외용소독제(의약외품) 효력평가법

가이드라인

2014. 6.

외용소독제(의약외품) 효력평가법 가이드라인
제․개정번호	승인일자	주요 내용

이 가이드라인은 식품의약품안전평가원에서 수행한 용역연구사업 결과와 관련 업계의 이해관계자 및 산․학․연 전문가의 의견을 반영하여 현재의 과학기술 수준에서 의약외품 외용소독제의 효력평가에 대한 일반적인 원칙과 방법을 제시하고자 작성되었습니다. 외용소독제에 대한 심사 경험과 전문가의 의견에 근거하여 식품의약품안전평가원의 최근 견해를 기술하였으며, 향후 과학기술의 발전에 따라 추가적으로 수정될 수 있습니다. 또한 본 가이드라인은 법적 효력이 있는 사항이 아니며, 개별 사항에 따라 다르게 해석할 수 있음을 알려드립니다.

※ 이 가이드라인에 대하여 의견이 있는 경우 아래로 문의하시기 바랍니다.

식품의약품안전평가원 바이오생약심사부 화장품심사과	T.043-719-3605	F.043-719-3600
식품의약품안전평가원 의료제품연구부 화장품연구팀	T.043-719-4857	F.043-719-4850

Ⅰ. 서론	2

Ⅱ. 외용소독제 효능평가 시험	3

1. In vitro 시험	3

1) 일반사항	3

2) 시험방법	3

2. 인체적용 시험	5

1) 일반사항	5

2) 시험방법	5

Ⅲ. 참고문헌	9

목  차

Ⅰ. 서론

외용소독제는 약사법 제2조제7호나목의 의약외품으로 관리되고 있는 품목으로서 주성분으로 에탄올, 이소프로필알코올, 과산화수소수, 염화벤잘코늄, 크레졸을 함유하며 인체에 직접 사용하는 소독제를 말한다.

식중독 및 감염방지를 위하여 손소독 등 개인위생에 대한 국민의 관심이 높아지면서 외용소독제 수요가 증가하고 관련 업계의 제품 개발 필요성이 증가되고 있다.

피부에 서식하는 미생물은 사람이 사는 환경에 따라 큰 차이가 있다. 사람의 피부로부터 가장 많이 분리된 균주는 Staphylococcus 속, Bacillus 속 미생물들이다. 이들 균들에 대한 살균력 측정법, 최소발육저지농도 측정법 및 최소살균농도 측정법과의 상관성을 분석하여 쉽고 빠르게 분석할 수 있는 살균력 평가법에 대한 가이드라인을 마련하였다.

본 가이드라인을 통하여 관련 업계에서 새로이 개발되는 외용소독제의 유효성 평가에 적용하여 제품 개발에 도움을 주고, 심사에 있어서 과학적 타당성 및 객관성을 확보하고자 하였다. 또한, 소비자로 하여금 유효성이 입증된 외용소독제를 신뢰하고 사용할 수 있도록 하는데 기여할 수 있을 것으로 기대된다.

Ⅱ. 외용소독제 효능평가 시험

1. In vitro 시험

1) 일반사항

(1) 시험물질에 대한 통계적 비교가 가능하기 위해 충분한 수의 유효데이터를 확보하여야 한다.

(2) 시험대상 균주 5종 이상에 대해 시험물질의 살균 효과가 입증되어야 한다.

(3) 본 가이드라인에서 규정된 시험법 외에 과학적․합리적으로 타당성이 인정되는 시험법 및 평가기준을 적용할 수 있다.

2) 시험방법

(1) 시험대상 균주

대한민국약전 일반시험법 중 미생물한도시험법에 제시된 균주를 참고할 수 있으며, 다음과 같은 균주를 예로 들 수 있다.

․ 포도상구균(Staphylococcus aureus, ATCC 6538)

․ 대장균(Escherichia coli, ATCC 11229 또는 ATCC 10536)

․ 녹농균(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 15522)

․ 바실러스(Bacillus cereus, ATCC  21772)

․ 살모넬라(Salmonella typhimurium, ATCC 13311)

(2) 시험물질

약사법 제2조제7호나목에 따라 의약외품으로 관리되고 있는 외용소독제

(3) 평가

① 시험장소

분리된 공간의 무균시험에 적합한 클린벤치에서 행해져야 하며, 시험에 사용하는 기구들은 멸균상태이어야 한다.

② 시험법

가. 균액의 조제

가) 시험대상 균주 5종을 각각 멸균된 TSB(Tryptoic Soy Broth, 대두카제인소화액체배지) 5mL가 담긴 round bottom tube에 접종하여 37℃에서 18~22시간 동안 배양한 후, 600 nm에서 흡광도를 측정하여 균의 배양정도를 확인한다.

