식품의약품안전처 공고 제2014-6호

화장품 안전기준 등에 관한 규정 일부개정고시안 행정예고

2014. 1.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2014-6호

「화장품 안전기준 등에 관한 규정」(식품의약품안전처 고시 제2013-24호, 2013. 4. 5)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 「행정절차법」 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2014년 1월 13일

식품의약품안전처장

화장품 안전기준 등에 관한 규정 일부개정고시안 행정예고

1. 개정 이유

혼재 사용되고 있는 일부 사용금지 제형의 용어를 명확히 하고, 검출허용한도가 설정되지 않은 ‘사용할 수 없는 원료’가 비의도적으로 검출된 경우 위해평가 근거를 마련하며, 국제기준에 부합되도록 미생물한도시험법을 개정함으로써 화장품 산업의 국제 경쟁력을 강화하고 화장품의 품질 및 안전성을 확보하고자 함.

2. 주요 내용

가. 일부 사용금지 제형의 용어를 명확화 (안 별표 2)

1) 에어로졸, 스프레이 등의 용어가 혼재 사용되고 있어 이를 조정할 필요가 있음.

2) “글루타랄(펜탄-1,5-디알)”, “데하이드로아세틱애씨드(3-아세틸-6-메칠피란-2,4(3H)-디온) 및 그 염류” 등 6개 성분에 대한 사용금지 제형의 용어를 개정

- 글루타랄(펜탄-1,5-디알)

- 데하이드로아세틱애씨드(3-아세틸-6-메칠피란-2,4(3H)-디온) 및 그 염류

- 아이오도프로피닐부틸카바메이트(아이피비씨)

- 에칠라우로일알지네이트 하이드로클로라이드

- 클로로부탄올

- 1,3-비스(하이드록시메칠)이미다졸리딘-2-치온

3) 국제기준에 부합되도록 사용금지 제형의 용어를 조정함으로써 민원인의 이해를 높이고자 함.

나. 검출허용한도가 설정되지 않은 ‘사용할 수 없는 원료’가 비의도적으로 검출된 경우 위해평가 근거 마련 (안 제5조)

1) ‘사용할 없는 원료’ 중 비의도적으로 검출이 됨에도 불구하고 아직 검출 허용 한도가 설정되지 않은 원료에 대해 비의도적으로 검출된 경우 동 규정 제5조 제1항의 취지에 부합하도록 위해평가 실시 근거 필요

2) 검출허용한도가 설정되지 않은 ‘사용할 수 없는 원료’가 비의도적으로 검출된 경우 위해평가 후 위해 여부를 결정토록 함.

3) ‘사용할 수 없는 원료’에 대한 규제를 합리적으로 개선함으로써 화장품 산업 발전 및 소비자 안전 사용 보장

다. 유통화장품의 미생물한도시험법 개정 (안 별표 4)

1) 미생물한도 기준이 화장품 전 유형으로 확대됨에 따라 제형별 특성을 반영한 미생물한도시험법 확립 필요

2) 제형별 전처리 방법 및 시험법 적합성 검증 시 ‘항균활성에 대한 중화제’를 예시하는 등 시험법을 구체적으로 제시한 미생물한도시험법 개정

3) 국제기준에 부합되도록 미생물한도시험법을 개정하여 명확한 시험법을 제시함으로써 제조(판매)업자의 품질관리 시 유통화장품의 안전·품질 확보

3. 의견 제출

「화장품 안전기준 등에 관한 규정」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는 단체 또는 개인은 2014년 3월 13일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처장(우편번호: 363-700, 주소 : 충북 청원군 오송읍 오송생명로2로 187 오송보건의료행정타운, 참조 : 화장품정책과, 전화 : 043-719-3410, 팩스 : 043-719-3400, 전자우편 : herbhwan@korea.kr)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬·반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 전화번호 및 주소

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2014 - 호

「화장품법」 제8조제1항, 제2항 및 제5항의 규정에 따른 「화장품 안전기준 등에 관한 규정」(식품의약품안전처 고시 제2013-24호, 2013. 4. 5)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2014년  월   일

식품의약품안전처장

화장품 안전기준 등에 관한 규정 일부개정고시안

화장품 안전기준 등에 관한 규정 일부를 다음과 같이 개정한다.

