〔붙임〕

유통 중 화장품 품질관리 가이드라인

2011. 12. 26.

목   차

Ⅰ. 서론	3

Ⅱ. 기준 및 시험방법

1. 기준	5

2. 시험방법	6

가. 포름알데히드	6

나. 프탈레이트류	8

다. 디옥산	10

라. 히드라퀴논	12

마. 미생물한도	13

바. 기타	24

	I. 서 론

1. 배경

가. 화장품 중 비의도적 유해성분 검출로 국민 불안 가중됨에 따라 기존의 품질관리 체계로는 비의도적으로 생성된 유해물질 관리에 한계가 있었음.

나. 브랜드 산업인 화장품의 실질적인 주체는 유통(판매)업체이나 제조·수입 업체만을 관리대상으로 함에 따라 관리의 실효성 부재.

다. 이에 따라 화장품 안전관리 강화 방안으로 화장품과 관련된 학계, 업계, 단체, 연구기관 전문가들의 의견을 반영하여 가이드라인 제정.

라. 향후 화장품법 개정(2012. 2. 5. 시행)에 따른 유통화장품의 안전관리기준을 고시하여 소비자를 보호하도록 함.

2. 목적

-  시중 유통 중인 화장품을 수거 검사 시 비의도적으로 생성된 유해물질 등에 대한 기준 및 시험방법을 제시하여, 화장품 업계 및 각 검사기관에서의 품질관리의 일관성을 유지함으로써 화장품 안전관리에 적정을 기하기 위함임.

3. 적용 범위

-  이 가이드라인은 유통 중인 화장품을 수거하여 검사할 때 적용함. 다만, 이 가이드라인보다 과학적이고 합리적인 시험 방법으로 시험할 경우에는 업계에서 타당한 근거자료를 보관하고 있어야 함.

4. 기타

- 기준 단위는 ‘㎍/g'으로 통일함.

- ‘하이드로퀴논’의 기준은 알부틴 사용 모든 화장품에 적용함.

5. 시행일

- 이 가이드라인은 2012. 1. 1.부터 시행한다.

	II. 기준 및 시험방법

1. 기준

가. 포름알데히드 : 다음 시험방법에 따라 시험할 때 그 양은 2,000 ug/g 이하이어야 한다.

나. 프탈레이트류 (디부틸프탈레이트, 부틸벤질프탈레이트 및 디에칠헥실프탈레이트) : 다음 방법에 따라 시험할 때 총 합으로서 100 μg/g 이하이어야 한다.

다. 디옥산 : 다음 시험방법에 따라 시험할 때 그 양은 100 μg/g 이하이어야 한다.

라. 히드로퀴논 : 알부틴을 원료로 사용한 제품에 대하여 시험하며, 다음 시험방법에 따라 시험할 때 그 양은 1 μg/g 이하이어야 한다.

마. 미생물한도 : 다음 시험방법에 따라 시험할 때 총 호기성생균수는 눈화장용제품류 및 어린이용제품류의 경우 500 개/g(mL) 이하, 기타 화장품의 경우 1,000 개/g(mL) 이하이고, 대장균 (Escherichia Coli), 녹농균 (Pseudomo nas aeruginosa), 황색포도상구균 (Staphylo coccus aureus)은 검출되지 않아야 한다.

바. 보존제(벤조익애씨드, 그 염류 및 에스텔류 등) : 「화장품 원료지정에 관한 규정」(식약청 고시 제2010-99호)의 기준을 적용한다.

사. 기타 : 이 가이드라인에 설정되어 있지 않은 기준은 「화장품 기준 및 시험방법」(식약청 고시 제2009-158호)의 기준을 적용한다.

