식품의약품안전청 고시 제2010- 51호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2010. 6.30.

식품의약품안전청

식품의약품안전청 고시 제2010- 51호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정이유

식품 중 중금속, 곰팡이독소, 벤조피렌 등에 대한 기준·규격 선진화를 통해 기준·규격 미비로 인해 발생 가능한 사건·사고를 사전에 예방하고, 식품자동판매기 음료․커피․다류에 대한 미생물 기준(밀봉제품 제외), 축․수산물에 대한 동물용의약품 잔류허용기준 등의 제·개정을 통하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함.

2. 주요 내용

가. 김치류 및 젓갈류에 대한 바실러스 세레우스 규격 개정 [제2. 5. 4)의 (1)]

(1) 대표적인 발효식품인 김치류 및 젓갈류 중 바실러스 세레우스 규격을 장류와 같이 합리화 할 필요성 대두

(2) 김치류와 젓갈류의 바실러스 세레우스 규격을 g 당 1,000 이하에서 10,000 이하로 완화

나. 농산물(11종) 및 식육부산물의 중금속 기준 신설 [제2. 5. 5)의 (3) 및 (5)]

(1) 채소류 3종(양파, 오이, 고추), 과실류 6종(감, 포도, 오렌지, 바나나, 키위, 망고), 밀, 참깨에 대한 납 또는 카드뮴 기준 신설

(2) 소, 돼지의 간 및 신장에 대한 납 및 카드뮴 기준 신설

다. 밀가루 및 건조과실류의 총아플라톡신 기준 신설[제2, 5, 8), (1)]

(1) 밀가루 수입원의 다변화에 따른 안전관리 강화를 위해 밀가루 중 총아플라톡신 기준 설정

(2) 기후 온난화 및 아열대 지역으로 부터의 식품 수입량 증가에 따라 아플라톡신 오염 우려가 큰 건조과실류의 총아플라톡신 기준 설정

라. 곡류 및 그 단순가공품 등의 곰팡이독소 기준 신설 [제2. 5. 8)의 (5), (6), (7)]

(1) 곰팡이의 오염 가능성이 높은 곡류 및 그 단순가공품, 포도주스, 포도주스농축액, 포도주, 건포도 중 오크라톡신 A에 대한 기준 신설

(2) 식사대용식으로 이용되는 시리얼류의 데옥시니발레놀 기준 신설

(3) 어린이들이 주로 섭취하는 과자의 안전관리 강화를 위하여 제랄레논 기준 신설

마. 개별동물에 대한 동물용의약품 잔류허용기준이 정해지지 않은 경우의 기준 적용 원칙 개정[제2, 5, 11), (1), ⑤]

바.  발기부전치료제 유사물질 기준 및 시험법 추가 [제2, 5, 12), (2) 및 안 제10. 7, 7. 4]

(1) 발기부전치료제는 의사의 처방에 따라 복용해야 하는 전문의약품임에도 불구하고 이와 유사한 물질을 합성․제조하여 식품에 혼입하는 사례가 발생함

(2) 새로운 발기부전치료제 유사물질인 치오퀴나피페리필, 하이드록시치오호모실데나필 및 클로로프레타다라필에 대한 기준 및 시험법 신설

사. 훈제어육 등의 벤조피렌 기준 신설[제 2, 5, 12), (4)]

(1) 훈제어육, 훈제건조어육, 어류, 패류, 연체류 및 갑각류, 특수용도식품, 훈제식육제품 및 그 가공품 중 벤조피렌[Benzo(a)pyrene 규격 신설

아. 식품자동판매기 다류․커피․음료류에 대한 미생물 기준 신설 [제 2, 5, 16) ]

(1) 청결상태 등 위생관리가 불량하여 지속적으로 문제가 되고 있는 식품자동판매기 음료 등에 대해 효율적인 관리를 위한 기준이 필요함

(2) 식품자동판매기 다류․커피․음료류에 대한 미생물 기준 신설(밀봉제품 제외)

자. 포도주의 납 기준 신설 [제5, 27-5, 5), (4)]

(1) 소비량이 증가하고 있는 포도주 중의 납에 대한 기준 신설

차. 밀가루의 중금속 기준 신설 [제5, 29-13, 5)의 (5) 및 (6), 6)의 (4) 및 (5)]

(1) 가공식품의 원료로 많이 소비되는 밀가루에 대한 납 및 카드뮴 기준 신설

카. 동물용의약품 기준 및 시험법 신설 및 개정 등[제 10. 5. 및 〔별표 7〕

(1) 겐타마이신의 개별어류에 대한 기준, 네오마이신의 어류 및 갑각류에 대한 기준, 티아물린의 어류에 대한 잔류허용기준 신설 및 관련 시험법 신설

(2) 동물용의약품으로 사용 승인되어 있으나 식품 중 잔류허용기준이 마련되어 있지 않은 트리메토프림, 클린다마이신 및 프라지콴텔의 잔류허용기준 및 시험법 신설

(3) 린코마이신의 시험법 신설

(4) 이 고시 및 CODEX에 잔류기준이 없는 동물용의약품 중 항생물질 및 합성항균제에 대한 기준적용원칙이 2010년 1월 1일부터 시행됨에 따라 항생물질 및 합성항균제 등 동물용의약품 분류 명기

타. 일반시험법 중 마비성 패독 및 중금속 시험법 개정 [제 10, 6.3.1, 7.1.1, 및 7.1.2 ]

(1) 마비성 패독 및 중금속 검사결과의 신뢰성 향상을 위한 시험법 개정

3. 기타참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요없음

다. 합의 : 해당사항 없음

라. 기타 : (1) 행정예고 : ’09. 8. 13, ’09. 9. 18, ’09. 10. 8., ‘09. 12. 22, ‘09. 12. 30, ‘10. 5. 12

(2) 규제심사 : ‘10. 6. 3, ’10. 6. 17

식품의약품안전청 고시 제2010-51호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전청 고시 제2010-45호, 2010. 6. 16)을 다음과 같이 개정합니다.

2010년 6월 30일

식품의약품안전청장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시안

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제2, 5, 4) 중 (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 장류(메주 제외), 소스류, 복합조미식품, 김치류, 젓갈류, 절임식품 및 조림식품 : g 당 10,000이하(단 멸균제품은 음성이어야 한다)

제2, 5, 5), (3)을 다음과 같이 한다.

(3) 농산물 중 중금속 기준

번호	대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
1	감	0.1 이하	-
2	감자	0.1 이하	0.1 이하
3	고구마	0.1 이하	0.1 이하
4	고추	0.2 이하	0.1 이하
5	당근	0.1 이하	0.1 이하
6	대두	0.2 이하	0.1 이하
7	마늘	0.1 이하	0.1 이하
8	망고	0.1 이하	-
9	무	0.1 이하	0.1 이하
10	밀	0.2 이하	0.2 이하
11	바나나	0.1 이하	-
12	배추	0.3 이하	0.2 이하
13	부추	0.1 이하	0.05 이하
14	시금치	0.3 이하	0.2 이하
15	쌀(현미 제외)	0.2 이하	0.2 이하
16	양파	0.1 이하	0.05 이하
17	오렌지	0.1 이하	-
18	오이	0.1 이하	0.05 이하
19	옥수수	0.2 이하	0.1 이하
20	참깨	0.3 이하	0.2 이하
21	키위	0.1 이하	-
22	파	0.1 이하	0.05 이하
23	팥	0.2 이하	0.1 이하
24	포도	0.2 이하	-

제 2, 5, 5), (5)을 다음과 같이 한다.

(5) 축산물 중 중금속 허용기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
가금류고기	0.1 이하	-
돼지간	0.5 이하	0.5 이하
돼지고기	0.1 이하	0.05 이하
돼지신장	0.5 이하	1.0 이하
소간	0.5 이하	0.5 이하
소고기	0.1 이하	0.05 이하
소신장	0.5 이하	1.0 이하

제2, 5, 8), (1)을 다음과 같이 한다.

대 상 식 품	기 준(μg/kg)
곡류, 두류, 땅콩, 견과류 및 그 단순가공품 (분쇄, 절단 등)	15 이하 (단, B1은 10 이하이어야 한다)
곡류가공품 및 두류가공품(규격외 일반가공식품)
장류(메주 제외) 및 고춧가루 및 카레분
육두구, 심황(강황), 건조고추, 건조파프리카 및 이를 함유한 천연향신료
밀가루
건조과실류

제2, 5, 8), (5)를 다음과 같이 한다.

대 상 식 품	기 준(μg/kg)
곡류 및 그 단순가공품(분쇄, 절단 등)	5 이하
커피콩, 볶은커피
인스턴트커피	10 이하
메주	20 이하
고춧가루	7 이하
포도주스, 포도주스농축액(원료용 포함, 농축배수로 환산하여), 포도주	2 이하
건포도	10 이하

제2, 5, 8)의 (6) 및 (7)을 다음과 같이 한다.

(6) 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

대 상 식 품	기 준(mg/kg)
곡류 및 그 단순가공품 (옥수수 및 그 단순가공품 제외)	1 이하
옥수수 및 그 단순가공품	2 이하
시리얼류	0.5 이하

(7) 제랄레논(Zearalenone)

대 상 식 품	기 준(μg/kg )
곡류 및 그 단순가공품	200 이하
과자	50 이하

제 2. 5, 11), (1) “잔류동물용의약품의 기준적용”을 “식품 중 잔류동물용의약품 기준적용”으로 한다.

제 2. 5, 11), (1), ② “식품공전의 동물용의약품 잔류허용기준”을 “ 별표 7 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준”으로 한다.

제 2, 5, 11), (1), ④를 다음과 같이 한다.

④ 로얄젤리 및 프로폴리스는 벌꿀의 기준을 적용한다.

제 2, 5, 11), (1), ⑤를 다음과 같이 한다.

⑤ 식용동물 등에 대해 이 고시에 별도로 잔류허용기준이 정해지지 아니한 경우 다음 각 항의 기준을 순차적으로 적용한다.

㉮ CODEX 기준

㉯ 유사 식용동물의 잔류허용기준 중 해당부위의 최저기준. 즉, 기준이 정하여지지 아니한 포유류 중 반추동물, 포유류 중 비반추동물, 가금류, 어류 및 갑각류는 각각 기준이 정하여진 반추동물, 비반추동물, 가금류, 어류, 갑각류 해당 부위의 기준 중 최저기준(단, 비반추동물 중 말은 기준이 있는 반추동물에 해당하는 기준 적용)

㉰ 항생물질 및 합성항균제에 대하여 축․수산물(유, 알 포함) 및 벌꿀(로얄젤리, 프로폴리스 포함)의 잔류기준을 0.03 mg/kg으로 적용

제 2, 5, 12), (2) 중  ,  및 을 각각 다음과 같이 신설한다.

치오퀴나피페리필(Thioquinapiperifil) : 검출되어서는 아니된다.

하이드록시치오호모실데나필(Hydroxythiohomosildenafil) : 검출되어서는 아니된다.

클로로프레타다라필 (Chloropretadalafil) : 검출되어서는 아니된다

제 2, 5, 12), (5)를 (3)으로 한다.

제 2, 5, 12), (4)에 ③부터 까지를 다음과 각각 같이 신설한다.

③ 훈제어육 : 5.0 ㎍/㎏ 이하(다만, 건조제품은 제외)

④ 훈제건조어육 : 10.0 ㎍/㎏ 이하(생물로 기준 적용 : 건조로 인하여 수분함량이 변화된 경우 수분함량을 고려하여 기준 적용)

⑤ 어류 : 2.0 ㎍/㎏ 이하

⑥ 패류 : 10.0 ㎍/㎏ 이하

⑦ 연체류 및 갑각류 : 5.0 ㎍/㎏ 이하

⑧ 특수용도식품 중 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식 : 1.0 ㎍/㎏ 이하

⑨ 훈제식육제품 및 그 가공품 : 5.0 ㎍/㎏ 이하

제 2, 5, 12), (3)를 (5)로 한다.

제 2. 5. 16)을 다음과 같이 신설한다.

16) 식품자동판매기 다류․커피․음료류에 대한 미생물 기준(밀봉제품 제외)

(1) 세균수 : 3,000/mL 이하(다만, 유가공품, 유산균, 발효제품 및 가열하지 아니한 과일․채소류음료가 함유된 경우는 제외한다)

(2) 대장균 : 음성이어야 한다

제5, 27-5, 5), (4)를 다음과 같이 신설한다.

(4) 납(mg/kg) : 0.2 이하(다만, 포도주에 한한다)

제5. 29-13, 5)의 (5) 및 (6)을 다음과 같이 신설한다.

(5) 납(mg/kg) : 0.2 이하

(6) 카드뮴(mg/kg) : 0.2 이하

제5. 29-13, 6)의 (4) 및 (5)를 다음과 같이 신설한다.

(4) 납

제10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

(5) 카드뮴

제10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

제 10, 5, 5.3.89부터 5.3.92까지를 다음과 같이 신설한다.

5.3.89 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 겐타마이신 및 네오마이신을 인산완충용액으로 추출하고 HLB 카트리지 및 약양이온교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 겐타마이신 및 네오마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 표준품 희석용매에 녹여 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 표준품 희석용매로 희석하여 겐타마이신은 0.025, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 mg/L, 네오마이신은 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 및 1.0 mg/L가 되게 한다.

마) 표준품 희석용매 : 100 mL 아세토니트릴과 10 mL 초산을 넣고 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

바) 5 mM 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 용액 : 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 0.65 mL를 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

사) 10 mM 인산완충용액(0.4 mM EDTA와 2 % 삼염화초산 함유) : 2 L 매스플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 2.72 g를 넣고 물 1.9 L로 녹인 후 1 N 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨 이수화물(Na2EDTA dihydrate) 0.3 g과 삼염화초산(trichloroacetic acid) 40 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

아) 용출용액 : 삼염화초산 4.1 g을 넣고 물 100 mL로 녹인 후 아세토니트릴 50 mL를 첨가하고 물로 250 mL가 되게 한다.

자) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지: divinylbenzene

-co-N-vinylpyrrolidone 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(200 mg, 6 mL)를 사용한다.

차) 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지 : 약양이온교환수지 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(150 mg, 6 mL)를 사용한다.

카) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

분쇄한 검체 2 g을 폴리프로필렌(Polypropylene) 재질의 원심분리관에 취하고 10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 1분 동안 균질화한 다음 초음파로 10분간 추출한다. 진탕기를 이용하여 10분간 격렬하게 진탕한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 원심분리관에 옮긴 다음 남은 잔여물에 10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 교반기로 섞고, 진탕기를 이용하여 10분간 격렬하게 진탕한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한 후 상층액을 합한다. 30% 수산화나트륨을 약 0.2 mL를 가하여 pH 7.5～8.0으로 맞추어 추출액으로 한다.

메탄올 5 mL와 물 5 mL로 각각 HLB 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 활성화한다. HLB 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 연속으로 연결하여 추출액을 1～3 mL/min의 속도로 흡착시키고 물 5 mL를 넣어 같은 유속으로 세척한다. 수분을 제거하기 위해 5분 이상 공기를 통과시켜 건조한다. 용출용액 4 mL를 1～3 mL/min의 속도로 용출시켜 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험액을 폴리프로필렌(Polypropylene)재질의 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

․ 이동상 A : 5 mM 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	90	10
15.0	60	40
25.0	60	40
30.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/min

(4) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 200℃

(3) 특이이온 및 Spray voltage

물 질	SIM ion(m/z)	Spray voltage(KV)
겐타마이신(C1a)	450	4.5
겐타마이신(C2, C2a)	464	4.5
겐타마이신(C1)	478	4.5
네오마이신	308	4.5

다) 표준품의 크로마토그램

겐타마이신(C1a) RT 12.9분

겐타마이신(C2, C2a) RT 13.0분

겐타마이신(C1) RT 13.1분

네오마이신 RT 13.5분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 겐타마이신 및 네오마이신의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 겐타마이신 정량한계 : 0.04 mg/kg

(2) 네오마이신 정량한계 : 0.003 mg/kg

5.3.90 프라지콴텔(Praziquantel), 티아물린(Tiamulin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 프라지콴텔과 티아물린을 2% 수산화암모늄으로 추출하고 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 프라지콴텔과 티아물린 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 프라지콴텔은 0.005, 0.01, 0.02, 0.03 및 0.04 mg/L, 티아물린은 0.025, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 mg/L가 되게 한다.

마) 2% 수산화암모늄 용액 : 암모니아수 10 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

바) 0.1 % 개미산 용액 : 개미산 0.5 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

사) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 : divinylbenzene

-co-N-vinylpyrrolidone  고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(200 mg, 6 mL)를 사용한다.

아) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

분쇄한 검체 2 g을 원심분리관에 취하고 2% 수산화암모늄 용액 6 mL를 가하여 균질화한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 상층액을 흡착시킨 다음 물 5 mL로 세척하고 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액을 약 3 mL가 될 때 까지 실온에서 질소 농축시킨다. 잔류한 추출액에 0.1% 개미산을 넣어 총량이 4 mL로 하고 이를 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	90	10
15.0	5	95
25.0	5	95
30.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/min

(4) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 250℃

(3) 특이이온 및 Spray voltage

물질	SIM ion(m/z)	Spray voltage(KV)
프라지콴텔	313	4.5
티아물린	494	4.5

다) 표준품의 크로마토그램

프라지콴텔 RT 10.8분

티아물린 RT 8.0분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중  프라지콴텔 및 티아물린의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 프라지콴텔 정량한계 : 0.002 mg/kg

(2) 티아물린 정량한계 : 0.001 mg/kg

5.3.91 트리메토프림(Trimethoprim)

1) 시험법 적용범위

축산물과 수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 트리메토프림를 아세토니트릴 : 물(1:1) 혼합액[유(乳)의 경우는 아세토니트릴 : 5% TCA 용액(1:1) 혼합액]으로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 클로로포름으로 분배하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC/MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 트리메토프림 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 용해시켜 100  mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물(2:1) 혼합액으로 희석하여 알(卵)분석법은 0.05, 0.1, 0.2, 0.3 및 0.4 mg/L가 되게 하고, 알(卵) 외의 분석법은 0.125, 0.25, 0.5, 0.75 및 1.0 mg/L가 되게 한다.

마) 5% 삼염화초산 용액： 삼염화초산(Trichloroacetic acid) 5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

바) 염화암모늄-암모니아 완충용액 : 염화암모늄 67.6 g을 암모니아수 570 mL에 녹이고 물을 넣어 1000 mL로 한다.

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 : 물(1:1) 혼합액[유(乳)의 경우는 아세토니트릴 : 5% 삼염화초산 용액(1:1) 혼합액] 20 mL를 가한 후 1분간 진탕한 다음 3,000 G에서 10분간 원심분리를 시킨다. 상층액 10 mL를 다른 원심분리관에 옮긴 후 헥산 5 mL를 가하여 1분간 진탕한다. 이 용액을 1,000 G에서 5분간 원심분리하여 헥산층(상층)을 버리고 남은 액에 염화암모늄-암모니아 완충용액을 넣어 pH 10으로 맞춘다. 이 용액에 20 mL 클로로포름을 넣고 1분간 진탕 후 1,000 G에서 5분간 원심분리 하고 물층(상층)을 버린 후 클로로포름층(아랫층)을 40℃에서 질소농축한다. 잔사를 아세토니트릴 : 물(2:1) 혼합액 1 mL에 용해시킨 후 0.2㎛ 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 초산 용액

․ 이동상 B : 0.1% 초산을 함유한 아세토니트릴 용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	99.5	0.5
2.0	99.5	0.5
10.0	20	80
15.0	20	80
20.0	99.5	0.5
25.0	99.5	0.5

(4) 유속 : 0.25 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : 아르곤

(4) Collision Energy : 23 V

다) 표준품의 크로마토그램

트리메토프림 RT 5.7분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 트리메토프림의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
트리메토프림	291	230

나) 정량한계 : 0.001 mg/kg

5.3.92 린코마이신(Lincomycin), 클린다마이신(Clindamycin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 린코마이신과 클린다마이신을 2% 초산으로 추출하고 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 린코마이신과 클린다마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 표준원액을 각각 0.025, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 mg/L가 되게 한다.

마) 2% 초산 용액 : 초산 10 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

바) 0.1% 개미산 용액 : 개미산 0.5 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

사) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지 : divinylbenzene

-co-N-vinylpyrrolidone  고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(200 mg, 6 mL)를 사용한다.

아) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

분쇄한 검체 2 g을 원심분리관에 취하고 2% 초산 용액 6 mL를 가하여 균질화한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 상층액을 흡착시킨 다음 물 5 mL로 세척한 후 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액을 약 3 mL이 될 때 까지 실온에서 질소 농축시킨다. 잔류한 추출액에 0.1% 개미산을 넣어 총량이 4 mL로 하고 이를 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	90	10
15.0	5	95
25.0	5	95
30.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/min

(4) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 200℃

(3) 특이이온 및 Spray voltage

물질	SIM ion(m/z)	Spray voltage(KV)
린코마이신	407	4.5
클린다마이신	425	4.5

다) 표준품의 크로마토그램

린코마이신 RT 2.4분

클린다마이신 RT 5.8분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중  린코마이신 및 클린다마이신의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 린코마이신 정량한계 : 0.1 mg/kg

(2) 클린다마이신 정량한계 : 0.01 mg/kg

제10, 6, 6.1.5 오크라톡신 A을 다음과 같이 한다.

6.1.5 오크라톡신 A(Ochratoxin A)

1) 시험법의 적용범위 : 곡류, 메주, 커피류, 고춧가루, 포도주스, 포도주스농축액, 포도주, 건포도

2) 분석원리

검체 중의 오크라톡신 A를 추출용매로 추출, 여과한 것을 면역친화성칼럼으로 정제시키고 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 : 형광검출기(Fluorescence detector)를 사용한다.

나) 오크라톡신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)

다) 페닐실란고상추출칼럼(Phenyl silane solid phase extract column) : BakerBond SPE Phenyl(500 mg) 또는 이와 동등한 것

라) 여과지：Whatman No.4(12.0 cm) 또는 이와 동등한 것

마) 유리섬유여과지(Glass microfiber filter paper) : Whatman GF/A(pore size : 1.6 μm) 또는 이와 동등한 것

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 오크라톡신 A 표준원액

오크라톡신 A를 톨루엔․초산(99:1, v/v) 혼합용액에 녹여 200 μg/mL가 되도록 한다.

라) 오크라톡신 A 표준용액

오크라톡신 A 표준원액 100 μL를 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후, 이를 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액으로 0.1 ～ 50 ng/mL의 농도가 되도록 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

염화나트륨(NaCl) 8.0 g, 무수 제이인산나트륨(Na2HPO4) 1.16 g, 제일인산칼륨(KH2PO4) 0.2 g 및 염화칼륨(KCl) 0.2 g을 물 990 ml에 녹인 것을 0.2 M 수산화나트륨으로 pH 7.4로 조정한 후 물로 1 L로 한다.

바) 3% 탄산수소나트륨 용액

탄산수소나트륨(NaHCO3) 30 g을 물에 녹여 1 L로 한다.

사) 추출용액 I

아세토니트릴․물(60:40, v/v) 혼합용액

아) 추출용액 II

메탄올․3% 탄산수소나트륨(50:50, v/v) 혼합용액

자) 0.01% 트윈 20 함유 PBS 용액

트윈 20(Tween 20) 0.01 mL를 취하여 PBS용액으로 100 mL한 것을 사용한다.

차) 5% 탄산수소나트륨(NaHCO3) 함유 1% PEG(Polyethylene grycol) 용액

10 g의 PEG(Polyethylene glycol)와 50 g의 탄산수소나트륨(NaHCO3)을 물 950 mL에 녹이고 pH를 8.3로 맞춘 후 1 L로 한다.

카) 1 M PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

제이인산나트륨(Na2HPO4․2H2O) 2.56 g, 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 12.6 g과 염화나트륨(NaCl) 87.9g을 물 950 mL에 녹인 것을 pH 7.4로 조정한 후 1 L로 한다.

타) 0.1 M PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

1 M PBS(Phosphate-buffered saline)용액을 물로 10배 희석하여 사용한다.

파) 1% 탄산수소나트륨 용액

탄산수소나트륨(NaHCO3) 10 g을 물에 녹여 1 L로 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 곡류 및 메주

(1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 시료 25 g을 정밀히 달아 추출용액 I 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 5 mL를 100 mL 플라스크에 취하고 PBS 용액 55 mL로 희석시킨다. 희석액을 흔들어 섞은 후 유리섬유여과지로 여과한 것을 추출액으로 한다.

(2) 정제

추출액 48 mL(검체 1g에 해당)를 정제용 칼럼에 주입하여 초당 1～2 방울의 속도로 통과시킨다. 이어서 물 10 mL를 같은 유속으로 유출시키고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 1 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

나) 커피류 및 고춧가루

(1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 시료 5 g을 정밀히 달아 추출용액 II 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 6 mL를 50 mL 플라스크에 취하고 3% 탄산수소나트륨 용액 18 mL를 가하여 희석시킨다. 이 중 20 mL을 취하여 추출액으로 한다.

(2) 정제

미리 메탄올 15 mL와 3% 탄산수소나트륨 용액 5 mL을 차례로 흘려 활성화 시킨 페닐실란고상추출칼럼에 위의 추출액 20 mL를 일회용 주사기를 이용하여 주입하고 메탄올․3% 탄산수소나트륨(25:75, v/v) 10 mL와 3% 탄산수소나트륨 용액을 차례로 주입하여 칼럼을 세척한 후 7% 메탄올용액 10 mL로 용출시킨다. 용출액을 50 mL 정용플라스크에 넣고 PBS 용액으로 50 mL로 한다. 이를 면역친화성칼럼에 주입하여 초당 1～2 방울의 속도로 통과시킨다. 이어서 0.01% 트윈 20 함유 PBS 용액 10 mL와 증류수 10 mL를 차례로 흘려 칼럼을 세척하고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 2 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

다) 포도주스, 포도주스농축액 및 포도주

(1) 추출

검체 10.0 g에 5% 탄산수소나트륨(NaHCO3) 함유 1% PEG(Polyethylene glycol) 용액 10 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과하여 추출액으로 한다.

(2) 정제

추출액 10 mL를 면역친화성칼럼에 주입하고 2.5% 염화나트륨 0.5% 탄산수소나트륨 용액(25 g의 염화나트륨과 5 g의  탄산수소나트륨을 950 mL의 물에 녹이고 pH를 8.1로 맞춘 후 1 L로 한다.) 5 mL과 물 5 mL를 차례로 흘려 세척하고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 2 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

라) 건포도

(1) 추출

검체 25 g을 정밀히 달아 1% 탄산수소나트륨(NaHCO3) 용액 60 mL를 넣어 1분간 고속으로 균질화한다. 균질화된 시료 42.5 g에 메탄올 70 mL를 가하고 1시간 동안 진탕한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 10 mL를 40 mL의 0.1 M PBS 용액으로 희석한 것을 추출액으로 한다.

(2) 정제

추출액 40 mL를 면역친화성칼럼에 주입하고 물 5 mL를 흘려 세척하고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 2.5 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기기 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액

(3) 칼럼온도 : 35℃

(4) 검출파장

(가) 여기파장 : 333 nm

(나) 형광파장 : 460 nm

(5) 유속 : 1 mL/분

(6) 주입량 : 5～20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 액체크로마토그래프에 주입한 후 얻어진 크로마토그램상의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 오크라톡신A 표준용액의 농도에 따른 액체크로마토그램

라) 정량한계

0.1 μg/kg

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 오크라톡신 A의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

가) 계산

오크라톡신 A의 함량(μg/kg) = C × V/M × D

C : 검량선에서 구한 오크라톡신 A의 농도(ng/mL)

V : 최종부피(mL)

M : 시료 채취량(g)

D : 희석배수

제10, 6, 6.3.1, 4) 중 다)를 다음과 같이 한다.

