대기에 옮긴다. 이에 5% 염화나트륨 용액 50 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 가하여 심하게 흔들어 정치한 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합한다. 여기에 2% 디에틸렌글리콜 0.2 mL를 첨가한 후, 30℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 2 mL를 가하여 용해한다.

나) 정제

후로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린 후 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이어서 ‘가) 추출’로부터 얻은 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 2 mL를 고정상 상단에 가하여 15 mL 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v) 5 mL로 유출시켜 상기 시험관에 받는다. 이 유출액을 30℃ 이하 수욕상에서 질소 농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산 혼합액(20/80, v/v)을 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-17(30 m × 0.53 mm, 1 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 15 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 220℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

(6) 주입모드 : 직접주입

(7) 주입량 : 2 μL

나) 검량선 작성

표준용액 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL를 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

이소티아닐

↓

머무름 시간(분)

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 :

이소티아닐(8.8분)

라) 정량한계

0.05 mg/kg

7) 정량시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

8) 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로써 이소티아닐을 확인한다.

가) 기체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

(1) 칼럼 : DB-5ms(30 m ×  0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량 : He, 1 mL/min

(3) 주입부 온도 : 260℃

(4) 오븐 온도 : 120℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 20℃/min의 비율로 220℃까지 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

(5) 인터페이스 온도 : 260℃

(6) 이온원 온도 : 250℃

(7) 주입모드 : splitless mode

(8) 주입량 : 1 μL

(9) 분자량 범위 : 50∼300 m/z

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

머무름 시간(분)	분자량(MW)	이온(m/z)
16.9	298	180, 91, 117

4.2 ～ 4.3 (현행과 같음)

5. ～ 9. (현행과 같음)

신․ 구조문 대비표