2. 시험방법

가. 포름알데하이드

검체 약 1.0 g을 정밀하게 달아 초산･초산나트륨완충액주1)을 넣어 20 mL로 하고 1 시간 진탕 추출한 다음 여과한다.  여액 1 mL를 정확하게 취하여 물을 넣어 200 mL로 하고, 이 액 100 mL를 취하여 초산･초산나트륨완충액주1) 4 mL를 넣은 다음 균질하게 섞고 6 mol/L 염산 또는 6 mol/L 수산화나트륨용액을 넣어 pH를 5.0으로 조정한다.  이 액에 2,4-디니트로페닐히드라진시액주2) 6.0 mL를 넣고 40 ℃에서 1 시간 진탕한 다음, 디클로로메탄 20 mL로 3 회 추출하고 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 5.0 g을 놓은 탈지면을 써서 여과한다.  이 여액을 감압에서 가온하여 증발 건고한 다음 잔류물에 아세토니트릴 5.0 mL를 넣어 녹인 액을 검액으로 한다.  따로 포름알데하이드 표준품을 물로 희석하여 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 ㎍/mL의 액을 만든 다음, 각 액 100 mL를 취하여 검액과 같은 방법으로 전처리하여 표준액으로 한다.  검액 및 표준액 각 10 μL씩을 가지고 다음 조건으로 액체크로마토그래프법의 절대검량선법에 따라 시험한다.  필요하면 표준액의 검량선 범위 내에서 검체 채취량 또는 검체 희석배수를 조정할 수 있다.

<조작조건>

검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 355 nm)

칼  럼 : 안지름 약 4.6 mm, 길이 약 25 cm인 스테인레스강관에 5 ㎛의 액체크로마토그래프용옥타데실실릴화한 실리카겔을 충전한다.

이동상 : 0.01 mol/L 염산 ․ 아세토니트릴혼합액 (40 : 60)

유  량 : 1.5 mL/분

주1) 초산･초산나트륨완충액 : 5 mol/L 초산나트륨액 60 mL에 5 mol/L 초산 40 mL를 넣어 균질하게 섞은 다음, 6 mol/L 염산 또는 6 mol/L 수산화나트륨용액을 넣어 pH를 5.0으로 조정한다.

주2) 2,4-디니트로페닐하이드라진시액 : 2,4-디니트로페닐하이드라진 약 0.3 g을 정밀하게 달아 아세토니트릴을 넣어 녹여 100 mL로 한다.

나. 프탈레이트류 (디부틸프탈레이트, 부틸벤질프탈레이트 및 디에칠헥실프탈레이트)

검체 약 1.0 g을 정밀하게 달아 헥산․아세톤 혼합액 (8:2)을 넣어 정확하게 10 mL로 하고 초음파로 충분히 분산시킨 다음 원심 분리한다.  그 상등액 5.0 mL를 정확하게 취하여 내부표준액주) 4.0 mL를 넣고 헥산․아세톤 혼합액 (8:2)을 넣어 10.0 mL로 하여 검액으로 한다.  따로 디부틸프탈레이트, 부틸벤질프탈레이트, 디에칠헥실프탈레이트 표준품을 정밀하게 달아 헥산․아세톤 혼합액 (8:2)을 넣어 녹여 희석하고 그 일정량을 취하여 내부표준액 4.0 mL를 넣고 헥산․아세톤 혼합액 (8:2)을 넣어 10.0 m로 하여 0.1, 0.5, 1.0, 5.0, 10.0, 25.0 ㎍/mL로 하여 표준액으로 한다.  검액 및 표준액 각 1 μL씩을 가지고 다음 조건으로 기체크로마토그래프법 내부표준법에 따라 시험한다.  필요한 경우 표준액의 검량선 범위내에서 검체 채취량 또는 희석배수를 조정할 수 있다.

<조작조건>

검 출 기 : 불꽃이온화검출기

칼    럼 : 안지름 약 0.25 mm, 길이 약 30 m인 용융실리카관의 내관에 14 % 시아노프로필페닐-86 % 메틸폴리실록산으로 0.25 μm 두께로 피복한다.

칼럼온도 : 150 ℃에서 2 분 동안 유지한 다음 260 ℃까지 매분 10 ℃씩 상승시킨 다음 15 분 동안 이 온도를 유지한다.

검체도입부온도: 250 ℃

검출기온도: 280 ℃

운반기체 : 질소

유 량 : 1 mL/분

스플리트비 : 약 1:10

주) 내부표준액 : 벤질벤조에이트 표준품 약 10 mg을 정밀하게 달아 헥산․아세톤 혼합액 (8:2)을 넣어 정확하게 1000 mL로 한다.