나) 시험대상 균주 5종의 초기 배양액을 TSB 배지(4℃ 냉장보관)로 10배씩 계열희석하여 균액 mL당 1x105 CFU가 되도록 준비한다.

다) 균액(1x105 CFU/mL) 0.1 mL를 새로운 eppendorf tube에 넣고 원심분리(9,300 RCF, 1분)한 후, 상등액을 제거한다.

나. 시험군 및 대조군의 조제

가) 시험군은 균액에 외용소독제 1 mL를 넣고 잘 현탁한 후 실온에서 1~5분간 방치한다.

나) 대조군은 균액에 PBS(Phosphate Buffer Saline) 완충액 1 mL를 넣고 잘 현탁한 후 실온에서 1~5분간 방치한다.

다. 시험군 및 대조군의 배지 도말

가) 1~5분간 방치된 시험군(균액/외용소독제) 및 대조군(균액) 각각을 원심분리(9,300 RCF, 1분)한 후, 상등액을 제거하고 다시 TSB 배지 또는 PBS 완충액 1 mL를 넣어 침전물을 잘 현탁한다.

나) 가)에서와 같은 조건으로 다시 원심분리를 한 후 상등액을 제거하는 세척 과정을 2회 반복한 다음 최종으로 침전물에 TSB 배지 또는 PBS 완충액 1 mL를 넣어 잘 현탁한다.

다) 나)에서 마련된 균액 0.1 mL씩을 각각 3개 이상의 TSA(Tryptoic Soy Agar, 대두카제인소화한천) 배지에 도말한 후, 37℃에서 20~24 시간 배양한다.

라. 저해율(%) 계산 및 평가

저해율(%)=[대조군 균수(CFU)-시험군 균수(CFU)]/대조군 균수(CFU) X 100

가) 각 군에서 형성된 집락(colony)수를 계수하고, 외용소독제를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 외용소독제 처리군의 저해율(%)을 계산한다.

나) 각각의 균에 대한 저해율이 99.9% 이상이어야 하며, 배지성능평가(대한민국약전 일반시험법 중 미생물한도시험 참고)를 통하여 시험방법 밸리데이션을 수행한다.

2. 인체적용 시험

1) 일반사항

(1) 인체적용시험은 피험자의 권리․안전․복지를 보호할 수 있도록 IRB 심의를 거친 후 실시되어야 한다.

(2) 피험자 수는 통계적으로 비교 가능하기 위해 충분한 수를 확보하여야 한다.

(3) 필요시 피험자에 대한 의학적 처치나 결정은 의사의 책임 하에 이루어져야 한다.

2) 시험방법

(1) 피험자의 선정

만 20세 이상의 성인 남녀 중에서 다음 ①항의 기준에 만족하며 ②항에 해당되지 않는 사람을 선정한다. 시험책임자 또는 시험책임자의 위임을 받은 사람은 시험과 관련된 모든 정보를 피험자에게 충분히 알려야 하고, 피험자는 자발적으로 시험 참여 ‘동의서’를 작성한 후 인체적용시험에 참가해야 한다.

① 선정기준

가. 피부 질환을 포함하는 급․만성 신체 질환이 없는 건강한 자

나. 시험 종료 후 유해사례 발생 추적이 가능한 자

② 제외기준

지원자와의 면담에 의하여 다음 사항에 해당되는 자

가. 임신 또는 수유중인 여성과 임신 가능성이 있는 여성

나. 피부질환 치료를 위해 스테로이드가 함유된 피부 외형제를 1개월 이상 사용 하는 사람

다. 민감성, 과민성 피부를 가진 사람

라. 시험부위에 상처, 여드름, 홍반, 모세혈관확장 등의 피부 이상 소견이 있는 사람

마. 인체적용 시험 시작 전 6개월 내에 시험 부위에 시술을 받은 사람

바. 그 외 시험책임자의 판단으로 시험에 부적합하다고 생각되는 사람

(2) 시험부위

손

(3) 시험대상 균주

대한민국약전 일반시험법 중 미생물한도시험법에 제시된 균주를 참고할 수 있으며, 다음과 같은 균주를 예로 들 수 있다.

․ 포도상구균(Staphylococcus aureus, ATCC 6538)

․ 대장균(Escherichia coli, ATCC 11229 또는 ATCC 10536)

․ 녹농균(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 15522)

․ 바실러스(Bacillus cereus, ATCC  21772)

․ 살모넬라(Salmonella typhimurium, ATCC 13311)

(4) 시험 물질 선정

약사법 제2조제7호나목에 따라 의약외품으로 관리되고 있는 외용소독제

(5) 시험 및 평가

① 시험장소

분리된 공간의 무균시험에 적합한 클린벤치에서 행해져야 하며, 시험에 사용하는 기구들은 멸균상태이어야 한다.