다) 표준원액 : 100 μg/mL(구입처 Div. of Contaminants Chemistry NaturaL  Products and Instrumentation Branch (HFF-423), Food and Drug Administration, 200 C St. SW Washington, DC 20204 및 이와 동등한 것)

제10, 7, 7.1.1을 다음과 같이 한다.

7.1.1 시료 채취 원칙

농산물	검 체
쌀	도정한것
옥수수	외피, 수염 및 이삭 속을 제거한 것
대두, 팥	깍지를 제거한 것
감자, 고구마, 당근	물로 가볍게 씻어 흙을 제거한 것
배추	바깥 변질 잎 및 심 및 뿌리를 제거한 것
무	물로 가볍게 씻어 흙을 제거하고 무청 및 잔뿌리를 제거한 것
파, 마늘, 부추, 양파	겉껍질 및 뿌리를 제거한 것
시금치	뿌리 및 변질 잎을 제거한 것
오이	꼭지를 제거한 것
고추	받침을 제거한 것
참깨	종자
감	받침 및 씨를 제거한 것
포도	꼭지를 제거한 것
오렌지, 키위, 바나나	껍질을 제거한 것
망고	껍질을 제거하고 씨를 제거한 것

농산물의 종류에 따라 아래 표에서와 같이 처리한 것을 시료로 한다. 다만, 그 이외의 식품의 경우는 원칙적으로 가식부를 시험부위로 한다.

제 10, 7.1.2.1, 1) 중 다) 용매추출법을 다음과 같이 한다.

(1) 시약

(가) MIBK(Methyl Iso-Buthyl Ketone) 또는 클로로포름

(나) DDTC(Diethyl dithocarbamic acid), silver를 포함하지 않은 것

(2) 시험조작

시험용액 및 공시험용액을 분액깔대기에 각각 10～50 mL 취한 후, 질산을 이용하여 pH 4로 조정한다. 여기에 10% DDTC 용액 1～5 mL를 넣고 흔들어 준 후 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL를 가하여 심하게 진탕하여 정치하고 MIBK(또는 클로로포름)층을 취한다. 다시 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL로 위의 과정을 되풀이 한 후 여액을 합한다. 분배액을 열판에서 80℃로 가열하여 용매를 모두 날려버리고 잔류물에 질산 7 mL, 과산화수소 1 mL를 넣고 다시 열판에서 가열하여 완전히 분해․건조시킨다. 잔류물을 1 N 질산용액으로 재용해하여 시험용액으로 한다.

제10, 7.1.2.1, 2) 중 나) 유도결합플라즈마법 중 “이온선의 발광광도를”을 “이온선의 발광광도 또는 질량값을”로 한다.

제 10, 7, 7.4 발기부전치료제 유사물질 4)의 다)를 다음과 같이 한다.

다) 표준원액：호모실데나필(homosildenafil), 홍데나필(hongdenafil), 하이드록시호모실데나필(hydroxyhomosildenafil), 아미노타다라필(aminotadalafil), 슈도바데나필(pseudovardenafil), 하이드록시홍데나필(hydroxyhongdenafil), 디메틸실데나필(dimethylsildenafil), 잔소안트라필(xanthoanthrafil), 하이드록시바데나필(hydroxyvardenafil), 노르네오실데나필(norneosildenafil), 데메틸홍데나필(demethylhongdenafil), 피페리디노홍데나필(piperidinohongdenafil), 카보데나필(carbodenafil), 치오실데나필(thiosildenafil), 디메틸치오실데나필(dimethylthiosildenafil), 아세틸바데나필(acetylvardenafil), 벤질실데나필(benzylsildenafil), 노르네오바데나필(norneovardenafil), 옥소홍데나필(oxohongdenafil), 치오호모실데나필(thiohomosildenafil), 데설포바데나필(desulfovardenafil), 니트로데나필(nitrodenafil), 싸이클로펜티나필(cyclopentynafil), 옥틸노르타다라필(octylnortadalafil), 클로로데나필(chlorodenafil), 신나밀데나필(cinnamyldenafil), 치오퀴나피페리필(thioquinapiperifil), 하이드록시치오호모실데나필(hydroxythiohomosildenafil),  클로로프레타다라필(Chloropretadalafil), 실데나필(sildenafil), 타다라필(tadalafil), 바데나필(vardenafil), 유데나필(udenafil), 미로데나필(mirodenafil) 각각의 표준품을 메탄올에 녹여 각각 100 mg/L이 되게 한다.

제 10, 7, 7.4, 5)를 다음과 같이 한다.

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 1 ～ 10 g을 정확히 달아 물 10 mL에 녹이고 메탄올 70 mL를 가하여 진탕 추출한 후 여과한다. 여액에 1% 중탄산나트륨용액 1 mL 및 물 20 mL을 가하고 디클로로메탄 50 mL로 2회 추출한다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 약 25 g을 사용하여 탈수하고 40℃ 이하의 수욕상에서 감압농축한다. 건고물에 10 mL 메탄올을 가하여 녹인 후 0.45 ㎛ 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 단, 시험용액의 농도가 검량곡선의 농도범위를 벗어날 경우 농도 범위내로 희석하여 사용한다.

제 10, 7, 7.4, 6), 가), (3), (나)를 다음과 같이 한다.

(나) 이동상 B : 95%아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	80	20
30	60	40
32	60	40
45	0	100
50	0	100
52	80	20
60	80	20

제 7, 7.4, 6), 다)를 다음과 같이 한다.

다) 표준품의 크로마토그램

제 10, 7, 7.4, 10) 중 ,  및 을 다음과 같이 신설한다.

치오퀴나피페리필(Thioquinapiperifil)(C24H28N6OS, 448)

하이드록시치오호모실데나필(Hydroxythiohomosildenafil)

(C23H32N6O4S2, 520)

클로로프레타다라필(Chloropretadalafil) (C22H19ClN2O5, 426)

제 10, 7, 7.8 중 7.8.3을 다음과 같이 신설한다.

7.8.3 수산물 및 그 가공품 중 벤조피렌

1) 시험법 적용범위

수산물 및 그 가공품에 한한다.

2) 분석원리

내부표준물질로 3-메틸콜란트렌을 사용하여 1M 수산화칼륨․에탄올 용액으로 알칼리 분해하고 헥산으로 추출한 후 고체상 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프/형광검출기 (High Performance Liquid Chromatograph/Fluorescence Detector, HPLC/FLD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：HPLC급 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실 카트리지：SPE용 또는 이와 동등한 것

라) 멤브레인 필터：수용성 폴리테트라플루오로에틸렌 또는 이와 동등한 것

마) 표준원액：벤조피렌 표준물질을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

바) 내부표준원액：3-메틸콜란트렌 표준물질을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

사) 표준용액：표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

아) 내부표준용액：내부표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

자) 기타시약：잔류농약시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

균질화 된 검체 약 10 g(건조물의 경우 1～2g)을 달아 1M 수산화칼륨․에탄올 용액 100 mL와 함께 둥근바닥 플라스크에 넣고 내부표준물질 1 mL를 첨가한 후 환류냉각장치를 부착시킨다. 이를 미리 80℃로 예열된 전열기에서 3시간 동안 가열하여 알칼리 분해시키고 신속히 냉각 후 헥산 50 mL를 환류냉각관을 통하여 넣어준다. 둥근바닥 플라스크의 알칼리 분해액을 분액깔대기에 옮기고 에탄올:헥산(1:1)용액 50 mL로 세척하여 분액깔대기에 합친다. 이 액에 50 mL의 물을 넣어 심하게 흔들어 섞은 후 헥산층을 분리하여 다른 분액깔대기에 받아두고 물층에 헥산 50 mL를 넣어 추출하는 과정을 두 번 반복하여 얻은 헥산층을 모두 합친다. 이 헥산층에 물 50 mL을 넣고 흔들어 섞은 후 정치하여 물층은 버리는 조작을 3회 되풀이하고 헥산층을 무수황산나트륨 약 15 g을 넣은 여과지를 사용하여 탈수여과한 후 40 ℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 약 2 mL로 농축한다.

나) 정제

후로리실 카트리지는 미리 디클로로메탄 10 mL 및 헥산 20 mL를 초당 2～3방울의 속도로 유출시킨 후 사용한다. 이 카트리지에 위의 농축액을 넣고 헥산 10 mL와 헥산/디클로로메탄 (3:1) 20 mL로 각각 용출시킨 후 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 질소가스 하에 농축․건고한 후 잔류물을 아세토니트릴에 녹여 전량을 1 mL로 하고 이를 0.45 ㎛ 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：Supelguard LC-18을 연결한 Supelcosil LC-PAH column (25 ㎝ × 4.6 ㎜) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(4) 이동상

시간(분)	아세토니트릴(%)	물(%)
0	80	20
20	100	0
25	100	0
27	80	20
40	80	20

(5) 검출기파장

시간(분)	여기파장(㎚)	방출파장(㎚)
0-15	254	390
15-26	260	420
26-40	293	498

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 피이크면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 크로마토그램

(분)

그림 1. 표준품(벤조피렌 : BaP)과 내부표준물질(3-메틸콜란트렌)    크로마토그램

라) 정량한계 : 0.9 μg/kg

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

가) 계산방법

검량곡선에서 얻어진 표준물질과 내부표준물질의 피크에 대한 면적비[AS/AIS]를 Y축으로 하고 표준물질의 농도를 X축으로 하여 검량곡선을 작성하고 시험용액의 면적비 [ASAM/ASAMIS]를 Y축에 대입하여 벤조피렌의 농도를 계산한다.

AS：검량곡선 표준용액의 표준물질 피크면적

AIS：검량곡선 표준용액의 내부표준물질 피크면적

ASAM：시험용액의 벤조피렌 피크면적

ASAMIS：시험용액의 내부표준물질 피크면적

별표 7, (1) “겐타마이신(Gentamicin)”을 “겐타마이신(Gentamicin) : 항생물질”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

넙치               0.1

송어               0.1

잉어               0.1

별표 7, (2) “나이카바진(Nicarbazin)”을 “나이카바진(Nicarbazin) : 항원충제”로 한다.

별표 7, (3) “네오마이신(Neomycin)”을 “네오마이신(Neomycin) : 항생물질”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