제5조 중 “제1항부터 제3항까지”를 “제1항부터 제4항까지”로, “제4항부터 제6항까지”를 “제5항부터 제7항까지”로 하고, 제2항부터 제6항까지를 제3항부터 제7항까지로 하며, 같은 조에 제2항을 다음과 같이 신설한다.

② 별표 1의 사용할 수 없는 원료가 제1항의 사유로 검출되었으나 검출허용한도가 설정되지 아니한 경우에는 「화장품법 시행규칙」 제17조에 따라 위해평가 후 위해 여부를 결정하여야 한다.

별표 2 * 살균․보존제 성분 중 “글루타랄(펜탄-1,5-디알)”에서 “스프레이제품”, “데하이드로아세틱애씨드(3-아세틸-6-메칠피란-2,4(3H)-디온) 및 그 염류”에서  “에어로솔제품”, “아이오도프로피닐부틸카바메이트(아이피비씨)”에서 “스프레이제품”, “클로로부탄올”에서 “에어로솔제품”은 각각  “에어로졸(스프레이에 한함)제품”으로 하고, “에칠라우로일알지네이트 하이드로클로라이드”에서 “0.4%(입술에 사용되는 제품 및 스프레이 제품에는 사용금지)”는 “0.4%”로 하며, 동 성분의 비고란에 “입술에 사용되는 제품 및 에어로졸(스프레이에 한함) 제품에는 사용금지”를 신설한다.

별표 2 * 기타 중 “1,3-비스(하이드록시메칠)이미다졸리딘-2-치온”에서 “에어로솔제품”은 “에어로졸(스프레이에 한함)제품”으로 하고, “에칠라우로일알지네이트 하이드로클로라이드”에서 “미생물 억제 목적으로 비듬샴푸”는 “비듬 및 가려움을 덜어주고 씻어내는 제품(샴푸)”로 한다.

별표 4의 Ⅰ. 일반화장품 중 ‘10. 미생물 한도’를 별지와 같이 한다.

부칙

이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

[별표 4]

유통화장품 안전관리 시험방법(제5조 관련)

Ⅰ. 일반화장품

10. 미생물 한도

일반적으로 다음의 시험법을 사용한다. 다만, 본 시험법 외에도 미생물 검출을 위한 자동화 장비와 미생물 동정기기 및 키트 등을 사용할 수 있다.

1) 검체의 전처리

검체조작은 무균조건하에서 실시하여야 하며, 검체는 충분하게 무작위로 선별하여 그 내용물을 혼합하고 검체 제형에 따라 다음의 각 방법으로 검체를 희석, 용해, 부유 또는 현탁시킨다. 아래에 기재한 어느 방법도 만족할 수 없을 때에는 적절한 다른 방법을 확립한다.

가) 액제·로션제 : 검체 1 mL(g)에 변형레틴액체배지 또는 검증된 배지나 희석액 9 mL를 넣어 10배 희석액을 만들고 희석이 더 필요할 때에는 같은 희석액으로 조제한다.

나) 크림제·오일제 : 검체 1 mL(g)에 적당한 분산제 1mL를 넣어 균질화 시키고 변형레틴액체배지 또는 검증된 배지나 희석액 8 mL를 넣어 10배 희석액을 만들고 희석이 더 필요할 때에는 같은 희석액으로 조제한다.

다) 파우더 및 고형제 : 검체 1g에 적당한 분산제를 1mL를 넣고 충분히 균질화 시킨 후 변형레틴액체배지 또는 검증된 배지 및 희석액 8mL를 넣어 10배 희석액을 만들고 희석이 더 필요할 때에는 같은 희석액으로 조제한다. 분산제만으로 균질화가 되지 않을 경우 40℃에서 30분 동안 가온한 후 멸균한 유리구슬(5mm: 5∼7개, 3mm: 10∼15)을 넣어 균질화 시킨다.

주1) 분산제는 멸균한 폴리소르베이트 80 등을 사용할 수 있으며, 미생물의 생육에 대하여 영향이 없는 것 또는 영향이 없는 농도이어야 한다.

주2) 검액 조제시 총호기성생균수시험법의 배지의 적합성시험과 미생물 발육저지물질의 확인 시험을 통하여 검증된 배지나 희석액을 사용할 수 있다.

