대한민국약전 제10개정

자주묻는 질의응답집 (FAQ)

- 미생물한도시험법, 무균시험법, 상수 및 정제수 등 -

2013. 2

- 목   차 -

미생물한도시험법	1

생균수시험	1

특정미생물시험	5

기타	8

무균시험법	10

상수 및 정제수	12

▢ 미생물한도시험법

1. 생균수시험

Q1. 「생균수시험」의 「배지성능시험」 관련하여 시판배지의 배지성능시험은 제조사의 배지성능시험 성적서로 갈음이 가능한지요?

☞  시판배지라 하더라도 배지성능시험을 따로 실시해야 합니다.

Q2. 「생균수시험」의 「배지성능시험」 관련하여 건조분말배지의 조제한 배치는 제조사의 조제 로트번호마다 시험하면 되는 것인지요?

☞  건조분말배지의 경우, 제조사의 조제 로트번호가 아닌 배지 조제시의 배치마다 시험해야 합니다.

Q3. 「생균수시험」의 「배지성능시험」 관련하여 액체배지의 유효성을 확인할 때 유효성이 확인된 배치의 배지와 같이 비교 시험을 실시해야 하는지 아니면 현탁정도만 육안으로 확인 후 한천배지에서 배양 후 집락수 계산이 필요한지요?

☞  액체배지의 경우, 유효성이 확인된 배치의 배지와 비교 시험을 실시하며 집락수 계산까지 필요하지는 않고 육안 확인 및 현탁도로 비교합니다.

※ 관련문구 : 생균수시험 4) 라) 배지성능항 중 “액체배지에서도 유효성이 확인된 배지 배치로 미리 시험하여 얻은 증식과 동등한 증식이 인정되어야 한다.”

Q4. 「시험균의 조제」에서 “시드로트 배양관리수법 (seed lot system)”이라는 용어는 어떤 의미입니까? 또, 이 관리방법에 대해 어떤 점을 유의할 필요가 있습니까?

☞  시드로트 배양관리수법은 보존균주의 계대수를 관리하기 위한 시스템입니다. 관리는 다음 사항에 유의해야 합니다. 배지성능시험이나 적합성시험에 사용하는 시험균주는 계대수 5 회를 초과하지 말고, 균주관리장부를 작성하여 계대수를 관리해야 합니다.

Q5. ‘표준화된 안정한 현탁액’은 상업적으로 판매되는 성적서가 있는 표준균주인지요? 시드로트 배양관리수법으로 자체적으로 관리하는 균주도 포함되는지요?

☞  ‘표준화된 안정한 현탁액’이란 미리 생균수를 알고 있고 균수가 일정한 상태로 유지되고 있는 것을 확인할 수 있는 균액을 말합니다. 각 실험실에서 안정적인 균액의 조제 및 저장방법에 대해 밸리데이션이 되어있다면 시험때마다 신선한 배양균에서 균액을 준비하지 않아도 밸리데이션 된 방법으로 조제 및 소분하여 보관한 균액을 사용시마다 1 개씩 사용할 수 있습니다. 또한 시판품을 사용하는 경우 그 안정성을 확인해야 합니다.

Q6. 「배지성능시험」에서 표준화된 균액, 신선한 배양균의 기준을 달리하고 있는데, 이를 혼용하는 것이 합리적인지요?

☞  표준화된 균액, 신선한 배양균의 기준을 달리하는 것은 표준화된 균액의 경우 측정값이 있으며, 신선한 배양균의 경우 정확한 균수를 알 수 없으므로 두 기준을 달리 하는 것이 합리적입니다.

※ 관련문구 : “한천배지에서는 접종균의 출현집락수가 표준화된 균액의 측정값의 1/2 ~ 2 배 이내 이어야 한다. 신선한 배양균을 써서 시험하는 경우에는 유효성이 확인된 배지 배치에서 이전에 얻은 증식과 동등한 증식이 인정되어야 한다.”