어류*              0.5

갑각류             0.5

별표 7, (4) “노보비오신(Novobiocin)”을 “노보비오신(Novobiocin) : 항생물질”로, (5) “다노플록사신(Danofloxacin)”을 “다노플록사신(Danofloxacin) : 합성항균제”로, (6) “데코퀴네이트(Decoquinate)”를 “데코퀴네이트(Decoquinate) : 항원충제”로, (7) “도라멕틴(Doramectin)”을  “도라멕틴(Doramectin) : 구충제”로, (8) “디미나진(Diminazene)”을 “디미나진(Diminazene) : 항원충제”로, (9) “디클라주릴(Diclazuril)”을 “디클라주릴(Diclazuril) : 항원충제”로, (10) “디히드로스트렙토마이신/스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin/Streptomycin)”을 “디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin)/스트렙토마이신(Streptomycin) : 항생물질”로 , (11) “레바미졸(Levamisole)”을 “레바미졸(Levamisole) : 구충제”로, (12) “모넨신(Monensin)”을 “모넨신(Monensin) : 항원충제”로, (13) “목시덱틴(Moxidectin)”을 “목시덱틴(Moxidectin) : 구충제”로, (14) “바시트라신(Bacitracin)”을 “바시트라신(Bacitracin) : 항생물질”로, (15) “버지니아마이신(Virginiamycin)”을 “버지니아마이신(Virginiamycin) : 항생물질”로, (16) “벤질페니실린/프로케인벤질페니실린(Benzylpenicillin/Procaine benzylpenicillin)”을 “벤질페니실린(Benzylpenicillin)/프로케인벤질페니실린(Procaine benzylpenicillin) : 항생물질”로, (17) “살리노마이신(Salinomycin)”을 “살리노마이신(Salinomycin) : 항원충제”로, (18) “설파제〔Sulfonamides의 총합으로서, 설파클로르피리다진(Sulfachlorpyridazine), 설파디아진(Sulfadiazine), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파메톡시피리다진(Sulfamethoxypyridazine), 설파메라진(Sulfamerazine), 설파메타진(Sulfamethazine, Sulfadimidine), 설파메톡사졸(Sulfamethoxazole), 설파모노메톡신(Sulfamonomethoxine), 설파티아졸(Sulfathiazole), 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaline), 설파독신(Sulfadoxine), 설파페나졸(Sulfaphenazole), 설피속사졸(Sulfisoxazole), 설파클로르피라진(Sulfachlorpyrazine, Sulfaclozine)의 합〕”을 “설파제〔Sulfonamides의 총합으로서, 설파클로르피리다진(Sulfachlorpyridazine), 설파디아진(Sulfadiazine), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파메톡시피리다진(Sulfamethoxypyridazine), 설파메라진(Sulfamerazine), 설파메타진(Sulfamethazine, Sulfadimidine), 설파메톡사졸(Sulfamethoxazole), 설파모노메톡신(Sulfamonomethoxine), 설파티아졸(Sulfathiazole), 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaline), 설파독신(Sulfadoxine), 설파페나졸(Sulfaphenazole), 설피속사졸(Sulfisoxazole), 설파클로르피라진(Sulfachlorpyrazine, Sulfaclozine)의 합〕: 합성항균제”로, (19) “세프티오퍼(Ceftiofur)”를 “세프티오퍼(Ceftiofur) : 항생물질”로, (20) “스펙티노마이신(Spectinomycin)”을 “스펙티노마이신(Spectinomycin) : 항생물질”로, (21) “스피라마이신(Spiramycin)”을 “스피라마이신(Spiramycin) : 항생물질”로, (22) “아목시실린(Amoxicillin)”을 “아목시실린(Amoxicillin) : 항생물질”로, (23) “알벤다졸(Albendazol)”을 “알벤다졸(Albendazol) : 구충제”로, (24) “암푸롤리움(Amprolium)”을 “암푸롤리움(Amprolium) : 항원충제”로, (25) “암피실린(Ampicillin)”을 “암피실린(Ampicillin) : 항생물질”로, (26) “에리스로마이신(Erythromycin)”을 “에리스로마이신(Erythromycin) : 항생물질”로, (27) “에토파베이트(Ethopabate)”를 “에토파베이트 (Ethopabate) : 항원충제”로, (28) “엔로플록사신(Enrofloxacin) 〔시프로플록사신(Ciprofloxacin)과 합으로서〕”를 “엔로플록사신(Enrofloxacin) 〔시프로플록사신(Ciprofloxacin)과의 합〕: 합성항균제”로, (29) “오르메토프림(Ormethoprim)”을 “오르메토프림(Ormethoprim) : 합성항균제”로, (30) “옥소린산(Oxolinic acid)”을 “옥소린산(Oxolinic acid) : 합성항균제”로, (31) “옥시테트라싸이클린/클로르테트라싸이클린/테트라싸이클린 (Oxytetracycline /Chlortetracycline /Tetracycline, 합으로서)”를 “옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline)/클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline)/테트라싸이클린(Tetracycline)의 합 : 항생물질”로, (32) “올라퀸독스(Olaquindox)”를 “올라퀸독스(Olaquindox) : 합성항균제”로, (33) “올레안도마이신(Oleandomycin)”을 “올레안도마이신(Oleandomycin) : 항생물질”로, (34) “이버멕틴(Ivermectin)”을 “이버멕틴(Ivermectin) : 구충제로”, (35) “이소메타미디움(Isometamidium)”을 “이소메타미디움(Isometamidium) : 항원충제”로, (36) “제라놀(Zeranol)”을 “제라놀(Zeranol) : 성장호르몬”으로, (37) “죠렌(Zoalene)”을 “죠렌(Zoalene) : 항원충제”로, (38) “티아벤다졸(Thiabendazole)”을 “티아벤다졸(Thiabendazole) : 구충제”로, (39) “카바독스(Carbadox)”를 “카바독스(Carbadox) : 합성항균제”로, (40) “클로산텔(Closantel)”을 “클로산텔(Closantel) : 구충제”로, (41) “클로피돌(Clopidol)”을 “클로피돌(Clopidol) : 항원충제”로, (42) “타일로신(Tylosin)”을 “타일로신(Tylosin) : 항생물질”로, (43) “트리클라벤다졸(Triclabendazole)”을 “트리클라벤다졸(Triclabendazole) : 구충제”로, (44) “티암페니콜(Thiamphenicol)”을  “티암페니콜(Thiamphenicol) : 항생물질”로, (45) “틸미코신(Tilmicosin)”을 “틸미코신(Tilmicosin) : 항생물질”로, (46) “페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸(Febantel/Fenbendazole/Oxfendazole)”을 “페반텔(Febantel)/펜벤다졸(Fenbendazole)/옥스펜다졸(Oxfendazole) : 구충제”로, (47) “플루벤다졸(Flubendazole)”을  “플루벤다졸(Flubendazole) : 구충제”로, (48) “플루아주론(Fluazuron)”을 “플루아주론(Fluazuron) : 살충제”로, (49) “하이그로마이신 B(Hygromycin B)”를 “하이그로마이신 B(Hygromycin B) : 구충제”로, (50) “플루메퀸(Flumequin)”을 “플루메퀸(Flumequin) : 합성항균제”로, (51) “독시싸이클린(Doxycycline)”을 “독시싸이클린(Doxycycline) : 항생물질”로, (52) “아미트라즈(Amitraz)”를 “아미트라즈(Amitraz) : 살충제”로, (53) “코마포스(Coumaphos)”를 “코마포스(Coumaphos) : 살충제”, (54) “플루메쓰린(Flumethrin)”을 “플루메쓰린(Flumethrin) : 살충제”로, (55) “플루발리네이트(Fluvalinate)”를 “플루발리네이트(Fluvalinate) : 살충제”로, (56) “노르플록사신(Norfloxacin)”을 “노르플록사신(Norfloxacin) : 합성항균제”로, (57) “오플록사신(Ofloxacin)”을 “오플록사신(Ofloxacin) : 합성항균제”, (58) “페플록사신(Pefloxacin)”을  “페플록사신(Pefloxacin) : 합성항균제”로, (59) “나라신(Narasin)”을 “나라신(Narasin) : 항원충제”로, (60) “라살로시드(Lasalocid)”를 “라살로시드(Lasalocid) : 항원충제”로, (61) “린코마이신(Lincomycin)”을 “린코마이신(Lincomycin) : 항생물질”로, (62) “마두라마이신(Maduramycin)”을 “마두라마이신(Maduramycin) : 항원충제”로, (63) “밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)”을 “밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol) : 항생물질”로, (64) “샘두라마이신(Semduramicin)”을 “샘두라마이신(Semduramicin) : 항생물질”로, (65) “아빌라마이신(Avilamycin)”을 “아빌라마이신(Avilamycin) : 항생물질”로, (66) “아프라마이신(Apramycin)”을 “아프라마이신(Apramycin) : 항생물질”로, (67) “엔라마이신(Enramycin)”을 “엔라마이신(Enramycin) : 항생물질”로, (68) “콜리스틴(Colistin)”을 “콜리스틴(Colistin) : 항생물질”로 한다.

별표 7, (69) “티아물린(Tiamulin)”을 “티아물린(Tiamulin) : 항생물질”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

어류*              0.1

별표 7, (70) “델타메쓰린(Deltamethrin))”을 “델타메쓰린(Deltamethrin) : 살충제”로, (71) “사라플록사신(Sarafloxacin)”을 “사라플록사신(Sarafloxacin) : 합성항균제”로, (72) “싸이플루쓰린(Cyfluthrin)”을 “싸이플루쓰린(Cyfluthrin) : 살충제”로, (73) “아바멕틴(Abamectin)”을 “아바멕틴(Abamectin) : 구충제”로, (74) “아자페론(Azaperone)”을 “아자페론(Azaperone) : 진정제”로, (75) “에프리노멕틴(Eprinomectin)”을 “에프리노멕틴(Eprinomectin) : 구충제”로, (76) “이미도캅(Imidocarb)”을 “이미도캅(Imidocarb) : 항원충제”로, (77) “트리클로르폰(Trichlorfon, Metrifonate)”을 “트리클로르폰(Trichlorfon, Metrifonate) : 구충제”로, (78) “폭심(Phoxim)”을 “폭심(Phoxim) : 살충제”로, (79) “답손(Dapsone)”을 “답손(Dapsone) : 합성항균제”로, (80) “로니다졸(Ronidazole)”을 “로니다졸(Ronidazole) : 항원충제”로, (81) “메트로니다졸(Metronidazole)”을 “메트로니다졸(Metronidazole) : 항원충제”로, (82) “초산트렌볼론(Trenbolone acetate)”을 “초산트렌볼론(Trenbolone acetate) : 합성스테로이드제”로, (83) “카라졸롤(Carazolol)”을 “카라졸롤(Carazolol) : 진정제”로, (84) “페닐부타존(Phenylbutazone)”을 “페닐부타존(Phenylbutazone) : 항염증제”로 한다.

별표 7, 중 (108)부터 (110)까지를 다음과 같이 신설한다.

(108) 트리메토프림(Trimethoprim) : 합성항균제

식품명              ㎎/㎏

소근육              0.05

소간                0.05

소지방              0.05

소신장              0.05

돼지근육            0.05

돼지간              0.05

돼지지방            0.05

돼지신장            0.05

양근육              0.05

양간                0.05

양지방              0.05

양신장              0.05

염소근육            0.05

염소간              0.05

염소지방            0.05

염소신장            0.05

말근육              0.1

말간                0.1

말지방              0.1

말신장              0.1

가금근육            0.05

가금간              0.05

가금지방            0.05

가금신장            0.05

알                  0.02

유                  0.05

어류*               0.05

갑각류              0.05

(109) 클린다마이신(Clindamycin) : 항생물질

뱀장어              0.1

넙치                0.1

(110) 프라지콴텔(Praziquantel) : 구충제

조피볼락            0.02

별표 7, 중 주1을 다음과 같이 신설한다.

주1. 상기 각각의 기준 중 *표시된 어류는 가물치, 감성돔, 넙치, 농어, 능성어, 메기, 미꾸라지, 민물돔, 방어, 뱀장어, 붕어, 송어, 숭어, 조피볼락, 은어, 임연수어, 잉어, 전갱이, 전어, 쥐치, 참돔 등 양식 어류에 한한다.

부  칙(2010. 6. 30. )

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제 2. 5. 5)의 (3) 및 (5)의 개정규정은 2011년 1월 1일부터 시행하고, 〔별표 7〕의 (1), (3), (69), (108), (109) 및 (110) 중 수산물에 대한 개정규정은 2011년 2월1일부터 시행하며, 제 2, 5, 12), (4), ④의 개정규정은 2011년 7월1일부터 시행한다.

제2조(경과조치) ① 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정을 적용한다.

② 제1항에도 불구하고, 제2, 5, 12), (2) 및 제10, 7.4의 개정규정은 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항에 대하여도 이 고시를 적용한다.

신․ 구조문 대비표

현  행

고  시

제 1. 총칙

1. ～ 3. (생  략)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ～ 4. (생  략)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (생 략)

4) 식중독균

( 생 략)

(1) 장류(메주 제외) 및 소스류, 복합조미식품, 절임식품, 조림식품 : g 당 10,000 이하(단 멸균제품은 음성이어야 한다).

(2) (생 략)

5) 중금속 기준

(1) ～ (2) (생 략)

(3) 농산물 중 중금속 기준

① 납(mg/kg) : 감자 0.1 이하, 고구마 0.1 이하, 당근 0.1 이하, 대두 0.2 이하, 마늘 0.1 이하, 무 0.1 이하, 배추 0.3 이하, 부추 0.1 이하, 시금치 0.3 이하, 쌀(현미제외) 0.2 이하, 옥수수 0.2 이하, 파 0.1 이하, 팥 0.2 이하

② 카드뮴(mg/kg) : 감자 0.1 이하, 고구마 0.1 이하, 당근 0.1 이하, 대두 0.1 이하, 마늘 0.1 이하, 무 0.1 이하, 배추 0.2 이하, 부추 0.05 이하, 시금치 0.2 이하, 쌀(현미제외) 0.2 이하, 옥수수 0.1 이하, 파 0.05 이하, 팥 0.1 이하

(4) (생 략)

(5) 축산물 중 중금속 허용기준

① 납(mg/kg) : 가금류고기 0.1 이하, 돼지고기 0.1 이하, 소고기 0.1 이하

② 카드뮴(mg/kg) : 돼지고기 0.05 이하, 소고기 0.05 이하

6) ～ 7) ( 생 략)

8) 곰팡이독소 기준

(1) 총아플라톡신(B1, B2, G1 및 G2의 합)

대 상 식 품	기 준
( 생 략 )	15 μg/kg 이하 (단, B1은 10 μg/kg 이하이어야 한다)
( 생 략 )
( 생 략 )
( 생 략 )
< 신 설 >
< 신 설 >

(2) ～ (4) (생 략)

(5) 오크라톡신 A(Ochratoxin A)

대 상 식 품	기 준
밀, 보리 및 호밀	5 μg/kg 이하
(생 략)	5 μg/kg 이하
(생 략)	10 μg/kg 이하
(생 략)	20 μg/kg 이하
(생 략)	7 μg/kg 이하
< 신 설 >
< 신 설 >

(6) 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

대 상 식 품	기 준
(생 략)	1 mg/kg 이하
(생 략)	2 mg/kg 이하
< 신 설 >

(7) 제랄레논(Zearalenone)

대 상 식 품	기 준
( 생 략 )	200 μg/kg 이하
< 신 설 >

9) ～10) (생  략)

11) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 잔류동물용의약품의 기준적용

① (생 략)

② 식품공전의 동물용의약품 잔류허용기준에서 따로 식품명이 정해져 있지 않은 식용동물의 부산물(내장, 뼈, 머리, 꼬리, 발, 껍질, 혈액 등 식용이 가능한 부위)은 축산물의 경우 해당동물의 “근육(고기)”, 수산물의 경우 “어류”에 준하여 기준을 적용한다.

③ (생 략)

④ 개별동물에 대한 국내 및 국제식품규격위원회의 기준이 없을 시 유사축종의 잔류허용기준 중 해당부위의 최저기준을 준용한다. 즉, 포유류 중 기준이 없는 반추동물 및 말, 기준이 없는 비반추동물과 기준이 없는 가금류는 기준이 정해진 반추동물, 비반추동물 및 가금류의 기준 중 해당부위의 최저기준을 각각 적용하며, 로얄젤리 및 프로폴리스는 벌꿀의 기준을 적용한다.

⑤ 「식품의 기준 및 규격」 및 국제식품규격위원회에도 잔류기준이 없는 동물용의약품 중 항생물질 및 합성항균제에 대하여 축․수산물(유, 알 포함) 및 벌꿀(로얄젤리, 프로폴리스 포함)의 잔류기준을 0.03 mg/kg으로 적용한다.