2) 총 호기성 생균수 시험법

총 호기성 생균수 시험법은 화장품 중 총 호기성 생균(세균 및 진균)수를 측정하는 시험방법이다.

가) 검액의 조제

1)항에 따라 검액을 조제한다.

나) 배지

총 호기성 세균수시험은 변형레틴한천배지 또는 대두카제인소화안천배지를 사용하고 진균수시험은 항생물질 첨가 포테이토 덱스트로즈 한천배지 또는 항생물질 첨가 사브로포도당한천배지를 사용한다. 위의 배지 이외에 배지의 적합성 및 시험결과의 타당성 시험을 통하여 검증된 다른 미생물 검출용 배지도 사용할 수 있고, 세균의 혼입이 없다고 예상된 때나 세균의 혼입이 있어도 눈으로 판별이 가능하면 항생물질을 첨가하지 않을 수 있다.

변형레틴액체배지 (Modified letheen broth)

육제펩톤                           20.0 g

카제인의 판크레아틴 소화물         5.0 g

효모엑스                           2.0 g

육엑스                             5.0 g

염화나트륨                         5.0 g

폴리소르베이트 80                  5.0 g

레시틴                             0.7 g

아황산수소나트륨                   0.1 g

정제수                             1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

변형레틴한천배지(Modified letheen agar)

프로테오즈 펩톤                   10.0 g

카제인의 판크레아틱소화물         10.0 g

효모엑스                          2.0 g

육엑스                            3.0 g

염화나트륨                        5.0 g

포도당                            1.0 g

폴리소르베이트 80                 7.0 g

레시틴                            1.0 g

아황산수소나트륨                  0.1 g

한천                              20.0 g

정제수                            1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

대두카제인소화한천배지(Tryptic soy agar)

카제인제 펩톤                      15.0 g

대두제 펩톤                         5.0 g

염화나트륨                          5.0 g

한천                               15.0 g

정제수                             1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.2 ± 0.1이 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

항생물질첨가 포테이토덱스트로즈한천배지(Potato dextrose agar)

감자침출물                          200.0 g

포도당                              20.0 g

한천                                15.0 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다. 사용하기 전에 1 L당 40 mg의 염산테트라사이클린을 멸균배지에 첨가하고 10 % 주석산용액을 넣어 pH가 3.5 ± 0.1로 조정한다.

항생물질첨가사부로포도당한천배지(Sabouraud dextrose agar)

육제 또는 카제인제 펩톤              10.0 g

포도당                               20.0 g

한천                                 15.0 g

정제수                               1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균한 다음의 pH가 5.6 ± 0.2이 되도록 조정한다. 쓸 때 배지 1000 mL당 벤질페니실린칼륨 0.10 g과 테트라사이클린 0.10 g을 멸균용액으로서 넣거나 배지 1000 mL당 클로람페니콜 50 mg을 넣는다.

다) 조작

(1) 세균수 시험 ㉮ 한천평판도말법 직경 9 ∼ 10 cm 페트리 접시내에 미리 굳힌 세균시험용 배지 표면에 전처리 검액 0.1 mL이상 도말한다.

㉯ 한천평판희석법 검액 1 mL를 같은 크기의 페트리접시에 넣고 그 위에 멸균 후 45 ℃로 식힌 15 mL의 세균시험용 배지를 넣어 잘 혼합한다.

검체당 최소 2개의 평판을 준비하고 30∼35 ℃에서 적어도 48시간 배양하는데 이때 최대 균집락수를 갖는 평판을 사용하되 평판당 300개 이하의 균집락을 최대치로 하여 총 세균수를 측정한다.

(2) 진균수 시험 : ‘(1) 세균수 시험’에 따라 시험을 실시하되 배지는 진균수시험용 배지를 사용하여 배양온도 20∼25 ℃에서 적어도 5일간 배양한 후 100 개 이하의 균집락이 나타나는 평판을 세어 총 진균수를 측정한다.

