양모제 효력평가시험법 가이드라인

2009. 12

바이오생약국

화장품심사과

- 목    차 -

I.  서  론

II. 동물시험법

1. C57BL/6 마우스를 이용한 평가

가. 생장기 유도 효과 평가

나. 퇴행기 억제 효과 평가

2. SKH-1 무모마우스 또는 누드마우스를 이용한 평가

Ⅲ. 임상시험법

I.  서  론

탈모증은 사춘기 이후 성인에서 시작되는 비교적 흔한 질환 중의 하나로써 생활 수준의 향상과 피부 미용에 대한 사회적인 관심이 증대됨에 따라 점차적으로 그 치료와 예방책에 대한 관심도 높아지고 있는 질환이다. 탈모관련 시장은 매년 큰 폭으로 성장하고 있으며 환경적인 요인과 더불어 현대인의 스트레스로 인한 젊은 층의 두피문제가 심각해지면서 현 탈모시장은 남녀노소를 불문하고 전 연령층으로 확대되고 있는 실정이다.

탈모의 원인에는 유전적 요인, 잘못된 식생활, 스트레스, 지루성 비듬, 내분비 이상 등이 알려져 있으며 탈모의 치료 및 예방을 위해 탈모 방지 및 양모를 목적으로 하는 제품의 사용이 증가하고 있다.

‘탈모 방지 및 양모’ 의 효능을 갖는 제품은 의약외품으로서 식약청에서 품목별로 안전성 및 효능을 심사하여 허가하고 있다.

이에 따라 본 가이드라인은 탈모 방지 및 양모의 효능을 평가하는 시험법을 표준화하여 관련 업계 및 심사자에게 도움을 주고 우수한 양모제의 개발 및 소비자 보호에 기여할 것으로 기대된다.

Ⅱ. 동물시험법

사람과 동물의 모발에는 모발 주기가 있다. 생장기(anagen phase)에는 모낭의 기저부위, 즉 모구에서 세포분열이 활발히 이루어져 모발이 계속 자라게 된다. 퇴행기(catagen phase)에는 모구가 급속도로 위축되며 모낭의 생장활동이 정지되어가고 휴지기(telogen phase)에는 모낭의 생장활동이 완전히 정지되게 된다. 그리고 휴지기 모낭의 기저부에서는 새로이 생장기 모발이 형성되게 되며 기존의 휴지기 모발은 새로운 생장기 모발에 의하여 밀려나 탈락되거나 또는 빗질 등의 기계적 작용에 의하여 빠지게 된다.

마우스를 이용한 동물시험에서는 휴지기에서 생장기로의 전환을 촉진시키는 효과(생장기 유도 효과)와 생장기에서 퇴행기로의 전환을 지연시키는 효과(퇴행기 억제 또는 생장기 연장 효과)을 확인함으로써 양모의 효력을 평가할 수 있다. 사람의 모발은 개개의 모발의 모발 주기가 다 다르지만 마우스의 경우에는 초기에는 모든 모발이 동일한 모발 주기에 있으며 또한 인위적인 방법으로 모발 주기를 동일하게 맞출 수 있어 모발 주기 변화를 보는 실험에 유용하다.

동물시험에 이용되는 마우스로는 C57BL/6 마우스, C3H 마우스, SKH-1 무모마우스, 누드 마우스 등이 있으며 주로 이용되는 C57BL/6 마우스는 색소를 만드는 멜라닌세포가 표피에는 존재하지 않고 모낭에만 존재하기 때문에 모낭의 멜라닌색소의 양에 의해 피부색이 결정되는 특성을 가지고 있다. 모낭에서의 멜라닌색소 합성은 생장기에만 이루어지기 때문에 생장기에는 피부색이 검은색이 되고 멜라닌 색소 합성이 되지 않는 퇴행기 및 휴지기에는 피부색이 분홍색이 된다. 이와 같은 특성을 이용하여 피부 조직검사를 하지 않고도 피부색을 통해 모발 주기를 확인할 수 있는 장점이 있다. 또한 C57BL/6 마우스는 생후 6～7주령이 되면 대부분의 털이 모두 휴지기가 되며 피부색은 분홍색이 된다. 또한 휴지기 상태의 모발을 동시에 뽑아서 제거하면 모든 모발을 동시에 생장기로 전환시킬 수 있다.

생장기 유도 효과를 평가하기 위해서는 휴지기 상태인 생후 6～7주령의 C57BL/6 마우스의 등의 털을 깎은 후에 시험물질을 수 주간 처리하면서 피부색의 변화를 관찰하여 생장기 유도 정도를 평가하게 된다.

퇴행기 억제 효과를 평가하기 위해서는 휴지기 상태인 생후 6～7주령의 C57BL/6 마우스의 모발을 뽑아서 생장기를 유도한 후 덱사메타손과 같은 퇴행기 유도 약물과 시험물질을 처리하면서 피부색의 변화를 관찰하여 퇴행기 억제 정도를 평가하게 된다.