다. 디옥산

검체 약 1.0 g을 정밀하게 달아 20 % 황산나트륨용액 1.0 mL를 넣고 잘 흔들어 섞어 검액으로 한다.  따로 1,4-디옥산 표준품을 물로 희석하여 0.0125, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8 mg/mL의 액으로 한 다음, 각 액 50 μL씩을 취하여 각각에 폴리에틸렌글리콜 400 1.0 g 및 20 % 황산나트륨용액 1.0 mL를 넣고 잘 흔들어 섞은 액을 표준액으로 한다.  검액 및 표준액을 가지고 다음 조건으로 기체크로마토그래프법의 절대검량선법에 따라 시험한다.  필요하면 표준액의 검량선 범위 내에서 검체 채취량 또는 희석배수를 조정할 수 있다.

<조작조건>

검 출 기 : 질량분석기

- 인터페이스온도 : 240 ℃

- 이온소스온도 : 230 ℃

- 스캔범위 : 40 ~ 200 amu

- 질량분석기모드 : 선택이온모드 (88, 58, 43)

헤드스페이스

- 주입량(루프) : 1 mL

- 바이알 평형온도 : 95 ℃

- 루프온도 : 110 ℃

- 주입라인온도 : 120 ℃

- 바이알 퍼지압력 : 20 psi

- 바이알 평형시간 : 30 분

- 바이알 퍼지시간 : 0.5 분

- 루프 채움시간 : 0.3 분

- 루프 평형시간 : 0.05 분

- 주입시간 : 1 분

칼    럼 : 안지름 약 0.32 mm, 길이 약 60 m인 관에 기체크로마토그래프용 폴리에칠렌왁스를 실란처리한 500 μm의 기체크로마토그래프용 규조토에 피복한것을 충전한다.

칼럼온도 : 처음 2 분간 50 ℃로 유지하고 160 ℃까지 1 분에 10 ℃ 씩 상승시킨다.

운반기체 : 헬륨

유    량 : 1,4-디옥산의 유지시간이 약 10 분이 되도록 조정한다.

스플리트비 : 약 1:10

라. 히드로퀴논

검체 약 1.0 g을 정밀하게 달아 이동상을 넣어 분산시킨 다음 10 mL로 하고 필요하면 여과하여 검액으로 한다.  따로 히드로퀴논 표준품(C6H6O2) 약 10 mg을 정밀하게 달아 이동상을 넣어 녹여 100 mL로 한 액 1 mL를 정확하게 취한 후, 이동상을 넣어 정확하게 1000 mL로 한 액을 표준액으로 한다.  검액 및 표준액 각 20 μL씩을 가지고 다음 조작조건으로 액체크로마토그래프법에 따라 시험할 때 검액의 히드로퀴논 피크는 표준액의 히드로퀴논 피크보다 크지 않다.

<조작조건>

검 출 기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 290㎚)

칼    럼 : 안지름 약 4.6 ㎜, 길이 약 25 ㎝인 스테인레스관에 5 ㎛ 액체크로마토그래프용 옥타데실실릴화한 실리카겔을 충전한다.

이 동 상 : 10 mmol 인산이수소칼륨액ㆍ아세토니트릴 혼합액 (92:8)

유    량 : 1.0 mL/분

마. 미생물한도

일반적으로 다음의 시험법을 사용한다.  다만, 본 시험법 외에도 미생물 검출을 위한 자동화 장비와 미생물 동정기기 및 키트 등을 사용할 수도 있다.

1) 검체의 전처리

검체조작은 무균조건하에서 실시하여야 하며, 검체는 충분하게 무작위로 선별하여 그 내용물을 혼합하고 검체의 특성에 따라 다음의 각 방법으로 검체를 희석, 용해, 부유 또는 현탁시킨다.

가) 수분산 검체 : 검체 1 mL에 변형레틴액체배지 또는 총 호기성 생균수 시험법의 배지의 적합성시험과 미생물 발육저지물질의 확인 시험을 통하여 검증된 배지나 희석액 9 mL를 넣어 10 배 희석액을 만들고 필요시 희석한다.