라) 배지성능시험

시판배지는 배치마다 시험하며, 조제한 배지는 조제한 배치마다 시험한다. 배지에 표 1.에 기재한 균주를 100cfu 이하 접종하여 세균은 30∼35 ℃에서 적어도 48시간, 진균은 20∼25 ℃에서 적어도 5일간 배양할 때 충분한 증식 또는 접종 균수의 회수가 확인되어야 한다. 또한, 시험에 사용된 배지 및 희석액 또는 시험 조작상의 무균상태를 확인하기 위하여 완충식염펩톤수(pH 7.0)를 대조로 하여 총호기성 생균수시험을 실시할 때 미생물의 성장이 나타나서는 안 된다.

시험균주		배양
Escherichia coli	ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP53.126, NBRC 3972 또는 KCTC 2571	호기배양 30 ∼ 35 ℃ 48시간
Bacillus subtilis	ATCC 6633, NCIMB 8054, CIP 52.62, NBRC 3134 또는 KCTC 1021
Staphylococcus aureus	ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83, NRRC 13276 또는 KCTC 3881
Candida albicans	ATCC 10231, NCPF 3179, IP48.72, NBRC1594 또는 KCTC 7965	호기배양 20 ∼ 25 ℃ 5일

표 1. 총호기성생균수 배지성능시험용 균주 및 배양조건

마) 시험법 적합성시험

검체의 유무하에서 라).항에 따라 시험할 때 검액에서 회수한 균수와 대조액에서 회수한 균수를 비교한다. 검체 중 보존제 등의 항균활성으로 인해 증식이 저해되는 경우 (검액에서 회수한 균수가 대조액에서 회수한 균수의 1/2 미만인 경우)에는 결과의 유효성을 확보하기 위하여 총호기성생균수시험법을 변경해야 한다. 항균활성을 중화하기 위하여 희석 및 중화제(표2.)를 사용할 수 있다.

표2. 항균활성에 대한 중화제

화장품 중 미생물 발육저지물질	항균성을 중화시킬 수 있는 중화제
페놀 화합물： 파라벤, 페녹시에탄올,페닐에탄올 등 아닐리드	레시틴, 폴리소르베이트 80, 지방알코올의 에틸렌 옥사이드축합물(condensate), 비이온성 계면활성제
4급 암모늄 화합물, 양이온성 계면활성제	레시틴, 사포닌, 폴리소르베이트 80, 도데실 황산나트륨, 지방 알코올의에틸렌 옥사이드 축합물
알데하이드, 포름알데히드－유리 제제	글리신, 히스티딘
산화(oxidizing) 화합물	치오황산나트륨
이소치아졸리논, 이미다졸	레시틴, 사포닌, 아민, 황산염, 메르캅탄, 아황산수소나트륨, 치오글리콜산나트륨
비구아니드	레시틴, 사포닌, 폴리소르베이트 80
금속염(Cu, Zn, Hg), 유기－수은 화합물	아황산수소나트륨, L－시스테인－SH 화합물(sulfhydryl compounds), 치오글리콜산

3) 특정세균시험법

가) 대장균 시험

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL을  유당액체배지를 사용하여 10 mL로 하여 30∼35 ℃에서 24∼72시간 배양한다. 배양액을 가볍게 흔든 다음 백금이 등으로 취하여 맥콘키한천배지위에 도말하고 30∼35 ℃에서 18∼24 시간 배양한다. 주위에 적색의 침강선띠를 갖는 적갈색의 그람음성균의 집락이 검출되지 않으면 대장균 음성으로 판정한다. 위의 특정을 나타내는 집락이 검출되는 경우에는 에오신메칠렌블루한천배지에서 각각의 집락을 도말하고 30∼35 ℃에서 18∼24시간 배양한다. 에오신메칠렌블루한천배지에서 금속 광택을 나타내는 집락 또는 투과광선하에서 흑청색을 나타내는 집락이 검출되면 백금이등으로 취하여 발효시험관이 든 유당액체배지에 넣어 44.3∼44.7 ℃의 항온수조 중에서 22∼26 시간 배양한다. 가스발생이 나타나는 경우에는 대장균 양성으로 의심하고 동정시험으로 확인한다.

(2) 배지

유당액체배지

육엑스                             3.0 g

젤라틴의 판크레아틴 소화물         5.0 g

유당                               5.0 g

정제수                             1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 121 ℃에서 15∼20 분간 고압증기멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9∼7.1이 되도록 하고 가능한 한 빨리 식힌다.