Q7. 「검체 존재 하의 측정법의 적합성」의 「접종 및 희석」 관련하여 총호기성미생물수 검액은 100 배 희석, 총진균수 검액은 10 배 희석이 가장 많은 집락수를 나타내는 희석도라면, 총호기성미생물수, 총진균수 시험용 검액을 각 배율 별로 따로 만들어야 하는지, 아니면 둘 중 낮은 희석율의 검액을 가지고 하면 되는지요?

☞  총호기성미생물수(TAMC), 총진균수(TYMC) 시험용 검액을 같은 배율로 만들 필요는 없으므로 각각 기준에 맞게 희석배수를 정하면 됩니다.

Q8. 「생균수시험」에서 「음성대조」는 매 시험마다 해야 하며, 판정하고 기록할 때 사진도 함께 남겨야 하는 건가요?

☞  생균수시험에서 음성대조는 매 시험마다 실시하여야 하며 판정기록방법은 시험이 적합하게 수행되었음을 나타낼 수 있도록 자율적으로 정하고 기록하시면 됩니다.

Q9. 「생균수시험」에서 측정법의 적합성을 확인할 때 3 배치에 대해 실시하면 되는 것인지요?

☞  3 배치에 대해 실시하는 것을 권장합니다.

Q10. 검액 조제 후 검액을 시험에 사용하는 시간에 대해 유의할 사항은 없나요?

☞  검액은 9 개정과 마찬가지로 조제한 다음 1 시간 이내에 시험에 사용해야 합니다. 방치할 필요가 있는 경우에는 균수나 균종에 변화가 없는 것 등의 타당성을 확인해야 합니다.

Q11. 대한민국약전 제10개정 일반시험법 미생물한도시험법에 따르면, 총호기성미생물수와 총진균수 시험에 사용하는 배지 종류는 시험기준에 따라 다릅니다.

(총호기성미생물수 (TMAC)의 사용배지 : 대두카제인소화액체배지,

총진균수 (TYMC)의 사용배지 : 사부로포도당한천배지)

세균 및 진균 측정 시, 총호기성미생물수 측정에 따라 대두카제인소화액체배지만을 사용하여 실시해도 되는지요?

☞  대한민국약전 제10개정 미생물한도시험법에서 대두카제인소화한천배지를 써서 측정된 집락수를 총호기성미생물수 (TAMC)로 하고, 사부로포도당한천배지를 써서 측정하는 집락수를 총진균수 (TYMC)로 합니다.

따라서 총호기성미생물수 및 총진균수 측정을 위해서는 각 시험에 사용하는 배지로 각각 시험하셔서 각 측정결과를 총호기성미생물수, 총진균수 판정에 사용해야 합니다.

Q12. 「검체의 시험」과 관련하여 지금까지는 배양기간을 ‘적어도 5 일’로 적용하였는데, 대한민국약전 제10개정 일반시험법 미생물한도시험법에서 총호기성미생물 배양기간은 3 ~ 5 일, 진균 배양기간은 5 ~ 7일로 규정하는 배양기간이 바뀌었습니다.

각 최소배양일수(3, 5일)을 적용하여 판정 가능한지요?

배양기간을 7일로 잡은 정확한 근거나 이유가 있는지?

☞  미생물한도시험법 생균수시험 중 총호기성미생물수 측정을 위한 대두카제인소화한천배지 배양기간을 3 ~ 5일, 총진균수 측정을 위한 사부로포도당한천배지 배양기간을 5 ~ 7일로 정하고 있습니다. 규정되어 있는 배양기간 중 가장 짧은 배양기간을 채택한 경우에는 그 타당성을 확인하는 것이 필요합니다.

또한, 진균 배양기간을 기존 5일에서 5 ~ 7일로 개정한 이유는 미생물한도에 대한 품질관리를 보다 엄격히 하기 위한 것으로, 일부 진균은 5 일간 배양시켜도 충분한 증식을 나타내지 않는 것을 고려하여 설정하였으며 최소 배양기간을 채택한 경우 그 타당성을 확인해야 합니다. 예를 들어, 5 일 배양기간 중 진균이 충분히 집락을 형성하였고 배양기간이 늘어날 경우 오히려 집락이 과도하게 크게 형성되어 결과판정에 어려움이 있을 때에는 배양기간의 범위 내에서 최소배양기간을 설정할 수 있습니다.