나) 비수분산 검체 : 검체 1 g(mL)에 적당한 분산제 (예 : 멸균한 폴리소르베이트 80) 1 mL를 넣어 균질화 시키고 변형레틴액체배지 또는 총 호기성 생균수 시험법의 배지의 적합성시험과 미생물 발육저지물질의 확인 시험을 통하여 검증된 배지나 희석액 8 mL를 넣어 10배 희석액을 만들고 필요시 희석한다.  균질화 되지 않을 경우 5 mm 유리구슬 5~7개 (3 mm 유리구슬 10~15개)를 넣어 균질화시키고 변형 레틴액체배지 또는 총 호기성 생균수 시험법의 배지의 적합성시험과 미생물 발육저지물질의 확인 시험을 통하여 검증된 배지나 희석액을넣어 10배 희석액을 만들고 필요시 희석한다. (단, 사용하는 분산제는 미생물의 생육에 대하여 영향이 없는 것 또는 영향이 없는 농도에서 사용한다.)

2) 총 호기성 생균수 시험법

총 호기성 생균수 시험법은 화장품 중 총 호기성 생균 (세균, 진균)수를 측정하는 시험방법이다.

가) 한천평판 희석법

(1) 검액의 조제

변형레틴액체배지 (Modified letheen broth) 또는 변형레틴액체배지 또는 총 호기성 생균수 시험법의 배지의 적합성시험과 미생물 발육저지물질의 확인 시험을 통하여 검증된 배지나 희석액을 사용하여 1)항에 따라 검액을 조제한다.

(2) 배지

총 호기성 세균수시험은 변형레틴한천배지 또는 대두카제인소화안천배지를 사용하고 진균수시험은 항생물질 첨가 포테이토 덱스트로즈 한천배지 또는 항생물질 첨가 사브로포도당한천배지를 사용한다.  위의 배지 이외에 배지의 적합성 및 시험결과의 타당성 시험을 통하여 검증된 다른 미생물 검출용 배지도 사용할 수 있고, 세균의 혼입이 없다고 예상된 때나 세균의 혼입이 있어도 눈으로 판별이 가능하면 항생물질을 첨가하지 않을 수 있다.

㉮ 변형레틴액체배지 (Modified letheen broth)

육제펩톤                           20.0 g

카제인의 판크레아틴 소화물         5.0 g

효모엑스                           2.0 g

육엑스                             5.0 g

염화나트륨                         5.0 g

폴리소르베이트 80                  5.0 g

레시틴                             0.7 g

아황산수소나트륨                   0.1 g

정제수                             1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

㉯ 변형레틴한천배지(Modified letheen agar)

프로테오즈 펩톤                   10.0 g

카제인의 판크레아틱소화물         10.0 g

효모엑스                          2.0 g

육엑스                            3.0 g

염화나트륨                        5.0 g

포도당                            1.0 g

폴리소르베이트 80                 7.0 g

레시틴                            1.0 g

아황산수소나트륨                  0.1 g

한천                              20.0 g

정제수                            1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

㉰ 대두카제인소화한천배지 (Tryptic soy agar)

카제인제 펩톤                      15.0 g

대두제 펩톤                         5.0 g

염화나트륨                          5.0 g

한천                               15.0 g

정제수                             1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1L로 하고 멸균후의 pH가 7.2 ± 0.1이되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

㉱ 항생물질첨가 포테이토덱스트로즈한천배지 (Potato dextrose agar)

감자침출물                          200.0 g

포도당                              20.0 g

한천                                15.0 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다. 사용하기 전에 1 L당 40 mg의 염산테트라사이클린을 멸균배지에 첨가하고 10 % 주석산용액을 넣어 pH가 3.5 ± 0.1로 조정한다.