12) 기타 유해물질 기준

(1) (생  략)

(2) 발기부전치료제 유사물질

① ～  (생 략)

<신 설>

(3) 3-MCPD(3-Monochloropropane-1,2-diol) 기준

(4) 벤조피렌[Benzo(a)pyrene]

① ～ ② (생 략)

<신  설>

(5) 비만치료제 유사물질

(6) (생  략)

13) ～ 15) (생 략)

< 신 설 >

6. (생  략)

제3. ～ 제4. (생  략)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 26. (생  략)

27. 주류

27-1 ～ 27-4 (생  략)

27-5 과실주

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (3) (생  략)

<신 설>

6) (생  략)

27-6 ～ 27-11 (생  략)

28. (생  략)

29. 기타식품류

29-1 ～ 29-12 (생  략)

29-13 밀가루

1) ～ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ～ (4) (생  략)

< 신 설 >

< 신 설 >

6) 시험방법

(1) ～ (3) (생  략)

< 신 설 >

< 신 설 >

29-14 ～ 29-18 (생  략)

제6. ～ 제9. (생 략)

제 10. 일반시험법

1. ～ 4. (생 략)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ~ 5.2 (생  략)

5.3.1 ~ 5.3.88 (생  략)

< 신  설 >

< 신 설 >

< 신 설 >

< 신 설 >

6. 식품 중 자연독소시험법

6.1 곰팡이독소

6.1.1 ～ 6.1.4 (생 략)

6.1.5 오크라톡신 A(Ochratoxin A)

1) 시험법의 적용범위 : 곡류, 메주, 커피류, 고춧가루

2) 분석원리

검체 중의 오크라톡신 A를 추출용매로 추출, 여과한 것을 면역친화성컬럼으로 정제시키고 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 : 형광검출기(Fluorescence detector)를 사용한다.

나) 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column) : OchraTest 또는 이와 동등한 것

다) 페닐실란고상추출칼럼(Phenyl silane solid phase extract column) : BakerBond SPE Phenyl(500 mg) 또는 이와 동등한 것

라) 여과지：Whatman No.4(12.0 cm) 또는 이와 동등한 것

마) 유리섬유여과지(Glass microfiber filter paper) : Whatman GF/A(pore size : 1.6 μm) 또는 이와 동등한 것

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 오크라톡신 A 표준원액

오크라톡신 A를 톨루엔․초산(99:1, v/v) 혼합용액에 녹여 200 μg/mL가 되도록 한다.

라) 오크라톡신 A 표준용액

오크라톡신 A 표준원액 100 μL를 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1mL를 가하여 녹인 후, 이를 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액으로 0.1～50 ng/mL의 농도가 되도록 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

염화나트륨(NaCl) 8.0 g, 무수 제이인산나트륨(Na2HPO4) 1.16 g, 제일인산칼륨 (KH2PO4) 0.2 g 및 염화칼륨(KCl) 0.2 g을 물 990 mL에 녹인 것을 0.2 M 수산화나트륨으로 pH 7.4로 조정한 후 물로 1 L로 한다.

바) 3% 탄산수소나트륨 용액

탄산수소나트륨(NaHCO3) 30 g을 물에 녹여 1 L로 한다.

사) 추출용액 I

아세토니트릴․물(60:40, v/v) 혼합용액

아) 추출용액 II

메탄올․3% 탄산수소나트륨(50:50, v/v)  혼합용액

자) 0.01% 트윈 20 함유 PBS 용액

트윈 20(Tween 20) 0.01 mL를 취하여 PBS 용액으로 100 mL한 것을 사용한다.

5) 시험용액의 조제

가) 곡류 및 메주

(1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 시료 25 g을 정밀히 달아 추출용액 I 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 5 mL를 100 mL 플라스크에 취하고 PBS 용액 55 mL로 희석시킨다. 희석액을 흔들어 섞은 후 유리섬유여과지로 여과한 것을 추출액으로 한다.

(2) 정제

추출액 48 mL(검체 1g에 해당)를 정제용 컬럼에 주입하여 초당 1～2 방울의 속도로 통과시킨다.

이어서 물 10 mL를 같은 유속으로 유출시키고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 1 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

나) 커피류 및 고춧가루

(1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 시료 5 g을 정밀히 달아 추출용액 II 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 6 mL를 50 mL 플라스크에 취하고 3% 탄산수소나트륨 용액 18 mL를 가하여 희석시킨다. 이 중 20 mL을 취하여 추출액으로 한다.

(2) 정제

미리 메탄올 15 mL와 3% 탄산수소나트륨 용액 5 mL을 차례로 흘려 활성화 시킨 페닐실란고상추출칼럼에 위의 추출액 20 mL를 일회용 주사기를 이용하여 주입하고 메탄올․3% 탄산수소나트륨(25:75, v/v) 10 mL와 3% 탄산수소나트륨 용액을 차례로 주입하여 칼럼을 세척한 후 7% 메탄올용액 10 mL로 용출시킨다. 용출액을 50 mL 정용플라스크에 넣고 PBS 용액으로 50 mL로 한다. 이를 면역친화성칼럼에 주입하여 초당 1～2 방울의 속도로 통과시킨다. 이어서 0.01% 트윈 20 함유 PBS 용액 10 mL와 증류수 10 mL를 차례로 흘려 칼럼을 세척하고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 2 mL로 용출시킨다.

용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기기 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액

(3) 칼럼온도 : 35℃

(4) 검출파장

(가) 여기파장 : 333 nm

(나) 형광파장 : 460 nm

(5) 유속 : 1 mL/분

(6) 주입량 : 5～20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 액체크로마토그래프에 주입한 후 얻어진 크로마토그램상의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 오크라톡신 A 표준용액의 농도에 따른 액체크로마토그램.

라) 정량한계

0.1 μg/kg

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 오크라톡신 A의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

가) 계산

오크라톡신 A의 함량(μg/kg) = C × V/M × D

C : 검량선에서 구한 오크라톡신 A의 농도(ng/mL)

V : 최종부피(mL)

M : 시료 채취량(g)

D : 희석배수

6.2 (생략)

6.3  패독

6.3.1 마비성 패독

1) ～ 3) (생 략)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생 략)

다) 표준원액 : -------------

(-----------------------

DC 20204)

라) ～ 마) (생 략)

5) ～ 7) (생 략)

6.3.2 (생 략)

6.4 (생 략)

7. 식품 중 유해물질시험법

7.1 중금속 시험

7.1.1 시료 채취 원칙

(생 략)

농산물	검 체
쌀	(생 략)
(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)
감자, 고구마	(생 략)
(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)
파	(생 략)
(생 략)	(생 략)

7.1.2 금속별 시험

7.1.2.1 납(Pb)

1) 시험용액의 조제

가) ～ 나) (생략)

다) 용매추출법

(1) 시약

(가) MIBK(Methyl Iso-Buthyl Ketone)

(나) DDTC(Diethyl dithocatbamic acid)

(다) BTB(Bromothymol blue)

(2) 시험조작

시험용액 및 공시험용액을 각각 10～50 mL 취하여 각각에 25% 구연산암모늄용액 2～10 mL 및 BTB시액 2방울을 가하여 액의 색이 황색에서 연한 녹색이 될 때까지 암모니아수로 중화하고 이에 40% 황산암모늄시액 2～10 mL 및 물을 가하여 일정량으로 한다. 여기에 10% DDTC용액 2～10 mL를 넣고 혼합하여 수분간 방치한 다음 MIBK 10～20 mL를 가하여 격렬히 흔들어 섞는다. 이를 정치하여 MIBK층을 분취하여 시험용액으로 한다.

주3) 표준용액에 대해서도 같은 조작을 하여 얻는다.

2) 측정

가) (생 략)

나) 유도결합플라즈마법

이 방법은 아르곤 가스에 고주파를 유도결합방법으로 걸어 방전되어 얻어진 아르곤 플라즈마에 시험용액을 주입하여 목적원소의 원자선 및 이온선의 발광광도를 측정하여 시험용액 중의 목적원소의 농도를 구하는 방법이다. 표준용액과 시험용액 및 공시험용액을 ICP(유도결합플라즈마)에 주입하여 시험용액의 농도를 구한다.

다) (생 략)

7.1.2.2 ～ 7.1.2.9 (생 략)

7.2 ～ 7.3 (생 략)

7.4 발기부전치료제 유사물질

1) ～ 3) (생 략)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (생 략)

다)표준원액：호모실데나필(homosildenafil), 홍데나필(hongdenafil), 하이드록시호모실데나필(hydroxyhomosildenafil), 아미노타다라필(aminotadalafil), 슈도바데나필(pseudovardenafil), 하이드록시홍데나필(hydroxyhongdenafil), 디메틸실데나필(dimethylsildenafil), 잔소안트라필(xanthoanthrafil), 하이드록시바데나필(hydroxyvardenafil), 노르네오실데나필(norneosildenafil), 데메틸홍데나필(demethylhongdenafil), 피페리디노홍데나필(piperidinohongdenafil), 카보데나필(carbodenafil), 치오실데나필(thiosildenafil), 디메틸치오실데나필(dimethylthiosildenafil), 아세틸바데나필(acetylvardenafil), 벤질실데나필(benzylsildenafil), 노르네오바데나필(norneovardenafil), 옥소홍데나필(oxohongdenafil), 치오호모실데나필(thiohomosildenafil), 데설포바데나필(desulfovardenafil), 니트로데나필(nitrodenafil), 싸이클로펜티나필(cyclopentynafil), 옥틸노르타다라필(octylnortadalafil), 클로로데나필(chlorodenafil), 신나밀데나필(cinnamyldenafil), 실데나필(sildenafil), 타다라필(tadalafil), 바데나필(vardenafil), 유데나필(udenafil), 미로데나필(mirodenafil) 각각의 표준품을 메탄올에 녹여 각각 100 mg/L이 되게 한다.

라) ～ 마) (생 략)

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 1 g을 정확히 달아 물 10 mL에 녹이고 메탄올 70 mL를 가하여 진탕 추출한 후 여과한다. 여액에 1% 중탄산나트륨용액 1 mL 및 물 20 mL을 가하고 디클로로메탄 50 mL로 2회 추출한 후 디클로로메탄층을 모아 삼각 플라스크에 옮긴다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 약 50g을 넣은 여과지를 사용하여 탈수여과한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하에 약 10 mL로 농축한다. 이 농축액을 시험관으로 옮겨서 40℃ 이하의 수욕상에서 질소가스 하에 약 5 mL까지 날려 보낸 다음 10 mL 메스플라스크로 옮겨서 메탄올로 정용한다. 이 액을 0.45 ㎛ 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 단, 시험용액의 농도가 검량곡선의 농도범위를 벗어날 경우 농도 범위내로 희석하여 사용한다.

6) 시험조작

가) (생 략)

(1) ～ (2) (생 략)

(3) 이동상

(가) (생 략)

(나) 이동상 B : 95%아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	90.0	10.0
3.0	90.0	10.0
13.0	75.0	25.0
30.0	64.0	36.0
33.0	57.0	43.0
35.0	50.0	50.0
40.0	0.0	100.0
40.9	0.0	100.0
41.0	90.0	10.0
50.0	90.0	10.0

(4) ～ (6) (생 략)

나) (생 략)

다) 표준품의 크로마토그램

라) (생 략)

7) ～ 9) (생 략)

10) 발기부전치료제 유사물질의 분자량 및 화학구조식

① ～  (생 략)

<신 설>

<신 설>

<신 설>

7.5 ～ 7.7 (생 략)

7.8 벤조피렌

7.8.1 ～ 7.8.2 (생 략)

<신 설>

7.9 (생 략)

8.～ 9. (생 략)

제11.～ 제12. (생 략)

[별표 1] ～ [별표 6] (생 략)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 겐타마이신(Gentamicin)

--- 유 0.2

(2) 나이카바진(Nicarbazin)

(3) 네오마이신(Neomycin)

--- 벌꿀 0.1

(4) 노보비오신(Novobiocin)

(5) 다노플록사신(Danofloxacin)

(6) 데코퀴네이트(Decoquinate)

(7) 도라멕틴(Doramectin)

(8) 디미나진(Diminazene)

(9) 디클라주릴(Diclazuril)

(10) 디히드로스트렙토마이신/스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin/Streptomycin)

(11) 레바미졸(Levamisole)

(12) 모넨신(Monensin)

(13) 목시덱틴(Moxidectin)

(14) 바시트라신(Bacitracin)

(15) 버지니아마이신(Virginiamycin)

(16) 벤질페니실린/프로케인벤질페니실린(Benzylpenicillin/Procaine benzylpenicillin)

(17) 살리노마이신(Salinomycin)

(18) 설파제〔Sulfonamides의 총합으로서, 설파클로르피리다진(Sulfachlorpyridazine), 설파디아진(Sulfadiazine), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파메톡시피리다진(Sulfamethoxypyridazine), 설파메라진(Sulfamerazine), 설파메타진(Sulfamethazine, Sulfadimidine), 설파메톡사졸(Sulfamethoxazole), 설파모노메톡신(Sulfamonomethoxine), 설파티아졸(Sulfathiazole), 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaline), 설파독신(Sulfadoxine), 설파페나졸(Sulfaphenazole), 설피속사졸(Sulfisoxazole), 설파클로르피라진(Sulfachlorpyrazine, Sulfaclozine)의 합〕

(19) 세프티오퍼(Ceftiofur)

(20) 스펙티노마이신(Spectinomycin)

(21) 스피라마이신(Spiramycin)

(22) 아목시실린(Amoxicillin)

(23) 알벤다졸(Albendazol)

(24) 암푸롤리움(Amprolium)

(25) 암피실린(Ampicillin)

(26) 에리스로마이신(Erythromycin)

(27) 에토파베이트(Ethopabate)

(28) 엔로플록사신(Enrofloxacin) 〔시프로플록사신(Ciprofloxacin)과 합으로서〕

(29) 오르메토프림(Ormethoprim)

(30) 옥소린산(Oxolinic acid)

(31) 옥시테트라싸이클린/클로르테트라싸이클린/테트라싸이클린 (Oxytetracycline /Chlortetracycline /Tetracycline, 합으로서)

(32) 올라퀸독스(Olaquindox)

(33) 올레안도마이신(Oleandomycin)

(34) 이버멕틴(Ivermectin)

(35) 이소메타미디움(Isometamidium)

(36) 제라놀(Zeranol)

(37) 죠렌(Zoalene)

(38) 티아벤다졸(Thiabendazole)