2. 특정미생물시험

Q13. 특정미생물시험에 시판되는 배지를 이용할 때, 보관방법에 대해서는 배지 제조사의 유효기간을 채용해도 됩니까?

☞  시판배지 제조사의 사용기간 설정에 대한 안정성시험자료 등에 의해 사용기간 설정이 타당하다는 것을 확인해야 합니다.

Q14. 대한민국약전 제9개정에서는 특정미생물시험의 첫 단계로 액체배지(대두카제인소화액체배지, 유당액체배지)에서 배양을 하도록 되어 있고, 증식이 나타나는 경우에 그 다음 단계의 시험을 실시하도록 되어 있습니다.

하지만 대한민국약전 제10개정에서는 특정미생물시험의 첫 단계로 액체배양을 하는데, 증식여부에 따른 다음 단계 시험 실시 선택에 대한 언급이 없습니다.

이 경우 증식이 나타나지 않아도 그 다음 단계의 시험을 진행해야 하는 것인지요?

☞  대한민국약전 제10개정 미생물한도시험 중 특정미생물시험의 판정은 첫 단계 액체배지 배양인‘전(前)배양’과 다음 단계시험인‘선택배양’후에 하도록 되어 있습니다. 따라서 전배양 결과만으로 판정하지 않으므로 전배양과 선택배양을 모두 실시한 다음 판정해야 합니다.

Q15. 특정미생물시험은 대장균, 살모넬라, 녹농균, 황색포도상구균에 담즙산저항성 그람음성균, 칸디다 알비칸스, 클로스트리디아가 추가되었습니다.

이전까지 대장균, 살모넬라, 녹농균, 황색포도상구균을 시험하였던 모든 검체에 대하여 새로 추가된 3가지 시험을 적용하여 실시해야 하는 것인지, 아니면 기존 4가지 균에 대한 시험은 계속 실시하되 새로 추가된 3가지 시험은 의약품 각조에서 지정할 때에 실시해야 하는 것인지요?

☞  대한민국약전 제9개정 때와 마찬가지로 특정미생물의 시험방법은 대한민국약전 일반시험법에 따르고, 그 적용범위 및 기준은 「대한민국약전 외 일반시험법」(식품의약품안전청 고시 제2012-129호(2012.12.27)) [별표 2]에 따릅니다(「대한민국약전외 일반시험법」 제3조 참조). 아울러 의약품각조에 그 기준이 설정되어 있는 경우 해당 기준에 따라 관리하시기 바랍니다.

Q16. A라는 분말을 가지고 미생물한도시험을 할 때 특정미생물 시험의 검액은 생균수 검액의 조제 항에 따르는 것이므로 A를 희석한 검액을 유당 또는 대두카제인소화액체배지에 10 mL 넣고 배양을 해야되는건지, 아님 특정미생물 조작 내용엔 검체 10 g 이라고 되어 있으므로 A라는 분말을 그대로 10 g 액체배지에 넣고 배양을 해야 되는 것인지요?

☞  특정미생물시험의 「검액의 조제」항에는 일반적인 검액 제법, 조건 등이 정해져 있으며, 각 특정미생물에 대한 검액 조제방법은 각 특정미생물의 조작항을 따르시면 됩니다.

더불어 조작항의 채취량은 검액량이 아닌 검체량임을 참고하시기 바랍니다. 따라서 검체 A 분말 10 g (또는 적합한 희석액을 사용하여 10 g 해당량)을 해당 배지에 넣어 배양하시면 됩니다.

Q17. 특정미생물한도시험에서 대장균, 녹농균, 황색포도상구균, 클로스트리디아 검체는 1 g 또는 2 g 이상이라고 표기 되어있는데 무조건 1 g 이상이면 되는 것인지요?