㉲ 항생물질첨가사부로포도당한천배지 (Sabouraud dextrose agar)

육제 또는 카제인제 펩톤              10.0 g

포도당                               20.0 g

한천                                 15.0 g

정제수                               1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1L로 하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균한 다음의 pH가 5.6 ± 0.2이 되도록 조정한다.  쓸 때 배지 1000 mL당 벤질페니실린칼륨 0.10 g과 테트라사이클린 0.10 g을 멸균용액으로서 넣거나 배지 1000 mL당 클로람페니콜 50 mg을 넣는다.

(3) 조작

㉮ 세균수 시험 : 직경 9 ~ 10 cm 페트리 접시내에 미리 굳힌 변형레틴한천배지 표면에 전처리 검액 1 mL를 도말한다. 또는 검액 1 mL를 같은 크기의 페트리접시에 넣고 그 위에 멸균 후 45 ℃로 식힌 15 mL의 배지를 넣어 잘 혼합한다. 검체당 최소 2개의 평판을 준비하고 30 ~ 35 ℃에서 적어도 48시간 배양하는데 이때 최대 균집락수를 갖는 평판을 사용하되 평판당 300 개 이하의 균집락을 최대치로 하여 총 세균수를 측정한다.

㉯ 진균수 시험 : ㉮ 세균수 시험에 따라 시험을 실시하되 배지는 진균수 시험용 배지를 사용하여 배양온도 20 ~ 25 ℃에서 적어도 5일간 배양한 후 100 개 이하의 균집락이 나타나는 평판을 세어 총 진균수를 측정한다.

나) 배지의 적합성 시험

표 1.의 준비배양조건에서 배양된 균주 또는 이와 동등하다고 생각되는 균주를 쓸 수 있다.  균액 1 mL당 약 100 개의 생균이 함유되도록 완충식염펩톤수 (pH 7.0)에 희석하여 균액을 만든다.  시험에 쓰는 배지는 균액 1mL를 접종하여 세균은 30 ~ 35 ℃에서 적어도 48 시간, 진균은 20 ~ 25 ℃에서 적어도 5일간 배양할 때 충분한 증식 또는 접종 균수의 회수가 확인되어야 한다.  또한, 시험에 사용된 배지 및 희석액 또는 시험 조작상의 무균상태를 확인하기 위하여 완충식염펩톤수 (pH 7.0)를 대조로 하여 총호기성 생균수시험을 실시할 때 미생물의 성장이 나타나서는 안 된다.

다) 미생물 발육저지물질의 확인시험

나.항에 따라 시험할 때 검액의 유․무 하에서 균수의 차이가 2배 이상되어서는 안 된다.

표 1. 배지성능시험용 균주

시험균주	준비배양조건
Staphylococcus aureus (ATCC No. 6538 or 6538 P) Bacillus subtilis (ATCC No. 6633) Escherichia coli (ATCC No. 8739)	호기배양 30 ~ 35 ℃ 18 ~ 24 시간
Candida albicans (ATCC No. 2091 or 10231)	호기배양 20 ~ 25 ℃ 48시간

3) 특정세균시험법

가) 대장균 시험법

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL를 달아 유당액체배지를 사용하여 10 mL로 하여 30 ~ 35 ℃에서 24 ~ 72 시간 배양한다.  배양액을 가볍게 흔든 다음 백금이 등으로 취하여 맥콘키한천배지위에 도말하고 30 ~ 35 ℃에서 18 ~ 24 시간 배양한다.  주위에 적색의 침강선띠를 갖는 적갈색의 그람음성균의 집락이 검출되지 않으면 대장균 음성으로 판정한다.  위의 특정을 나타내는 집락이 검출되는 경우에는 에오신메칠렌블루한천배지에서 각각의 집락을 도말하고 30 ~ 35℃에서 18 ~ 24 시간 배양한다.  에오신메칠렌블루한천배지에서 금속 광택을 나타내는 집락 또는 투과광선하에서 흑청색을 나타내는 집락이 발견되면 백금이등으로 취하여 발효시험관이 든 유당액체배지에넣어 44.3 ~ 44.7 ℃의 항온수조 중에서 22 ~ 26 시간 배양한다.  가스발생이 나타나는 경우에는 대장균 양성으로 판정한다.