(39) 카바독스(Carbadox)

(40) 클로산텔(Closantel)

(41) 클로피돌(Clopidol)

(42) 타일로신(Tylosin)

(43) 트리클라벤다졸(Triclabendazole)

(44) 티암페니콜(Thiamphenicol)

(45) 틸미코신(Tilmicosin)

(46) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸 (Febantel/Fenbendazole/Oxfendazole)

(47) 플루벤다졸(Flubendazole)

(48) 플루아주론(Fluazuron)

(49) 하이그로마이신 B(Hygromycin B)

(50) 플루메퀸(Flumequin)

(51) 독시싸이클린(Doxycycline)

(52) 아미트라즈(Amitraz)

(53) 코마포스(Coumaphos)

(54) 플루메쓰린(Flumethrin)

(55) 플루발리네이트(Fluvalinate)

(56) “노르플록사신(Norfloxacin)

(57) 오플록사신(Ofloxacin)

(58) 페플록사신(Pefloxacin)

(59) 나라신(Narasin)

(60) 라살로시드(Lasalocid)

(61) 린코마이신(Lincomycin)

(62) 마두라마이신(Maduramycin)

(63) 밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)

(64) 샘두라마이신(Semduramicin)

(65) 아빌라마이신(Avilamycin)

(66) 아프라마이신(Apramycin)

(67) 엔라마이신(Enramycin)

(68) 콜리스틴(Colistin)

(69) 티아물린(Tiamulin)

--- 알 1.0

(70) 델타메쓰린(Deltamethrin)

(71) 사라플록사신(Sarafloxacin)

(72) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin)

(73) 아바멕틴(Abamectin)

(74) 아자페론(Azaperone)

(75) 에프리노멕틴(Eprinomectin)

(76) 이미도캅(Imidocarb)

(77) 트리클로르폰(Trichlorfon, Metrifonate)

(78) 폭심(Phoxim)

(79) 답손(Dapsone)

(80) 로니다졸(Ronidazole)

(81) 메트로니다졸(Metronidazole)

(82) 초산트렌볼론(Trenbolone acetate)

(83) 카라졸롤(Carazolol)

(84) 페닐부타존(Phenylbutazone)

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

< 신  설 >

제 1. 총칙

1. ～ 3. (현행과 같음)

제 2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ～ 4. (현행과 같음)

5. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 식중독균

( 현행과 같음)

(1) ----------복합조미식품, 김치류, 젓갈류, 절임식품 -------- :----

-------------------------

------.

(2) (현행과 같음)

5) 중금속 기준

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 농산물 중 중금속 기준

번호	대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
1	감	0.1 이하	-
2	감자	0.1 이하	0.1 이하
3	고구마	0.1 이하	0.1 이하
4	고추	0.2 이하	0.1 이하
5	당근	0.1 이하	0.1 이하
6	대두	0.2 이하	0.1 이하
7	마늘	0.1 이하	0.1 이하
8	망고	0.1 이하	-
9	무	0.1 이하	0.1 이하
10	밀	0.2 이하	0.2 이하
11	바나나	0.1 이하	-
12	배추	0.3 이하	0.2 이하
13	부추	0.1 이하	0.05 이하
14	시금치	0.3 이하	0.2 이하
15	쌀(현미 제외)	0.2 이하	0.2 이하
16	양파	0.1 이하	0.05 이하
17	오렌지	0.1 이하	-
18	오이	0.1 이하	0.05 이하
19	옥수수	0.2 이하	0.1 이하
20	참깨	0.3 이하	0.2 이하
21	키위	0.1 이하	-
22	파	0.1 이하	0.05 이하
23	팥	0.2 이하	0.1 이하
24	포도	0.2 이하	-

(4) (현행과 같음)

(5) 축산물 중 중금속 허용기준

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)
가금류고기	0.1 이하	-
돼지간	0.5 이하	0.5 이하
돼지고기	0.1 이하	0.05 이하
돼지신장	0.5 이하	1.0 이하
소간	0.5 이하	0.5 이하
소고기	0.1 이하	0.05 이하
소신장	0.5 이하	1.0 이하

6) ～ 7) ( 현행과 같음)

8) 곰팡이독소 기준

(1) 총아플라톡신(B1, B2, G1 및 G2의 합)

대 상 식 품	기 준(μg/kg)
(현행과 같음)	15 이하 (단, B1은 10 이하이어야 한다)
(현행과 같음)
(현행과 같음)
(현행과 같음)
밀가루
건조과실류

(2) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 오크라톡신 A(Ochratoxin A)

대 상 식 품	기 준(μg/kg)
곡류 및 그 단순가공품(분쇄, 절단 등)	5 이하
(현행과 같음)
(현행과 같음)	10 이하
(현행과 같음)	20 이하
(현행과 같음)	7 이하
포도주스, 포도주스농축액(원료용 포함, 농축배수로 환산하여), 포도주	2 이하
건포도	10 이하

(6) 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

대 상 식 품	기 준(mg/kg)
(현행과 같음)	1 이하
(현행과 같음)	2 이하
시리얼류	0.5 이하

(7) 제랄레논(Zearalenone)

대 상 식 품	기 준(μg/kg )
(현행과 같음)	200 이하
과자	50 이하

9) ～ 10) (현행과 같음)

11) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 식품 중 잔류동물용의약품 기준적용       ① (현행과 같음)

② [별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준-------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

③ (현행과 같음)

④ 로얄젤리 및 프로폴리스는 벌꿀의 기준을 적용한다.

⑤ 식용동물 등에 대해 이 고시에 별도로 잔류허용기준이 정해지지 아니한 경우 다음 각 항의 기준을 순차적으로 적용한다.

㉮ CODEX 기준

㉯ 유사 식용동물의 잔류허용기준 중 해당부위의 최저기준. 즉, 기준이 정하여지지 아니한 포유류 중 반추동물, 포유류 중 비반추동물, 가금류, 어류 및 갑각류는 각각 기준이 정하여진 반추동물, 비반추동물, 가금류, 어류, 갑각류 해당 부위의 기준 중 최저기준(단, 비반추동물 중 말은 기준이 있는 반추동물에 해당하는 기준 적용)

㉰ 항생물질 및 합성항균제에 대하여 축․수산물(유, 알 포함) 및 벌꿀(로얄젤리, 프로폴리스 포함)의 잔류기준을 0.03 mg/kg으로 적용

12) 기타 유해물질 기준

(1) (현행과 같음)

(2) 발기부전치료제 유사물질

① ～  (현행과 같음)

치오퀴나피페리필(thioquina piperifil) : 검출되어서는 아니된다.

하이드록시치오호모실데나필(hydroxythiohomosildenafil) : 검출되어서는 아니된다.

클로로프레타다라필 (Chloropretadalafil) : 검출되어서는 아니된다.

(3) (현행 (5)와 같음)

(4) 벤조피렌[Benzo(a)pyrene]

① ～ ② (현행과 같음)

③ 훈제어육 : 5.0 ㎍/㎏ 이하(다만, 건조제품은 제외)

④ 훈제건조어육 : 10.0 ㎍/㎏ 이하(생물로 기준 적용 : 건조로 인하여 수분함량이 변화된 경우 수분함량을 고려하여 적용)

⑤ 어류 : 2.0 ㎍/㎏ 이하

⑥ 패류 : 10.0 ㎍/㎏ 이하

⑦ 연체류 및 갑각류 : 5.0 ㎍/㎏ 이하

⑧ 특수용도식품 중 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영․유아용 곡류조제식, 기타 영․유아식 : 1.0 ㎍/㎏ 이하

⑨ 훈제식육제품 및 그 가공품 : 5.0 ㎍/㎏ 이하

(5) ( 현행 (3)과 같음)

(6) (현행과 같음)

13) ～ 15) (현행과 같음)

16) 식품자동판매기 다류․커피․음료류에 대한 미생물 기준(밀봉제품 제외)

(1) 세균수 : 3,000/mL 이하이어야 한다(다만, 유가공품, 유산균, 발효제품 및 가열하지 아니한 과일·채소류음료가 함유된 경우는 제외한다)

(2) 대장균 : 음성이어야 한다

6. (현행과 같음)

제3. ～ 제4. (현행과 같음)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 26. (현행과 같음)

27. 주류

27-1 ～ 27-4 (현행과 같음)

27-5 과실주

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 납(mg/kg) : 0.2 이하(다만, 포도주에 한한다)

6) (현행과 같음)

27-6 ～ 27-11 (현행과 같음)

28. (현행과 같음)

29. 기타식품류

29-1 ～ 29-12 (현행과 같음)

29-13 밀가루

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ～ (4) (현행과 같음)

(5) 납(mg/kg) : 0.2 이하

(6) 카드뮴(mg/kg) : 0.2 이하

6) 시험방법

(1) ～ (3) (현행과 같음)

(4) 납

제10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

(5) 카드뮴

제10. 일반시험법 7.1 중금속시험에 따라 시험한다.

29-14 ～ 29-18 (현행과 같음)

제6. ～ 제9. (현행과 같음)

제 10. 일반시험법

1. ～ 4. (생 략)

5. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

5.1 ~ 5.2 (현행과 같음)

5.3.1 ~ 5.3.88 (현행과 같음)

5.3.89 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 겐타마이신 및 네오마이신을 인산완충용액으로 추출하고 HLB 카트리지 및 약양이온교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기        (LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 겐타마이신 및 네오마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 표준품 희석용매에 녹여 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 표준품 희석용매로 희석하여 겐타마이신은 0.025, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 mg/L, 네오마이신은 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 및 1.0 mg/L가 되게 한다.

마) 표준품 희석용매 : 100 mL 아세토니트릴과 10 mL 초산을 넣고 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

바) 5 mM 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 용액 : 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 0.65 mL를 물에 녹여 1,000 mL가 되게 한다.

사) 10 mM 인산완충용액(0.4 mM EDTA와 2 % 삼염화초산 함유) : 2 L 매스플라스크에 제일인산칼륨(KH2PO4) 2.72 g를 넣고 물 1.9 L로 녹인 후 1 N 염산으로 pH 4.0을 맞춘다. 여기에 EDTA-나트륨 이수화물(Na2EDTA dihydrate) 0.3 g과 삼염화초산(trichloroacetic acid) 40 g을 넣고 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다.

아) 용출용액 : 삼염화초산 4.1 g을 넣고 물 100 mL로 녹인 후 아세토니트릴 50 mL를 첨가하고 물로 250 mL가 되게 한다.

자) HLB(Hydrophilic Lipophilic Balance) 카트리지: divinylbenzene

-co-N-vinylpyrrolidone 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(200 mg, 6 mL)를 사용한다.

차) 약양이온교환(Weak Cation Exchange) 카트리지 : 약양이온교환수지 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(150 mg, 6 mL)를 사용한다.

카) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

분쇄한 검체 2 g을 폴리프로필렌(Polypropylene)재질의 원심분리관에 취하고 10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 1분 동안 균질화한 다음 초음파로 10분간 추출한다. 진탕기를 이용하여 10분간 격렬하게 진탕한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 원심분리관에 옮긴 다음 남은 잔여물에 10 mM 인산완충용액 10 mL를 가하여 교반기로 섞고, 진탕기를 이용하여 10분간 격렬하게 진탕한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한 후 상층액을 합한다. 30% 수산화나트륨을 약 0.2 mL를 가하여 pH 7.5～8.0으로 맞추어 추출액으로 한다.

메탄올 5 mL와 물 5 mL로 각각 HLB 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 활성화한다. HLB 카트리지와 약양이온교환 카트리지를 연속으로 연결하여 추출액을 1～3 mL/min의 속도로 흡착시키고 물 5 mL를 넣어 같은 유속으로 세척한다. 수분을 제거하기 위해 5분 이상 공기를 통과시켜 건조한다. 용출용액 4 mL를 1～3 mL/min의 속도로 용출시켜 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험액을 폴리프로필렌(Polypropylene)재질의 바이알에 담아 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

․ 이동상 A : 5 mM 헵타플로오로뷰티린산(HFBA) 용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	90	10
15.0	60	40
25.0	60	40
30.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/min

(4) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 200℃

(3) 특이이온 및 Spray voltage

물 질	SIM ion(m/z)	Spray voltage(KV)
겐타마이신(C1a)	450	4.5
겐타마이신(C2, C2a)	464	4.5
겐타마이신(C1)	478	4.5
네오마이신	308	4.5

다) 표준품의 크로마토그램

겐타마이신(C1a) RT 12.9분

겐타마이신(C2, C2a)

RT 13.0분

겐타마이신(C1) RT 13.1분

네오마이신 RT 13.5분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 ,표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 중 겐타마이신 및 네오마이신의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 겐타마이신 정량한계 : 0.04 mg/kg

(2) 네오마이신 정량한계 : 0.003 mg/kg

5.3.90 프라지콴텔(Praziquantel), 티아물린(Tiamulin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 프라지콴텔과 티아물린을 2% 수산화암모늄으로 추출하고 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 프라지콴텔과 티아물린 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 프라지콴텔은 0.005, 0.01, 0.02, 0.03 및 0.04 mg/L, 티아물린은 0.025, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 mg/L가 되게 한다.

마) 2% 수산화암모늄 용액 : 암모니아수 10 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

바) 0.1 % 개미산 용액 : 개미산 0.5 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

사) HLB(Hydrophilic Lipophilic  Balance) 카트리지 : divinylbenzene

-co-N-vinylpyrrolidone  고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(200 mg, 6 mL)를 사용한다.

아) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

분쇄한 검체 2 g을 원심분리관에 취하고 2% 수산화암모늄 용액 6 mL를 가하여 균질화한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 상층액을 흡착시킨 다음 물 5 mL로 세척하고 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액을 약 3 mL가 될 때 까지 실온에서 질소 농축시킨다. 잔류한 추출액에 0.1% 개미산을 넣어 총량이 4 mL로 하고 이를 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	90	10
15.0	5	95
25.0	5	95
30.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/min

(4) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 250℃

(3) 특이이온 및 Spray voltage

물질	SIM ion(m/z)	Spray voltage(KV)
프라지콴텔	313	4.5
티아물린	494	4.5

다) 표준품의 크로마토그램

프라지콴텔 RT 10.8분

티아물린 RT 8.0분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 중 프라지콴텔 및 티아물린의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 프라지콴텔 정량한계 : 0.002 mg/kg

(2) 티아물린 정량한계 : 0.001 mg/kg

5.3.91 트리메토프림(Trimethoprim)

1) 시험법 적용범위

축산물과 수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 트리메토프림를 아세토니트릴 : 물(1:1) 혼합액[유(乳)의 경우는 아세토니트릴 : 5% TCA 용액(1:1) 혼합액]으로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 클로로포름으로 분배하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC/MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 트리메토프림 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 용해시켜 100  mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물(2:1) 혼합액으로 희석하여 알(卵)분석법은 0.05, 0.1, 0.2, 0.3 및 0.4 mg/L가 되게 하고, 알(卵) 외의 분석법은 0.125, 0.25, 0.5, 0.75 및 1.0 mg/L가 되게 한다.

마) 5% 삼염화초산 용액： 삼염화초산(Trichloroacetic acid) 5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

바) 염화암모늄-암모니아 완충용액 : 염화암모늄 67.6 g을 암모니아수 570 mL에 녹이고 물을 넣어 1000 mL로 한다.

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 : 물(1:1) 혼합액[유(乳)의 경우는 아세토니트릴 : 5% 삼염화초산 용액(1:1) 혼합액] 20 mL를 가한 후 1분간 진탕한 다음 3,000 G에서 10분간 원심분리를 시킨다. 상층액 10 mL를 다른 원심분리관에 옮긴 후 헥산 5 mL를 가하여 1분간 진탕한다. 이 용액을 1,000 G에서 5분간 원심분리하여 헥산층(상층)을 버리고 남은 액에 염화암모늄-암모니아 완충용액을 넣어 pH 10으로 맞춘다. 이 용액에 20 mL 클로로포름을 넣고 1분간 진탕 후 1,000 G에서 5분간 원심분리 하고 물층(상층)을 버린 후 클로로포름층(아랫층)을 40℃에서 질소농축한다. 잔사를 아세토니트릴 : 물(2:1) 혼합액 1 mL에 용해시킨 후 0.2㎛ 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 초산 용액

․ 이동상 B : 0.1% 초산을 함유한 아세토니트릴 용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	99.5	0.5
2.0	99.5	0.5
10.0	20	80
15.0	20	80
20.0	99.5	0.5
25.0	99.5	0.5

(4) 유속 : 0.25 mL/min

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : 아르곤

(4) Collision Energy : 23 V

다) 표준품의 크로마토그램

트리메토프림 RT 5.7분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 중 트리메토프림의 함량을 구한다.

물질	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)
트리메토프림	291	230

나) 정량한계 : 0.001 mg/kg

5.3.92 린코마이신(Lincomycin), 클린다마이신(Clindamycin)

1) 시험법 적용범위

수산물에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 린코마이신과 클린다마이신을 2% 초산으로 추출하고 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 린코마이신과 클린다마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 이동상으로 희석하여 표준원액을 각각 0.025, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 mg/L가 되게 한다.

마) 2% 초산 용액 : 초산 10 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

바) 0.1% 개미산 용액 : 개미산 0.5 mL를 물에 녹여 500 mL가 되게 한다.

사) HLB(Hydrophilic Lipophilic  Balance) 카트리지 : divinylbenzene

-co-N-vinylpyrrolidone  고정상이 충진되어 있는 일회용 가트리지(200 mg, 6 mL)를 사용한다.

아) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

분쇄한 검체 2 g을 원심분리관에 취하고 2% 초산 용액 6 mL를 가하여 균질화한 다음 1,200 G에서 10분간 원심분리 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 HLB 카트리지에 상층액을 흡착시킨 다음 물 5 mL로 세척한 후 메탄올 6 mL로 용출한다. 용출액을 약 3 mL가 될 때 까지 실온에서 질소 농축시킨다. 잔류한 추출액에 0.1% 개미산을 넣어 총량이 4 mL로 하고 이를 0.45 μm 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

․ 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

․ 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	90	10
15.0	5	95
25.0	5	95
30.0	90	10

(3) 유속 : 0.2 mL/min

(4) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 200℃

(3) 특이이온 및 Spray voltage

물질	SIM ion(m/z)	Spray voltage(KV)
린코마이신	407	4.5
클린다마이신	425	4.5

다) 표준품의 크로마토그램

린코마이신 RT 2.4분

클린다마이신 RT 5.8분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 특이이온을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름시간을 비교하고 ,표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 중 린코마이신 및 클린다마이신의 함량을 구한다.

나) 정량한계

(1) 린코마이신 정량한계 : 0.1 mg/kg

(2) 클린다마이신 정량한계 : 0.01 mg/kg

6. 식품 중 자연독소시험법

6.1 곰팡이독소

6.1.1 ～ 6.1.4 (현행과 같음)

6.1.5 오크라톡신 A(Ochratoxin A)

1) 시험법의 적용범위 : 곡류, 메주, 커피류, 고춧가루, 포도주스, 포도주스농축액, 포도주, 건포도

2) 분석원리

검체 중의 오크라톡신 A를 추출용매로 추출, 여과한 것을 면역친화성칼럼으로 정제시키고 액체크로마토그래프로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프 : 형광검출기(Fluorescence detector)를 사용한다.

나) 오크라톡신용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)

다) 페닐실란고상추출칼럼(Phenyl silane solid phase extract column) : BakerBond SPE Phenyl(500 mg) 또는 이와 동등한 것

라) 여과지：Whatman No.4(12.0 cm) 또는 이와 동등한 것

마) 유리섬유여과지(Glass microfiber filter paper) : Whatman GF/A(pore size : 1.6 μm) 또는 이와 동등한 것

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 오크라톡신 A 표준원액

오크라톡신 A를 톨루엔․초산(99:1, v/v) 혼합용액에 녹여 200 μg/mL가 되도록 한다.

라) 오크라톡신 A 표준용액

오크라톡신 A 표준원액 100 μL를 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후, 이를 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액으로 0.1 ～ 50 ng/mL의 농도가 되도록 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

마) PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

염화나트륨(NaCl) 8.0 g, 무수 제이인산나트륨(Na2HPO4) 1.16 g, 제일인산칼륨(KH2PO4) 0.2 g 및 염화칼륨(KCl) 0.2 g을 물 990 ml에 녹인 것을 0.2 M 수산화나트륨으로 pH 7.4로 조정한 후 물로 1 L로 한다.

바) 3% 탄산수소나트륨 용액

탄산수소나트륨(NaHCO3) 30 g을 물에 녹여 1 L로 한다.

사) 추출용액 I

아세토니트릴․물(60:40, v/v) 혼합용액

아) 추출용액 II

메탄올․3% 탄산수소나트륨(50:50, v/v) 혼합용액

자) 0.01% 트윈 20 함유 PBS 용액

트윈 20(Tween 20) 0.01 mL를 취하여 PBS용액으로 100 mL한 것을 사용한다.

차) 5% 탄산수소나트륨(NaHCO3) 함유 1% PEG(Polyethylene grycol) 용액

10 g의 PEG(Polyethylene glycol)와 50 g의 탄산수소나트륨(NaHCO3)을 물 950 mL에 녹이고 pH를 8.3로 맞춘 후 1 L로 한다.

카) 1 M PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

제이인산나트륨(Na2HPO4․2H2O) 2.56 g, 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 12.6 g과 염화나트륨(NaCl) 87.9g을 물 950 mL에 녹인 것을 pH 7.4로 조정한 후 1 L로 한다.

타) 0.1 M PBS(Phosphate-buffered saline) 용액

1 M PBS(Phosphate-buffered saline)용액을 물로 10배 희석하여 사용한다.

파) 1% 탄산수소나트륨 용액

탄산수소나트륨(NaHCO3) 10 g을 물에 녹여 1 L로 한다.

5) 시험용액의 조제

가) 곡류 및 메주

(1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 시료 25 g을 정밀히 달아 추출용액 I 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 5 mL를 100 mL 플라스크에 취하고 PBS 용액 55 mL로 희석시킨다. 희석액을 흔들어 섞은 후 유리섬유여과지로 여과한 것을 추출액으로 한다.

(2) 정제

추출액 48 mL(검체 1g에 해당)를 정제용 칼럼에 주입하여 초당 1～2 방울의 속도로 통과시킨다. 이어서 물 10 mL를 같은 유속으로 유출시키고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 1 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

나) 커피류 및 고춧가루

(1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화 한 시료 5 g을 정밀히 달아 추출용액 II 100 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 6 mL를 50 mL 플라스크에 취하고 3% 탄산수소나트륨 용액 18 mL를 가하여 희석시킨다. 이 중 20 mL을 취하여 추출액으로 한다.

(2) 정제

미리 메탄올 15 mL와 3% 탄산수소나트륨 용액 5 mL을 차례로 흘려 활성화 시킨 페닐실란고상추출칼럼에 위의 추출액 20 mL를 일회용 주사기를 이용하여 주입하고 메탄올․3% 탄산수소나트륨(25:75, v/v) 10 mL와 3% 탄산수소나트륨 용액을 차례로 주입하여 칼럼을 세척한 후 7% 메탄올용액 10 mL로 용출시킨다. 용출액을 50 mL 정용플라스크에 넣고 PBS 용액으로 50 mL로 한다. 이를 면역친화성칼럼에 주입하여 초당 1～2 방울의 속도로 통과시킨다. 이어서 0.01% 트윈 20 함유 PBS 용액 10 mL와 증류수 10 mL를 차례로 흘려 칼럼을 세척하고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 2 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

다) 포도주스, 포도주스농축액 및 포도주

(1) 추출

검체 10.0 g에 5% 탄산수소나트륨(NaHCO3) 함유 1% PEG(Polyethylene glycol) 용액 10 mL를 넣어 5분간 고속으로 균질화한 후 이를 여과지로 여과하여 추출액으로 한다.

(2) 정제

추출액 10 mL를 면역친화성칼럼에 주입하고 2.5% 염화나트륨 0.5% 탄산수소나트륨 용액(25 g의 염화나트륨과 5 g의  탄산수소나트륨을 950 mL의 물에 녹이고 pH를 8.1로 맞춘 후 1 L로 한다.) 5 mL과 물 5 mL를 차례로 흘려 세척하고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 2 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

라) 건포도

(1) 추출

검체 25 g을 정밀히 달아 1% 탄산수소나트륨(NaHCO3) 용액 60 mL를 넣어 1분간 고속으로 균질화한다. 균질화된 시료 42.5 g에 메탄올 70 mL를 가하고 1시간 동안 진탕한 후 이를 여과지로 여과한다. 여액 10 mL를 40 mL의 0.1 M PBS 용액으로 희석한 것을 추출액으로 한다.

(2) 정제

추출액 40 mL를 면역친화성칼럼에 주입하고 물 5 mL를 흘려 세척하고 칼럼 내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 메탄올 2.5 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물․초산(99:99:2, v/v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인 후 시린지 필터(pore size : 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 기기 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 아세토니트릴․물․초산99:99:2, v/v/v) 혼합용액

(3) 칼럼온도 : 35℃

(4) 검출파장

(가) 여기파장 : 333 nm

(나) 형광파장 : 460 nm

(5) 유속 : 1 mL/분

(6) 주입량 : 5～20 μL

나) 검량선 작성

표준용액을 액체크로마토그래프에 주입한 후 얻어진 크로마토그램상의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램

라) 정량한계

그림 1. 오크라톡신A 표준용액의 농도에 따른 액체크로마토그램

0.1 μg/kg

7) 정성시험

위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 오크라톡신 A의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

가) 계산

오크라톡신 A의 함량(μg/kg) = C × V/M × D

C : 검량선에서 구한 오크라톡신 A의 농도(ng/mL)

V : 최종부피(mL)

M : 시료 채취량(g)

D : 희석배수

6.2 (현행과 같음)

6.3  패독

6.3.1 마비성 패독

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) 표준원액 : --------------

(-----------------------

--- 20204 및 이와 동등한 것)

라) ～ 마) (현행과 같음)

5) ～ 7) (현행과 같음)

6.3.2 (현행과 같음)

6.4 (현행과 같음)

7. 식품 중 유해물질시험법

7.1 중금속 시험

7.1.1 시료 채취 원칙

(현행과 같음)

농산물	검 체
쌀, 밀	(생 략)
(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)
감자, 고구마, 당근	(생 략)
(생 략)	(생 략)
(생 략)	(생 략)
파, 마늘, 부추, 양파	(생 략)
(생 략)	(생 략)
오이	꼭지를 제거한 것
고추	받침을 제거한 것
참깨	종자
감	받침 및 씨를 제거한 것
포도	꼭지를 제거한 것
오렌지, 키위, 바나나	껍질을 제거한 것
망고	껍질을 제거하고 씨를 제거한 것

7.1.2 금속별 시험

7.1.2.1 납(Pb)

1) 시험용액의 조제

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) 용매추출법

(1) 시약

(가) ---------------------- Ketone) 또는 클로로포름

(나) ----------------------

acid), silver를 포함하지 않은 것

< 삭  제 >

(2) 시험조작

시험용액 및 공시험용액을 분액깔대기에 각각 10～50 mL 취한 후, 질산을 이용하여 pH 4로 조정한다. 여기에 10% DDTC 용액 1～5 mL를 넣고 흔들어 준 후 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL를 가하여 심하게 진탕하여 정치하고 MIBK(또는 클로로포름)층을 취한다. 다시 MIBK(또는 클로로포름) 20 mL로 위의 과정을 되풀이 한 후 여액을 합한다. 분배액을 열판에서 80℃로 가열하여 용매를 모두 날려버리고 잔류물에 질산 7 mL, 과산화수소 1 mL를 넣고 다시 열판에서 가열하여 완전히 분해․건조시킨다. 잔류물을 1 N 질산용액으로 재용해하여 시험용액으로 한다.