예를 들어 현재 10 g으로 검체를 녹이는데 이와 같이 10 g으로 해도 되는 건가요?

검체와 희석액을 비율에 따라 증가 시켜 실험을 해도 되는지요?

☞  특정미생물시험의 대장균, 녹농균, 황색포도상구균 검액 조제방법에 따라 검체를 1 g 이상을 취해 「생균수시험」에 따라 조제한 10 배 희석액 10 mL (혹은 검체 1 g 또는 1 mL에 해당하는 양)를 적당량(「시험법의 적합성」에서 결정)의 배지에 접종하여 배양하셔야 합니다. 단, 2 g 이상으로 취하도록 규정된 클로스트리디아의 경우는 선택배양시 시험관을 2개(최소 10 mL)로 나누어 따로 시험하기 위해 ‘2 g 이상’으로 규정된 것이므로 2 g 이상을 취한 다음 그 10 배 희석액(최소 20 mL 이상)을 조제하여 사용하시기 바랍니다.

Q18. 「담즙산저항성그람음성균」에서 「부정시험」과 「정량시험」으로 나뉘는데 부정시험에서 집락의 증식이 없으면 정량시험-선택배양은 하지 않아도 되는지요? 증식이 없다는 건 세균이 없다는 것으로 봐도 되는데 굳이 정량시험-선택배양을 해야되는 이유는 뭔가요?

정량시험을 한다면 검체 0.1 g, 0.01 g, 0.001 g 해당량을 모젤장내세균증균액체배지에 접종하라고 되어 있는데 3개의 모젤장내세균액체배지에 따로 각각 다 배양시켜야 되는건가요?

☞  담즙산저항성그람음성균에 대한 부정시험과 정량시험은 각조에 그 기준이 구분되어 규정되어야 하며, 따라서 각조 미생물한도 기준에 “불검출”이 규정된 경우 부정시험을, 한도량의 기준이 있을 경우 정량시험을 실시하면 됩니다.

정량시험에서는 세 가지 검체량으로 배양한 시험결과를 모두 가지고 있어야 표Ⅱ-2에 따라 균 수의 추정값을 구해 판정할 수 있으므로 각각 배양이 필요합니다.

Q19. 판정에서 집락이 나타나는 경우 KP 9개정에서와 같이 확인시험은 동일한가요?

예를 들어 대장균의 경우 “맥콘키한천배지에 침강선띠를 가진 적갈색 그람음성균의 집락이 나타나면 에오신메틸렌블루한천배지로시험하고 여기서 금속광택 또는 흑청색 집락이 나타나면 대장균키트를 사용한다.”와 같이 방법이 동일한지요?

☞  미생물동정시험에 대하여 9 개정에서의 시험방법 외에도 국제적으로 통용되는 생화학적 검사, 면역학적 검사 및 유전자 검사 등의 시험도 미생물의 종의 판별에 사용할 수 있습니다.

Q20. 클로스트리디아 시험 관련하여 ‘혐기적 조건’에 대한 구체적인 권장조건이 있는지요?

☞  일반적인 미생물시험에 사용하는 혐기적 방법으로 「측정법의 적합성」을 증명하고 사용하시면 됩니다. 참고로 전용 Container 등 혐기적 조건을 만들어주는 여러 시판제품이 있습니다.

3. 기타

Q21. 항생물질의약품기준이 폐지되면서 해당 제제가 대한민국약전으로 규격이 변경된 「시럽용 아목시실린·클라불란산칼륨」의 경우, 규격 변경시 미생물한도시험이 없으며 10 개정 제제총칙 내 시럽제 부분에도 관련 언급이 없습니다. 이와 같은 경우 해당 제제의 미생물한도시험이 삭제된 것인지요? 삭제되었다면 해당 제제의 미생물한도시험을 진행하지 않아도 되는 것인지요?