(2) 배지

㉮ 유당액체배지

육엑스                             3.0 g

젤라틴의 판크레아틴 소화물         5.0 g

유당                               5.0 g

정제수                             1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 121 ℃에서 15 ~ 20 분간 고압증기멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9 ~ 7.1이 되도록 하고 가능한 한 빨리 식힌다.

㉯ 맥콘키한천배지

젤라틴의 판크레아틴 소화물          17.0 g

카제인의 판크레아틴 소화물          1.5 g

육제 펩톤                           1.5 g

유당                                10.0 g

데옥시콜레이트나트륨                1.5 g

염화나트륨                          5.0 g

한천                                13.5 g

뉴트럴렛                            0.03 g

염화메칠로자닐린                    1.0 mg

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수 1 L에 녹여 1 분간 끓인 다음 121 ℃에서 15 ~ 20 분간 고압증기멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9 ~ 7.3이 되도록한다.

㉰ 에오신메칠렌블루한천배지(EMB한천배지)

젤라틴의 판크레아틴 소화물           10.0 g

인산일수소칼륨                       2.0 g

유당                                 10.0 g

한천                                 15.0 g

에오신                               0.4 g

메칠렌블루                           0.065 g

정제수                               1000 mL

이상을 달아 정제수 1 L에 녹여 121 ℃에서 15 ~ 20 분간 고압증기 멸균한다. 멸균 후의 pH가 6.9 ~ 7.3이 되도록 한다.

나) 녹농균시험

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL를 달아 카제인대두소화액체배지를 사용하여 10 mL로 하고 30 ~ 35 ℃에서 24 ~ 48시간 증균 배양한다.  증식이 나타나는 경우는 백금이 등으로 세트리미드한천배지 또는 엔에이씨한천배지에 도말하여 30 ~ 35 ℃에서 24 ~ 48시간 배양한다.  미생물의 증식이 관찰되지 않는 경우 녹농균 음성으로 판정한다.  그람음성간균으로 녹색 형광물질을 나타내는 집락을 확인하는 경우에는 증균배양액을 녹농균 한천배지 P 및 F 에 도말하여 30 ~ 35 ℃에서 24 ~ 72 시간 배양한다.  그람음성간균으로 플루오레세인 검출용 녹농균 한천배지 F의 집락을 자외선하에서 관찰하여 황색의 집락이 나타나고, 피오시아닌 검출용 녹농균 한천배지 P의 집락을 자외선하에서 관찰하여 청색의 집락이 나타나면 녹농균 양성으로 판정한다. 녹농균의 가능성이 높은 집락은 옥시다제시험을 실시한다.  집락을 N, N-디메칠 p-페닐렌디암모늄이염산염이 묻은 여지에 옮겨 5 ~ 10 초 이내에 자색으로 변색하면 옥시다제반응 양성으로 판정한다.  옥시다제반응 음성인 경우에는 녹농균 음성으로 판정한다.

(2) 배지

㉮ 카제인대두소화액체배지

카제인 판크레아틴 소화물            17.0 g

대두파파인소화물                    3.0 g

염화나트륨                          5.0 g

인산일수소칼륨                      2.5 g

포도당일수화물                      2.5 g

이상을 달아 정제수에 녹여 1 L로 하고 멸균후의 pH가 7.3 ± 0.2가 되도록 조정하고 121 ℃에서 15분간 고압멸균 한다.

㉯ 세트리미드한천배지(Cetrimide agar)

젤라틴제 펩톤                       20.0 g

염화마그네슘                        3.0 g

황산칼륨                            10.0 g

세트리미드                          0.3 g

글리세린                            10.0 mL

한천                                13.6 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다. 121 ℃에서 15 분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

㉰ 엔에이씨한천배지(NAC agar)

펩톤                                 20.0 g

인산수소이칼륨                       0.3 g

황산마그네슘                         0.2 g

세트리미드                           0.2 g

날리딕산                             15 mg

한천                                 15.0 g

정제수                               1000 mL

최종 pH는 7.4 ± 0.2이며 멸균하지 않고 가온하여 녹인다.