② 시험법

가. 균액의 조제

가) 시험대상 균주 5종을 각각 멸균된 TSB 배지 5 mL가 담긴 round bottom tube에 접종하여 37℃에서 18~22시간 동안 배양한 후, 600 nm에서 흡광도를 측정하여 균의 배양정도를 확인한다.

나) 시험대상 균주 5종의 초기 배양액을 TSB 배지(4℃ 냉장보관)로 10배씩 계열 희석하여 균액 mL 당 2x103 CFU가 되도록 준비한다.

나. 시험군 및 대조군의 처리

가) 선정 기준 및 제외 기준에 적합한 피험자를 선정한다.

나) 깨끗하게 손을 씻은 피험자의 양쪽 손(손바닥 및 손가락 부분)에 각각 2x103 CFU/mL의 균액 0.5 mL을 멸균된 스크래퍼(scraper)를 이용하여 넓게 펴바른 뒤 3분간 건조시킨다.

다) 한쪽 손은 균액을 바른 부분에 멸균된 스크래퍼를 이용하여 외용소독제 0.5 mL을 넓게 펴바르고 시험군으로 한다. 다른 한 손은 PBS 완충액 0.5 mL를 펴바르고 대조군으로 한다.

라) 1~5분 경과 후 시험군 및 대조군의 손을 일정량의 PBS 완충액으로 세척하여 수집한다.

다. 시험군 및 대조군의 배지 도말

가) 수집한 각각의 세척액을 원심분리(9,300 RCF, 1분)한 후 상등액을 제거하고, 남아있는 침전물에 TSB 배지 또는 PBS 완충액 1 mL를 넣어 잘 현탁한다.

나) 가)에서와 같은 조건으로 다시 원심분리를 한 후 상등액을 제거하는 세척 과정을 2회 반복한 다음 최종으로 침전물에 TSB 배지 또는 PBS 완충액 1 mL를 넣어 잘 현탁한다.

다) 나)에서 마련된 균액 0.1 mL씩을 3개 이상의 TSA 배지에 도말한 후, 37℃에서 20~24 시간 배양한다.

라. 각 피험자별 저해율(%) 계산 및 평가

저해율(%)=[대조군 균수(CFU)-시험군 균수(CFU)]/대조군 균수(CFU) X 100

가) 각 군에서 형성된 집락(colony)수를 계수하고, 외용소독제를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 외용소독제 처리군의 저해율(%)을 계산한다.

나) 통계 프로그램을 이용하여 각 피험자에서 얻은 저해율(%)을 비교 분석한다.

다) 각각의 균에 대한 저해율이 99.9% 이상이어야 하며, 배지성능평가(대한민국약전 일반시험법 중 미생물한도시험 참고)를 통하여 시험방법 밸리데이션을 수행한다.

(6) 유해사례

① 개인별 증례기록서(Case Report Form)에서 다음과 같은 유해사례 발생 여부를 기록한다.

- 홍반(Erythema), 부종(Edema), 인설생성(Scaling), 가려움(Itching), 자통(Stinging), 작열감(Burning), 뻣뻣함(Tightness), 따끔거림(Prickling)) 등

② 유해사례 중대성 여부를 파악한다.

③ 시험 과정과 인과관계 유무를 판정할 수 있는 방법을 기재한다.

④ 유해사례 증상의 정도를 경증(Mild), 중등증(Moderate), 중증(Severe)으로 구분하여 판정한다.

(7) 주의사항

시험 종료 후 클로르헥시딘 등 소독제를 이용해 피험자의 손에 남은 균이 없도록 살균 처리한다.

Ⅲ. 참고문헌

1. Antiseptic resistance in methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Lacey RW. et al., Lancet 1985; 326: 1307-1308.

2. Laboratory and in vitro testing of skin antiseptics: a prediction for in-vivo activity? Baquero F. et al., J Hosp Infect 1991; 18(Suppl B): 5-11.

3. Methods for determining bactericidal activity of antimicrobial agents; approved guideline. Barry AL. et al., National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1999; 19: ISSN 0273-3099.

4. MIC test are not suitable for assessing antiseptic handwashes. Platt JH. et al., J Hosp Infect 1988; 11(4): 396-397.

5. 미생물 면역분과학회 실험 미생물학. ㈜라이프사이언스 2013; 139-151.

6. 외용소독제 및 콘택트렌즈에 관한 효능평가법 개발 연구. 식품의약품안전처, 2013.

7. 대한민국약전 제10개정 일반시험법