그 외에 SKH-1 무모 마우스는 유전적인 결함에 의해 생후 첫 번째 모발 주기 동안 대부분의 모발이 소실된다. 그러나 일부 모낭은 정상적인 조직학적 구조를 보이며 남아있다. 누드 마우스도 유전적인 결함에 의해 모낭은 존재하나 모낭세포의 최종 분화 장애로 모발 성장이 조기에 중단되고 퇴행기가 유도되어 정상적인 모발이 육안으로 관찰되지 않는다. 무모 마우스와 누드 마우스를 이용하면 모발을 깎거나 뽑지 않고도 모발의 성장 상태를 육안으로 관찰할 수 있고 털을 깎거나 뽑는 동안에 발생할 수 있는 피부 손상을 방지할 수 있는 장점이 있다.

1. C57BL/6 마우스를 이용한 평가

가. 생장기 유도 효과 평가

1) 시험방법

① 등의 피부색이 흰색 또는 분홍색인 6∼7주령 암컷 C57BL/6 마우스를 사용한다.

② 시험군은 음성대조군(유효성분이 없는 기제 포함)과 양성대조군을 포함하여 2군 이상으로 하며 각군에는 6마리 이상의 마우스를 사용한다.

③ 전기면도기를 이용하여 마우스 등의 털을 깎고 털을 깎은 부위에 하루 1회 또는 2회씩 3～4주간 시험물질을 도포한다.

④ 시험기간 중에 가능하면 마우스가 등에 바른 시험물질을 핥아먹지 못하도록 하기 위한 조치를 하도록 한다.

2) 결과분석

① 전체 삭모 부위 중 생장기 모발이 자란 부위의 비 (전체 삭모 부위 면적 중 검정색 변한 면적의 비)를 구한다. 이를 시험 종료까지 매주 측정한다.

② 전체 삭모 부위 중 털이 자란 부위의 비를 측정한다. 시험 종료 시까지 매주 측정한다.

③ 시험 종료 시 또는 그 전 특정 시점에 조직검사를 시행하여 생장기 모낭의 형성 여부를 평가한다.

④ 그 외에 전문 논문에서 검증된 방법을 이용한다.

나. 퇴행기 억제 효과 평가

1) 시험방법

① 등의 피부색이 흰색 또는 분홍색인 6∼7주령 암컷 C57BL/6 마우스를 사용한다.

② 시험군은 음성대조군(유효성분이 없는 기제 포함)과 양성대조군을 포함하여 2군 이상으로 하며 각군에는 6마리 이상의 마우스를 사용한다.

③ 마우스의 등의 털을 제거한다.

④ 제모 7일 후부터 제모한 부위에 하루 1회 또는 2회씩 7일간 시험물질을 도      포한다.

⑤ 제모 9일 후부터 프로필렌글리콜을 용매로 사용한 0.1% 덱사메타손 1ml를 제모한 부위에 하루 1회씩 5일간 도포한다.

⑥ 시험기간 중에 가능하면 마우스가 등에 바른 시험물질을 핥아먹지 못하도록 하기 위한 조치를 하도록 한다.

2) 결과분석

① 제모 16일 후에 전체 제모 부위 중 생장기 모발이 유지되고 있는 부위의 비(전체 제모 부위 면적 중 피부색이 검정색인 면적의 비)를 구한다.

② 제모 16일 후에 조직검사를 시행하여 생장기 모낭, 퇴행기 모낭, 휴지기 모낭의 비를 구한다.

2. SKH-1 무모마우스 또는 누드마우스를 이용한 평가

1) 시험방법

① 5～7주령의 SKH-1 무모마우스 또는 누드마우스를 이용한다.

② 시험군은 음성대조군(유효성분이 없는 기제 포함)과 양성대조군을 포함하여 2군 이상으로 하며 각군에는 6마리 이상의 마우스를 사용한다.

③ 시험물질을 하루 1회 또는 2회씩 3～4주간 도포한다.

④ 시험기간 중에 가능하면 마우스가 등에 바른 시험물질을 핥아먹지 못하도록 하기 위한 조치를 하도록 한다.

2) 결과분석

① 매주 모발의 길이와 수를 육안 관찰한다.

② 시험 종료 시 또는 그 전 특정 시점에 조직검사를 시행하여 모낭의 상태를 평가 한다.

Ⅲ. 임상시험법

1. 연구 형식

이중 맹검, 위약 대조, 무작위 배정을 원칙으로 한다.

2. 연구기간

16주 이상

3. 연구계획

0일째

- 탈모부위 두피에 1개의 점 문신을 시행하고 문신을 중심으로 포토트리코그       램을 시행한다.

- 전체 사진을 촬영한다.

8주째

- 피험자 설문 및 사진 촬영에 의한 연구자의 육안평가를 시행한다.

16주째

- 피험자 설문 및 사진 촬영에 의한 연구자의 육안평가를 시행한다.