맥콘키한천배지

젤라틴의 판크레아틴 소화물          17.0 g

카제인의 판크레아틴 소화물          1.5 g

육제 펩톤                           1.5 g

유당                                10.0 g

데옥시콜레이트나트륨                1.5 g

염화나트륨                          5.0 g

한천                                13.5 g

뉴트럴렛                            0.03 g

염화메칠로자닐린                    1.0 mg

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수 1 L에 녹여 1분간 끓인 다음 121 ℃에서 15∼20 분간 고압증기 멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9∼7.3이 되도록 한다.

에오신메칠렌블루한천배지(EMB한천배지)

젤라틴의 판크레아틴 소화물           10.0 g

인산일수소칼륨                       2.0 g

유당                                 10.0 g

한천                                 15.0 g

에오신                               0.4 g

메칠렌블루                           0.065 g

정제수                               1000 mL

이상을 달아 정제수 1 L에 녹여 121 ℃에서 15∼20 분간 고압증기 멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9∼7.3이 되도록 한다.

나) 녹농균시험

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL를 달아 카제인대두소화액체배지를 사용하여 10 mL로 하고 30∼35 ℃에서 24∼48시간 증균 배양한다. 증식이 나타나는 경우는 백금이 등으로 세트리미드한천배지 또는 엔에이씨한천배지에 도말하여 30∼35 ℃에서 24∼48시간 배양한다. 미생물의 증식이 관찰되지 않는 경우 녹농균 음성으로 판정한다. 그람음성간균으로 녹색 형광물질을 나타내는 집락을 확인하는 경우에는 증균배양액을 녹농균 한천배지 P 및 F에 도말하여 30∼35 ℃에서 24∼72시간 배양한다. 그람음성간균으로 플루오레세인 검출용 녹농균 한천배지 F의 집락을 자외선하에서 관찰하여 황색의 집락이 나타나고, 피오시아닌 검출용 녹농균 한천배지 P의 집락을 자외선하에서 관찰하여 청색의 집락이 검출되면 옥시다제시험을 실시한다. 옥시다제반응 양성인 경우 5∼10초 이내에 보라색이 나타나고 10초 후에도 색의 변화가 없는 경우 녹농균 음성으로 판정한다. 옥시다제반응 양성인 경우에는 녹농균 양성으로 의심하고 동정시험으로 확인한다.

(2) 배지

카제인대두소화액체배지

카제인 판크레아틴 소화물            17.0 g

대두파파인소화물                    3.0 g

염화나트륨                          5.0 g

인산일수소칼륨                      2.5 g

포도당일수화물                      2.5 g

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.3 ± 0.2가 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

세트리미드한천배지(Cetrimide agar)

젤라틴제 펩톤                       20.0 g

염화마그네슘                        3.0 g

황산칼륨                            10.0 g

세트리미드                          0.3 g

글리세린                            10.0 mL

한천                                13.6 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다. 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

엔에이씨한천배지(NAC agar)

펩톤                                 20.0 g

인산수소이칼륨                       0.3 g

황산마그네슘                         0.2 g

세트리미드                           0.2 g

날리딕산                             15 mg

한천                                 15.0 g

정제수                               1000 mL

최종 pH는 7.4 ± 0.2이며 멸균하지 않고 가온하여 녹인다.

플루오레세인 검출용 녹농균 한천배지 F (Pseudomonas agar F for detection of fluorescein)

카제인제 펩톤                       10.0 g

육제 펩톤                           10.0 g

인산일수소칼륨                      1.5 g

황산마그네슘                        1.5 g

글리세린                            10.0 mL

한천                                15.0 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다. 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

피오시아닌 검출용 녹농균 한천배지 P (Pseudomonas agar P for detection  of pyocyanin)

젤라틴의 판크레아틴 소화물          20.0 g

염화마그네슘                        3.0 g

황산칼륨                            10.0 g

글리세린                            10.0 mL

한천                                15.0 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다. 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

다) 황색포도상구균 시험

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL를 달아 카제인대두소화액체배지를 사용하여 10 mL로 하고 30∼35 ℃에서 24∼48시간 증균 배양한다. 증균배양액을 보겔존슨한천배지 또는 베어드파카한천배지에 이식하여 30∼35 ℃에서 24시간 배양하여 균의 집락이 검정색이고 집락주위에 황색투명대가 형성되며 그람염색법에 따라 염색하여 검경한 결과 그람 양성균으로 나타나면 응고효소시험을 실시한다. 응고효소시험 음성인 경우 황색포도상구균 음성으로 판정하고, 양성인 경우에는 황색포도상구균 양성으로 의심하고 동정시험으로 확인한다.