☞  질의하신 제제는 「대한민국약전 외 일반시험법」(식품의약품안전청 고시 제2012-129호(2012.12.27)) 제3조 및 별표 2에 따라 미생물한도시험이 적용됩니다.

원칙적으로 제제총칙에 규정된 시험항목은 의약품각조에 기재되고, 제제총칙에 규정되지 않는 「대한민국약전 외 일반시험법」의 시험항목은 제제의 각조에 기재하지 않고 시험의 적용은 「대한민국약전 외 일반시험법」에 따로 규정한 적용범위에 따르니 참고하시기 바랍니다 (개정요지 및 개정안 작성지침 참조).

참고로, 질의하신 제제는 쓸 때 녹여 쓰는 시럽제로서 시럽제의 경우 「의약품의 품목허가·신고·심사 규정」(식품의약품안전청 고시 제2013-2호, 2013.1.16) 제32조제2항제7호 및 제34조제3항제6호와 별표 13에 따라 미생물한도시험이 적용됩니다.

▢ 무균시험법

1. 무균시험법 전반

Q1. 무균시험법 중 「배지의 적합성」시험 관련하여 시판용 배지를 사용할 때 매 배치별 제조원 성적서로 평가를 한다면, 자사에서는 배지 적합성 시험을 생략해도 되는지요?

☞  시판배지의 경우 배지 제조사의 배지성능시험 성적서가 있더라도 무균시험을 실시하는 실험실에서 수행한 배지성능시험에 적합해야 합니다. 또한 건조분말배지의 경우 배지 제조사의 로트가 아닌 배지 조제시의 배치마다 배지성능시험을 실시하셔야 합니다.

Q2. 「배지와 배양온도」 관련하여 ‘배지 보존’은 조제 후 14 일(조제 후 14일 까지는 보통 배지성능시험, 배지의 무균성 시험을 위해 소요되므로)을 초과해서 보관할 때를 의미하는 것인지요?

☞  배지 보존이라 함은 배지를 제조 후 바로 사용하지 않는 경우를 의미하며 이 경우 배지 밸리데이션을 해야 합니다.

Q3. 「측정법의 적합성시험」 관련하여 새로운 검체에 대해 무균시험을 하는 경우, 동일한 원료 조성이지만 함량만 다른 경우에도 적합성 시험을 실시해야 하는지요? (예 : 5% 포도당주사액, 10% 포도당주사액)

☞  함량만 다른 경우에도 적합성시험을 실시해야 합니다.

Q4. 「측정법의 적합성시험」 관련하여 “「검체의 무균시험」과 동시에 시험할 수도 있다.”는 것은 시간적인 개념인지, 한 번 시험하여 적합성시험과 무균시험에 적합하다면 두 시험을 다 한 것으로 간주할 수 있다는 말인지요?

☞  측정법의 적합성 시험을 검체의 무균시험과 동시에 할 수 있다는 시간적인 개념이며 검체의 무균시험이 적합인 경우 시험법 적합성 시험을 대신 할 수 있다는 의미는 아닙니다.

Q5. 「검체의 무균시험」에서 「멤브레인필터법」 중 미생물의 포집효율이 확립되어 있는 멤브레인필터를 사용하라고 되어 있는데 「측정법 적합성시험」에 적합하면 되는지 아니면 포집효율이 확립된 멤브레인필터라는 것을 문서화 한 후에 시험에 적용해야 하는 건지요?

☞  측정법 적합성시험에 적합한 멤브레인필터는 포집효율이 확립되어 있다고 볼 수 있습니다.

▢ 의약품각조 제2부

1. 상수 및 정제수

Q1. 대한민국약전 제10개정에서 「상수」는 「먹는물관리법」의 먹는물 수질기준에 적합하다고 되어 있는데, 먹는물 수질기준 및 시험방법은 무엇인가요?