- 포토트리코그램을 시행한다

4. 연구대상

① 18～54세의 안드로겐성 탈모증으로 진단된 남녀

② Basic and specific (BASP) 분류에 의해 basic type은 M2 이상 또는 C2 이     상 또는 U1 이상, specific type은 V1 이상 또는 F1 이상으로 진단된 남녀 안드     로겐성 탈모증 환자

③ 연구기간 동안 특별한 모발용품이나 모발관리 및 조작을 하지 않을 환자

④ 연구기간 동안 동일한 머리모양을 유지할 환자

그림 1. BASP 분류

(Lee et al. A new classification of pattern hair loss that is universal for men and women: Basic and specific (BASP) classification. J Am Acad Dermatol 2007;57:37-46)

제외대상

① 최근 6개월 사이에 시험 결과에 영향을 줄만한 심각한 급성 신장 또는 심장 질환 또는 기타 만성 질환(고혈압, 당뇨 등)을 앓고 있는 자

② 임신 중이거나 수유 중 또는 6개월 이내에 임신을 계획하고 있는 자

③ 정신과적 질환이 있는 자

④ 감염성 피부 질환이 있는 자

⑤ 모발 이식술, 두피 축소술 등의 탈모에 대한 외과적 처치를 받은 적이 있는 자

⑥ 경구 Dutasteride를 사용한 적이 있는 자

⑦ 최근 1개월간 경구 Finasteride 를 복용하고 있는 자

⑧ 최근 1개월간 국소 발모제 및 양모, 육모제를 도포하고 있는 자

⑨ 최근 1개월간 다음 약물을 복용하고 있는 자: 스테로이드, 세포사멸제, 혈관 확장제, 항고혈압제, 항전간제, 베타수용체 차단제, 기관지 확장제, 이뇨제, spironolactone, cimetidine, diazoxide, cyclosporine, ketoconazole

⑩ 최근 1개월간 국소 스테로이드 제제를 두피에 도포하고 있는 자

⑪ 심한 지루성 피부염, 두피 건선, 두피 감염 등으로 시험 물질 도포에 지장이 있을 것으로 판단되는 자

⑫ 안드로겐성 탈모증 이외에 원형 탈모증, 휴지기 탈모증, 반흔성 탈모증 등의 다른 탈모 질환이 있는 환자

⑬ 기타 위의 사항들 외에 시험 책임자의 판단으로 시험수행이 곤란하다고 판단되는 자

5. 연구방법

1) 포토트리코그램(Phototrichogram)

평가하고자 하는 탈모부위에 직경 1mm의 작은 점 문신을 하거나 일정의 좌표를 기록하도록 하여 매번 점 문신 또는 일정좌표를 중심으로 하여 포토트리코그램을 시행한다.

① 전체 모발 수 (Total hair counts; number/cm2) : 1 cm2 원내에 있는 모발 수

② 모발 직경 (Hair diameter : ㎛) : 1 cm2 원내에 있는 모발 중 5개 모발의 평균 직경 값

그림 2.  포토트리코그램 사진 촬영(예)

2) 피험자 설문

- 논문을 포함한 전문 자료를 근거로 한 적절한 설문 문항 사용

예>

① 정수리 부위의 모발이 풍성해 졌습니까?

② 탈락모발수가 줄었다고 생각하십니까?

③ 모발의 두께가 두꺼워졌다고 생각하십니까?

④ 앞 머리선이 좋아졌다고 느끼십니까?

⑤ 모발 성장 속도가 빨라졌다고 생각하십니까?

매우 좋아짐 +3,  좋아짐 +2, 조금 좋아짐 +1,  변화 없음 0

매우 나빠짐 -3,  나빠짐 -2, 조금 나빠짐 -1

3) 사진 촬영에 의한 연구자 평가

항상 같은 조건에서 정해진 위치에서 임상사진을 찍어 시험물질 도포 전과 후를 비교한다.

- 임상 사진 촬영 : 45도 (앞머리선), 90도 (정수리) 두 부위를 평가 시점마다 동일한 조건, 구도 및 위치에서 동일한 부위를 촬영한다.

- 사진 평가 : 연구자는 육안 평가를 실시한다.

예> 당신은 연구자로서  환자의 두피에서 머리카락이 빠지는 정도가 치료 전과

비교하여 어떠한가?

매우 좋아짐 +3,  좋아짐 +2, 조금 좋아짐 +1,  변화 없음 0

매우 나빠짐 -3,  나빠짐 -2, 조금 나빠짐 -1

4) 안전성 평가

평가시점마다 설문조사와 연구자의 관찰에 의해 주관적 자극감과 객관적 자극 등 두피 안전성을 평가

① 주관적 자극감

- 가렵다

- 바늘로 찌르듯이 아프다

- 화끈거린다

- 따끔거린다

- 뻣뻣하다

② 객관적 자극

- 홍반

- 부종

- 구진

- 기타

5) 유효성 평가 변수

(1) 1차 유효성 평가 변수(Primary efficacy endpoint)

① 포토트리코그램

- 총 모발 수

- 모발 두께

(2) 2차 유효성 평가 변수 (Secondary efficacy endpoint)

① 피험자 설문

② 사진 촬영에 의한 연구자 평가

6) 결과 평가 기준

1차 유효성 평가변수(Primary efficacy endpoint)에서 통계적으로 유의한 효과를 보여야 하며, 2차 유효성 평가 변수에서 이를 뒷받침할 수 있는 효과가 있어야 함