2) 측정

가) (현행과 같음)

나) 유도결합플라즈마법

---------------------------

---------------------------

---------------------------

------------------------ 이

온선의 발광광도 또는 질량값을   ---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

-------------------

다) (현행과 같음)

7.1.2.2 ～ 7.1.2.9 (현행과 같음)

7.2 ～ 7.3 (현행과 같음)

7.4 발기부전치료제 유사물질

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ～ 나) (현행과 같음)

다) --- : -------------------

------------------------

------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

----------------신나밀데나필

(cinnamyldenafil), 치오퀴나피페리필(thioquinapiperifil), 하이드록시치오호모실데나필(hydroxythiohomosildenafil),  클로로프레타다라필(Chloropretadalafil), 실데나필(sildenafil)---------------------

-----------------------------.

라) ～ 마) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

-------- 1 ～ 10 g----------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

-------------------- 추출한다.

---------------------------

----------------------- 25 g을 사용하여 탈수하고 ------- --------------- 감압농축한다. 건고물에 10 mL 메탄올을 가하여 녹인 후---------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

---------------------------

6) 시험조작

가) (현행과 같음)

(1) ～ (2) (현행과 같음)

(3) 이동상

(가) (현행과 같음)

(나) 이동상 B : 95%아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	80	20
30	60	40
32	60	40
45	0	100
50	0	100
52	80	20
60	80	20

(4) ～ (6) (현행과 같음)

나) (현행과 같음)

다) 표준품의 크로마토그램

라) (현행과 같음)

7) ～ 9) (현행과 같음)

10) 발기부전치료제 유사물질의 분자량 및 화학구조식

① ～  (현행과 같음)

치오퀴나피페리필 (Thioquinapiperifil) (C24H28N6OS, 448)

하이드록시치오호모실데나필 (Hydroxy thiohomosildenafil) (C23H32N6O4S2, 520)

클로로프레타다라필(Chloropretadalafil) (C22H19ClN2O5, 426)

7.5 ～ 7.7 (현행과 같음)

7.8 벤조피렌

7.8.1 ～ 7.8.2 (현행과 같음)

7.8.3 수산물 및 그 가공품 중 벤조피렌

1) 시험법 적용범위

수산물 및 그 가공품에 한한다.

2) 분석원리

내부표준물질로 3-메틸콜란트렌을 사용하여 1M 수산화칼륨․에탄올 용액으로 알칼리 분해하고 헥산으로 추출한 후 고체상 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프/형광검출기 (High Performance Liquid Chromatograph/Fluorescence Detector, HPLC/FLD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：HPLC급 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 후로리실 카트리지：SPE용 또는 이와 동등한 것

라) 멤브레인 필터：수용성 폴리테트라플루오로에틸렌 또는 이와 동등한 것

마) 표준원액：벤조피렌 표준물질을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

바) 내부표준원액：3-메틸콜란트렌 표준물질을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

사) 표준용액：표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

아) 내부표준용액：내부표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

자) 기타시약：잔류농약시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

균질화 된 검체 약 10 g(건조물의 경우 1～2g)을 달아 1M 수산화칼륨․에탄올 용액 100 mL와 함께 둥근바닥 플라스크에 넣고 내부표준물질 1 mL를 첨가한 후 환류냉각장치를 부착시킨다. 이를 미리 80℃로 예열된 전열기에서 3시간 동안 가열하여 알칼리 분해시키고 신속히 냉각 후 헥산 50 mL를 환류냉각관을 통하여 넣어준다. 둥근바닥 플라스크의 알칼리 분해액을 분액깔대기에 옮기고 에탄올:헥산(1:1)용액 50 mL로 세척하여 분액깔대기에 합친다. 이 액에 50 mL의 물을 넣어 심하게 흔들어 섞은 후 헥산층을 분리하여 다른 분액깔대기에 받아두고 물층에 헥산 50 mL를 넣어 추출하는 과정을 두 번 반복하여 얻은 헥산층을 모두 합친다. 이 헥산층에 물 50 mL을 넣고 흔들어 섞은 후 정치하여 물층은 버리는 조작을 3회 되풀이하고 헥산층을 무수황산나트륨 약 15 g을 넣은 여과지를 사용하여 탈수여과한 후 40 ℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 약 2 mL로 농축한다.

나) 정제

후로리실 카트리지는 미리 디클로로메탄 10 mL 및 헥산 20 mL를 초당 2～3방울의 속도로 유출시킨 후 사용한다. 이 카트리지에 위의 농축액을 넣고 헥산 10 mL와 헥산/디클로로메탄 (3:1) 20 mL로 각각 용출시킨 후 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 질소가스 하에 농축․건고한 후 잔류물을 아세토니트릴에 녹여 전량을 1 mL로 하고 이를 0.45 ㎛ 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：Supelguard LC-18을 연결한 Supelcosil LC-PAH column (25 ㎝ × 4.6 ㎜) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(4) 이동상

시간(분)	아세토니트릴(%)	물(%)
0	80	20
20	100	0
25	100	0
27	80	20
40	80	20

(5) 검출기파장

시간(분)	여기파장(㎚)	방출파장(㎚)
0-15	254	390
15-26	260	420
26-40	293	498

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크높이 또는 피이크면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 크로마토그램

(분)

그림 1. 표준품(벤조피렌:BaP)과 내부표준물질(3-메틸콜란트렌) 크로마토그램

라) 정량한계 : 0.9 μg/kg

7) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

8) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법에 따라 정량한다.

가) 계산방법

검량곡선에서 얻어진 표준물질과 내부표준물질의 피크에 대한 면적비[AS/AIS]를 Y축으로 하고 표준물질의 농도를 X축으로 하여 검량곡선을 작성하고 시험용액의 면적비 [ASAM/ ASAMIS]를 Y축에 대입하여 벤조피렌의 농도를 계산한다.

AS：검량곡선 표준용액의 표준물질 피크면적

AIS：검량곡선 표준용액의 내부표준물질 피크면적

ASAM：시험용액의 벤조피렌 피크면적

ASAMIS：시험용액의 내부표준물질 피크면적

7.9 (현행과 같음)

8.～ 9. (현행과 같음)

제11.～ 제12. (현행과 같음)

[별표 1] ～ [별표 6] (현행과 같음)

[별표 7] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 겐타마이신(Gentamicin) : 항생물질

--- 유 0.2, 넙치 0.1, 송어 0.1, 잉어 0.1

(2) 나이카바진(Nicarbazin) : 항원충제

(3) 네오마이신(Neomycin) : 항생물질

--- 벌꿀 0.1, 어류* 0.5, 갑각류 0.5

(4) 노보비오신(Novobiocin) : 항생물질

(5) 다노플록사신(Danofloxacin) : 합성항균제

(6) 데코퀴네이트(Decoquinate) : 항원충제

(7) 도라멕틴(Doramectin) : 구충제

(8) 디미나진(Diminazene) : 항원충제

(9) 디클라주릴(Diclazuril) : 항원충제

(10) 디히드로스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin)/스트렙토마이신(Streptomycin) : 항생물질

(11) 레바미졸(Levamisole) : 구충제

(12) 모넨신(Monensin) : 항원충제

(13) 목시덱틴(Moxidectin) : 구충제

(14) 바시트라신(Bacitracin) : 항생물질

(15) 버지니아마이신(Virginiamycin) : 항생물질

(16) 벤질페니실린(Benzylpenicillin)/프로케인벤질페니실린(Procaine benzylpenicillin) : 항생물질

(17) 살리노마이신(Salinomycin) : 항원충제

(18) 설파제〔Sulfonamides의 총합으로서, 설파클로르피리다진(Sulfachlorpyridazine), 설파디아진(Sulfadiazine), 설파디메톡신(Sulfadimethoxine), 설파메톡시피리다진(Sulfamethoxypyridazine), 설파메라진(Sulfamerazine), 설파메타진(Sulfamethazine, Sulfadimidine), 설파메톡사졸(Sulfamethoxazole), 설파모노메톡신(Sulfamonomethoxine), 설파티아졸(Sulfathiazole), 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaline), 설파독신(Sulfadoxine), 설파페나졸(Sulfaphenazole), 설피속사졸(Sulfisoxazole), 설파클로르피라진(Sulfachlorpyrazine, Sulfaclozine)의 합〕: 합성항균제

(19) 세프티오퍼(Ceftiofur) : 항생물질

(20) 스펙티노마이신(Spectinomycin) : 항생물질

(21) 스피라마이신(Spiramycin) : 항생물질

(22) 아목시실린(Amoxicillin) : 항생물질

(23) 알벤다졸(Albendazol) : 구충제

(24) 암푸롤리움(Amprolium) : 항원충제

(25) 암피실린(Ampicillin) : 항생물질

(26) 에리스로마이신(Erythromycin) : 항생물질

(27) 에토파베이트(Ethopabate) : 항원충제

(28) 엔로플록사신(Enrofloxacin) 〔시프로플록사신(Ciprofloxacin)과의 합〕: 합성항균제

(29) 오르메토프림(Ormethoprim) : 합성항균제

(30) 옥소린산(Oxolinic acid) : 합성항균제

(31) 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline)/클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline)/테트라싸이클린(Tetracycline)의 합 : 항생물질

(32) 올라퀸독스(Olaquindox) : 합성항균제

(33) 올레안도마이신(Oleandomycin) : 항생물질

(34) 이버멕틴(Ivermectin) : 구충제

(35) 이소메타미디움(Isometamidium) : 항원충제

(36) 제라놀(Zeranol) : 성장호르몬

(37) 죠렌(Zoalene) : 항원충제

(38) 티아벤다졸(Thiabendazole) : 구충제

(39) 카바독스(Carbadox) : 합성항균제

(40) 클로산텔(Closantel) : 구충제

(41) 클로피돌(Clopidol) : 항원충제

(42) 타일로신(Tylosin) : 항생물질

(43) 트리클라벤다졸(Triclabendazole) : 구충제

(44) 티암페니콜(Thiamphenicol) : 항생물질

(45) 틸미코신(Tilmicosin) : 항생물질

(46) 페반텔(Febantel)/펜벤다졸(Fenbendazole)/옥스펜다졸(Oxfendazole) : 구충제

(47) 플루벤다졸(Flubendazole) : 구충제

(48) 플루아주론(Fluazuron) : 살충제

(49) 하이그로마이신 B(Hygromycin B) : 구충제

(50) 플루메퀸(Flumequin) : 합성항균제

(51) 독시싸이클린(Doxycycline) : 항생물질

(52) 아미트라즈(Amitraz) : 살충제

(53) 코마포스(Coumaphos) : 살충제

(54) 플루메쓰린(Flumethrin) : 살충제

(55) 플루발리네이트(Fluvalinate) : 살충제

(56) 노르플록사신(Norfloxacin) : 합성항균제

(57) 오플록사신(Ofloxacin) : 합성항균제

(58) 페플록사신(Pefloxacin) : 합성항균제

(59) 나라신(Narasin) : 항원충제

(60) 라살로시드(Lasalocid) : 항원충제

(61) 린코마이신(Lincomycin) : 항생물질

(62) 마두라마이신(Maduramycin) : 항원충제

(63) 밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol) : 항생물질

(64) 샘두라마이신(Semduramicin) : 항생물질

(65) 아빌라마이신(Avilamycin) : 항생물질

(66) 아프라마이신(Apramycin) : 항생물질

(67) 엔라마이신(Enramycin) : 항생물질

(68) 콜리스틴(Colistin) : 항생물질

(69) 티아물린(Tiamulin) : 항생물질

--- 알 1.0, 어류* 0.1

(70) 델타메쓰린(Deltamethrin) : 살충제

(71) 사라플록사신(Sarafloxacin) : 합성항균제

(72) 싸이플루쓰린(Cyfluthrin) : 살충제

(73) 아바멕틴(Abamectin) : 구충제

(74) 아자페론(Azaperone) : 진정제

(75) 에프리노멕틴(Eprinomectin) : 구충제

(76) 이미도캅(Imidocarb) : 항원충제

(77) 트리클로르폰(Trichlorfon, Metrifonate) : 구충제

(78) 폭심(Phoxim) : 살충제

(79) 답손(Dapsone) : 합성항균제

(80) 로니다졸(Ronidazole) : 항원충제

(81) 메트로니다졸(Metronidazole) : 항원충제

(82) 초산트렌볼론(Trenbolone acetate) : 합성스테로이드제

(83) 카라졸롤(Carazolol) : 진정제

(84) 페닐부타존(Phenylbutazone) : 항염증제

(108) 트리메토프림(Trimethoprim) : 합성항균제

식품명 ㎎/㎏

소근육 0.05, 소간 0.05, 소지방 0.05,  소신장 0.05, 돼지근육 0.05, 돼지간 0.05, 돼지지방 0.05, 돼지신장 0.05, 양근육 0.05, 양간 0.05, 양지방 0.05, 양신장 0.05, 염소근육 0.05, 염소간 0.05, 염소지방 0.05, 염소신장 0.05, 말근육 0.1, 말간 0.1, 말지방 0.1, 말신장 0.1, 가금근육 0.05, 가금간 0.05, 가금지방 0.05, 가금신장 0.05, 알 0.02, 유 0.05, 어류* 0.05, 갑각류 0.05

(109) 클린다마이신(Clindamycin) : 항생물질

뱀장어 0.1, 넙치 0.1

(110) 프라지콴텔(Praziquantel) : 구충제

조피볼락 0.02

*주1. 상기 각각의 기준 중 *표시된 어류는 가물치, 감성돔, 넙치, 농어, 능성어, 메기, 미꾸라지, 민물돔, 방어, 뱀장어, 붕어, 송어, 숭어, 조피볼락, 은어, 임연수어, 잉어, 전갱이, 전어, 쥐치, 참돔 등 양식 어류에 한한다.