☞  먹는물 수질기준은 환경부령 「먹는물 수질기준 및 검사 등에 관한 규칙」, 시험방법은 환경부고시 「먹는물 수질공정시험기준」에 제시되어 있습니다. 향후 관련법령 개정에 따라 변경될 수 있으니, 법제처 및 환경부 홈페이지를 참고하시기 바랍니다.

Q2. 대한민국약전 제10개정에서 우물물과 공업용수를 사용하여「상수」를 제조시 추가 시험항목을 확인하도록 되어있습니다. 먹는물관리법에서 명시하는 샘물과 같은 의미인가요?

☞  대한민국약전 제10개정에서 「상수」는 「먹는물관리법」의 먹는물 수질기준에 따르며, 우물물, 공업용수 등을 사용하여 제조하는 경우에는 먹는 물 수질기준외 암모늄, 아질산성질소 항목에도 적합하여야 합니다.

약전에서의 우물물은 먹는물 관리법의 샘물과 동일한 의미는 아닙니다.

먹는물 관리법에서의 샘물은 “암반대수층안의 지하수 또는 용천수 등 수질의 안전성을 계속 유지할 수 있는 자연상태의 깨끗한 물을 먹는 용도로 사용할 원수”입니다.

※ 관련 규정 : 먹는물관리법 제2조(정의)

Q3. 정제수 시험에서는 시험항목이 성상, 전도율, 순도시험(유기체탄소)과 성상밖에는 시험이 없습니다. 기존 약전 9개정의 다른 순도시험을 생략해도 된다는 뜻인지요?

☞  대한민국약전 제10개정에서 「정제수, Purified Water in Bulk」의 정의는 이온교환, 증류, 역삼투 또는 한외여과 등을 단독 또는 조합시킨 시스템에 의해 「상수」로부터 만드는 것이며, 시험항목은 성상, 순도시험(유기체탄소), 전도율입니다.

따라서 기준규격에 적합한 「상수」를 이용하여 정제수를 제조하도록 되어 있으므로, 「상수」의 기준규격을 충족해야 한다는 의미를 가지고 있으며, 이에 더해 10 개정으로 개정된 정제수항의 규격을 최종 제조 후 충족하면 됩니다.

Q4. 「정제수(기밀용기내)」는 시판하고 있는 정제수를 의미하는지요?

☞  「정제수(기밀용기내), Purified Water in Container」는 정제수를 기밀용기에 넣은 것으로, 시판되는 제제가 정제수를 기밀용기에 넣은 것이라면 「정제수(기밀용기내)」에 해당됩니다.

Q5. 공업단지에서 상수를 「먹는물 관리법」의 먹는물 수질기준에 적합하게 관리한다면 공업단지에서 시험한 시험성적서로 갈음이 가능한지 아니면 한국수자원공사 성적서로 갈음이 가능한지요?

☞  상수의 시험은 원칙적으로 자사의 사용점에서 실시해야 합니다.

Q6. 상수에 대한 시험횟수(또는 주기) 및 모든 사용점과 시험항목을 실시해야 하는지요?

☞  품질관리에 문제가 없는 범위 내에서 자사에서 적정하게 설정하여 관리하여야 하며, 원칙적으로 모든 사용점과 시험항목을 실시하여야 합니다.

Q7. 상수 시험을 외부 기관에 위탁하여 실시한 시험성적서로 대체가 가능한지요?

☞  의약품등의 제조업자가 의약품등의 시험을 다른 의약품등의 제조업자 등에게 위탁하는 경우 그 수탁자의 범위는 「약국 및 의약품등의 제조업·수입자와 판매업의 시설기준령 시행규칙」 제11조 규정에 적합하여야 합니다.

Q8. 대한민국약전 정제수의 총 유기탄소(TOC) 측정위치 및 사용점에서 TOC 측정여부는 어떻게 관리하나요?

☞  대한민국약전 개정고시 부칙에 따라, 원칙적으로 대한민국약전 ‘정제수(Purified water in bulk)’ 항으로 규격을 설정하여 관리하는 모든 사용점에서 개정된 시험방법에 따라 정기적으로 관리하여야 합니다.