(2) 배지

보겔존슨한천배지(Vogel-Johnson agar)

카제인의 판크레아틴 소화물          10.0 g

효모엑스                            5.0 g

만니톨                              10.0 g

인산일수소칼륨                      5.0 g

염화리튬                            5.0 g

글리신                              10.0 g

페놀렛                              25.0 mg

한천                                16.0 g

정제수                              950 mL

이상을 달아 1분동안 가열하여 자주 흔들어 준다. 121 ℃에서 15분간 고압멸균하고 45∼50 ℃로 냉각시킨다. 멸균 후 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정하고 멸균한 1 %(w/v) 텔루린산칼륨 20 mL를 넣는다.

베어드파카한천배지(Baird-Parker agar)

카제인제 펩톤                       10.0 g

육엑스                              5.0 g

효모엑스                            1.0 g

염화리튬                            5.0 g

글리신                              12.0 g

피루브산나트륨                      10.0 g

한천                                20.0 g

정제수                              950 mL

이상을 섞어 때때로 세게 흔들며 섞으면서 가열하고 1분간 끓인다. 121 ℃에서 15 분간 고압멸균하고 45∼50 ℃로 냉각시킨다. 멸균한 다음의 pH가 6.8 ± 0.2가 되도록 조정한다. 여기에 멸균한 아텔루산칼륨용액 1 %(w/v) 10 mL와 난황유탁액 50 mL를 넣고 가만히 섞은 다음 페트리접시에 붓는다. 난황유탁액은 난황 약 30 %, 생리식염액 약 70 %의 비율로 섞어 만든다.

라) 배지성능 및 시험법 적합성시험

표3.에 따라 시험균주를 각 배지에 약 100cfu를 개별적으로 접종하여 규정된 조건에서 배양하였을 때 충분한 증식 및 적절한 특성이 확인되어야 한다. 또한 검액의 유·무 하에서 각각 특정세균시험법에 따라 시험할 때 접종균 각각에 대하여 양성으로 나타나야 한다. 증식이 저해되는 경우 2)-마)항에 따라 항균활성을 중화시킨다.

표3. 특정세균 배지성능시험용 균주

Escherichia coli (대장균)	ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP53.126, NBRC 3972 또는 KCTC 2571
Pseudomonas aeruginosa (녹농균)	ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, NBRC 13275 또는 KCTC 2513
Staphylococcus aureus (황색포도상구군)	ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83, NRRC 13276 또는 KCTC 3881

신･구조문 대비표

현 행	개 정 안
제5조(유통화장품의 안전관리 기준) 유통화장품은 제1항부터 제3항까지의 안전관리 기준에 적합하여야 하며, 유통화장품 유형별로 제4항부터 제6항까지의 안전관리 기준에 추가적으로 적합하여야 한다. 또한 시험방법은 별표 4에 따라 시험하되, 기타 과학적․합리적으로 타당성이 인정되는 경우 자사 기준으로 시험할 수 있다.	제5조(유통화장품의 안전관리 기준) -----------제1항부터 제4항까지------------------------- -------------------------제5항부터 제7항까지------------ -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.
① (생 략)	① (현행과 같음)
<신 설>	② 별표 1의 사용할 수 없는 원료가 제1항의 사유로 검출되었으나 검출허용한도가 설정되지 아니한 경우에는 「화장품법 시행규칙」 제17조에 따라 위해평가 후 위해 여부를 결정하여야 한다.
② (생략)	③ (현행 제2항과 같음)
1.～3. (생략)	1.～3. (현행과 같음)
③ (생략)	④ (현행 제3항과 같음)
1.～4. (생략)	1.～4. (현행과 같음)
④ (생략)	⑤ (현행 제4항과 같음)
⑤ (생략)	⑥ (현행 제5항과 같음)
⑥ (생략)	⑦ (현행 제6항과 같음)
1.～9. (생략)	1.～9. (현행과 같음)