㉱ 플루오레세인 검출용 녹농균 한천배지 F  (Pseudomonas agar F for detection of fluorescein)

카제인제 펩톤                       10.0 g

육제 펩톤                           10.0 g

인산일수소칼륨                      1.5 g

황산마그네슘                        1.5 g

글리세린                            10.0 mL

한천                                15.0 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다.  121 ℃에서 15 분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

㉲ 피오시아닌 검출용 녹농균 한천배지 P (Pseudomonas agar P for detection of pyocyanin)

젤라틴의 판크레아틴 소화물          20.0 g

염화마그네슘                        3.0 g

황산칼륨                            10.0 g

글리세린                            10.0 mL

한천                                15.0 g

정제수                              1000 mL

이상을 달아 정제수에 녹이고 글리세린을 넣어 1 L로 한다.  121 ℃에서 15 분간 고압증기멸균하고 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정한다.

다) 황색포도상구균 시험

(1) 검액의 조제 및 조작 : 검체 1 g 또는 1 mL를 달아 카제인대두소화액체배지를 사용하여 10 mL로 하고 30 ~ 35 ℃에서 24 ~ 48시간 증균 배양한다. 증균배양액을 보겔존슨한천배지 또는 베어드파카한천배지에 이식하여 30 ~ 35 ℃에서 24시간 배양하여 균의 집락이 검정색이고 집락주위에 황색투명대가 형성되며 그람염색법에 따라 염색하여 검경한 결과 그람 양성균으로 나타나면 응고효소시험을 실시한다. 결과가 양성으로 나타나면 황색포도상구균 양성으로 판정한다.

(2) 배지

㉮ 보겔존슨한천배지(Vogel-Johnson agar)

카제인의 판크레아틴 소화물          10.0 g

효모엑스                            5.0 g

만니톨                              10.0 g

인산일수소칼륨                      5.0 g

염화리튬                            5.0 g

글리신                              10.0 g

페놀렛                              25.0 mg

한천                                16.0 g

정제수                              950 mL

이상을 달아 1 분동안 가열하여 자주 흔들어 준다. 121 ℃에서 15분간 고압멸균하고 45 ~ 50 ℃로 냉각시킨다. 멸균 후 pH가 7.2 ± 0.2가 되도록 조정하고 멸균한 1 %(w/v) 텔루린산칼륨 20 mL를 넣는다.

㉯ 베어드파카한천배지(Baird-Parker agar)

카제인제 펩톤                       10.0 g

육엑스                              5.0 g

효모엑스                            1.0 g

염화리튬                            5.0 g

글리신                              12.0 g

피루브산나트륨                      10.0 g

한천                                20.0 g

정제수                              950 mL

이상을 섞어 때때로 세게 흔들며 섞으면서 가열하고 1분간 끓인다. 121℃에서 15 분간 고압멸균하고 45 ~　50 ℃로 냉각시킨다. 멸균한 다음의 pH가 6.8 ± 0.2이 되도록 조정한다. 여기에 멸균한 아텔루산칼륨용액 1 %(w/v) 10　mL와 난황유탁액 50　mL를 넣고 가만히 섞은 다음 페트리접시에 붓는다. 난황유탁액은 난황 약 30　%, 생리식염액 약 70　%의 비율로 섞어 만든다.

라) 배지의 적합성 및 시험방법의 타당성 시험

황색포도상구균 ATCC 6538P 또는 ATCC 6538와 녹농균 ATCC 9027은 카제인대두소화액체배지를, 대장균 ATCC 8739은 유당액체배지를 사용한다. 각 배양액을 완충식염펩톤수에 1　mL당 약 1,000개의 균주가 함유되도록 희석하고 각 균액을 동량으로 섞은 다음 0.4　mL(각 균수가 약 100개)를 황색포도상구균시험, 녹농균시험, 대장균시험의 접종균으로 한다.  검액의 유·무 하에서 각각 특정세균시험법에 따라 시험할 때 접종균 각각에 대하여 양성으로 나타나야 한다.

바. 기타

이 가이드라인에 설정되어 있지 않은 시험방법은 「화장품 기준 및 시험방법」(식약청 고시 제2009-158호)의 시험방법을 적용한다.